專利名稱：預(yù)防和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的包含軟棗獼猴桃提取物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有預(yù)防和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病活性的包含軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)提取物的組合物。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及具有預(yù)防和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病活性的包含硬獼猴桃提取物的組合物，并且尤其是用于預(yù)防和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的、包含粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或獼猴桃(kiwifruit)提取物的純化級分的組合物。
脫發(fā)綜合征在中年男性中經(jīng)常發(fā)生并且脫發(fā)被分為兩種類型。一種是男性型脫發(fā)(male pattern baldness)，也叫作老年脫發(fā)或雄激素性脫發(fā)，它們通常出現(xiàn)在中年男性的前額或頭頂，另一種是斑禿(alopeciaareata)，其顯示出脫發(fā)相對明確的邊界并且經(jīng)常在青少年中發(fā)生。該綜合征主要在男性和甚至在女性中發(fā)生(M.Inaba et al；Androgeneticalopecia，Springer-Berlag，Tokyo，Japan，1996)。
已經(jīng)有報導(dǎo)脫發(fā)源自遺傳因素、衰老過程、藥物濫用、放射性治療和嚴重疾病后出現(xiàn)的壓力等。已經(jīng)知道脫發(fā)的主要因素是雄性激素過度產(chǎn)生、頭皮中血液循環(huán)問題和在生化和生理方面毛發(fā)代謝所必需維生素的缺乏，和男性型脫發(fā)的主要因素涉及雄激素和甾類激素，尤其是5-α-還原酶轉(zhuǎn)化睪酮為5-α-二氫睪酮(DHT)并被分布于皮脂腺、毛囊的角質(zhì)形成細胞、真皮乳頭細胞、汗腺、頭皮毛囊的根鞘等，并且芳香酶(aromatase)轉(zhuǎn)化雄激素為雌性激素比如雌二醇。已知斑禿的病因起源是自身免疫系統(tǒng)障礙，特別是黑素細胞、角質(zhì)形成細胞、真皮乳頭和血管內(nèi)皮中CD4+淋巴細胞的障礙(J.Shapiro et al；Therapeutic agents，Dermatol.Clin.，16(2)pp341-356，1998)。
已經(jīng)開發(fā)出治療脫發(fā)的各種常規(guī)藥物并且直到現(xiàn)在還在應(yīng)用。例如，非那甾胺，一種口服5-α-還原酶抑制劑，已經(jīng)在市場上有售，然而它有幾個缺點，比如在停用時反復(fù)復(fù)發(fā)、孕婦應(yīng)用受限制、和由于長期施用引起的性功能障礙；米諾地爾，一種在市場上有售的藥物，其已經(jīng)與其它藥劑如細胞分裂加速劑、血管擴張劑、毛細血管形成促進劑、免疫抑制劑、cAMP調(diào)節(jié)劑、EGF(上皮細胞生長因子)和細胞增殖調(diào)節(jié)劑一起被用來治療男性型脫發(fā)，然而它也有副作用，比如在停用時反復(fù)復(fù)發(fā)和快速降低血壓的作用；作為作用于淋巴細胞以抑制功能亢進的免疫系統(tǒng)的代表性免疫調(diào)節(jié)劑ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素)已經(jīng)通過軟膏或注射劑形式施用來治療斑禿，然而它也有多個缺點比如復(fù)發(fā)或副作用，造成了長期施用的困難。除了上述藥物，已經(jīng)報導(dǎo)用環(huán)丙孕酮(cyproteroneactate)、螺內(nèi)酯、雌激素等等治療脫發(fā)(J.Shapiro et al，Hair regrowth，Therapeutic agents，Dermatol.Clin.16(2)，pp341-356，1998)。
如上所述，大部分常規(guī)藥物不能提供達到滿意活性的充分療效并且具有幾個缺點比如復(fù)發(fā)或副作用，因此迄今已有很多的嘗試來獲得提供滿意效果并且副作用降低的新藥。
同時，迄今為止已有很多專門的努力來研究來自天然資源的有效藥物用于治療和預(yù)防脫發(fā)病。
作為替代性方法，已有幾個關(guān)于包含具有毛發(fā)生長刺激作用的粗提藥物的組合物的報導(dǎo)，例如，公開于韓國專利登記號015667的屬于蘭科植物的植物提取物，韓國專利登記號0161338中的蔓荊子(vitex seed)和熊脂(bear fat)，韓國專利公開號91-106中的Rhododendron fauriae提取物，韓國專利公開號96-40346中的松葉提取物，韓國專利公開號90-2757中的由torilla種子、松葉和蠶蛾組成的粗提藥物，韓國專利公開號2000-24499中的由無梗五加(Acanthopanax sessiliflorus)、黃芪(Astragalusmembranceus)、何首烏(Polygonum multiflourm)、穿山龍(Dioscoreanipponica)和蕎麥(Fagopyrum esculentum)組成的粗藥物提取物，韓國專利登記號259037中的由半夏(Pinellia ternata)、丁香(EugeniaCaryophyllata)、插田泡(Rubus coreanus)、Zanthoxylum piperatum、單葉蔓荊(Vitex rotundifolia)、丹參(Salvia miltiorrhiza)和Thujae semen組成的粗藥物提取物，通過在200℃加熱蠶和它們的副產(chǎn)物15分鐘所獲得的脂肪，在韓國專利公開號90-13934中的由人參(Panax ginseng)、當歸(Angelica sinensis)、黃芪(Astragalus membranceus)、何首烏(Polygonummultiflorum)、Juglans sinensis、插田泡(Rubus coreanus)、地黃(Rehmanniaglustinosa)、補骨脂(Psoralea corylifolia)、赤松(Pinus densiflora)、單葉蔓荊(Vitex rotundifolia)、紅花(Carthamus tinctorius)和女貞(Ligustrumlucidum)組成的粗藥物提取物，在韓國專利公開號90-5952中的由蠶蛾、蠶卵、蠶蛹、黑芝麻種子、芝麻種子、褐海藻、和胡桃組成的粗藥物提取物，在韓國專利登記號260673中的綠豆、黃豆、紫蘇子、芝麻種子、胡桃、紫菜、海貝(sea mussel)、牡蠣、鳳尾魚(anchovy)、褐海藻、和酵母濃縮物的混合粉末，韓國專利公開號2000-36534中的枸杞(Lycium chinensis)的果實、根、枝、葉、花、和玉米穗絲的提取物，等等。然而，在上述公開的組合物的毛發(fā)生長作用仍不能被在此公開的任何內(nèi)容所完全支持或確認。
屬于獼猴桃科(Actinidiaceae)的軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)、葛棗獼猴桃(A.polygama)和狗棗獼猴桃(A.kolomikta)分布于西伯利亞、中國北方地區(qū)、北朝鮮和南朝鮮。已有報導(dǎo)超過30個種屬于獼猴桃科。在它們中間，中華獼猴桃(Actinidia chinensis)或美味獼猴桃(A.delicious)的果實已經(jīng)被命名為幾維果(kiwi)和軟棗獼猴桃，并且其它同屬的果實已經(jīng)被用作中藥藥材，其被命名為‘獼猴桃(mihudo)’，其以無毒的特性被用來治療肝病、腸胃疾病和泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)石(Chung B.S.and Shin M.K.；HyangyakDaesacheon，Youngrimsa.，pp386-388，1998)。
同時，迄今為止已有幾個關(guān)于獼猴桃屬果實治療或預(yù)防各種醫(yī)學(xué)疾病的活性的應(yīng)用。
例如，韓國專利登記號344147公開了包含獼猴桃屬果實滲出物作為主要組分的健康飲品及其制備；韓國專利登記號134024公開了包含中華獼猴桃或美味獼猴桃果實提取物作為主要組分的健康飲品及其制備；韓國專利公開號1996-37061公開了包含獼猴桃果實提取物作為主要組分的肝保護劑和抗癌劑；韓國專利公開號2002-78467公開了包含由軟棗獼猴桃、北拐棗(Hovenia dulcis)、枸杞(Lycium chinensis)、五味子(Schizandra chinensis)、茵陳蒿(Artemis capillaries)、葛藤(Pueraria thunbergiana)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、葫蘆(Lagenaria siceraria)、Aralia elata、遠志(Polygala tenuifolia)、當歸(Angelica sinensis)、白術(shù)(Atractylodesmacrocephala)、桅子(Gardenia jasminoides)、黃芪(Astragalusmembranaceus)、紅花(Carthamus tinctorius)和蛹蟲草(Cordyceps militaris)組成的粗藥物提取物的健康飲品，用于改善肝功能。
然而，在上述任何文獻中還沒有報導(dǎo)或公開過有關(guān)硬獼猴桃(kiwifruit)提取物治療或預(yù)防脫發(fā)和脂溢性皮膚病的活性。
為了研究硬獼猴桃提取物對脫發(fā)和脂溢性皮膚病的治療作用和預(yù)防作用，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)大量實施了有關(guān)對DHT(二氫睪酮)再生抑制作用的體內(nèi)和體外試驗以及關(guān)于毛發(fā)生長刺激和脂溢性皮膚病的臨床試驗。作為研究的結(jié)果，本發(fā)明人通過證實硬獼猴桃提取物降低了血DHT水平、并抑制了毛發(fā)脫落和脂溢性皮膚病，最終完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供包含有效量的硬獼猴桃提取物作為活性成分的藥用組合物，其用來治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚疾病。
本發(fā)明提供硬獼猴桃提取物在制備預(yù)防和緩解人和哺乳動物脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的藥用組合物中的用途。
本發(fā)明也提供包含硬獼猴桃提取物的健康食品或食品添加劑，其用于改善和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明也提供包含硬獼猴桃提取物的飼料或飼料添加劑，其用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明也提供包含有效量硬獼猴桃提取物作為活性成分的化妝品組合物，其用來治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供包含硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物作為活性成分的藥用組合物，其用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明的一個目的是提供硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物在制備用于治療和預(yù)防人和哺乳動物脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療劑中的用途。
本發(fā)明的一個目的是提供用于治療和預(yù)防哺乳動物脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療或預(yù)防方法，其包括對所述哺乳動物施用有效量的硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物及其藥物可接受的載體。
本發(fā)明的另一個目的是提供包含上述提取物以及營養(yǎng)學(xué)可接受添加劑的健康食品或食品添加劑，其用于預(yù)防和改善對脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療和預(yù)防。
本發(fā)明的另一個目的是提供包含上述提取物作為主要成分的飼料或飼料添加劑，其用于治療、預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
是本發(fā)明的另一個目的是提供包含上述提取物的化妝品組合物，其用于預(yù)防和改善對脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療和預(yù)防。
上述的脫發(fā)癥在本文中包括老年脫發(fā)、斑禿等等。
本文中所定義的術(shù)語‘粗提物’表示可溶于水、低級醇比如甲醇、乙醇或丁醇及其混合物的‘提取物’，優(yōu)選的是混合有水和乙醇的有機溶劑混合物。
優(yōu)選的是，上述粗提物在本文中包括通過以下步驟所獲得的提取物用水、低級醇比如甲醇、乙醇或丁醇及其混合物，優(yōu)選用混合有水和乙醇的有機溶劑混合物，來提取硬獼猴桃；過濾并濃縮濾液。
本文中定義的術(shù)語‘非極性溶劑可溶性提取物’表示可溶于氯仿、乙酸乙酯、己烷、二氯甲烷或醚的‘提取物’，其中優(yōu)選乙酸乙酯。
上述的非極性可溶性提取物在本文中包括由以下步驟所獲得的提取物用非極性可溶性溶劑比如氯仿、乙酸乙酯、己烷、二氯甲烷或醚提取硬獼猴桃，其中優(yōu)選乙酸乙酯；過濾并濃縮濾液。
上面的硬獼猴桃可以包括軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃、葛棗獼猴桃或同屬植物并且可以使用它們的果實、莖、根。
本發(fā)明的藥用組合物可以包含基于該組合物總重的約0.01-50重量％的上述提取物。
本發(fā)明的健康食品包含基于所述組合物總重的0.01-95重量％、優(yōu)選1-80重量％的上述提取物。
上面的健康食品可以包含于健康食品、健康飲料等中，并且可以用作粉末、顆粒、片、咀嚼片、膠囊、飲料等。
來自硬獼猴桃的本發(fā)明提取物可以根據(jù)以下優(yōu)選實施方案制備。
在下文中，對本發(fā)明進行詳細描述。
硬獼猴桃的本發(fā)明提取物通過以下步驟詳細進行制備。
本發(fā)明的硬獼猴桃提取物可以按以下進行制備；干燥、切割、壓碎硬獼猴桃，并與5-25倍、優(yōu)選約10倍體積的蒸餾水、低級醇比如甲醇、乙醇、丁醇等或其混合物混合，其中優(yōu)選甲醇；用20-100℃、優(yōu)選60-100℃的熱水處理溶液1-24小時，提取方法是通過用熱水、冷水提取、回流提取、或超聲提取連續(xù)提取1-5次、優(yōu)選2-3次；過濾殘余物從而獲得上清液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在溫度20-100℃、優(yōu)選50-70℃下進行濃縮，隨后用真空凍干、熱風干燥或噴霧干燥進行干燥從而獲得干燥的硬獼猴桃粗提粉末，其可溶于水、低級醇、或其混合物。
此外，通過以下步驟可制備本發(fā)明的極性溶劑可溶性和非極性溶劑可溶性提取物；通過上面步驟制備的粗提物被懸在水中，并且隨后與1-100倍、優(yōu)選1-5倍體積的非極性溶劑比如乙酸乙酯、氯仿、己烷等混合；收集非極性溶劑層從而獲得本發(fā)明的非極性溶劑可溶性提取物，收集剩下的極性溶劑可溶性層從而獲得本發(fā)明的極性溶劑可溶性提取物，其可溶于水、低級醇、或其混合物。同樣，可以修改上述步驟或?qū)嵤┻M一步的步驟從而使用本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法分級或分離更有效的級分或化合物，其中所述常規(guī)方法即公開于文獻(Harborne J.B.Phytochemical methodsAguide to modern techniques of plant analysis，3rdEd.pp6-7，1998)中的方法。
例如，可以通過對由前述步驟制備的非極性溶劑可溶性提取物進行柱色譜操作來制備本發(fā)明硬獼猴桃提取物的進一步純化的級分，其中柱色譜法比如硅膠柱色譜法、TLC(薄層色譜法)或Sephadex柱色譜法，優(yōu)選用混合氯仿∶甲醇∶水的洗脫劑進行洗脫的硅膠柱色譜法，以逐步增加它們的極性，更優(yōu)選的是其以100∶10∶1(W/W/W)的混合比開始和以20∶10∶0.5(W/W/W)的混合比結(jié)束從而獲得進一步純化的提取物，特別的是，純化的提取物具有如圖1-3所示的TLC譜。
因此，本發(fā)明也提供包含由上述方法獲得的硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化的提取物作為活性成分的藥物組合物，其用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明的一個目的是提供由上述方法獲得的硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化的提取物在制備治療和預(yù)防人和哺乳動物脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療劑中的用途。
本文中定義的術(shù)語‘純化的提取物’表示由柱色譜法純化獲得的、比極性或非極性溶劑可溶性提取物具有更強活性的任何‘級分’，優(yōu)選的是，純化的提取物具有如圖1-3所示的TLC譜。
為了研究由上面方法制備的硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化的提取物對脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的抑制活性，實施涉及對小鼠血中DHT(二氫睪酮)再生和對小鼠發(fā)根形成的抑制作用的體內(nèi)和體外試驗以及涉及對毛發(fā)生長刺激和脂溢性皮膚病的臨床試驗。作為研究的結(jié)果，本發(fā)明人確認在小鼠模型試驗中口服施用硬獼猴桃提取物降低血DHT水平，促進發(fā)根的形成，以及抑制毛發(fā)的脫落并改善志愿者的脂溢性皮膚病，比如生角質(zhì)皮膚(keratic skin)、皮脂溢出等。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供包含由上面制備方法制備的硬獼猴桃提取物作為活性成分的藥物組合物，其用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明的另一方面提供治療方法和預(yù)防方法，包括給患有脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的人或哺乳動物施用包含由上述制備方法制備的所述提取物的藥物組合物。
用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的組合物可以包含基于所述組合物總重的0.01-50重量％的上述提取物。
本發(fā)明組合物可以依照本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)使用方法另外包含常規(guī)載體、助劑或稀釋劑。
在下文中，以下的配制方法和賦形劑僅作為實例并不限制本發(fā)明。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可以作為藥物組合物提供，其含有藥用可接受載體、助劑或稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠(acacia rubber)、海藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。該制劑還可以包括填充劑、抗凝劑、潤滑劑、潤濕劑、芳香劑、乳化劑、防腐劑等?？梢耘渲票景l(fā)明的組合物從而提供在應(yīng)用本領(lǐng)域眾所周知的任何方法將它們施用于患者后，使活性成分快速、持續(xù)或延遲釋放。
例如，本發(fā)明的組合物可以溶解于油、丙二醇或通常用來生產(chǎn)注射劑的其它溶劑。載體的合適實例包括生理鹽水、聚乙二醇、乙醇、植物油、豆蔻酸異丙酯等，但是并不限于這些。對于局部施用，本發(fā)明的化合物可以配制成軟膏和乳膏型。
可以將含有本組合物的藥用制劑制備為任何形式，比如口服劑型(粉劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、水性藥物(aqueous medicine)、糖漿劑、酏劑藥丸(elixirs pill)、粉劑、sachet、顆粒劑)，或局部制劑(乳膏、軟膏、洗劑、凝膠劑、香膏(balm)、貼劑(patch)、糊劑、噴霧液、氣溶膠等)，或可注射制劑(溶液、混懸劑、乳劑)。
藥物劑型的本發(fā)明組合物可以以它們藥物可接受的鹽形式應(yīng)用，也可以單獨或適當結(jié)合、以及與其它藥物活性化合物的組合形式應(yīng)用。
本發(fā)明提取物或組合物的期望劑型依賴于病癥和對象的體重、嚴重程度、藥物形式、施用的途徑和周期而變化，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員來選擇。然而，為了獲得期望的效果，通常向施用者推薦本發(fā)明的提取物或化合物的量為10g/kg、優(yōu)選1-3g/kg體重/天?？梢詥为毣蛎刻旆譃閹状问┯迷撍巹?。根據(jù)組合物，本發(fā)明的提取物的量應(yīng)該是基于組合物總重的0.01-95重量％、優(yōu)選0.5-80重量％存在。
可以通過各種途徑給動物對象比如哺乳動物(大鼠、小鼠、家畜或人)施用本發(fā)明的藥物組合物?？梢钥紤]所有的施用方式，例如，施用可以是口服、直腸施用或通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、鞘內(nèi)、硬膜外或腦室內(nèi)(intracerebroventricular)注射。
同樣，本發(fā)明提供用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的健康食品飲料的組合物，其添加硬獼猴桃0.01-20重量％、氨基酸0.001-5重量％、維生素0.001-2重量％、糖0.001-20重量％、有機酸0.001-10重量％、適量的甜味劑和調(diào)味劑。
可以將上面的硬獼猴桃提取物加到食品和飲料中用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
為了開發(fā)健康食品，包含本發(fā)明上面提取物的可添加食品的實例是，例如，各種食品、飲品、膠(gum)、復(fù)合維生素、健康改善食品等，并且它們可以作為粉末、顆粒、片劑、咀嚼片、膠囊或飲料等使用。
同樣，本發(fā)明的提取物通過包含在嬰幼兒食品中，比如調(diào)制奶粉、用于生長期的調(diào)制奶粉、用于生長期的調(diào)制食品，將能夠預(yù)防、和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
可以向食品、添加劑或飲料中加入上述組合物，其中在食品和飲料中上述提取物的量通常對于健康食品組合物而言是食品總重的大約0.1-95w/w％、優(yōu)選1-80w/w％，和在100ml健康飲料組合物中的比例是1-30g、優(yōu)選3-10g。
只要本發(fā)明的健康飲料組合物以所指示的比率包含上述提取物作為主要成分，對其它的液體組分沒有特別限制，其中其它組分可以是各種除臭劑或天然碳水化合物等比如常規(guī)飲料。前述天然碳水化合物的實例是單糖比如葡萄糖、果糖等；二糖比如麥芽糖、蔗糖等；常規(guī)的糖比如糊精、環(huán)糊精；和糖醇比如木糖醇、和赤蘚糖醇等。作為前述以外的其它除臭劑，天然除臭劑比如taumatin、甜葉菊提取物(stevia extract)比如levaudiosideA、甘草酸等；和合成除臭劑比如糖精、天冬甜素(aspartam)等可以適宜的應(yīng)用。上述天然碳水化合物的量通常是在100ml的本飲料組合物中的比例為大約1-20g、優(yōu)選5-12g。
除了前述組合物，其它組分是各種營養(yǎng)物、維生素、礦物質(zhì)或電解質(zhì)、合成調(diào)味劑、在干酪巧克力等情況中的著色劑和改進劑、果膠酸和其鹽、海藻酸和其鹽、有機酸、保護性膠體粘合劑(protective colloidal adhesive)、pH控制劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于碳酸飲料等的碳酸化劑。除了前述組分，其它組分可以是用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果汁，其中所述組分可以單獨或組合使用。組分的比例不是非常重要，但通常是每100w/w％本發(fā)明組合物大約0-20w/w％。其中包含前述提取物的可添加食品的實例是各種食品、飲料、膠(gum)、復(fù)合維生素、健康改善食品等。
本發(fā)明的組合物可以另外包含一或多種有機酸，比如檸檬酸、延胡索酸、己二酸、乳酸、蘋果酸；磷酸鹽，比如磷酸鹽、磷酸鈉、磷酸鉀、酸性焦磷酸鹽、多磷酸鹽；天然抗氧化劑，比如多酚、兒茶素、α-生育酚、迷迭香提取物、維生素C、綠茶提取物、甘草提取物、殼聚糖、丹寧酸、植酸等。
硬獼猴桃的上述提取物可以是20-90％高濃度的液體、粉末、或顆粒。
相似的，硬獼猴桃的上述提取物可以另外包括一種或多種的乳糖、酪蛋白、右旋糖(dextrose)、葡萄糖(glueose)、蔗糖和山梨糖醇。
同樣，在本發(fā)明中，也提供了食品添加劑比如殺菌劑、香料(spice)、佐料(seasoning)、各種營養(yǎng)物、維生素、礦物質(zhì)或電解質(zhì)、合成調(diào)味劑、在干酪巧克力等情況中的著色劑和改進劑、果膠酸和其鹽、海藻酸和其鹽、有機酸、保護性膠體粘合劑、pH控制劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于碳酸飲料等的碳酸化劑、或作為食品材料主要成分的使用方法。
其中可以通過沉積、噴、或混合向食品中添加食物添加劑，添加劑的比例不是非常重要，但一般在每100w/w％本組合物約0.01-20w/w％的范圍。包含前述提取物的可添加食品在此作為實例。
其中食品添加劑可以被添加于一種或超過一種的食品，比如水果、蔬菜、食品、脫水食品或分割產(chǎn)品比如水果、蔬菜；果汁、蔬菜汁或者混合汁；含酸飲料的飲品；甜點比如曲奇、糖果、飴糖、膠；面包；冰激凌、茶、發(fā)酵乳比如酸奶；乳制品、香料、酒精飲料、罐頭食品、瓶裝食品(inbottles)、面條、加工的牲畜產(chǎn)品、加工的海產(chǎn)品、發(fā)酵食品、豆類食品、谷類食品、加工的肉、甘草制品或hubs。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了基本包含由上面制備方法所制備的所述提取物的飼料或飼料添加劑，其用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明的上述食品添加劑可以基于飼料總干重以5-100g/kg混合量進行混合。
此外，本發(fā)明提供包含以上飼料添加劑的飼料組合物。
同樣，本發(fā)明也提供包含有效量硬獼猴桃粗提物或非極性溶劑可溶性提取物的化妝品組合物，其用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
本發(fā)明的化妝品組合物提供這樣的化妝品組合物，其包含基于組合物總重的0.01-30％、更優(yōu)選0.01-5％本發(fā)明組合物重量的以上提取物，其用于治療、預(yù)防、和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
其它的組分可以是本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)化妝品組合物成分的混合物。
含有以上組合物的化妝品制劑可以制備為任何形式比如皮膚化妝品、洗液(lotion)、霜(cream)、精華素(essence)、收斂劑(toner)、乳液(emulsion)、面膜(pack)、湯(soup)、洗發(fā)劑(shampoo)、護發(fā)素(rinse)、洗潔劑、身體清洗液(body washing solution)、沖洗液(washing solution)、治療性化妝品(treatment)、凝膠、香脂(balm)、噴霧液(spray solution)等。
本發(fā)明的化妝品組合物可以包含另外的添加劑，其選自水溶性維生素、脂溶性維生素、肽聚合物、多糖聚合物、鞘脂和海草提取物。
優(yōu)選的水溶性維生素是可以與化妝品混合的任一種，然而優(yōu)選各種維生素比如維生素B1、B2、B6、吡哆醇、鹽酸吡哆醇、維生素B12、泛酸、煙酸、煙酰胺、葉酸、維生素C、維生素H等、它們的鹽比如硫胺素鹽酸鹽、抗壞血酸鈉鹽等或它們的衍生物比如抗壞血酸-2-膦酸鈉鹽、抗壞血酸-2-膦酸鎂鹽，并且它們可以通過常規(guī)方法獲得，比如微生物轉(zhuǎn)化方法、從微生物培養(yǎng)純化的方法、酶法或化學(xué)合成方法。
優(yōu)選的脂溶性維生素是能與化妝品混合的任一種，然而優(yōu)選各種維生素比如維生素A、D2、D3、E(dl-α-生育酚、d-α-生育酚、d-Δ-生育酚)和它們的衍生物比如棕櫚酸抗壞血酸酯、硬脂酸抗壞血酸酯、二棕櫚酸抗壞血酸酯、乙酸-dl-α-生育酚、煙酸dl-α-生育酚、維生素E、dl-泛醇、D-泛醇、泛酰基乙醚(pantothenyl ethylether)等含有用于本發(fā)明實施例的脂溶性維生素的物質(zhì)，并且它們可以通過常規(guī)的方法獲得，比如微生物轉(zhuǎn)化方法、從微生物培養(yǎng)純化的方法、酶法或化學(xué)合成方法。
優(yōu)選的肽聚合物是能與化妝品混合的任一種，然而膠原、可水解膠原、明膠、彈性蛋白、可水解明膠、角蛋白等含有用于本發(fā)明實施例的肽聚合物的物質(zhì)是優(yōu)選的。
優(yōu)選的多糖聚合物是能與化妝品混合的任一種，然而優(yōu)選羥乙基纖維素、黃原膠、透明質(zhì)酸鈉、硫酸軟骨素或它們的鹽(鈉鹽等)等。例如，可以通過平常從哺乳動物或魚的純化來應(yīng)用硫酸軟骨素或它們的鹽。
優(yōu)選的鞘脂是能與化妝品混合的任一種，然而優(yōu)選神經(jīng)酰胺、pit-神經(jīng)鞘氨醇、神經(jīng)鞘脂多糖等。可以用常規(guī)方法從哺乳動物、魚、貝類、酵母或植物等進行純化來獲得神經(jīng)鞘脂。
優(yōu)選的海草提取物是能與化妝品混合的任一種，然而優(yōu)選褐藻、紅藻、綠藻等的提取物或者從其分離的被純化的角叉菜膠、海藻酸、海藻酸鈉、鉀是優(yōu)選的。可以用常規(guī)方法從海草進行純化來獲得藻類提取物。
本發(fā)明的化妝品組合物可以與常規(guī)化妝品組合物組合的其它成分進行組合，如必要的話，可以加入上述主要成分。
優(yōu)選的上述其它成分可以包含油成分、保濕劑、柔潤劑(emollients)、表面活性劑、有機或無機染料、有機粉末、紫外線吸收劑、防腐劑、消毒劑、抗氧化劑、植物提取物、pH控制劑、醇、色素、香水(perfume)、冷卻劑(refrigerant)、血液循環(huán)劑(blood circulator)、止汗劑、蒸餾水等。
優(yōu)選的油成分可以包含酯油、烴油、硅油、氟化油(fluoride oil)、動物油、植物油等。
優(yōu)選的上述酯油可以包括三2-乙基己酸甘油酯、2-乙基己酸十六酯、肉豆寇酸異丙酯、肉豆寇酸丁酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸乙酯、棕櫚酸辛酯、異硬脂酸異十六酯、硬脂酸丁酯、亞油酸乙酯、亞油酸異丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸十六基酯、肉豆蔻酸異十八酯、棕櫚酸異十八酯、肉豆蔻酸辛基十二酯、異硬脂酸異十六酯、癸二酸二乙酯(diethyl sebasic acid)、己二酸異丙酯、新戊酸異烷基酯、三(癸酰基，癸酸)甘油酯(glyceryltri(capryl，capric acid))、三羥甲基丙基三2-乙基己酸酯(trimethylopropanetri-2-ethyl hexanoic acid)、三異硬脂酸三羥甲基丙酯、四2-乙基己酸季戊四醇酯、辛酸十六酯、月桂酸癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸十六酯、硬脂酸十八酯、油酸癸酯、亞油酸十六酯、月桂酸異十八酯、肉豆蔻酸異十三酯、棕櫚酸異十六酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸異十六酯、油酸異癸酯、油酸辛基十二酯、亞油酸辛基十二酯、異硬脂酸異丙酯、2-乙基己酸十六氧十八(cetostearyl)酯、2-乙基己酸十八醇酯、異硬脂酸己酯、二辛酸乙二醇酯、二油酸乙二醇酯、二癸酸丙二醇酯、二(癸酰基，癸酸)丙二醇酯、二辛酸丙二醇酯、二癸酸新戊二醇酯、二辛酸新戊二醇酯、三辛酸甘油酯、三-十一酸甘油酯、三異棕櫚酸甘油酯、三異硬脂酸甘油酯、新戊酸辛基十二酯、辛酸異十八酯、異壬酸辛酯、新癸酸己基癸酯、新癸酸辛基十二酯、異硬脂酸異十六酯、異硬脂酸異十八酯、異硬脂酸辛基癸酯、齊墩果酸聚甘油酯、異硬脂酸聚甘油酯、檸檬酸三異十六酯、檸檬酸三異烷基酯、檸檬酸三異辛酯、乳酸十二酯、乳酸十四酯、乳酸十六酯、乳酸辛基癸酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸乙酰三乙酯、檸檬酸乙酰三丁酯、檸檬酸三辛酯、馬來酸二異十八酯、羥基硬脂酸二2-乙基己基酯(di 2-ethylhexyl hydroxyl stearic acid)、琥珀酸2-乙基己酯、己二酸二異丁酯、癸二酸二異丙酯(diisopropyl sebasinic acid)、癸二酸二辛酯(dioctyl sebacinic acid)、硬脂酸膽甾醇酯(cholesteryl stearic acid)、異硬脂酸膽甾醇酯、羥基硬脂酸膽甾醇酯(cholesteryl hydroxyl stearicacid)、羥基硬脂酸膽甾醇酯(cholesteryl hydroxyl stearic acid)、油酸膽甾醇酯、油酸二氫膽甾醇酯、pitsteryl isostearic acid、pitsteryl oleic acid、isocetyl 12-stealoyl hydroxyl stearic acid、stearyl 12-stealoyl hydroxylstearic acid、isostearyl 12-stealoyl hydroxyl stearic acid。
優(yōu)選的上述烴油可以包括角鯊烯、液體石蠟、α-烯烴低聚物、異鏈烷烴、地蠟、石蠟、液體異鏈烷烴、polybuden、微晶蠟、凡士林等。
優(yōu)選的硅油可以包括聚甲基硅氧烷、甲基苯基硅氧烷、甲基環(huán)聚硅氧烷(methylcyclopolysiloxane)、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基環(huán)硅氧烷、二甲基硅氧烷-甲基十六基氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷-甲基stealoxy硅氧烷共聚物、烷基改性硅油、氨基改性硅油等。
優(yōu)選的氟化油可以包括全氟聚醚等。
優(yōu)選的動物或植物油可以包括鱷梨油、杏仁油、橄欖油、芝麻油、稻殼油、紅花油、豆油、玉米油、菜油、苦杏仁油、棕櫚仁油、棕櫚油、pimajaoil、向日葵油、水果籽油(fruite seed oil)、棉籽油、椰樹油、cucui nut oil、麥胚芽油、稻胚芽油、sia butter、月見草油(evening-primrose oil)、markerdaymia nut oil、medo home oil、蛋黃油、羊毛脂、大麻子油、貂油(minkoil)、orange ruppy oil、霍霍巴油、carnawa wax、液體羊毛脂、固體pimaja蠟等。
優(yōu)選的潤濕劑可以包括水溶性低分子潤濕劑、親脂性低分子潤濕劑、水溶性聚合物和脂溶性聚合物。
特別是，優(yōu)選的水溶性低分子潤濕劑可以包括蠟素、谷氨酰胺、山梨糖醇、甘露醇、吡咯烷酮-羧酸鈉、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、乙二醇、聚乙二醇(聚合指數(shù)＞2)、聚丙二醇(聚合指數(shù)＞2)、乳酸、乳酸鹽等。
優(yōu)選的脂溶性低分子潤濕劑可以包括膽固醇、膽固醇酯等。
優(yōu)選的水溶性聚合物可以包括羧基乙烯聚合物、聚天冬氨酸鹽、黃蓍膠、黃原膠(xanthin gum)、HMC(羥甲基纖維素)、HEC(羥乙基纖維素)、HPC(羥丙基纖維素)、羧甲基纖維素、水溶性甲殼素、殼聚糖、糊精等。
優(yōu)選的脂溶性聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮-二十烯(eicocene)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮-十六碳烯共聚物、硝化纖維素、糊精脂肪酸酯、硅氧烷聚合物等。
優(yōu)選的潤膚劑可以包括長鏈酰基谷氨酸膽甾醇酯、膽甾醇羥基硬脂酸、12-羥基硬脂酸、rogic acid、羊毛脂脂肪酸膽甾醇酯等。
優(yōu)選的表面活性劑可以包括非離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、雙性表面活性劑等。
特別的是，優(yōu)選的非離子表面活性劑可以包括自乳化單硬脂酸甘油、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯(POE)失水山梨醇脂肪酸酯、POE失水山梨醇脂肪酸酯、POE甘油脂肪酸酯、POE烷基醚、POE脂肪酸酯、POE solid pimaja oil、POEpimaja oil、POE-POP共聚物、POE-POP烷基醚、聚醚改性硅酮、月桂酸烷醇酰胺、烷基氧化胺、氫加成大豆磷脂等。
優(yōu)選的陰離子表面活性劑可以包括脂肪酸皂、α-酰基磺酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基烯丙基磺酸、烷基萘磺酸鹽、烷基磺酸鹽、PEO烷醚硫酸鹽、烷基酰胺硫酸鹽、烷基磷酸鹽、POE烷基磷酸鹽、烷基酰胺磷酸鹽、烷?；榛；撬猁}(alkyloylalkyl taurine salt)、N-酰基氨基酸鹽、POE烷基醚羧酸鹽、烷基硫代琥珀酸鹽、烷基硫代乙酸鹽、?；伤饽z原肽鹽、全氟烷基磷酸酯等。
優(yōu)選的陽離子表面活性劑可以包括烷基三甲基氯化銨、硬脂基三甲基氯化銨、硬脂基三甲基溴化銨、鯨蠟基硬脂基三甲基氯化銨(setostearyltrimethyl ammonium chloride)、二硬脂基二甲基氯化銨、硬脂基二甲基苯甲基氯化銨、vehenyltrimethyl ammonium bromide、苯扎氯胺、二乙氨基乙基硬脂酰胺、二甲基氨基丙基硬脂酰胺、羊毛脂季銨衍生物等。
優(yōu)選的兩性表面活性劑可以包括羧基甜菜堿型、酰氨甜菜堿型、羥基磺?；鸩藟A型、磷?；鸩藟A型、氨基羧酸、咪唑啉衍生物型、酰胺胺型(amide amine type)等。
優(yōu)選的有機和無機染料可以包括硅酸、無水硅酸、硅酸鎂、滑石、ceracyte、云母、高嶺土、三氧化二鐵、黏土、膨潤土(bentonite)、鈦膜云母(titan film mica)、氧化氯鉍、氧化鋯、氧化鎂、氧化鋅、氧化鈦、氧化鋁、硫酸鈣、硫酸鋇、硫酸鎂、碳酸鈣、碳酸鎂、氧化鐵、氧化鉻、氫氧化鉻、calamine、炭黑和它們的作為無機染料的復(fù)合物；聚酰胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯樹脂、尿素樹脂、酚樹脂、氟樹脂、硅樹脂、丙烯樹脂、三聚氰銨樹脂(melamine resin)、環(huán)氧樹脂、聚碳酸酯樹脂、二乙烯基苯-苯乙烯共聚物、絲粉(silk powder)、纖維素、CI顏料黃、CI顏料橙作為有機染料；和它們的復(fù)合物等。
優(yōu)選的有機粉末可以包括金屬皂比如硬脂酸鈣；烷基膦酸金屬鹽比如棕櫚酸鈉鋅、月桂酸鋅、月桂酸鈣；酰基氨基酸多價金屬鹽比如N-月桂酰-β-丙氨酸鈣、N-月桂酰-β-丙氨酸鋅、N-月桂酰-甘氨酸鈣等；酰氨磺酸多價金屬鹽比如N-月桂酰?；撬徕}、N-棕櫚酰牛磺酸鈣；N-酰基堿式氨基酸比如N-ε-月桂酰-L-賴氨酸、N-ε-棕櫚酰賴氨酸、N-α-棕櫚酰鳥氨酸、N-α-月桂酰精氨酸、硬化羊毛脂脂肪酸?；彼岬?；N-?；嚯谋热鏝-月桂酰甘氨酰甘氨酸；α-氨基脂肪酸比如α-氨基辛酸、α-氨基月桂酸等；聚乙烯、聚丙烯、尼龍、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯-苯乙烯共聚物、四氟乙烯等。
優(yōu)選的紫外吸收劑可以包括對氨基苯甲酸、對氨基乙基苯甲酸酯、對氨基戊基苯甲酸酯、對氨基辛基苯甲酸酯、乙二醇水楊酸酯、苯基水楊酸酯、辛基水楊酸酯、苯甲基水楊酸酯、丁苯基水楊酸酯、水楊酸三甲環(huán)己(homomentyl)酯、苯甲基肉桂酸、對甲氧基2-乙氧基乙基肉桂酸、對甲氧基辛基肉桂酸、二對甲氧基單-2-乙基己烷甘油肉桂酸、對甲氧基異丙基肉桂酸、二異丙基-二異丙基肉桂酸酯混合物、urokanic acid、ethyl urokanicacid、羥基甲氧基二苯甲酮、羥基甲氧基二苯甲酮磺酸及其鹽、二羥基甲氧基二苯甲酮、二羥基甲氧基二苯甲酮二磺酸鈉、二羥基二苯甲酮、四羥基二苯甲酮、4-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷、2，4，6-三苯胺基-對-(碳-2’-乙基己基-1’-氧)-1，3，5-三嗪、2-(2-羥基-5-甲基苯基)苯并三唑等。
優(yōu)選的防腐劑可以包括扁柏酚、三氯酸(trichloric acid)、三氯羥基二苯基醚、葡萄糖醛酸氯己定、苯氧基乙醇、間苯二酚、異丙基甲基苯酚、甘菊環(huán)(azulene)、水楊酸、zinc pilithione、bezalconium HCl、光敏劑301、單硝基愈創(chuàng)木酚鈉、十一碳烯酸等。
優(yōu)選的抗氧化劑可以包括丁基羥基茴香醚、沒食子酸丙酯、ellisorbate等。
優(yōu)選的pH控制劑可以包括檸檬酸、檸檬酸鈉、蘋果酸、蘋果酸鈉、延胡索酸、延胡索酸鈉、琥珀酸、琥珀酸鈉、氫氧化鈉、磷酸氫鈉等。
優(yōu)選的醇可以包括十六醇等。
此外，其它可向上述組分添加的成分及其量不限于本發(fā)明目的和效果的范圍，然而，所述其它成分的量優(yōu)選是總組合物的0.01-5％、更優(yōu)選0.01-3％。
本發(fā)明的化妝品組合物可以被改為溶液、乳液、粘性混合物等。
上述成分比如水溶性維生素、脂溶性維生素、肽聚合物、多糖聚合物、鞘脂、海草提取物和如果必要除了上述成分還可以添加的成分可以根據(jù)文獻(Matsumoto Mithio，Manual for the development of transdermal appliedpreparation.Seisi Press，1st Ed.，1985)中公開的常規(guī)方法來獲得。
此外，本發(fā)明也提供包含上述提取物作為主要組分的化妝品添加劑，其用于預(yù)防或改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
上面的化妝品添加劑可以通過加到現(xiàn)有的化妝品和洗液中來使用，用來預(yù)防、改善或治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
此外，上面的化妝品添加劑可以用到霜、洗液、message pack和身體洗液、湯、洗發(fā)液等。
本發(fā)明的提取物沒有毒性并且其沒有副作用；它們可以安全的應(yīng)用。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員很清楚的是可以對本發(fā)明的組合物、用途和制備法、制備物進行各種修飾和變化，其并不脫離本發(fā)明的精神和范圍。
通過以下的實施例將對本發(fā)明進行更詳細的說明。然而，應(yīng)該理解的是本發(fā)明不以任何方式限制于這些實施例。


通過以下結(jié)合附圖的詳細說明，本發(fā)明的以上和其它目的、特征和其它優(yōu)勢將更加清楚的被理解，其中圖1顯示硬獼猴桃提取物和級分的TLC照片；圖2顯示亞級分[1]的2D-TLC照片；圖3顯示亞級分[2]的2D-TLC照片；圖4顯示硬獼猴桃的熱水提取物在小鼠中降低DHT濃度的作用；圖5顯示硬獼猴桃的非極性溶劑可溶性提取物在小鼠中對血DHT濃度的降低作用；
圖6顯示硬獼猴桃的純化提取物在小鼠中對血DHT濃度的降低作用；圖7和8顯示經(jīng)過分別口服兩周時間的對照物和獼猴桃提取物處理的小鼠背部毛發(fā)生長的照片。
具體實施例方式
通過以下實施例和試驗實施例用于進一步舉例說明本發(fā)明而不限制發(fā)明范圍。
實施例1.硬獼猴桃提取物的制備1-1.硬獼猴桃水提取物的制備購自位于首爾Kyung-dong Market的硬獼猴桃(軟棗獼猴桃)100g干燥硬果實和干燥莖、狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃的干燥果實被壓碎，與1L蒸餾水混合，然后在90-95℃進行回流提取3小時，進行三次，然后提取物用濾紙過濾，接下來用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(N-1000，Eyela Co.Japan)在55-56℃低壓下濃縮并用凍干儀干燥，從而獲得獼猴桃(軟棗獼猴桃)的15.6g干燥果實提取物、10.4g干燥莖提取物、狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃各自16.2g和17.0g的干果實提取物。干燥粉末被溶解于蒸餾水(100mg/ml)。
1-2.硬獼猴桃的水-醇可溶性提取物的制備除了應(yīng)用不同比率的水-醇溶劑混合物比如30％、50％、和70％的乙醇溶劑以外，所有的步驟與實施例1-1的步驟相同。從而對于每個比率的溶劑混合物獲得11g～13g的硬獼猴桃干燥粉末并且干燥粉末被溶解于蒸餾水(100mg/ml)。
實施例2.極性溶劑和非極性溶劑可溶性硬獼猴桃提取物的制備通過以下步驟對在實施例1-1中制備的水提取物進行分級。
2-1.氯仿可溶性級分的制備向在實施例1-1中獲得的5g硬獼猴桃提取物加入50ml蒸餾水。通過分液漏斗向其加入50ml氯仿，并用力搖晃從而使其分為氯仿可溶性層和水可溶性層。
2-2.乙酸乙酯可溶性級分的制備在實施例1-1中獲得的以上水可溶性層與50ml乙酸乙酯進行混合，隨后被分為乙酸乙酯可溶性層和水可溶性層。
以上的氯仿可溶性層、乙酸乙酯可溶性層和水層通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行濃縮，用凍干儀進行干燥，從而分別獲得0.34g氯仿可溶性級分、0.05g乙酸乙酯可溶性級分和4.61g水級分粉末。
實施例3.通過硅膠柱色譜法對硬獼猴桃提取物進行分級對實施例2-2中的2784mg乙酸乙酯可溶性級分進行進一步硅膠柱色譜法(Daiso gel IR-60-W-4063mm)。用氯仿∶甲醇∶水([1]90∶11∶1，[2]60∶10∶1，[3]60∶20∶2)的溶劑混合物作為開始的展開溶劑，和用甲醇[4]作為結(jié)束，以300ml/小時的洗脫速度，從而獲得四個亞分級分([1]2381mg，[2]135mg，[3]148mg，[4]98mg)。
對上面的水提取物、乙酸乙酯可溶性級分和四個亞級分進行TLC(TLC板∶Merck Co.Ltd.，展開溶劑；氯仿∶甲醇∶水＝9∶5∶1)和結(jié)果顯示在圖1中。如圖1所示，泳道1是水提取物，泳道2是乙酸乙酯可溶性級分，泳道3是[4]亞級分，泳道4是[3]亞級分，泳道5是[2]亞級分和泳道6是[1]亞級分。
對上面的[1]和[2]亞級分進行2D-TLC，其中用氯仿∶甲醇∶水(9∶5∶1)溶劑混合物作為第一展開劑和氯仿∶丙酮∶水(3∶8∶0.5)溶劑混合物作為第二展開劑(見圖1和2)。
試驗實施例1.對血DHT形成的抑制活性1-1.硬獼猴桃的極性可溶性提取物對血DHT濃度的作用為了確認硬獼猴桃提取物對血DHT濃度的抑制作用，給小鼠施用硬獼猴桃的水提取物和乙醇提取物并且通過以下步驟確定血DHT濃度；使6周齡雄性C57BL/6小鼠(首爾國立大學(xué)動物實驗中心)適應(yīng)環(huán)境一周時間。7周后，16只小鼠被分成4組，并且每組分別口服施用3周的100ul硬獼猴桃水提取物(1500？g/小鼠/天)、100ul硬獼猴桃乙醇提取物(1500？g/小鼠/天)、100ul非那甾胺(100？g/小鼠/天)和100ul飲用水(100？g/小鼠/天)。小鼠被處死并且從其收集血清和脾器官后，用ELISA(IBL-Hamburg GmbH)方法測量血DHT濃度。
如圖4中所示，與施用非那甾胺的組相似，在施用硬獼猴桃提取物的組中顯示血DHT濃度降低了約90％。
1-2.硬獼猴桃的非極性可溶性提取物對血DHT濃度的作用為了測量C57BL/6小鼠中血DHT濃度，對在上面的實施例2中制備的氯仿可溶性級分、乙酸乙酯可溶性級分和水可溶性級分進行與上面試驗實施例1-1中公開的同樣試驗。
給C57BL/6小鼠分別施用50？l的氯仿可溶性級分、乙酸乙酯可溶性級分和水可溶性級分。施用100？l的飲用水作為對照。
如圖5中所示，在施用硬獼猴桃的乙酸乙酯可溶性級分的組中顯示血DHT濃度降低約95％，在施用硬獼猴桃的水可溶性級分的組中其只有輕微降低。然而，在施用硬獼猴桃的氯仿可溶性級分的組中它沒有受到影響。
1-3.硅膠柱色譜級分對血DHT濃度的作用為了測量C57BL/6小鼠的血DHT濃度，對在上面的實施例3中制備的氯仿可溶性級分、硅膠柱色譜級分[1]、[2]、[3]和[4]進行與上面試驗實施例1-1中公開的同樣試驗。
給C57BL/6小鼠分別施用30ul的硅膠色譜級分[1]、[2]、[3]和[4]。施用100ul飲用水作為對照。
如圖6中所示，施用級分[1]和[2]的小鼠顯示出明顯的DHT抑制。
1-4.硬獼猴桃莖的水可溶性提取物對血DHT濃度的作用為了測量C57BL/6小鼠的血DHT濃度，對水可溶性級分進行與上面試驗實施例1-1中公開的同樣試驗。
7周后，8只小鼠被分成2組并且每組分別口服施用3周的100？l硬獼猴桃莖的水提取物(1500？g/小鼠/天)和100ul飲用水(100？g/小鼠/天)。小鼠被處死并且從其收集血清和脾器官后，測量血DHT濃度。在施用硬獼猴桃莖的水提取物組中，血DHT濃度分別為42pg/ml、193pg/ml、362pg/ml和1625pg/ml。因此，它證實了硬獼猴桃莖提取物以及硬獼猴挑提取物顯示出對DHT形成的抑制作用。
試驗實施例2.對發(fā)根形成的刺激作用2-1.硬獼猴桃的水可溶性提取物對發(fā)根形成的作用為了確定硬獼猴桃的水可溶性提取物對發(fā)根形成的作用，對小鼠模型依下列各項實施；使6周齡雌性C57BL/6小鼠(首爾國立大學(xué)動物實驗中心)適應(yīng)環(huán)境7天。7周后，使用電動剃刀對每只小鼠背部的毛發(fā)進行仔細修剪。隨后10只小鼠被分成2個組，并且每組分別口服施用4周的100？l硬獼猴桃水提取物(1500？g/小鼠/天)和100ul飲用水(100？g/小鼠/天)。通過證實毛發(fā)被去除位置上皮膚顏色從從鮮紅(bright red)到由黑色素而變暗顏色的變化，可以容易地識別發(fā)根是否被活化。同樣，可以通過直接觀察硬獼猴桃的水可溶性提取物對發(fā)根形成的作用來確定毛發(fā)的生長。
如圖7和8中所示，在施用硬獼猴桃水級分的組中，毛發(fā)被去除位置的皮膚顏色在施用后的2周內(nèi)變暗，這顯示出毛發(fā)的生長。然而，在施用硬獼猴桃氯仿級分的組中，沒有顯示出毛發(fā)的生長以及皮膚顏色的變化。在施用后的4周時間，在前面的組中的每只小鼠的背部都覆蓋有新生的毛發(fā)，然而在后面的組中仍然沒有顯示任何的新生毛發(fā)。因此，它證實了硬獼猴桃提取物可以在促進小鼠發(fā)根形成的機制中刺激毛發(fā)的生長。
2-2.硬獼猴桃的非極性可溶性提取物對發(fā)根形成的作用為了確定在上面的實施例2中制備的氯仿可溶性級分、乙酸乙酯可溶性級分和水可溶性級分對發(fā)根形成的作用，以與公布于以上試驗實施例2-1中相似的步驟進行以下試驗。
接下來20只小鼠被分成4組并且每組分別口服施用4周的100？l硬獼猴桃水級分、100？l硬獼猴桃乙酸乙酯級分、100？l硬獼猴桃氯仿級分和100？l飲用水。
作為結(jié)果，與其它組相比，在施用硬獼猴桃的乙酸乙酯可溶性級分的組中，毛發(fā)的生長被顯著地高度刺激。
試驗實施例3.硬獼猴桃提取物對改善脂溢性皮膚病的作用為了檢驗硬獼猴桃提取物對改善脂溢性皮膚病的作用，給三名患有脂溢性皮炎的志愿者口服施用每天一次、持續(xù)4周、每次1g硬獼猴挑水提取物，以證實是否改善了脂溢性皮膚病，依以下各項實施3-1.患者K，患有嚴重脂溢性皮膚病并且多頭皮屑以致發(fā)展成脫發(fā)的29歲韓國女性。在她持續(xù)兩周每天一次服用含有1g硬獼猴桃水提取物的片劑后，脂溢性和角質(zhì)組織生長性皮膚病明顯減輕并且脫發(fā)綜合征減輕超過約50％。
3-2.患者P，患有油性面和頭皮并且多頭皮屑的27歲韓國男性。在他持續(xù)兩周每天一次服用含有1g硬獼猴挑水提取物的片劑后，油性面被明顯減輕并且脫發(fā)癥減輕超過約70％。
3-2.患者U，從幾年前就患有脂溢性皮膚病尤其是面部以及斑狀(purutitic)和點狀頭皮的29歲韓國男性。在他持續(xù)兩周每天一次服用含有1g硬獼猴桃水提取物的片劑后，斑狀頭皮綜合征消失并且由油性面引起的問題例如丘疹也明顯消失。
試驗實施例4.毒性檢驗為了檢驗硬獼猴桃提取物的毒性，在小鼠上進行重復(fù)毒性檢驗。
10只雌性Balb/c小鼠被分成兩組并且給小鼠持續(xù)4周施用150mg/kg的本發(fā)明的硬獼猴桃提取物(150mg/kg)，并且對照組用水處理。進行4周毒性癥狀的觀察，比如觀察體重的變化、血液學(xué)分析和組織學(xué)檢驗。
作為試驗結(jié)果，施用150mg/kg本發(fā)明硬獼猴桃提取物的小鼠沒有出現(xiàn)死亡例并且在體重增加、食物的熱量攝取、血液學(xué)分析和組織學(xué)檢驗等方面也沒有明顯異常。根據(jù)以上結(jié)果，證實了硬獼猴桃是安全的藥物。
(1)體重和觀察沒有觀察到體重的異常變化。
(2)血液學(xué)分析在WBC、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、RBC、血紅蛋白和血小板的數(shù)量上沒有觀察到異常癥狀。
(3)血清生化檢驗在血清的AST、ALT、LDH、膽紅素、肌酸酐、葡萄糖、膽固醇、礦物質(zhì)、白蛋白、BUN、脂肪酶和淀粉酶的水平上沒有觀察到異常癥狀。
(4)組織學(xué)檢驗在腎、脾、肝和胸腺的組織中沒有觀察到異常癥狀。
在下文中，將描述配制方法和賦形劑的種類，但是本發(fā)明并不限于它們。代表性的制備實施例描述如下。
注射劑的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物....................50mg
偏重亞硫酸鈉.............................................3.0mg對羥基苯甲酸甲酯.....................................0.8mg對羥基苯甲酸丙酯.....................................0.1mg注射用蒸餾水.........................................適量注射制劑如下制備通過常規(guī)方法混合以上組分并加到2ml，隨后用常規(guī)注射劑制備方法將所有2ml組分填充到安瓿中并滅菌。
片劑的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物................................50mg玉米淀粉.................................................100mg乳糖.....................................................100mg硬脂酸鎂.................................................2mg通過混合以上組分并制片來制備片劑制劑。
膠囊的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物................................100mg玉米淀粉.................................................100mg乳糖.....................................................100mg滑石.....................................................2mg硬脂酸鎂.................................................適量用常規(guī)明膠制備方法通過混合以上組分并填充明膠膠囊來進行膠囊的制備。
液體的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物..................................100mg糖.........................................................20g果糖.......................................................20g檸檬香精..................................................適量蒸餾水....................................................100ml用常規(guī)液體制備方法通過混合以上組分和隨后填充100ml棕色瓶并滅菌來制備液體制劑。
保健食品的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物................................1000mg維生素混合物.............................................20g？維生素A乙酸酯..........................................70？g？維生素E................................................1.0mg？維生素B1...............................................0.13mg？維生素B2...............................................0.15mg？維生素B6...............................................0.5mg？維生素B12..............................................0.2？g？維生素C................................................10mg？生物素.................................................10？g？煙酰胺.................................................1.7mg？葉酸...................................................50？g？泛酸鈣.................................................0.5mg礦物混合物...............................................適量？硫酸亞鐵...............................................1.75mg？氧化鋅.................................................0.82mg？碳酸鎂.................................................25.3mg？磷酸一鉀...............................................15mg磷酸二鈣.................................................55mg檸檬酸鉀.................................................90mg碳酸鈣...................................................100mg氯化鎂...................................................24.8mg可以以很多方式改變上述維生素和礦物混合物。并不認為這些變化偏離了本發(fā)明的精神和范圍。
健康飲料的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物.................................1000mg檸檬酸....................................................100mg寡糖......................................................100g杏濃縮物..................................................2g
?；撬?...................................................1g蒸餾水....................................................900ml用常規(guī)健康飲料制備方法通過溶解活性組分、混合、在85℃攪拌1小時、過濾并隨后將所有組分填充入2000ml安瓿中并消毒來制備健康飲料制備物。
皮膚洗劑的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物..................................1.0(％)甘油.......................................................3.00乙醇......................................................1.00丙二醇....................................................0.10香精......................................................痕量蒸餾水....................................................加到100％根據(jù)常規(guī)洗劑制備方法通過溶解活性組分來制備皮膚制劑。
洗劑的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物............................3.0(％)L-抗壞血酸-2-磷酸鎂..................................1.00可溶性膠原(1％溶液)..................................1.00檸檬酸鈉.............................................0.10檸檬酸...............................................0.051，3-丁二醇..........................................3.00蒸餾水...............................................加到100％根據(jù)常規(guī)洗劑制備方法通過溶解活性組分來制備洗劑制劑。
乳膏的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物..............................3.0(％)聚乙二醇單硬脂酸酯.....................................2.00單硬脂酸甘油酯........................................1.00十六醇................................................4.00角鯊烯................................................6.00三2-甘油基乙基己酸酯..................................6.00
鞘糖脂(sphingo-glycolipid)................................1.001，3-丁二醇...............................................7.00蒸餾水....................................................加到100％面膜(pack)的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物................................5.0(％)聚乙烯醇.................................................13.0L-抗壞血酸-2-磷酸鎂......................................1.00月桂酰羥基脯氨酸.........................................1.00可溶性膠原(1％溶液)......................................2.001，3-丁二醇..............................................3.00乙醇.....................................................5.00蒸餾水...................................................加到100％根據(jù)常規(guī)面膜制備方法通過溶解活性組分來制備面膜制備物。
美容液的制備實施例1的硬獼猴桃水提取物......................2.00(％)羥乙基纖維素(2％溶液)..........................12.00黃原膠(xanthin gum)(2％溶液)...................2.001，3-丁二醇....................................3.00濃甘油.........................................4.00透明質(zhì)酸鈉.....................................5.00蒸餾水.........................................加到100％根據(jù)常規(guī)美容液制備方法通過溶解活性組分來制備美容液制備物。
已如此描述了本發(fā)明，顯而易見同樣可以很多方式進行變化。這些變化并不被認為偏離了本發(fā)明的精神和范圍，并且對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的所有這些修飾也包括在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
工業(yè)實用性正如本發(fā)明所述，通過本發(fā)明制備法所制備的硬獼猴桃提取物在小鼠模型試驗中降低了血DHT水平，促進了發(fā)根的形成，并且抑制毛發(fā)的脫落并改善志愿者的脂溢性皮膚病比如生角質(zhì)皮膚、皮脂溢出等。因此，硬獼猴桃可以被用作治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的藥物組合物。此外，硬獼猴桃提取物的提取物可以以保健食品、食品添加劑、飼料添加劑和化妝品組合物的形式應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物在制備治療和預(yù)防人和哺乳動物中脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療劑中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述硬獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述硬獼猴桃提取物來自其果實、莖或根的任何種類。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述粗提物可溶于選自蒸餾水、低級醇或其混合物的極性溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述非極性溶劑可溶性提取物可溶解于氯仿、乙酸乙酯、己烷、二氯甲烷或醚中。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述純化提取物是由柱色譜純化法獲得的任何級分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述純化提取物是具有如圖1-3所示TLC譜的純化提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述提取物的量為基于該試劑總重的0.01-50重量％。
9.一種包含硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物作為活性成分的藥物組合物，其用于治療和預(yù)防脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
10.一種包含硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物以及營養(yǎng)學(xué)可接受添加劑的保健食品，其用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的保健食品，其中所述硬獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的保健食品，其中所述硬獼猴桃的提取物來自其果實、莖或根的任何種類。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的保健食品，其中所述提取物的量構(gòu)成基于該組合物總重的0.01-80重量％。
14.根據(jù)權(quán)利要求10的保健食品，其中以粉末、顆粒、片、膠囊或飲料的形式提供所述保健食品。
15.一種包含硬獼猴桃粗提物的食品添加劑，其用于預(yù)防和改善脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的食品添加劑，其中所述硬獼猴桃的粗提物另外進一步包含至少一種選自乳糖、酪蛋白、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇的物質(zhì)。
17.根據(jù)權(quán)利要求15的食品添加劑，其中所述添加劑的比率為每100w/w％本組合物的約0.01-20w/w％。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17中任一項的食品添加劑，其中所述食品添加劑被用作香料(spice)、佐料(seasoning)或食品材料。
19.根據(jù)權(quán)利要求15的食品添加劑，其中可以通過沉積、噴或混合方法向食品添加所述食品添加劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求15的食品添加劑，其中所述食品是選自水果、蔬菜、食物脫水食品或分割產(chǎn)品比如水果、蔬菜；果汁、蔬菜汁或其混合汁；含酸飲料的飲品；甜點比如曲奇、糖果、飴糖、膠；面包；冰激凌、茶、發(fā)酵乳比如酸奶；乳制品、香料、酒精飲料、罐頭食品、瓶裝食品、面條、加工的牲畜產(chǎn)品、加工的海產(chǎn)品、發(fā)酵食品、豆類食品、谷類食品、加工肉、甘草制品或hubs中的至少一種。
21.一種包含硬獼猴桃粗提物的飼料添加劑，其用于預(yù)防和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的飼料添加劑，其中所述粗提物可溶于選自蒸餾水、低級醇比如乙醇、甲醇、丁醇或其混合物的極性溶劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的飼料添加劑，其中所述硬獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃。
24.根據(jù)權(quán)利要求21的飼料添加劑，其中以液體、粉末或顆粒的形式提供所述飼料添加劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求21的飼料添加劑，其中可以通過沉積、噴或混合方法向飼料添加所述飼料添加劑。
26.包含根據(jù)權(quán)利要求21-25的任一種飼料添加劑的飼料組合物。
27.一種包含硬獼猴桃粗提物的化妝品組合物，其用于預(yù)防、改善、和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的化妝品組合物，其中所述粗提物可溶于選自蒸餾水、低級醇比如乙醇、甲醇、丁醇或其混合物的溶劑。
29.根據(jù)權(quán)利要求27的化妝品組合物，其中所述提取物的量為基于該組合物總重的0.01-30重量％。
30.根據(jù)權(quán)利要求27-29任一項的化妝品組合物，其中所述化妝品組合物是皮膚化妝品、洗液、霜、精華素、收斂劑、乳液、面膜、湯、洗發(fā)劑、護發(fā)素、洗潔劑、身體清洗液、沖洗液、治療性化妝品。
31.包含硬獼猴桃粗提物的化妝品添加劑，其用于預(yù)防、改善、和治療脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病。
全文摘要
本發(fā)明涉及硬獼猴桃的粗提物、非極性溶劑可溶性提取物或純化提取物在制備治療和預(yù)防人和哺乳動物中脫發(fā)癥和脂溢性皮膚病的治療劑中的用途，和包含同樣物質(zhì)的保健食品、食品添加劑、飼料添加劑、化妝組合物。硬獼猴桃在小鼠模型試驗中降低血DHT水平、促進毛根的形成，并且抑制毛發(fā)脫落并改善志愿者的脂溢性皮膚病，比如生角質(zhì)皮膚、脂溢性皮炎等。
文檔編號A61P17/00GK101027071SQ200480043776
公開日2007年8月29日 申請日期2004年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月10日
發(fā)明者金峰徹, 魚海寬, 李和峻, 陳美琳, 鄭亨鎮(zhèn), 金善榮 申請人:赫利科生株式會社