專利名稱：甲狀旁腺激素緩釋微球的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種藥物技術(shù)領(lǐng)域的組合物，具體是一種甲狀旁腺激素緩釋微球。
背景技術(shù)：
1997年人重組甲狀旁腺激素(1～84氨基酸)已在進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)，Lilly的甲狀旁腺激素(1～34)產(chǎn)品特立帕肽(Teriparatide Forteo)2002年6月經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥和原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。由于甲狀旁腺激素的血漿半衰期很短(20-30min)，不被直接吸收、治療周期長(zhǎng)，目前甲狀旁腺激素治療采用每周3～5次皮下注射40～100微克，長(zhǎng)時(shí)間治療病人難以耐受，上述原因給甲狀旁腺激素用藥治療帶來(lái)很大困難，因此需要研究甲狀旁腺激素緩釋劑型。
經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Christopher Breuer等在《Journal ofPediatric Surgery》(兒童外科雜志)2005年第40期第81-85頁(yè)，文章題名“Development of a parathyroid hormone-controlled release system as apotential surgical treatment for hypoparathyroidism”(甲狀旁腺激素緩釋系統(tǒng)用于治療甲狀旁腺激素功能減退的研究進(jìn)展)，提出采用甲狀旁腺激素(4.76％，w/w)和聚乳酸羥基乙酸共聚物研究得到微球組合物(95.24％，w/w)制備緩釋微球，但是所得的微球組合物體外釋放曲線存在嚴(yán)重的突釋現(xiàn)象，第一天釋放出69％，沒(méi)有達(dá)到理想的緩釋效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種甲狀旁腺激素緩釋微球，使其可以改善微球的釋放曲線，提高載藥量，并在制劑、貯存、釋放過(guò)程中穩(wěn)定甲狀旁腺激素。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明甲狀旁腺激素緩釋微球包括甲狀旁腺激素、高分子多糖、小分子糖、緩釋高分子。各組分的重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％，小分子糖0-10％，緩釋高分子75-95％。
本發(fā)明通過(guò)以下方法制得a)將甲狀旁腺激素先溶于高分子多糖水溶液中作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，將初乳乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將W/O/W復(fù)乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
所述的高分子多糖可以選用葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質(zhì)酸、海藻酸鹽中的一種或者幾種的混合物；可以添加小分子糖以提高干燥過(guò)程中多肽的穩(wěn)定性。
所述的可緩釋高分子可以選用乳酸和羥基乙酸的共聚物。
所述的甲狀旁腺激素是由84個(gè)氨基酸殘基組成的一條直鏈多肽分子，分子質(zhì)量9000，氨基端是活性端，與靶組織受體結(jié)合后引起生物效應(yīng)，羧基端不具有生物活性，生物活性部分主要在氨基端1～34；甲狀旁腺激素也可以是由1-34位氨基酸組成的多肽分子。
本發(fā)明以可降解緩釋高分子材料為基質(zhì)；高分子多糖顆粒作為“內(nèi)親水相”，均勻地分散在可降解高分子基質(zhì)中，其顆粒直徑不大于6微米；甲狀旁腺激素分散于高分子多糖微粒中。本發(fā)明在內(nèi)水相中加入高分子多糖可以和緩釋高分子共同調(diào)節(jié)甲狀旁腺激素的釋放速率，根據(jù)治療需要控制釋放速率；在內(nèi)水相中加入高分子多糖可以阻滯甲狀旁腺激素向外水相泄漏，從而提高微球載藥量；在內(nèi)水相中加入高分子多糖通過(guò)增大粘度降低甲狀旁腺激素分子的可動(dòng)性，減少聚集現(xiàn)象的發(fā)生；高分子多糖與甲狀旁腺激素有很好的生物相溶性，可以減少高由于甲狀旁腺激素與高分子的直接接觸而引起的吸附，可以提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過(guò)使用高分子多糖增加內(nèi)水相粘度，調(diào)節(jié)釋放曲線，減少甲狀旁腺激素分子的聚集和在高分子表面的吸附。本發(fā)明可以改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性、增加微球的載藥量?？沙掷m(xù)釋放半個(gè)月至三個(gè)月且第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1甲狀旁腺激素微球制備及體外釋放實(shí)驗(yàn)a)將甲狀旁腺激素(2％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(1％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(95％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，采用磁力攪拌10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
精密稱量10mg微球，加入1mlPBS溶液，于37℃、60rpm氣浴搖床培養(yǎng)，定時(shí)取出上清夜并補(bǔ)加緩沖介質(zhì)，采用microbca的方法測(cè)試上清夜中甲狀旁腺激素含量，扣除空白微球讀數(shù)，計(jì)算微球釋放度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲狀旁腺激素微球組合物平穩(wěn)緩釋，第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例2a)將甲狀旁腺激素(20％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(3％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，采用磁力攪拌2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例3a)將甲狀旁腺激素(11％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(2％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(85％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，采用磁力攪拌6250rpm，3.5分鐘，形成w/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。甲狀旁腺激素微球組合物平穩(wěn)緩釋，第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象實(shí)施例4a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶于高分子多糖(20％，w/w)、小分子糖(0％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，勻漿10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例5a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶于高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(10％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，勻漿2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例6a)將甲狀旁腺激素(10％，w/w)先溶于高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(5％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，勻漿6250rpm，3.5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時(shí)，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時(shí)，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無(wú)突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
權(quán)利要求
1.一種甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征在于，各組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％，小分子糖0-10％，緩釋高分子75-95％，高分子多糖微粒作為內(nèi)親水相分散于緩釋高分子構(gòu)成的微球基質(zhì)中，甲狀旁腺激素存在于多糖內(nèi)親水相中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，所述的作為內(nèi)親水相的高分子多糖，為葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質(zhì)酸、海藻酸鹽中的一種或者幾種混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，在高分子多糖中添加小分子糖，以提高干燥過(guò)程中多肽的穩(wěn)定性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，其內(nèi)親水相高分子多糖顆粒的直徑小于等于6微米。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，所述的緩釋高分子選用聚乳酸或乳酸和羥基乙酸共聚物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，所述的甲狀旁腺激素是由84個(gè)氨基酸殘基組成的分子質(zhì)量為9000的多肽分子。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或者6所述的甲狀旁腺激素緩釋微球，其特征是，所述的甲狀旁腺激素或者是由1-34位氨基酸組成的多肽分子。
全文摘要
一種藥物技術(shù)領(lǐng)域的甲狀旁腺激素緩釋微球，各組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2－20％、高分子多糖2－20％，小分子糖0－10％，緩釋高分子75－95％，高分子多糖微粒作為“內(nèi)親水相”分散于緩釋高分子構(gòu)成的微球基質(zhì)中，甲狀旁腺激素存在于多糖內(nèi)親水相中。本發(fā)明通過(guò)使用高分子多糖增加內(nèi)水相粘度，調(diào)節(jié)釋放曲線，減少甲狀旁腺激素分子的聚集和在高分子表面的吸附。本發(fā)明可以改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性、增加微球的載藥量。
文檔編號(hào)A61P19/00GK1739796SQ200510029278
公開(kāi)日2006年3月1日 申請(qǐng)日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者金拓, 吳飛 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)