專利名稱：生發(fā)劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制成纖維細(xì)胞生長因子5作用的新的植物提取物和含有該提取物的生發(fā)劑、化妝品。
背景技術(shù)：
以往開發(fā)的大多數(shù)生發(fā)·護發(fā)劑都是通過抑制阻礙生發(fā)的過剩的皮脂分泌、消除頭皮等的血液循環(huán)不良、或者抑制雄性激素的作用來試圖促進生發(fā)。另一方面，如在松的提取物中所見，自古以來存在來自植物的生發(fā)劑，對于其生發(fā)作用的具體機理并不清楚，但一直被作為民間療法使用。因此存在有多種生發(fā)·護發(fā)劑，但目前還沒有對疏發(fā)·脫發(fā)普遍表現(xiàn)出效果的，對于不同種類的疏發(fā)·脫發(fā)，效果的個體差異也較大。
另外，毛發(fā)不是以一定的速度不斷生長，而是重復(fù)著生長期和休止期的同時生長。從生長期到休止期的毛發(fā)的生長和脫發(fā)的周期(毛發(fā)周期)根據(jù)身體部位和人的情況每一根毛發(fā)都是不同的。作為對所述的毛母細(xì)胞的毛發(fā)周期有影響的物質(zhì)之一，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)β表現(xiàn)出使毛發(fā)周期從生長期進入退行期、休止期的作用。抑制其作用的拮抗物被發(fā)現(xiàn)，作為新的生發(fā)成分被提出。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，與上述TGF β不同的細(xì)胞因子、成纖維細(xì)胞生長因子5(以下亦稱“FGF-5”)的生物活性中也有毛發(fā)周期的控制。FGF-5蛋白屬于表現(xiàn)出多種生理作用的成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)家族。根據(jù)本發(fā)明者的研究知道，F(xiàn)GF-5具有抑制毛發(fā)的生長、使毛發(fā)周期從生長期進入退行期的作用。還知道，在生長期的毛細(xì)胞中大量表達的FGF-5的短鏈型分子FGF-5S對于FGF-5表現(xiàn)出拮抗活性，藉此延緩從生長期進入退行期，促進毛發(fā)生長(非專利文獻1～4)。
根據(jù)這樣的現(xiàn)狀，作為老齡化和高壓力的社會的反映，對于疏發(fā)·脫發(fā)普遍發(fā)揮效果的生發(fā)·護發(fā)劑的需求可以說今后依然很大。
非專利文獻1Ozawa K，Suzuki S，Asada M等J.Biol.Chem.27329262-29271(1998)
非專利文獻2Suzuki S，Kato T，Takimoto H等J.Invest.Dermatol.111963-972(1998)非專利文獻3Suzuki S，Ozawa K，Imamura T J.Invest.Dermatol.114456-463(2000)非專利文獻4Ota Y，Saitoh Y，Suzuki S等Biochem.Biophys.Res.Commun.290169-176(2002)發(fā)明的揭示本發(fā)明者在FGF-5作用的研究過程中，想到具有抑制該作用的活性的物質(zhì)可以用作發(fā)揮良好效果的生發(fā)劑，為了發(fā)現(xiàn)對于抑制毛發(fā)生長的FGF-5作用具有抑制作用或者作為拮抗物的物質(zhì)，進行了認(rèn)真研究。結(jié)果本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)特定的植物提取物符合該目的，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的是提供含有上述植物提取物的FGF-5抑制劑、生發(fā)劑、化妝品。即，提供發(fā)揮以基于FGF-5的毛發(fā)周期控制機制為基礎(chǔ)的良好的生發(fā)·護發(fā)效果，而且?guī)缀鯖]有副作用的生發(fā)劑、化妝品。
發(fā)明的概要本發(fā)明提供植物提取物，通?？梢酝ㄟ^用水或除水之外的溶劑對植物進行抽提而得到，其特征在于，具有抑制成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的作用的活性。
本發(fā)明的植物提取物的特征在于，可以通過用水或除水之外的溶劑對屬于薔薇科植物、杜鵑花科植物、冬青科植物、茜草科植物、菊科植物或褐藻植物的植物進行抽提而得到，具有抑制FGF-5的作用的活性。
上述的植物提取物中，較好的是所述植物選自營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草和褐藻類。
本發(fā)明還包括具備下述特征的植物提取物，即，該提取物通過用水或除水之外的溶劑對鉤藤或茶進行抽提而得到，具有抑制FGF-5的作用的活性。
本發(fā)明提供成纖維細(xì)胞生長因子5的抑制劑，其特征在于，含有1種或2種以上的用水或除水之外的溶劑對營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶或褐藻類進行抽提而得到的提取物。
此外，本發(fā)明還提供生發(fā)劑，其特征在于，含有1種或2種以上的上述抑制FGF-5的作用的植物提取物作為有效成分。
另外，本發(fā)明還提供化妝品，其特征在于，含有1種或2種以上的上述抑制FGF-5的作用的植物提取物作為有效成分。
發(fā)明的效果本發(fā)明的從植物或海藻類抽提得到的植物提取物表現(xiàn)出抑制FGF-5作用的活性。該FGF-5作用是指在毛母細(xì)胞中，抑制毛發(fā)生長，使毛發(fā)周期從生長期進入退行期的作用。
發(fā)明的具體說明以下，對本發(fā)明，就植物提取物、FGF-5的抑制、植物提取物的制備、生發(fā)劑和化妝品進行詳細(xì)說明。
(植物提取物)本發(fā)明的植物提取物的特征在于，可以通過用水或除水之外的溶劑從植物抽提而得到，具有抑制成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的作用的活性。該植物提取物較好是選自薔薇科植物、杜鵑花科植物、冬青科植物、茜草科植物、菊科植物、山茶科植物或褐藻植物的植物的提取物或來源于其的提取物。因此，為了制備本發(fā)明的提取物，作為原料使用的植物特別好是選自上述植物中的營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶、褐藻類的植物。
本發(fā)明中所使用的營實是日本野生的蔓生落葉灌木多花薔薇(薔薇科，學(xué)名Rosa multiflora Thunb.)或其它近緣植物(薔薇科，Rosaceae)的假果或果實。枇杷(學(xué)名Eriobotrya japonica Lindley)是在關(guān)東地區(qū)以西野生的、好石灰?guī)r性的薔薇科常綠喬木植物。地榆(學(xué)名Sanguisorba officinalis)是在日本全境的向陽山坡上野生的薔薇科多年生草本植物。熊果(學(xué)名Arctostaphylos uva-urusi(Linne)Sprengel(Ericaceae))是在北半球的高山或寒冷地區(qū)的原野上野生的杜鵑花科的常綠低矮灌木。巴拉圭茶(學(xué)名IlexParaguariensis)是在亞熱帶地區(qū)野生的冬青科植物，貓爪草(學(xué)名Uncariatomentosa)是在全球的熱帶雨林地區(qū)中野生的茜草科鉤藤屬的植物。同樣作為茜草科鉤藤屬的植物的鉤藤(學(xué)名Uncaria rhynchophylla)是常綠的藤本植物。茶(學(xué)名Camellia sinensis)是屬于山茶科的植物，艾草(學(xué)名Artemisiaprinces)是通常在田埂和草地中可以見到的菊科多年生草本植物。此外，海藻植物特別好是褐藻類(Brown algae，褐藻綱，Class Phaeophyceae)。
本說明書中，“植物提取物”是指，將植物體直接或干燥后根據(jù)需要再進行粉碎、加熱處理等必要的加工處理后，通過用水或后述的溶劑抽提得到的各種溶劑提取液、其稀釋液、其濃縮液或其干燥粉末。
本發(fā)明中所使用的上述植物的提取物是指從營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、艾草、鉤藤和貓爪草的葉、莖、樹皮、花、果實、根、雄蕊等植物體的一部分、全草或樹汁等抽提的物質(zhì)。自海藻的提取物從褐藻的一部分或整棵藻等抽提。
特別好是，營實從假果或果實抽提，熊果和枇杷從葉抽提，地榆從根莖抽提，艾草從葉和莖抽提，褐藻從整棵藻抽提。茶的提取物中，除了由從茶樹采集的茶葉等直接抽提得到的提取物之外，也包括從作為茶制品的綠茶、紅茶、烏龍茶抽提得到的提取物。
本發(fā)明的植物提取物具有抑制FGF-5的作用的活性。該活性可能是由于在該提取物中含有一種(或多種)被認(rèn)為是FGF-5抑制物質(zhì)的成分而產(chǎn)生的。
(成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的抑制)根據(jù)本發(fā)明者的研究首次知道，F(xiàn)GF-5具有抑制毛發(fā)的生長、使毛發(fā)周期從生長期進入退行期的作用。另一方面，位于毛囊基部的毛乳頭通過調(diào)節(jié)毛母細(xì)胞的增殖和分化來控制毛發(fā)的生長。進入退行期，則毛母細(xì)胞消失，雖然毛乳頭細(xì)胞活動減低，但其數(shù)量并不減少。在下一個生長期，毛乳頭細(xì)胞再次活化，由于其作用，毛母細(xì)胞重新開始增殖·分化。由于毛乳頭細(xì)胞本身不改變，所以可以生成與上一個生長期同樣粗細(xì)的毛發(fā)。因此，如果通過某種方法抑制承擔(dān)從生長期進入退行期·休止期的誘因的角色的FGF-5的作用，則只有生長期被延長。因而，期待將生長期這樣延長的物質(zhì)發(fā)揮生發(fā)·護發(fā)效果。
實際上，本發(fā)明者報道了，在生長期的毛細(xì)胞中大量表達的FGF-5的短鏈型分子FGF-5S通過對FGF-5表現(xiàn)出拮抗活性，減緩從生長期進入退行期，促進毛發(fā)生長。本發(fā)明者進一步研究后發(fā)現(xiàn)，由上述植物或海藻類得到的提取物具有抑制FGF-5作用的活性。如后所述，該提取物產(chǎn)生的抑制作用通過使用培養(yǎng)細(xì)胞考察對FGF-5、白細(xì)胞介素3(IL-3)引起的細(xì)胞增殖促進作用的影響而得到確認(rèn)。
該提取物產(chǎn)生的FGF-5抑制的機理和活性物質(zhì)的實體還不得不等待今后的研究結(jié)果。本發(fā)明的提取物或含有一種或兩種以上該提取物的成纖維細(xì)胞生長因子5抑制劑中，可能含有一種或多種具有與FGF-5S相似的拮抗活性的物質(zhì)，或者存在對于FGF-5直接產(chǎn)生抑制作用的抑制物質(zhì)。
本發(fā)明所述的抑制劑是成纖維細(xì)胞生長因子5的抑制劑，其特征在于，含有一種或兩種以上用水或除水之外的溶劑對營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶或褐藻類進行抽提而得到的提取物。這樣的抑制劑如果摻入生發(fā)劑、化妝品中，則可發(fā)揮生發(fā)效果。
(植物提取物的制備)為了制備本發(fā)明的提取物，作為用作原料的植物特別好是選自上述植物中的營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶、褐藻類。
營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草的植物、鉤藤、褐藻可以將新鮮的植株直接供于抽提工序，但如果考慮到抽提效率，則較好是進行細(xì)切、干燥、粉碎等處理后進行抽提。茶的情況下，可以將從茶樹上采集的生茶葉等作為原料，或者將由茶葉加工得到的綠茶、發(fā)酵茶、半發(fā)酵茶等茶制品作為原料。抽提時浸漬于抽提溶劑中進行。為了提高效率，可以進行連續(xù)或間歇的攪拌，或者在抽提溶劑中進行均質(zhì)化。抽提溫度通常較好是設(shè)為5℃至抽提溶劑的沸點以下的溫度。抽提時間根據(jù)抽提原料的性狀、抽提溶劑的種類、抽提溫度等的不同而不同，但一般較好是設(shè)定為1～14天左右。抽提操作可以使用索氏抽取器等抽提器具進行連續(xù)抽提。
對抽提方法沒有特別限定，可以是常規(guī)的方法，例如加熱抽提或常溫抽提。另外，除了在常壓下，也可以在加壓下進行抽提。
作為抽提中使用的溶劑，除了水之外，可以使用甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等低級醇類溶劑，聚乙二醇、1，3-丁二醇、丙二醇、一縮二丙二醇、丙三醇等多元醇類溶劑，乙醚、丙醚等醚類溶劑，丙酮、甲基乙基酮等酮類溶劑，乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯類溶劑等極性有機溶劑。特別好是使用物質(zhì)的溶解性良好、而且凝固點和沸點較低的溶劑。從上述的溶劑中選擇一種或兩種以上用于抽提。根據(jù)抽提的植物的種類、部位、性狀等，適當(dāng)選擇抽提溶劑即可。例如，含有大量引起皮炎的草酸鈣等的植物的情況下，通過組合水和上述有機溶劑的多種溶劑的交互使用來進行抽提，或者通過使用混合溶劑的分配來進行抽提，也可以得到選擇性地除去了不理想的成分的提取物。
或者，可以使用生理鹽水、磷酸緩沖液、磷酸緩沖生理鹽水等。如果需要，也可以采用例如日本專利特開昭62-172096號公報中所揭示的使用二氧化碳的超臨界狀態(tài)的流體的方法。
這樣得到的粗提取物也可以直接作為有效成分加入到本發(fā)明所述的抑制劑、生發(fā)劑、化妝品中。如果考慮到保存、生發(fā)劑的形態(tài)等制劑化的條件，則可以再適當(dāng)進行減壓濃縮、稀釋、過濾等處理后使用?；蛘撸梢詫⒊樘岬玫降娜芤哼M行濃縮、噴霧干燥、冷凍干燥等處理后制成干燥物。
可以再進行濃縮、干燥或者再溶解于水或極性溶劑的操作，或者在不損害它們的生理作用的范圍內(nèi)，通過公知的方法，進行脫色、脫臭、脫鹽等精制處理，采用通過柱層析等的分離處理的精制。
(生發(fā)劑和化妝品)含有基于承擔(dān)生發(fā)的生理機能的毛乳頭細(xì)胞機能和控制它的分子的作用的生發(fā)物質(zhì)作為有效成分的生發(fā)·護發(fā)劑一定可以獲得足夠的生發(fā)效果。由所述觀點而獲得的本發(fā)明的生發(fā)劑含有一種或兩種以上上述抑制FGF-5的作用的植物提取物作為有效成分。同樣地，本發(fā)明的化妝品含有一種或兩種以上上述植物提取物作為有效成分。本發(fā)明的生發(fā)劑和化妝品的特征在于，所含有效成分的作用由生發(fā)的分子機理保證，而且其成分來自于天然素材。
本發(fā)明的生發(fā)劑和化妝品可以通過與作為有效成分選擇的一種或兩種以上上述植物提取物一起，將下述的成分以規(guī)定量，按常規(guī)方法進行混合等操作來制造。
相對于生發(fā)劑總量的上述植物提取物的添加量根據(jù)所用植物的種類、抽提溶劑和抽提條件、抽提后的處理等的不同而不同。相對于液狀的生發(fā)劑總量的該量以將植物粉碎處理后浸漬于抽提溶劑中而抽提得到的上清的狀態(tài)，較好是0.001～5.0重量％，更好是0.1～1重量％。其中，上清的狀態(tài)的基準(zhǔn)是，如后所述，對于100g干燥植物體，使用1升抽提溶劑抽提，將提取液靜置得到的上清或離心分離后的上清。未滿0.001％時，無法獲得所期望的生發(fā)促進效果；相反，若超過5％，則雖然該效果達到頂點，但成本直線上升。生發(fā)劑為乳狀、凍膠狀、糊狀等半固體或流動狀的情況下，以將植物提取物粉末等根據(jù)上述上清的量換算得到的比例添加即可。
本發(fā)明所述的生發(fā)劑和化妝品可以采用溶液狀、乳劑狀、凝膠狀、乳膏狀、軟膏狀、泡沫狀、氣霧狀、凍膠狀等各種劑型。
具體來說，生發(fā)劑可以以護發(fā)素(hair tonic)、發(fā)膠(hair jell)、養(yǎng)發(fā)水(hair treatment lotion)、發(fā)泡沫、發(fā)噴霧、洗發(fā)水、護發(fā)液(hair rinse)等形態(tài)提供。
本發(fā)明的生發(fā)劑和化妝品中，除了上述必須成分之外，在不損害上述提取物的作用的范圍內(nèi)，可以任意組合并適當(dāng)含有如下的一般的生發(fā)劑用添加物油性成分，透明質(zhì)酸、神經(jīng)酰胺等保濕劑，α-生育酚、抗壞血酸衍生物等抗氧化劑，表面活性劑，紫外線吸收劑，局部刺激劑，毛囊活化劑，香料，色素，防菌劑，pH調(diào)整劑，增粘劑，賦形劑，清涼劑等。還可以再添加螯合劑等穩(wěn)定劑、皮膚吸收促進劑等。
此外，通過并用對于頭皮狀態(tài)的正常化有效的其它生發(fā)促進成分，可以實現(xiàn)生發(fā)·護發(fā)效果的疊加作用。用于該目的有常用的血液循環(huán)促進劑、抗皮脂溢劑、角質(zhì)溶解劑等。
本發(fā)明的生發(fā)劑不限癥狀和體質(zhì)，對各種脫發(fā)癥都發(fā)揮促進生發(fā)、顯著改善和治療脫發(fā)的效果。此外，適用的主要對象是人的頭發(fā)，也可以用于改善狗、貓、金絲雀、鸚哥之類寵物的毛發(fā)狀況等。另外，通過用于采集毛、或利用毛皮的綿羊、開士米山羊、羊駝、安哥拉兔、水貂、狐貍等動物，促進毛的生長，改善毛的色澤，有助于提高毛或毛皮制品的品質(zhì)。
本發(fā)明的化妝品除了一般皮膚化妝品之外，包括功能性化妝品、藥用化妝品等，可以以油/水型或水/油型的乳化化妝品、乳膏、化妝乳液、油性化妝品、化妝水、粉底、面膜等各種形態(tài)和用途進行使用。
相對于化妝品總量，本發(fā)明的上述提取物的添加量根據(jù)所用植物的種類、抽提溶劑和抽提條件、抽提后的處理等的不同而不同，對于抽提得到的上清狀態(tài)的提取液，以上述生發(fā)劑的濃度為準(zhǔn)。即，相對于液狀化妝品的總量，設(shè)定為0.001～5.0重量％，較好是0.1～1重量％?；瘖y品為乳狀、凍膠狀、糊狀等半固體或流動狀的情況下，以將植物提取物粉末等根據(jù)上述上清的量換算得到的比例添加。
附圖的簡單說明[

圖1]圖1表示來自各種植物或海藻的提取物對于FR-Ba/F3培養(yǎng)細(xì)胞的FGF-5依賴性及IL-3依賴性的增殖的抑制作用。橫軸為培養(yǎng)基中的提取物的濃度(單位％(V/V))。
圖2表示來自鉤藤的提取物對于FR-Ba/F3培養(yǎng)細(xì)胞的FGF-5依賴性及IL-3依賴性的增殖的抑制作用。橫軸為培養(yǎng)基中的提取物的濃度(單位％(V/V))。
圖3表示“茶提取物”和“綠茶提取物”對于FR-Ba/F3培養(yǎng)細(xì)胞的FGF-5依賴性及IL-3依賴性的增殖的抑制作用。橫軸為培養(yǎng)基中的提取物的濃度(單位％(V/V))。
圖4是顯示毛發(fā)周期處于生長期的小鼠的皮膚切片圖像的照片。各切片圖像中，毛囊是從位于真皮的囊狀的毛球部向表皮延伸的結(jié)構(gòu)物，生長中的毛發(fā)被包圍在其中。在圖像的下部，可以看到皮下(脂肪)組織。涂布了作為溶劑(vehicle)的50％乙醇的組(照片中的標(biāo)尺表示0.1mm。其它照片也是同樣的倍率。)中，由于皮下投與的FGF-5的作用，毛囊短小，保持生長受到抑制的狀態(tài)。與其相對地，涂布了本發(fā)明的植物提取物的組，即枇杷、營實、褐藻類、巴拉圭茶、貓爪草、地榆、熊果和艾草的組中，發(fā)現(xiàn)毛囊都向脂肪組織的方向伸長，其生長恢復(fù)。
圖5是表示與圖2-1所示的實驗相同的實驗中涂布自鉤藤的提取物、“茶提取物”或“綠茶提取物”的效果的照片。
圖6通過將涂布了貓爪草、艾草或茶提取物的小鼠中的毛囊的全長與溶劑組比較，顯示其生發(fā)效果。
圖7是顯示毛發(fā)周期處于生長期的末期的小鼠的皮膚切片圖像的照片。根據(jù)切片中的毛囊的形態(tài)和大小，涂布了作為溶劑的50％乙醇的組(照片中的標(biāo)尺表示0.1mm。其它照片也是同樣的倍率。)中，正進入退行期，但植物提取物涂布組，即涂布了熊果、褐藻類、地榆或營實的提取物的組中，都持續(xù)處于生長期，毛囊維持在較長的狀態(tài)。以下，參照附圖例舉實施例對本發(fā)明進一步進行說明，但本發(fā)明并不僅局限于這樣的實施例。如沒有特別說明，則％為重量％。
實施例1(植物提取物的制備)對于營實(多花薔薇Rosa multiflora Thunb.的假果或果實)、枇杷(Eriobotrya japonica Lindley)的葉、地榆(Sanguisorba officinalis)的根莖、熊果(學(xué)名Arctostaphylos uva-urusi(Linne)Sprengel(Ericaceae))的葉、巴拉圭茶(學(xué)名Ilex Paraguariensis)、貓爪草(學(xué)名Uncaria tomentosa)、艾草(學(xué)名Artemisia princes)、鉤藤(學(xué)名Uncaria rhynchophylla)的葉和莖、褐藻類(Brown algae，褐藻綱，Class Phaeophyceae)的整棵藻，都以相對于100g干重1升50％乙醇水溶液的比例，在室溫下浸漬1～10天，抽提可溶性成分。提取液與抽提殘渣的分離通過離心分離或過濾進行。將得到的上清作為受試材料。此外，對于茶的提取物，將收錄于“化妝品種類配比成分標(biāo)準(zhǔn)”并在市場上銷售的“茶提取物”(常盤植物化學(xué)研究所株式會社，商品名“茶提取物S”)和“綠茶提取物”(常盤植物化學(xué)研究所株式會社，商品名“綠茶提取物MF”)直接適當(dāng)稀釋后使用。
實施例2(使用培養(yǎng)細(xì)胞的FGF-5抑制物質(zhì)的檢測)將對FGF-5和白細(xì)胞介素3(IL-3)具有應(yīng)答性的FR-Ba/F3細(xì)胞在含有10％牛胎血清的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)。IL-3是與FGF-5同樣促進大范圍的細(xì)胞增殖的另一種細(xì)胞因子。在96孔培養(yǎng)用平板(フアルコン公司制)中，以10000細(xì)胞/孔接種，在培養(yǎng)液中添加1μg/ml的FGF-5或10ng/ml的IL-3，再添加適當(dāng)稀釋了的受試物質(zhì)(實施例1的植物提取液)和作為溶劑的50％乙醇，培養(yǎng)3天。然后，在各孔中添加細(xì)胞計數(shù)試劑(和光純藥制)，培養(yǎng)3天后，使用微量板閱讀儀(Microplate Reader)考察細(xì)胞增殖。其結(jié)果示于圖1、圖2和圖3。與IL-3依賴性的增殖相比，來自營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、褐藻類的任一種提取物，或者“茶提取物”或“綠茶提取物”都以低濃度抑制了FGF-5依賴性的FR-Ba/F3細(xì)胞的增殖。由這些結(jié)果可知，上述的植物提取物具有選擇性的FGF-5抑制活性。
實施例3(生長期誘導(dǎo)后的小鼠涂布實驗)對毛周期處于休止期的8周齡的C3H/He小鼠(購自日本SLC公司)的背部進行除毛，誘導(dǎo)生長期。誘導(dǎo)第二天起7天，每天一次，每次在同樣的部位皮下注射5μg FGF-5，再在該注射部位周圍以0.02ml/cm2涂布實施例1所述的自營實等的植物提取物(50％乙醇溶液)、“茶提取物”和“綠茶提取物”。作為對照組的小鼠，每天一次同樣地涂布50％乙醇。同時，對另外的小鼠組，作為與FGF-5皮下投與組的對照，設(shè)置投與磷酸緩沖生理鹽水的組。
最后一次涂布的第二天，將上述小鼠通過頸椎脫臼處死，采集涂布部位的皮膚。采集的皮膚用10％甲醛水溶液固定后，進行使用乙醇脫水系列的處理、使用二甲苯的透明處理后，進行石蠟包埋。使用顯微切片機(ヤマト公司制)，以可以從上部到下部完全看清毛囊的方向制成4μm的皮膚切片，在涂覆硅烷的玻片(マツナミ公司制)上展開。進行使用二甲苯的脫石蠟處理、使用乙醇親水系列的處理后，通過蘇木精和伊紅對上述切片進行染色，進行使用乙醇脫水系列的處理、使用二甲苯的透明處理后，使用加拿大香脂封片。
在光學(xué)顯微鏡下觀察的皮膚切片進行電腦的圖像數(shù)據(jù)輸入和照片拍攝，比較切片中的毛囊的形態(tài)和大小。該圖像示于圖4和圖5。皮下投與FGF-5的組與磷酸緩沖生理鹽水投與組(與FGF-5皮下投與的對照)相比，毛囊的生長受到抑制。上述植物提取物涂布組與涂布50％乙醇(溶劑)的對照組相比，毛囊生長明顯地恢復(fù)。因此，這些提取物阻止毛發(fā)周期因FGF-5的作用進入退行期，具有生發(fā)活性。
實施例4(毛囊的全長的比較)為了定量地確認(rèn)生發(fā)活性，按照實施例3，對皮下投與FGF-5的小鼠涂布實施例1所述的植物提取物和“茶提取物”，制成投與部位皮膚的顯微鏡觀察用切片。根據(jù)這些切片，每一個體選取50～100個可以確認(rèn)全長的毛囊，測定其長度，分別與溶劑投與組進行比較。每一組使用8只小鼠進行試驗。其結(jié)果如圖6所示，涂布貓爪草、艾草、茶提取物的小鼠分別與溶劑投與組相比，毛囊顯著地較長。
實施例5(生長期后半段的小鼠涂布實驗)對毛周期處于休止期的8周齡的C3H/He小鼠(購自日本SLC公司)的背部進行除毛，誘導(dǎo)生長期。誘導(dǎo)17天后，將除毛部位長出的毛用推子剪去，其后3～4天，每天一次，以0.05ml/cm2涂布實施例1所述的植物提取物(50％乙醇溶液)。對于對照組的小鼠，每天一次同樣地涂布50％乙醇。
最后一次涂布的第二天，用實施例3所述的方法采集各組小鼠的皮膚，同樣地制成組織切片，比較毛囊的形態(tài)、大小。其結(jié)果示于圖7。作為對照組的乙醇(溶劑)涂布組中，毛囊短，已經(jīng)進入退行期，相反上述植物提取物涂布組中，毛囊長，生長期持續(xù)。由這些結(jié)果可知，本發(fā)明的植物提取物延長毛發(fā)周期的生長，明顯具有生發(fā)活性。
實施例6(護發(fā)素的制備)在55重量份乙醇、2重量份聚氧乙烯(8)油醇醚、36重量份精制水中混合摻入1重量份實施例1中得到的植物提取物(上清)。再按照常規(guī)方法適量摻入薄荷醇等香料、生育酚乙酸酯等抗氧化劑、水楊酸等保存劑、著色劑、pH調(diào)整劑，形成護發(fā)素型的生發(fā)劑。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性由于含有直接作用于毛母細(xì)胞增殖的成分，本發(fā)明的含有上述提取物的生發(fā)劑、化妝品可以發(fā)揮良好的生發(fā)·護發(fā)效果和防脫發(fā)效果。由于其有效成分是植物的提取物，所以可以安全地使用，幾乎沒有副作用。
權(quán)利要求
1.植物提取物，其特征在于，具有抑制成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的作用的活性。
2.植物提取物，其特征在于，通過用水或除水之外的溶劑對屬于薔薇科植物、杜鵑花科植物、冬青科植物、茜草科植物、菊科植物或褐藻植物的植物進行抽提而得到，具有抑制成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的作用的活性。
3.如權(quán)利要求2所述的植物提取物，其特征還在于，所述植物選自營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草和褐藻類。
4.植物提取物，其特征在于，通過用水或除水之外的溶劑對鉤藤或茶進行抽提而得到，具有抑制成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的作用的活性。
5.成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF-5)的抑制劑，其特征在于，含有一種或兩種以上用水或除水之外的溶劑對營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶或褐藻類進行抽提而得到的提取物。
6.生發(fā)劑，其特征在于，含有一種或兩種以上權(quán)利要求1～4中的任一項所述的抑制FGF-5的作用的植物提取物作為有效成分。
7.化妝品，其特征在于，含有一種或兩種以上權(quán)利要求1～4中的任一項所述的抑制FGF-5的作用的植物提取物作為有效成分。
全文摘要
成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF－5)作用具有在毛母細(xì)胞中，抑制毛發(fā)生長，使毛發(fā)周期從生長期進入退行期的作用。較好是用水或除水之外的溶劑對營實、枇杷、地榆、熊果、巴拉圭茶、貓爪草、艾草、鉤藤、茶或褐藻類進行抽提而得到的提取物具有抑制該FGF－5作用的活性。因此，由于含有一種以上該提取物的生發(fā)劑和化妝品含有維持毛母細(xì)胞增殖、直接起到促進毛發(fā)生長的作用的成分，所以可根據(jù)基于FGF－5的毛發(fā)周期控制機制，發(fā)揮良好的生發(fā)·護發(fā)效果。
文檔編號A61K36/739GK1863503SQ20048002954
公開日2006年11月15日 申請日期2004年10月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月9日
發(fā)明者鈴木聰, 富樫謙一, 堀美代, 菅井直樹 申請人:株式會社阿德王駿