專利名稱：用于治療哮喘或慢性阻塞性肺病的脫氫表雄酮或硫酸脫氫表雄酮與白三烯受體拮抗劑的 ...的制作方法
背景技術(shù)：
本申請是2003年10月29日提交的美國申請系列號10/698,076的部分繼續(xù)，后者要求2003年7月31日提交的美國臨時專利申請系列號60/492,233的優(yōu)先權(quán)，所述申請被全文納入本文作為參考。
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及含有非糖皮質(zhì)類固醇(其中包括脫氫表雄酮(DHEA)、硫酸DHEA、或其鹽)和白三烯受體拮抗劑(LTRA)的組合物。這些組合物可用于治療哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)或其它呼吸系統(tǒng)疾病。
背景描述 呼吸疾病與多種條件有關(guān)，在普通人群中非常普遍。一些情況下，它們伴有炎癥，而炎癥會加劇肺部癥狀。呼吸疾病包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)以及其它上和下氣道的呼吸系統(tǒng)疾病，如變應性鼻炎、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和肺纖維化。
例如，哮喘是工業(yè)化國家最常見的疾病之一。估計在美國它占到所有健康護理花費的約1％。據(jù)報道，過去十年來哮喘的傳播率和死亡率都以令人擔憂的速度增加，且哮喘被認為是下個十年最顯著的職業(yè)肺病。哮喘是一種以可變的、多數(shù)情況下是可逆的呼吸道阻塞為特征的病癥。這一過程與肺部感染有關(guān)，在某些情況下與肺部的變態(tài)反應也有關(guān)系。許多病人會出現(xiàn)急性發(fā)作，被稱為“哮喘發(fā)作”，而其他的病人會遭受慢性疾病的折磨。哮喘在某些情況下可能會因為過敏人員吸入抗原而發(fā)作。這種疾病一般被稱為“外源性哮喘”。其他哮喘對疾病具有內(nèi)在的易感性，因此被稱為“內(nèi)源性哮喘”，包括不同原因引起的哮喘，如腺苷受體介導的哮喘、Ig-E介導的免疫反應引起的變態(tài)反應性哮喘等。所有的哮喘都有下列一組癥狀，這些癥狀是這種病癥的特征發(fā)作性支氣管收縮、肺部感染和/或肺表面活性物質(zhì)減少。支氣管擴張劑和抗炎藥物是目前所常用的哮喘治療劑。皮質(zhì)類固醇是最常見的抗炎藥物，具有很大的不良作用，但仍廣泛應用于臨床。更重要的是現(xiàn)在可用的大多數(shù)哮喘治療劑對許多病人幾乎沒有效果。
COPD的特征是氣流阻塞，一般是由慢性支氣管炎、肺氣腫或二者共同引起的。氣道阻塞通常是不完全可逆的，但有10-20％的患者在治療中的確顯示氣道阻塞得到一些改善。在慢性支氣管炎中，氣道粘液異常長期過量分泌、炎癥、支氣管痙攣和感染導致氣道阻塞。慢性支氣管炎也以至少在連續(xù)的兩年內(nèi)每年至少有3個月出現(xiàn)久咳、產(chǎn)生粘液或這兩者為特征，同時排除其他引起久咳的原因。在肺氣腫中，終末細支氣管的結(jié)構(gòu)元件(彈性蛋白)被破壞，導致氣道壁損壞且無法呼出“廢舊”空氣。在肺氣腫中肺泡被永久性破壞。肺氣腫的特征是遠至終末細支氣管的氣腔異常不可逆擴張，同時伴隨氣腔壁破壞，但是無明顯的纖維化。COPD也可造成繼發(fā)性肺動脈高壓。繼發(fā)性肺動脈高壓本身是一種肺動脈血壓異常升高的疾病。嚴重時心臟右側(cè)必須比平常更加努力地工作以抵抗這種高壓。如果這種情況持續(xù)一段時間，右心將擴大并功能減弱，體液集中在踝部(水腫)和腹部。最終左心開始衰竭。由肺部疾病造成的心力衰竭被稱為肺源性心臟病。
COPD的特征是侵襲中年人和老年人，它是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的病因之一。在美國，它侵襲約1400萬人，死亡率位居第四，致殘率位居第三。但是，其發(fā)病率和死亡率仍然在升高。據(jù)估計，在美國自1982年以來，該疾病的流行率升高了41％，年齡校正過的死亡率在1966-1985年之間升高了71％。這與同時期年齡校正過的所有病因的死亡率的下降(下降了22％)和心血管疾病的死亡率的下降(下降了45％)呈相反的趨勢。在1998年，COPD在美國共死亡112,584例。
但是，COPD是可以預防的，因為據(jù)認為它的主要起因是接觸香煙煙霧。長期抽煙是COPD的最常見的起因。它占所有病例的80-90％。一個抽煙的人死于COPD的可能性比不抽煙的人高10倍。該病在終身不抽煙的人身上很少見，而接觸抽煙環(huán)境的人會有至少部分患氣管阻塞。提出的其他病因包括氣管的超易反應性或高敏性、周圍空氣的污染和變態(tài)反應。COPD中的氣管阻塞在連續(xù)抽煙的人身上通常是進行性的。這導致了早期的致殘并縮短壽命。戒煙使發(fā)病率下降至不抽煙人的水平值，但吸煙造成的傷害是不可逆的。其他危險性的因素包括遺傳、二手抽煙、接觸工作時和環(huán)境中的空氣污染、兒童時期的呼吸道感染史。COPD的癥狀包括慢性咳嗽、胸悶、靜止時和用力時呼吸急促、呼吸費力、產(chǎn)生的粘液增多和頻繁的清喉。
目前幾乎沒有緩解COPD癥狀、防止惡化、保持最佳肺功能和提高日常活動活力和生活質(zhì)量的方法。許多患者在其剩余的歲月中長期服用藥物治療，藥物的劑量不斷增加，并且在病情惡化時服用藥物更多。COPD患者目前的處方藥包括速效β2-激動藥、抗膽堿能支氣管擴張藥、長效支氣管擴張藥、抗生素和祛痰藥。在現(xiàn)有的COPD治療劑中，通過服用抗膽堿能藥、β2腎上腺素能激動藥和口服類固醇在阻止疾病的進展上可以達到短期效果而不是長期效果。只有在急性加重時推薦口服類固醇，長期使用會使死亡率和發(fā)病率上升。
短效和長效吸入β2腎上腺素能激動劑能夠?qū)崿F(xiàn)短期支氣管擴張并緩解COPD患者的一些癥狀，但對疾病的進展未顯示有意義的維持作用。短效β2腎上腺素能激動劑能夠改善COPD患者的癥狀，如提高運動能力和造成一定程度的支氣管擴張，甚至在一些嚴重病例中提高肺功能。發(fā)現(xiàn)新的長效吸入β2腎上腺素能激動劑的最大功效可與短效β2腎上腺素能激動劑相比。發(fā)現(xiàn)沙美特羅可改善癥狀和生活質(zhì)量，盡管它對肺功能的改善非常小或沒有。使用β2-激動劑可對心血管造成影響，如改變脈搏率、血壓和心電圖結(jié)果。在極少病例中，使用β2-激動劑可造成超敏反應，如蕁麻疹、血管性水腫、皮疹和口咽水腫。這些病例應停止使用β2-激動劑。用支氣管擴張藥異丙托溴銨或非諾特羅連續(xù)治療哮喘和COPD患者不如在需要時進行治療，因此說明它們不適合用作維持治療。另一方面，β2腎上腺素能激動劑最常見的立即不良作用是震顫，在高劑量時這可能會造成血漿鉀降低、節(jié)律障礙以及動脈氧張力降低。聯(lián)合使用β2腎上腺素能激動劑和抗膽堿能藥相比單獨使用每種藥物幾乎不提供額外的支氣管擴張作用。然而，在吸入β2腎上腺素能激動劑的標準劑量中加入異丙托銨90天相比單獨使用每種藥物能更好地穩(wěn)定COPD患者?？傊?腎上腺素能激動劑不良作用(如震顫和節(jié)律障礙)的發(fā)生頻率高于抗膽堿能藥。因此，抗膽堿能藥和β2腎上腺素能激動劑都不對所有COPD患者有效；這兩種藥劑的組合亦是如此。
抗膽堿能藥在COPD患者中實現(xiàn)了短期支氣管擴張并減輕了一些癥狀，但無法改善長期預后。大多數(shù)COPD患者有至少部分的氣管阻塞，通過異丙托溴銨可以減輕一些。“肺部健康研究”發(fā)現(xiàn)在男性和女性抽煙者中有早期COPD的肺活量征兆。經(jīng)過5年的三種治療比較，發(fā)現(xiàn)異丙托溴銨對于患者肺部的功能有效容量的下降沒有顯著作用，而停止抽煙會使肺部的功能有效容量的下降趨緩。但是，異丙托溴銨產(chǎn)生嚴重的不良作用，例如心臟病癥、高血壓、皮疹和膀胱滯留。
茶堿在COPD患者身上具有輕度的支氣管擴張作用，然而它們具有一些共同的不良作用，而且治療范圍狹窄。需要15-20mg/l的血清濃度以便達到最佳效果，而且必須小心監(jiān)測其血清水平。副作用包括惡心、腹瀉、頭痛、刺激、煩躁、癲癇和心臟心律失常，而且它們在高可變血濃度下發(fā)生，在許多人身上，它們甚至出現(xiàn)在治療范圍內(nèi)。茶堿的劑量必須根據(jù)抽煙習慣、感染和其他治療逐個調(diào)整，很繁雜。雖然有人聲稱茶堿在哮喘方面具有消炎作用，尤其是較低劑量下，但是在COPD方面尚無報道。茶堿的副作用和需要頻繁監(jiān)視限制了它們的用途。
口服皮質(zhì)類固醇已顯示可改善COPD急性加重的短期結(jié)果，但長期服用口服類固醇有嚴重的副作用，其中包括骨質(zhì)疏松和導致顯性糖尿病?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，吸入的皮質(zhì)類固醇在氣管對于組胺的超易反應性方面沒有實際的短期作用。在用吸入的氟替卡松進行的兩項為期3年的治療研究中，中等和嚴重惡化顯著降低，同時生活質(zhì)量略微改善但對肺功能沒有影響。用吸入的氟替卡松治療患有更加可逆性疾病的COPD患者似乎更加有利。
粘液溶解劑對于惡化的持續(xù)和頻率有中等的益處，但是對于肺功能有副作用。然而N-乙酰半胱氨酸或其他的粘液溶解劑對于嚴重COPD患者(功能有效容量＜50％)都沒有顯著的作用，盡管曾證明會大為降低惡化的頻率。N-乙酰半胱氨酸產(chǎn)生腸胃副作用。對血氧不足(hypoxaemic)的COPD和充血性心衰患者施用長期氧療，在頭500天左右，對于患者的死亡率幾乎沒有影響，但是，隨后男性的存活率有提升，并在后5年期間保持不變。但是，在整個研究過程中，氧降低了女性患者的死亡率。對血氧不足的COPD患者持續(xù)進行氧療達19.3年，會降低總的死亡風險。但是，迄今為止，已發(fā)現(xiàn)僅生活方式改變、停止抽煙和長期用氧療(對血氧不足的患者)就可以改變COPD的長期進程。
抗生素也通常首選用于呼吸道感染以預防對病肺的其它損傷和感染。祛痰藥幫助松弛氣道及從氣道中清除粘液分泌物，能夠幫助使呼吸順暢。此外，其它藥物也可用來治療與COPD有關(guān)的病癥。其中包括利尿劑(在治療時給予以避免與右心衰竭有關(guān)的過量水分滯留)、洋地黃(有強心作用)和鎮(zhèn)咳藥。后面列出的藥物能夠幫助緩解與COPD有關(guān)的癥狀，但不能治療COPD。因此，現(xiàn)在幾乎沒有能夠緩解COPD癥狀、防止惡化、保持最佳肺功能、同時提高日常生活活力和生活質(zhì)量的藥物。
急性呼吸道窘迫綜合征(ARDS)或強直肺、休克肺、泵肺和充血性肺膨脹不全被認為是由于肺內(nèi)液體積聚進而導致肺變硬而引起的。這種疾病一般是由于各種原因?qū)е路螕p傷而在48小時內(nèi)形成的，如創(chuàng)傷、頭部損傷、休克、敗血癥、重復輸血、藥物、肺栓塞、重癥肺炎、煙霧吸入、放射、高原、近乎溺死等。一般來說，ARDS是作為急癥發(fā)生的，可能由其他直接或間接導致血管向肺內(nèi)滲漏體液的疾病而引起。ARDS時肺的擴張能力急劇下降，對肺的氣囊、基質(zhì)或內(nèi)皮造成嚴重損傷。ARDS最常見的癥狀是吃力地快速呼吸、鼻翼煽動、組織缺氧導致的皮膚、嘴唇和指甲發(fā)紺、焦慮和瞬間的呼吸停滯。通過胸部X線檢查并測量動脈血氣可確認ARDS初步診斷。在某些情況下ARDS與其他疾病有關(guān)，如急性骨髓性白血病、用阿糖胞苷治療后發(fā)生的急性腫瘤溶解綜合征(ATLS)。但是，ARDS通常與創(chuàng)傷性損傷、重癥血液感染如敗血病或其他系統(tǒng)性疾病、高劑量的放射治療、化療、導致多器官衰竭并在許多情況下導致死亡的炎癥反應有關(guān)。早產(chǎn)兒的肺組織或肺表面活性物質(zhì)發(fā)育不完全。早產(chǎn)兒發(fā)生呼吸道窘迫綜合征(RDS)時就是個非常嚴重的問題。發(fā)生RDS的早產(chǎn)兒現(xiàn)在一般用通氣、輸氧和給予表面活性物質(zhì)治療。發(fā)生RDS的早產(chǎn)兒即使存活下來通常也會有支氣管發(fā)育不良(BPD)，也稱為早產(chǎn)兒慢性肺病，常常是致命的。
有五分之一的美國人患有變應性鼻炎，各個年齡段都會發(fā)生，每年的醫(yī)療費用估計需要40到100億美元。由于許多人誤以為他們的癥狀是持續(xù)感冒或鼻竇問題，變應性鼻炎很可能被誤診。變應性鼻炎一般是由于IgE與鼻內(nèi)的變態(tài)反應原結(jié)合產(chǎn)生化學介質(zhì)，誘導細胞反應和神經(jīng)刺激，引發(fā)以下炎癥反應。癥狀包括眼和鼻充血、流涕、打噴嚏、鼻癢，以及眼睛發(fā)癢。變應性鼻炎患者經(jīng)過一段時間以后常常會發(fā)生鼻竇炎、中耳炎伴積液及鼻息肉病。約有60％的變應性鼻炎患者還患有哮喘同時變應性鼻炎加重了哮喘。肥大細胞脫粒釋放出的活性介質(zhì)與各種細胞、血管和粘液腺相互作用，從而導致典型的鼻炎癥狀。鼻內(nèi)的大多數(shù)早期和晚期反應都發(fā)生在變態(tài)反應原致敏后。但是晚期反應也見于慢性變應性鼻炎，伴隨粘液分泌過多和鼻腔堵塞。重復接觸可導致針對一種或多種變態(tài)反應原的超敏反應?；颊咭部赡茏兊脤Ψ翘禺愋源碳と缋淇諝夂痛碳馕斗磻^度。非變應性鼻炎也可被感染所誘導，如病毒感染，或與鼻息肉有關(guān)，如阿司匹林特異體質(zhì)患者中發(fā)生的。
懷孕、甲狀腺功能低下以及接觸職業(yè)因素或藥物也可導致鼻炎。所謂NARES綜合征(非變應性鼻炎伴嗜酸粒細胞增多綜合征)是一種與鼻內(nèi)分泌物的嗜酸性粒細胞有關(guān)的非變應性鼻炎，好發(fā)于中年人，伴隨嗅覺的丟失。對變應性和非變應性鼻炎的治療不令人滿意。自我給予鹽水改善了鼻塞、打噴嚏和充血，且通常不會造成副作用，因此首選用于懷孕患者。通常用鹽水噴霧來緩解與各種鼻狀況有關(guān)的粘膜刺激或干燥、減輕粘膜萎縮以及去除形成外皮的粘膜或增厚的粘膜。如果在鼻內(nèi)滴皮質(zhì)類固醇前立即使用，生理鹽水還有助于防止藥物導致的局部刺激?？菇M胺藥(如特菲那定和阿司咪唑)也可用于治療變應性鼻炎；但使用抗組胺藥曾導致室性心律失常(稱為扭轉(zhuǎn)型室性心動過速)，通常與其他藥物如酮康唑和紅霉素相互作用或者繼而引發(fā)心臟問題。氯雷他定(另一種非鎮(zhèn)定類抗組胺藥)和西替利嗪還沒有發(fā)現(xiàn)與對QT間隔有不良影響或與嚴重心血管副作用有關(guān)。然而西替利嗪會造成嗜睡因此未被廣泛使用。非鎮(zhèn)靜類抗組胺藥如克敏能(Claritin)可適當減輕噴嚏、流涕及鼻、眼、腭的騷癢癥狀，但它還沒試用于這些適應癥或哮喘。另一方面，特非那定、氯雷他定和特非那定顯示出極其輕微的支氣管擴張效應、減輕對組胺的支氣管超敏反應以及防止因運動和抗原誘導的支氣管痙攣。然而這些益處中的一些要求高于目前推薦劑量的劑量。鎮(zhèn)靜類抗組胺藥幫助導致夜晚睡眠，但他們造成嗜睡因此如果在白天使用會削弱它們的作用。使用時，抗組胺藥通常與解充血藥聯(lián)合使用以幫助緩解鼻充血。擬交感神經(jīng)藥物可作為血管收縮劑和解充血藥使用。三種經(jīng)常使用的系統(tǒng)性解充血藥偽麻黃堿、苯丙醇胺和苯福林會造成血壓升高、心悸、心悸亢進、煩躁、失眠和頭疼。苯丙醇胺與咖啡因(2-3杯咖啡的劑量)相互作用可顯著升高血壓。此外，用偽麻黃堿之類的藥物進行治療可能會造成兒童活動過度。然而，局部解充血藥只能在有限時間內(nèi)使用，因為過度使用會造成反彈性鼻擴張?？鼓憠A能藥物可用于治療有明顯鼻漏的病人或某些特殊的病例，如“味覺鼻炎”，后者常常與攝入辛辣的食物有關(guān)，這種藥物已被用于治療普通感冒。如果將例如色甘酸鈉(Cromolyn)作為鼻噴霧預防性使用可減少打噴嚏、鼻漏和鼻搔癢，并可阻斷早期和晚期超敏反應，但會造成噴嚏、暫時頭痛，甚至鼻灼燒。局部皮質(zhì)類固醇，如二丙酸倍氯米松(Vancenase)可有效治療鼻炎，特別是治療搔癢、噴嚏和流涕癥狀，但對鼻塞效果不佳。然而，根據(jù)制劑不同，皮質(zhì)類固醇鼻噴霧可造成刺激、刺痛、灼燒，甚至也會造成打噴嚏。有時也會發(fā)生局部出血和鼻中隔穿孔，尤其是當氣溶膠的作用目標不恰當時。局部使用類固醇藥物一般要比用色甘酸鈉有效，尤其是治療變應性鼻炎時。免疫治療通常是有益的，尤其是對于用其它藥物會產(chǎn)生副作用的患者，但是免疫治療費用高且使用不方便。所謂封閉抗體以及改變細胞組胺釋放的藥物最終將導致IgE降低，同時會帶來許多其它有利的生理變化。這種作用在IgE-介導的疾病中是有益的，例如患有復發(fā)性中耳炎的特應性患者中的超敏性。
肺纖維化、間質(zhì)性肺病(ILD)或間質(zhì)性肺纖維化包括超過130種的慢性肺病，通過損傷肺組織、在肺泡壁產(chǎn)生炎癥、肺間質(zhì)(或肺泡之間的組織)結(jié)?；蚶w維化，使肺硬化而損傷肺，因此而得名。運動中呼吸停止是這類疾病的第一癥狀之一，也可能出現(xiàn)干咳。通常癥狀和X光透視都無法準確區(qū)分不同類型的肺纖維化。某些肺纖維化的病人是知道發(fā)病原因的。一些肺纖維化患者的病因是未知的或特發(fā)的。這種疾病的進程一般無法預測并且這種疾病不可避免地是致命的。其進展包括肺組織增厚和硬化、炎癥和呼吸困難。多數(shù)患者需要吸氧，而肺移植是唯一的治愈方法。
肺癌在世界上最常見的癌癥。2003年，僅美國就新發(fā)約171900例肺癌(男性91800例，女性80100例)，而歐洲約有375000例。在男性和女性中肺癌都是造成癌癥死亡的首要原因。估計2003年將有157200人死于肺癌(其中男性88400人，女性68800人)，占到單美國所有癌癥死亡的28％。相比結(jié)腸癌、乳腺癌和前列腺癌的總和，更多人死于肺癌(美國癌癥學會網(wǎng)站，2003，詳細指南肺癌主要統(tǒng)計數(shù)字如何？)。公認吸煙是造成肺癌的主要原因，約有90％的病例被認為與煙草有關(guān)。肺癌風險和每天吸煙數(shù)量、吸入程度以及開始吸煙的年齡之間有明確的劑量反應關(guān)系。終身吸煙者的肺癌風險高出非吸煙者20-30倍。然而，肺癌風險隨著停止吸煙后時間的流逝而逐漸降低。男性戒煙者的相對風險隨戒煙時間的長短迅速降低，但不會達到非吸煙者的水平，且降低程度不及女性戒煙者(Tyczynski等，Lancet Oncol.4(1)45-55(2003)。
COPD和肺癌通常是并存疾病，潛在COPD程度可預測是否需要對特定患者進行外科手術(shù)。對于NSCLC(非小細胞肺癌)，只有手術(shù)(聯(lián)合或不聯(lián)合放療或輔助化療)才能治愈。
·肺癌的1年存活率(診斷出癌癥后存活至少1年的人數(shù))在1988年為42％，這主要是由于手術(shù)技術(shù)的進步。
·非小細胞肺癌所有階段的5年存活率僅為15％。小細胞肺癌的5年相對存活率約為6％。
·對于發(fā)現(xiàn)NSCLC并在其擴散到淋巴結(jié)或其它器官之前通過手術(shù)早期治療的患者，平均5年存活率約為50％。然而，僅有15％的肺癌患者是在這種較早的局限性階段被診斷出的。
顯然，在肺癌的化學預防以及肺癌治療方面有很大發(fā)展空間。
脫氫表雄酮(DHEA)(3β-羥基雄-5-烯-17-酮)是一種由腎上腺皮質(zhì)分泌的具有明顯的化學保護特性的天然類固醇。流行病學研究表明DHEA內(nèi)源性水平低可導致發(fā)生某些種類腫瘤的危險性增加，如絕經(jīng)前婦女的乳腺癌和男女的膀胱癌。DHEA和DHEA類似物如DHEA-S(硫酸DHEA)抑制腫瘤發(fā)生的能力被認為是來自于其對葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)活性的抑制。G6PDH是單磷酸己糖途徑的限速酶，該途徑是胞內(nèi)核糖-5-磷酸和NADPH的主要來源。核糖-5-磷酸是合成核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸的必需底物。NADPH也是核酸生物合成和羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG CoA還原酶)合成的輔因子。HMG CoA還原酶是一種特殊的酶，產(chǎn)生1摩爾甲羥戊酸產(chǎn)物需要2摩爾NADPH。因此HMG CoA還原酶對DHEA介導的NADPH耗竭是十分敏感的，DHEA處理的細胞內(nèi)甲羥戊酸的含量迅速降低。甲羥戊酸是DNA合成所必需的，DHEA可以與直接的HMG CoA極類似的方式使人細胞阻滯在細胞周期的G1期。由于G6PDH對于產(chǎn)生用于某些細胞過程如蛋白的異戊二烯化和多萜醇(一種糖蛋白生物合成的前體)的合成的甲羥戊酸是必需的，因此DHEA可通過耗竭甲羥戊酸、進而抑制蛋白的異戊二烯化和糖蛋白的合成來抑制腫瘤的發(fā)生。甲羥戊酸是膽固醇合成的中心前體，也是各種參與蛋白的翻譯后修飾過程的非固醇化合物如焦磷酸法尼酯和牦牛兒酰焦磷酸合成的中心前體；也是多萜醇合成的中心前提，而多萜醇是糖蛋白合成所必需的，糖蛋白參與細胞對細胞的通訊和細胞結(jié)構(gòu)的組成。早已知道患者接受適當藥物劑量的腎上腺皮質(zhì)來源的類固醇激素會增加傳染性疾病的發(fā)病率。美國專利No.5527789公開了一種通過給予患者DHEA和泛醌來治療癌癥的方法，其中所述癌癥是一種對DHEA敏感的癌癥。
DHEA是一種17-酮類固醇，在量上來說是哺乳動物體內(nèi)的一種主要的腎上腺皮質(zhì)激素。盡管DHEA似乎是作為生殖腺類固醇合成的中間物，但DHEA的主要生理功能還未完全了解。然而已知這種激素的水平從20歲起開始降低(晚年時達到最初水平的5％)。在臨床上，DHEA已被系統(tǒng)和/或局部地用于治療牛皮癬、痛風和高脂血癥，以及給予冠狀動脈栓塞后的病人。在哺乳動物中，DHEA已顯示具有控制體重和抗腫瘤的作用，歐洲已在臨床上與雌激素聯(lián)合使用以治療絕經(jīng)期癥狀和狂躁抑郁癥、精神分裂癥和阿耳茨海默病。臨床上已經(jīng)用40mg/kg/天的DHEA治療晚期癌癥和多發(fā)性硬化癥。DHEA的副作用有中度的雄激素效應、多毛癥以及性欲增強。但這些副作用可以通過監(jiān)測劑量和/或利用其類似物來克服。已知可以皮下或口服給予DHEA以增強宿主對感染的反應，也可使用透皮貼來遞送DHEA。已知DHEA也是增強哺乳動物免疫反應的多種藥物的代謝前體。這就是說DHEA作為前藥一起作用當轉(zhuǎn)化成雄烯二醇、雄-5-烯-3β，17β-二醇(βAED)、雄烯三醇或雄-5-烯-3β，7β，17β-三醇(βAET)時可以作為免疫調(diào)節(jié)劑。然而，由于其在轉(zhuǎn)化成βAED和/或βAET之前對細胞增殖具有淋巴細胞毒性效應和抑制效應，因此被認為其超級免疫增強活性來自于它可以轉(zhuǎn)化成活性更高的代謝產(chǎn)物。
腺苷是一種參與中間物代謝的嘌呤，并且可構(gòu)成各種疾病的重要肺內(nèi)介體，這些疾病包括支氣管哮喘、COPD、CF、RDS、鼻炎、肺纖維化等。哮喘患者對霧化的腺苷有顯著支氣管收縮反應而正常個體沒有這種反應，這一發(fā)現(xiàn)說明了其受體的潛在作用。哮喘兔類動物模型(人類哮喘的塵螨過敏兔模型)以類似的方式對霧化的腺苷產(chǎn)生顯著支氣管收縮反應，而非哮喘的兔子顯示無反應。用這種動物模型進行的最近的工作顯示，哮喘中腺苷誘導的支氣管收縮和支氣管高反應性可主要通過刺激腺苷受體而介導。當將腺苷治療性給予之前未診斷出高反應性氣道疾病的對象以治療其它疾病和癥狀時已顯示會產(chǎn)生副作用，其中包括死亡。腺苷在體內(nèi)發(fā)揮細胞代謝調(diào)質(zhì)的獨特作用。它可升高細胞AMP、ADP和ATP水平，這三者是細胞的能量中間產(chǎn)物。腺苷可刺激或下調(diào)腺苷酸環(huán)化酶的活性因此調(diào)節(jié)cAMP水平。cAMP又在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、細胞分裂和激素釋放中發(fā)揮作用。腺苷的主要作用似乎是作為保護性損傷內(nèi)分泌物。腺苷似乎在任何出現(xiàn)缺血、低氧張力或創(chuàng)傷的情況下發(fā)揮作用。已假設腺苷的合成、釋放、作用和/或降解的缺陷會造成腦興奮性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)活性過度，并因此造成各種病理狀態(tài)。腺苷也是決定支氣管哮喘和其它呼吸系統(tǒng)疾病的癥狀、誘導支氣管收縮和氣道平滑肌收縮的主要決定因素。此外，腺苷使哮喘患者支氣管收縮但在非哮喘患者中沒有這種作用。其它數(shù)據(jù)顯示腺苷受體也可能通過降低中樞多巴胺能系統(tǒng)的活動過度而參與過敏和炎癥反應。已假定對炎癥細胞表面信號傳導的調(diào)節(jié)會影響急性炎癥。據(jù)說腺苷可通過刺激中性白細胞而抑制超氧化物產(chǎn)生。最近的證據(jù)說明，腺苷在中風、CNS損傷、癲癇、缺血性心臟病、冠狀動脈旁路，射線照射和炎癥中也有保護作用?？傊?，腺苷似乎通過ATP調(diào)節(jié)細胞代謝、作為甲硫氨酸載體、降低細胞的氧需求并保護細胞免受缺血損傷。腺苷是一種當細胞面臨缺血、缺氧、細胞應激及工作量增加，或當ATP需求量超過其供應量時釋放的組織激素或胞間信使。腺苷是一種嘌呤，其形成與ATP的分解代謝直接相關(guān)。它似乎可調(diào)節(jié)包括血管收縮、激素作用、神經(jīng)功能、血小板凝集和淋巴細胞分化在內(nèi)的一系列生理過程。它也在DNA形成、ATP生物合成及一般中間體代謝中發(fā)揮作用。這說明它調(diào)節(jié)腦和各種外圍組織內(nèi)cAMP的形成。腺苷通過A1和A2兩種受體調(diào)節(jié)cAMP形成。腺苷通過A1受體降低腺苷酸環(huán)化酶活性，而在A2受體刺激腺苷酸環(huán)化酶。相比A2受體，腺苷A1受體對腺苷更加敏感。腺苷的CNS作用通常被認為是由A1受體介導的，而外圍效應如低血壓、心動過緩據(jù)信是由A2受體介導的。
現(xiàn)在已有多種方法可用于呼吸道疾病及病癥的治療，雖然這些方法都有局限。其中有糖皮質(zhì)類固醇、白三烯抑制劑、抗膽堿能藥、抗組胺藥、氧氣療法、茶堿以及粘液溶解藥。盡管糖皮質(zhì)類固醇的副作用已有許多報道，但它是使用最廣泛的。然而在治療哮喘時，目前可用的藥物都只對一小部分病例有效，而不是全部有效?，F(xiàn)在還沒有一種治療方法可以治療多種其他呼吸道疾病。茶堿是治療哮喘的一種重要藥物，是一種已知的腺苷受體拮抗劑，據(jù)報道它可消除哮喘兔體內(nèi)腺苷介導的支氣管收縮。也有報道表明選擇性的腺苷A1受體拮抗劑8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤(DPCPX)可抑制變態(tài)反應兔體內(nèi)腺苷介導的支氣管收縮、炎癥和支氣管超敏反應。然而現(xiàn)有腺苷A1受體特異性拮抗劑的治療性和預防性應用受其毒性所限。例如，曾被廣泛用于治療哮喘的茶堿由于其狹窄的治療劑量范圍而有頻繁發(fā)生的顯著毒性(腸胃、心血管、神經(jīng)和生物紊亂)。雖然進行了數(shù)十年廣泛的研究，但還不存在可臨床使用的腺苷受體特異性拮抗劑的事實證實這些藥物都有毒性。
目前可購買白三烯受體拮抗劑(LTRA)孟魯司特來預防和長期治療成人和12個月以上兒童患者的哮喘，以及減輕成人和2歲以上兒童患者的季節(jié)性變應性鼻炎癥狀。它由Merck & Co.，Inc.(Whitehouse StatioN，NJ)以Singulair(孟魯司特鈉)銷售，口服劑量為4mg顆粒劑或4、5和10mg片劑。
目前可購買LTRA扎魯司特來長期治療哮喘。它由AstraZeneca Pharmaceuticals LP(Wilmington，DE)以Accolate銷售，口服劑量為10mg和20mg片劑。
SmithKline Beecham的普侖司特(Ultair)是一種由Ono Pharmaceutical持有執(zhí)照并被批準在日本銷售的白三烯受體拮抗劑。
美國專利No.5,660,835(以及相應的PCT公布WO 96/25935)揭示了一種通過給予對象脫氫表雄酮(DHEA)或DHEA相關(guān)化合物來治療對象哮喘或腺苷缺失的新方法。該專利還揭示了一種可吸入或可呼吸制劑形式的含有可呼吸粒度DHEA或DHEA相關(guān)化合物的新型藥物組合物。
美國專利No.5,527,789揭示了一種通過給予對象DHEA或DHEA相關(guān)化合物以及泛醌(用于治療由DHEA或DHEA相關(guān)化合物導致的心力衰竭)來治療對象癌癥的方法。
美國專利No.6,087,351揭示了一種通過給予對象DHEA或DHEA相關(guān)化合物來減少或消耗對象體內(nèi)腺苷的體內(nèi)方法。
2003年6月3日提交的美國專利申請序列號10/454,061揭示了一種通過給予對象DHEA或DHEA相關(guān)化合物來治療對象COPD的方法。
2003年6月17日提交的美國專利申請序列號10/462,901揭示了一種密封在容器內(nèi)的可吸入形式的DHEA的穩(wěn)定干粉制劑。
2003年6月17日提交的美國專利申請序列號10/462,927揭示了一種適合治療哮喘和COPD的DHEA-S二水合物結(jié)晶形式的穩(wěn)定干粉制劑。
上述專利和專利申請被全文納入本文作為參考。
現(xiàn)在顯然迫切需要找到一種新的有效的方法來治療目前無法治療的呼吸道疾病、肺病和癌癥或者至少有效并且無目前藥物的副作用的方法。這種疾病影響呼吸道，特別是肺和肺通道，包括呼吸困難、哮喘、支氣管收縮、肺部感染和變態(tài)反應、表面活性物質(zhì)耗竭或低分泌等。另外也迫切需要找到一種預防和治療方法，該方法只需要少量的活性劑，因而比較便宜而且副作用較輕。
此外，還需要有確保患者在服藥時比較配合以及便于服用預防或治療哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病所需的多種化合物的方法。
發(fā)明概述 本發(fā)明提供了一種含有至少兩種活性劑的組合物。第一活性劑包括非糖皮質(zhì)類固醇，如表雄酮(EA)或其鹽。第二活性劑包括白三烯受體拮抗劑(LTRA)。所述組合物包含第一活性劑和第二活性劑的組合。該組合物中第一活性劑的量和第二活性劑的量為，當給予對象該組合物時足以有效預防或治療可能患上哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病的對象。該組合物還含有其它生物活性劑和配方成分。該組合物是一種適合給予對象或患者，如人類或非人動物(如非人哺乳動物)，的藥用或獸用組合物。
所述組合物可用于治療哮喘、COPD或存在炎癥及其并發(fā)癥的其它呼吸系統(tǒng)疾病，包括與支氣管收縮、表面活性物質(zhì)缺失和/或變態(tài)反應有關(guān)的癥狀。
本發(fā)明還提供了治療哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病的方法，該方法包括給予需要這種治療的對象所述組合物。
本發(fā)明還提供了所述第一活性劑和第二活性劑在制造用于預防性或治療性處理上述哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應用。
本發(fā)明還提供了包含所述組合物可輸遞裝置的藥盒。所述輸遞裝置能夠輸送組合物到個體。優(yōu)選地，該輸遞裝置包括吸入器和氣溶膠或噴霧發(fā)生裝置以輸送顆粒。優(yōu)選輸送到對象的氣道。更優(yōu)選輸送到對象的肺。優(yōu)選輸送到所需部位。
使用所述組合物的主要優(yōu)點是需要這種預防或治療的患者能夠配合治療。呼吸系統(tǒng)疾病如哮喘或COPD是多因子疾病，每個患者有不同的表現(xiàn)或癥狀。因此大多數(shù)患者用多種藥物治療以減輕疾病的不同方面。第一活性劑(如DHEA或DHEA-S)與第二活性劑(如孟魯司特、扎魯司特或普侖司特)的固定組合能夠更加方便且有效地治療特定的患者群體。通過簡化療法以及關(guān)注每個患者的特有疾病原因提高了患者的順應性，因此可以更加迅速地治療它們的特定癥狀。此外，同時施用第一和第二活性劑的另一個好處是方便或省時。當將組合物用于對象身體上可能出現(xiàn)不適的區(qū)域時尤其如此，如將該組合物用于對象的氣道。當通過侵入性方式將組合物給予對象時亦是如此。
此外，所述第一活性劑(如DHEA或DHEA-S)是一種抗炎藥，當將其輸送或沉積到肺泡膜和細小氣道的末稍外周氣道而不是導氣道時最有效。哮喘和某些COPD患者的導氣道是狹窄的，這限制了第一活性劑(如DHEA)的輸送(由于較低顆粒速度造成的早期沉積)和對這些末稍外周氣道的作用。使用所述組合物改進了持續(xù)藥物功效，從而改進了對疾病的控制?？拱兹┧幬餃p輕了非常小的外周氣道中的間質(zhì)水腫。這也對增加外周氣道直徑以及便于輸送第一活性劑有效。對于抗組胺藥亦是如此，這種藥物也能減輕外周氣道水腫并便于將第一活性劑輸送到末稍氣道。
本發(fā)明的附圖作為本發(fā)明說明書的一部分，可進一步解釋下面所討論的本發(fā)明的某些方面。
附圖簡述

圖1描述了單劑量Acu-Breathe吸入器輸送的微粉化純DHEA-S·2H2O細顆粒組分與流速的函數(shù)。結(jié)果以DHEA-S表示。該圖中還顯示了IDL數(shù)據(jù)或幾乎無水的微粉化DHEA-S，由圖可見，流速為30L/min時的結(jié)果被設為零點，因此此時未檢測到進入沖擊器的質(zhì)量。
圖2描述了幾乎無水的DHEA-S在50℃單獨儲存以及與乳糖混合儲存1周后的HPLC色譜圖。對照為室溫(RT)下儲存的純DHEA-S。
圖3描述了DHEA-S·2H2O在50℃單獨儲存以及與乳糖混合儲存1周后的HPLC色譜圖。對照為RT下儲存的純DHEA-S·2H2O。
圖4描述了兩個溫度下DHEA-S的溶解度與NaCl濃度的函數(shù)。
圖5描述了24-25℃時DHEA-S的溶解度與鈉陽離子濃度倒數(shù)的函數(shù)。
圖6描述了7-8℃時DHEA-S的溶解度與鈉陽離子濃度倒數(shù)的函數(shù)。
圖7描述了室溫有和沒有緩沖液時DHEA-S的溶解度與NaCl濃度的函數(shù)。
圖8描述了24-25℃有和沒有緩沖液時DHEA-S的溶解度與鈉陽離子濃度倒數(shù)的函數(shù)。
圖9描述了兩種儲存條件下DHEA-S溶液濃度與時間的關(guān)系。
圖10描述了兩種儲存條件下DHEA溶液濃度與時間的關(guān)系。
圖11描述了霧化實驗的示意圖。
圖12描述了沉積在旁路收集器內(nèi)的DHEA-S的質(zhì)量與置于噴霧器內(nèi)的原始溶液濃度的函數(shù)關(guān)系。
圖13描述了級聯(lián)沖擊DHEA-S噴霧器溶液的顆粒大小。數(shù)據(jù)表示為所有7次噴霧實驗的平均值。
圖14描述了DHEA對HT-29SF細胞的抑制。
圖15描述了DHEA對HT-29SF細胞細胞周期分布的影響。
圖16a和16b描述了DHEA誘導的HT-29細胞生長抑制的逆轉(zhuǎn)。
圖17描述了DHEA誘導的HT-29SF細胞停留于G1期的逆轉(zhuǎn)。
圖18描述了DHEA-S對肥大細胞顆粒化的作用。
圖19描述了DHEA某些合適的類似物。
圖20描述了DHEA某些合適的類似物。
圖21描述了DHEA某些合適的類似物。
圖22描述了對DHEA C-17酮的適當修飾。
優(yōu)選實施方案詳述 定義 本發(fā)明文中，術(shù)語“腺苷”和“表面活性物質(zhì)”耗盡包括對象的水平相比對象之前的水平降低或耗盡，以及與該對象之前的水平基本相同，但由于某些其它原因，通過調(diào)整這些藥劑的水平，相比之前的水平將獲得一些治療益處。
術(shù)語“氣道”在這里表示與空氣接觸的對象的呼吸系統(tǒng)的一部分或全部。所述氣道包括而不局限于咽喉、氣管、鼻道、竇等。氣道也包括氣管、支氣管、細支氣管、終末細支氣道、呼吸道細支氣道、肺泡管和肺泡囊。
術(shù)語“氣道炎癥”在這里表示與對象氣道上發(fā)炎相關(guān)的疾病或狀況。氣道炎癥可以由以下癥狀引起或伴隨有以下癥狀變態(tài)反應(一種或多種)、哮喘、障礙性呼吸、囊性纖維變性(CF)、慢性阻塞性肺病(COPD)、變應性鼻炎(AR)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、微生物或病毒感染、肺動脈高壓、肺炎、支氣管炎、氣管阻塞和支氣管縮窄。
術(shù)語“載體”在這里表示生物學上可以接受的氣態(tài)、液態(tài)、固態(tài)載體及其混合物，它們適于預定的不同的施藥途徑。載體優(yōu)選是藥學上或獸醫(yī)學上可以接受的載體。
“有效量”在這里表示提供治療或預防益處的量。
“其它治療劑”是指所述組合物第一或第二活性劑之外的任何治療劑。
術(shù)語“預防”在這里表示在人得病之前或得到病狀況的癥狀之前進行的預防性治療，這樣它就能夠使對象避免、防止或降低得上疾病的癥狀或與之相關(guān)的狀況。所述對象可以是患上這種疾病或之前診出的癥狀惡化的風險增加的個體。
術(shù)語“呼吸系統(tǒng)疾病”，在這里表示與呼吸系統(tǒng)相關(guān)的疾病或狀況。其例子包括而不局限于氣道炎癥、變態(tài)反應(一種或多種)、障礙性呼吸、囊性纖維性變病(CF)、變應性鼻炎(AR)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、癌癥、肺動脈高壓、肺炎、支氣管炎、氣管阻塞、支氣管縮窄、微生物感染和病毒感染例如SARS。
術(shù)語“治療”在這里表示降低受到這樣治療的患者表現(xiàn)出疾病或其他狀況的癥狀的概率的治療。
本發(fā)明提供了一種含有第一活性劑和第二活性劑的組合物，所述第一活性劑包含非糖皮質(zhì)類固醇，如表雄酮(EA)、其類似物或其鹽，所述第二活性劑包含白三烯受體拮抗劑(LTRA)。該組合物還含有醫(yī)藥或獸藥上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、生物活性劑或成分。該組合物可用于治療哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病。該組合物可有效治療的其它呼吸系統(tǒng)疾病是肺病和呼吸系統(tǒng)疾病以及與支氣管收縮、肺炎和/或變態(tài)反應及肺癌有關(guān)的癥狀。
所述第一活性劑是表雄酮、其類似物或醫(yī)藥上或獸藥上可接受的鹽。所述表雄酮、其類似物或醫(yī)藥上或獸藥上可接受的鹽選自具有如下化學式的非糖皮質(zhì)類固醇
式中，虛線表示單鍵或雙鍵；R是氫或鹵素；5位的H以α或β構(gòu)型出現(xiàn)，或者化學式I的化合物包含兩種構(gòu)型的外消旋混合物；R1是氫或與該化合物共價結(jié)合的多價無機或有機二羧酸； 具有如下化學式的非糖皮質(zhì)類固醇
或 具有如下化學式的非糖皮質(zhì)類固醇

或其組合， 式中，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R12、R13、R14和R19獨立為H、OR、鹵素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，R5和R11獨立為OH、SH、H、鹵素、藥學上可接受的酯、藥學上可接受的硫酯、藥學上可接受的醚、藥學上可接受的硫醚、藥學上可接受的無機酯、藥學上可接受的單糖、二糖或寡糖、螺環(huán)氧乙烷、螺環(huán)硫乙烷(spirothirane)、-OSO2R20、-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6一起為＝O，R10和R11一起為＝O；R15是(1)當R16是-C(O)OR22時為H、鹵素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)當R16是鹵素、OH或(C1-C10)烷基時為H、鹵素、OH或(C1-C10)烷基，(3)當R16是OH時為H、鹵素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、甲?；?、(C1-C10)烷?；颦h(huán)氧，(4)當R16是H時為OR、SH、H、鹵素、藥學上可接受的酯、藥學上可接受的硫酯、藥學上可接受的醚、藥學上可接受的硫醚、藥學上可接受的無機酯、藥學上可接受的單糖、二糖或寡糖、螺環(huán)氧乙烷、螺環(huán)硫乙烷、-OSO2R20或-OPOR20R21，或R15和R16一起為＝O；R17和R18獨立為(1)當R6是H OR、鹵素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22時為H、-OH、鹵素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)當R15和R16一起為＝O時為H、(C1-C10烷基)氨基、((C1-C10)烷基)n氨基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羥基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(鹵素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷?；?、甲?；?、(C1-C10)烷氧羰基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18一起為＝O；(4)R17或R18與它們所連接的碳一起形成含有0或1個氧原子的3-6元環(huán)；或(5)R15和R17與它們所連接的碳一起形成一環(huán)氧環(huán)；R20和R21獨立為OH、藥學上可接受的酯或藥學上可接受的醚；R22是H、(鹵素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或其醫(yī)藥上或獸藥上可接受的鹽。
優(yōu)選地，在化學式(I)中，所述多價有機二羧酸是SO2OM、磷酸鹽或碳酸鹽，其中M包括平衡離子，其中所述平衡離子是H、鈉、鉀、鎂、鋁、鋅、鈣、鋰、銨、胺、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、三乙胺、乙醇胺、膽堿、三乙醇胺、普魯卡因、芐星青霉素、丁三醇胺(tromethanine)、吡咯烷、哌嗪、二乙胺、硫苷脂
和磷脂
式中R2和R3可以相同或不同，是直鏈或支鏈(C1-C14)烷基或葡糖苷酸
化學式I的5位上的氫原子可以α或β構(gòu)型出現(xiàn)，或者該DHEA化合物是兩種構(gòu)型化合物的混合物。上述化學式I的代表性化合物包括，但不限于，DHEA，此時R和R1分別為氫，含有一雙鍵；16-α溴表雄酮，此時R是Br，R1是H，含有一個雙鍵；1-α-氟表雄酮，此時R是F，R1是H，含有一個雙鍵；本膽烷醇酮，此時R和R1分別為氫，不含雙鍵；以及硫酸脫氫表雄酮，此時R是H，R1是SO2OM，M是上面定義的硫苷脂(sulphatide)基，無雙鍵。但是也包括其它物質(zhì)。同樣優(yōu)選的式I的化合物中R是鹵素，例如溴、氯或氟，R1是氫，同時存在雙鍵。最優(yōu)選的式I的化合物是16-α-氟表雄酮。其它優(yōu)選的化合物是DHEA和DHEA鹽，如硫酸鹽(DHEA-S)。
總之，非糖皮質(zhì)類固醇，如式(I)、(III)和(IV)的那些化合物，它們的衍生物和它們的鹽的給藥劑量為每公斤體重約0.05、0.1、1、5、20-100、500、1000、1500、1800、2500、3000、3600毫克。但是根據(jù)病人的情況其他劑量也是合適的。式(I)、(III)和(IV)的第一活性劑可根據(jù)已知的方法或根據(jù)已知的方法稍加改動進行制備，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。參見美國專利No.4,956,355；英國專利No.2,240,472；EPO專利申請No.429；187，PCT專利文獻No.WO 91/04030；美國專利No.5,859,000；Abou-Gharbia等，J.Pharm.Sci.701154-1157(1981)；Merck Index MonographNo.7710(第11版，1989)等。
在本發(fā)明的一些實施方案中，第一活性劑可以是表雄酮類似物或其衍生物。同時，本發(fā)明也包括表雄酮的前藥和活性代謝物。精通本發(fā)明的技術(shù)人員將知道，這里所述的化合物可具有互變異構(gòu)、構(gòu)象異構(gòu)、幾何異構(gòu)和/或光學異構(gòu)現(xiàn)象。應理解為本發(fā)明包括具有上述一種或多種用處的化合物的任何互變異構(gòu)、構(gòu)象異構(gòu)、光學異構(gòu)和/或幾何異構(gòu)形式，以及這些不同形式的混合物。
表雄酮的代謝物，如以下參考文獻中所述的那些，可被用作第一活性劑《用特布他林治療的哮喘兒童尿液類固醇的毛細管氣相層析》(Capillary gas chromatographyof urinary steroids of terbutaline-treated asthmatic children，Chromatographia(1998)，48(1/2)，163-165；《人肺成纖維細胞內(nèi)的雄烯二酮代謝》(Androstenedione metabolism inhuman lung fibroblasts)；Journal of Steroid Biochemistry(1986)，24(4)，893-7；《培養(yǎng)物中的人肺組織和肺內(nèi)皮細胞的雄酮和5α-雄烷-3α，17β-二醇的代謝》(Metabolismof androsterone and 5α-androstane-3α，17β-diol in human lung tissue and in pulmonaryendothelial cells in culture)，Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism(1985)，60(2)，244-50；《人肺組織的睪酮代謝》(Testosterone metabolism by human lung tissue)，Journal of Steroid Biochemistry(1978)，9(1)，29-32；《培養(yǎng)物中的人肺組織和肺內(nèi)皮細胞的雄酮和5α-雄烷-3α，17β-二醇的代謝》(Metabolism of androsterone and5α-androstane-3α，17 beta-diol in human lung tissue and in pulmonary endothelial cells inculture)，Journal of clinical endocrinology and metabolism(1985年2月)，60(2)，44-50；《培養(yǎng)物中的人肺組織和肺內(nèi)皮細胞的脫氫異雄酮和雄烯二酮的代謝》(Metabolismof dehydroisoandrosterone and androstenedione in human pulmonary endothelial cells inculture)，Journal of clinical endocrinology and metabolism(1983年5月)，56(5)，930-5；《人肺的脫氫異雄酮和雄烯二酮體外代謝》(Metabolism of dehydroisoandrosteroneand androstenedione by the human lung in vitro)，Journal of Steroid biochemistry(1977Apr)，8(4)，277-84；以及《狗肺的睪酮體外代謝》(Testosterone metabolism in dog lungin vitro)，Steroids and lipids research(1973)，4(1)，17-23，這些參考資料被全文納入本文作為參考。
這里描述了可用作第一活性劑的DHEA的其它合適類似物。圖19描述了DHEA的某些合適類似物，包括式IA、IB、IC和ID的化合物。在敘述這里合適的R基團時，連接點用CH2基團表示或用星號標記的原子表示。R1和R3可以是直鏈或支鏈烷基，包括芐基和任選取代的烷基，如氨基烷基、羥基烷基、醚和羧酸，以及任選取代的芳基和雜芳基。例如，R1和R3可以是 CF3CH3(CH2)n其中，n優(yōu)選0-4

其中，X＝OH、O-烷基、N (被H、烷基或?；〈?m和p獨立為1-4

其中，Y＝O、NH、N-烷基或N-酰基


其中，X＝CO2H或酰胺 式IA的化合物的例子包括
R2優(yōu)選二酸衍生的或氨基酸衍生的取代基，包括氯乙酰衍生物和丙烯酸酯衍生物，或任選取代的芳基，如芐基和雜苯甲?；?。式IB的化合物的例子包括
式IC的化合物的例子包括
R4可以是芳香性基團，式ID的合適化合物的例子包括
其它合適的化合物包括在C-3位進行保留OH或用NH取代OH的修飾的類似物。這些類似物通?？蓮腃-17縮醛保護的雄-4-烯3，17-二酮開始制備，如圖20所示。式IE的化合物可來自格氏試劑，也可能來自芳基-鋰試劑，如芳香性物質(zhì)，并且可以是炔基、烯基和烷基。R5的例子是 CH3(CH2)n其中，n＝0-4
式IE的化合物的例子包括
R6和R8可獨立為不同的胺，并可包括具有R1基團所述官能度的胺。合適的式IF的化合物的例子包括
合適的R7基團可來自格氏試劑/有機鋰試劑，也可具有R5所述的官能度。式IG的化合物的例子包括
式IH的化合物的例子包括
其它合適的類似物包括那些在DHEA的C-2位被修飾的化合物。合適的修飾示于圖21。R9可來自烷基化劑，如烷基、芐基、雜芐基以及其它活性鹵化物的衍生物。R9的例子包括
式IJ的化合物的例子包括
R10可以是芳酯，如含有芳環(huán)或雜芳環(huán)或可烯醇化的烷基酯。
式IK的化合物的例子包括
R11可以是一系列芳醛或雜芳醛，如苯甲醛及其取代變體、吡啶甲醛或不可烯醇化的醛，如(CH3)3CCH＝O。式IL的化合物的例子包括
R12可以是(例如)R6的胺的子集。式IN的化合物的例子包括
對DHEA C-17酮的合適修飾示于圖22。圖22所示的化合物可用作第一活性劑。
其它合適的DHEA類似物描述在美國專利6,635,629；歐洲專利934745；《脫氫表雄酮及類似物抑制AP-1的DNA結(jié)合和氣道平滑肌增殖》(Dehydroepiandrosteroneand analogs inhibit DNA binding of AP-1 and airway smooth muscle proliferation)，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics(1998)，285(2)，876-883；和《脫氫表雄酮及有關(guān)類固醇在體外抑制線粒體RNA的呼吸作用》(Dehydroepiandrosteroneand related steroids inhibit mitochondrial respiration in vitro)，International Journal ofBiochemistry(1989)，21(10)，1103-7，所有這些被全文納入本文作為參考。
第二活性劑是是能夠抑制支氣管收縮的白三烯受體拮抗劑(LTRA)。本發(fā)明的LTRA化合物包括4,859,692；5,294,636；5,319,097；5,482,963；5,565,473；5,583,152；5,612,367和6,143,775(其內(nèi)容被納入本文作為參考)中定義的化合物。優(yōu)選的LTRA是孟魯司特、扎魯司特和普侖司特。
LTRA由化學式(V)、(VI)和(VIII)定義 LTRA由化學式(V)定義
式中R1是H、鹵素、-CF3、-CN、-NO2或N3；R2是低級烷基、低級烯基、低級炔基、-CF3、-CH2F、-CHF2、CH2CF3、取代或未取代的苯基、取代或未取代的芐基、取代或未取代的2-苯乙基，或者連接在相同碳原子上的兩個R2基團可形成一個含有0-2的選自O、S和N的雜原子的至多8元的環(huán)；R3是H或R2；CR3 R22可以是標準的氨基酸基；R4是鹵素、-NO2、-CN、-OR3、-SR3、NR3 R3、NR3 C(O)R7或R3；R5是H、鹵素、-NO2、-N3、-CN、-SR2、-NR3 R3、-OR3、低級烷基或-C(O)R3；R6是(CH2)s-C(R7R7)-(CH2)s-R8或-CH2C(O)NR12 R12； R7是H或C1-4烷基；R8是A)含有3-12個環(huán)碳原子及1或2個選自N、S或O的環(huán)雜原子的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)基，且雜環(huán)基中的每個環(huán)由5或6個原子形成，或B)W-R9基；R9含有多達20個碳原子，并且是(1)烷基或(2)無環(huán)或在環(huán)中最多含有1個雜原子的單環(huán)有機羧酸的烷基羰基；R10是-SR11、-OR12或-NR12 R12；R11是低級烷基、-C(O)R14、未取代的苯基或未取代的芐基；R12是H、R11或連接在相同N上的兩個R12基團可形成一個含有1-2個選自O、S和N的雜原子的5或6元環(huán)；R13是低級烷基、低級烯基、低級炔基、-CF3、或取代或未取代的苯基、芐基或2-苯乙基；R14是H或R13；R16是H、C1-C4烷基或OH；R17是低級烷基、低級烯基、低級炔基、或取代或未取代的苯基、芐基或2-苯乙基；R18是低級烷基、低級烯基、低級炔基、-CF3或取代或未取代的苯基、芐基或2-苯乙基；R19是低級烷基、低級烯基、低級炔基、-CF3或取代或未取代的苯基、芐基或2-苯乙基；R20是H、C1-C4烷基、取代或未取代的苯基、芐基、苯乙基或吡啶基，或連接在相同N上的兩個R20基團可形成一個含有1-2個選自O、S和N的雜原子的飽和5或6元環(huán)；R21是H或R17；R22是R4、CHR7OR3或CHR7SR2；m和m′獨立為0-8；n和m′獨立為0或1，p和p′獨立為0-8；當r是1且X2是O、S、S(O)或S(O)2時m+n+p是1-10；當r是1且X2是CR3R16時m+n+p是0-10；當r是0時m+n+p是0-10；m′+m′+p′是0-10；r和r′獨立為0或1；s是0-3；Q1是-C(O)OR3、1H(或2H)-四唑-5-基、-C(O)OR6、-C(O)NHS(O)2R13、-CN、-C(O)NR12R12、-NR21S(O)2R13、-CN、-NR12C(O)NR12R12、-NR21C(O)R18、-OC(O)NR12R12、-C(O)R19、-S(O)R18、-S(O)2R18、-S(O)2NR12R12、-NO2、-NR21C(O)OR17、-C(NR12R12)＝NR12、-C(R13)＝NOH；或者如果Q1是-C(O)OH且R22是-OH、-SH、-CHR7OH或-NHR3，則Q1和R22以及連接它們的碳原子可通過失水形成雜環(huán)；Q2是OH或NR20R20；W是O、S或NR3；X2和X3獨立為O、S、S(O)、S(O)2或CR3R16；Y是-CR3＝CR3-或-C≡C-；Z1是Z2獨立為-HET(-R3-R5)-；HET是苯、吡啶、呋喃或噻吩的雙基；及其藥學上可接受的鹽。
定義 以下縮寫的含義為 Et＝乙基 Me＝甲基 Bz＝芐基 Ph＝苯基 t-Bu＝叔-丁基 i-Pr＝異丙基 n-Pr＝正丙基 c-Hex＝環(huán)己基 c-Pr＝環(huán)丙基 1，1-c-Bu＝1-雙-環(huán)丁基 1，1-c-Pr＝1，1-雙-環(huán)丙基(例如HOCH2(1，1-c-Pr)CH2 CO2 Me是1-(羥甲基)環(huán)丙烷乙酸甲酯) c-＝環(huán) Ac＝乙?；? Tz＝1H(或2H)-四唑-5-基 Th＝2-或3-噻吩基 C3H5＝烯丙基 c-Pen＝環(huán)戊基 c-Bu＝環(huán)丁基 phe＝苯二基(benzenediyl) pye＝吡啶二基 fur＝呋喃二基 thio＝噻吩二基 DEAD＝偶氮羧酸二乙酯 DHP＝二氫吡喃 DIAD＝偶氮二羧酸二異丙酯 r.t.＝室溫 烷基、烯基和炔基包括直鏈、支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)以及它們的組合。
“烷基”包括“低級烷基”并包括含有多達20個碳原子的碳片段。烷基的例子包括辛基、壬基、降冰片基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十三烷基、十五烷基、二十烷基、3，7-二乙基-2，2-二甲基-4-丙基壬基、2-(環(huán)十二烷基)乙基、金剛烷基等。
“低級烷基”是指含有1-7個碳原子的烷基。低級烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲-和叔-丁基、戊基、己基、庚基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、2-甲基環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基等。
“低級烯基”是指含有2-7個碳原子的烯基。低級烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、異丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。
“低級炔基”是指含有2-個碳原子的炔基。低級炔基的例子包括乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-己炔基等。
“烷基羰基”是指含有1-20個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷基羰基。烷基羰基的例子是2-甲基丁?；?、十八烷?；?、11-環(huán)己基十一烷酰基等。因此，11-環(huán)己基十一烷?；莄-Hex-(CH2)10-C(O)-。
取代的苯基、芐基、2-苯乙基和吡啶基是指芳環(huán)上有1或2個選自低級烷基、R10、NO2、SCF3、鹵素、-C(O)R7、-C(O)R10、CN、CF3和CN4H的取代基的結(jié)構(gòu)。
鹵素是指F、C1、Br和I。
Q1的前藥酯(即Q1＝-C(O)OR6)是指以下文獻中所述的酯類，如Saari等，J.Med.Chem.，21(8)746-753(1978)，Sakamoto等，Chem.Pharm.Bull.，32(6)2241-2248(1984)和Bundgaard等，J.Med.Chem.，30(3)451-454(1987)。在定義R8時，一些代表性的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)基是 2，5-二氧代-1-吡咯烷基， (3-吡啶基羰基)氨基， 1，3-二氫-1，3-二氧代-2H-異吲哚-2-基， 1，3-二氫-2H-異吲哚-2-基， 2，4-咪唑啉二酮-1-基， 2，6-哌啶二酮-1-基， 2-咪唑基， 2-氧代-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基(2-oxo-1，3-dioxolen-4-yl)， 哌啶-1-基， 嗎啉-1-基，和 哌嗪-1-基。
當Q1和R22以及連接它們的碳原子形成環(huán)時，如此形成的環(huán)包括內(nèi)酯、內(nèi)酰胺和硫內(nèi)酯。
對特定分子內(nèi)任何取代基(例如R1、R2、m、X等)的定義與該分子在其它地方的定義無關(guān)。因此，-NR3R3可表示-NHH、-NHCH3、-NHC6H5等。
兩個R3、R12或R20通過N連接而形成的雜環(huán)包括環(huán)吡咯烷、哌啶、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪和N-甲基哌嗪。
“標準氨基酸”基可以是CR3 R22，表示以下氨基酸丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸(將F.H.C.Crick，實驗生物學科學會議(Symposium of the Society ofExperimental Biology)，12，140(1958))。
這里所述的以下化合物含有一個或多個不對稱中心，因此可以產(chǎn)生非對映異構(gòu)體和光學異構(gòu)體。LTRA包括這種可能的非對映異構(gòu)體以及它們的外消旋混合物和光學活性拆分形式。可用常規(guī)技術(shù)拆分光學活性(R)和(S)異構(gòu)體。
這里所述的一些化合物含有烯雙鍵，除非另有說明，這包括E和Z幾何異構(gòu)體。
在優(yōu)選的化學式(V)的化合物中 R1是H、鹵素、-CF3或-CN； R2是C1-4烷基、-CF3、-CF2、-CH2F，或連接在相同碳原子上的兩個R2基團形成一個至多6元的環(huán)； R3是H或R2； CR3R22可以是標準的氨基酸基； R4是-OR3、-SR3、NR3R3、NHC(O)CH3或R3； R5是H或鹵素； R6是(CH2)s-C(R7R7)-(CH2)s-R8或-CH2C(O)NR12R12； R7是H或C1-4烷基； R8是A)含有3-12個環(huán)碳原子及1或2個選自N、S或O的環(huán)雜原子的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)基，且雜環(huán)基中的每個環(huán)由5或6個原子形成，或B)W-R9基； R9含有多達20個碳原子，并且是(1)烷基或(2)烷基羰基； R10是-SR11、-OR12或-NR12R12； R11是低級烷基、-C(O)R14、未取代的苯基或未取代的芐基； R12是M、R11或連接在相同N上的兩個R12基團可形成一個含有1-2的選自O、S和N的雜原子的5或6元環(huán)； R13是低級烷基、-CF3或取代或未取代的苯基、芐基或2-苯乙基； R14是H或R13； R16是H、C1-4烷基或OH； R22是R4、CH2OR3或CH2SR2； m和m′獨立為0-4； n和m′獨立為0或1； p和p′獨立為0-4； 當r是1且X2是O或S時m+n+p是1-9； 當r是1且X2是CR3R16時m+n+p是0-9； 當r是0時m+n+p是0-9； m′+m′+p′是1-9； r和r′獨立為0或1； s是0-3； Q1是-C(O)OR3、1H(或2H)-四唑-5-基、-C(O)OR6、-C(O)NHS(O)2R13、-C(O)NR12R12、-NHS(O)2R13；或者如果Q1是-C(O)OH且R22是-OH、-SH、-CH20H或-NHR3，則Q1和R22以及連接它們的碳原子可通過失水形成雜環(huán)； Q2是OH； W是O、S或NH； X2和X3獨立為O、S或CR3R16； Y是(E)-CH＝CH-； Z1是Z2獨立為-HET(-R3-R5)-； HET是苯、吡啶、呋喃或噻吩的雙自由基； 及其藥學上可接受的鹽。
在另一組優(yōu)選的化合物中，與Q1α連接的R22是低級烷基、CF3或取代或未取代的苯基。
更加優(yōu)選的化學式(V)的化合物可用化學式(Va)表示
式中R1是H、鹵素、CF3或CN； R22是R3，-CH2O3或-CH2SR2； Q1是-C(O)OH、1H(或2H)-四唑-5-基、-C(O)NHS(O)2R13、-C(O)NR12R12或-NHS(O)2R13； m′是2或3； p′是0或1； m+p是1-5； 其余的定義如在化學式(V)中的定義；以及其藥學上可接受的鹽。
另一組更加優(yōu)選的化合物如化學式(Va)所示，其中 m’是0； 其余的定義如在化學式(Va)中的定義。
最優(yōu)選的化學式(Va)的化合物在Q1基的α碳上有一低級烷基。
另一組更優(yōu)選的化學式(V)的化合物可用化學式(Vb)表示
式中R1是H、鹵素、CF3或CN； R22是R3、-CH2O3或-CH2SR2； Q1是-C(O)OH、1H(或2H)-四唑-5-基、-C(O)NHS(O)2R13、-C(O)NR12R12或-NHS(O)2R13； m是0、2或3； p是0或1； p′是1-4； m+p是0-4； 其余的定義如在化學式(V)中的定義；及其藥學上可接受的鹽。
代表性的化學式(V)的化合物列于美國專利No.5,565,473的表I，該專利被納入本文作為參考。
優(yōu)選的化學式(V)的化合物如下
所述組合物包含化學式(V)的化合物作為第二活性劑，或其藥學上可接受的鹽。術(shù)語“藥學上可接受的鹽”是指從藥學上可接受的無毒堿(包括無機堿和有機堿)制備的鹽。衍生自無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、二價錳、鉀、鈉、鋅鹽等。特別優(yōu)選銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學上可接受的有機無毒堿的鹽包括伯、仲和叔胺、包括天然產(chǎn)生的取代的胺在內(nèi)的取代的胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹脂，如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、海巴胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
當本發(fā)明的化合物呈堿性時，可從藥學上可接受的無毒酸(包括無機酸和有機酸)制備鹽。這種酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、延胡索酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優(yōu)選檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來酸、磷酸、磷酸和酒石酸。
應理解為，在討論以下治療方法時，當提及化學式(V)的化合物時也包括藥學上可接受的鹽。
化學式(V)的化合物拮抗白三烯作用的能力使得它們能夠用來在人類對象中預防或逆轉(zhuǎn)由白三烯誘導的癥狀。對白三烯作用的這種拮抗作用說明該化合物或其藥物組合物可用來在哺乳動物尤其是人類中治療、預防或緩解1)包括哮喘、慢性支氣管炎和相關(guān)阻塞性氣道疾病在內(nèi)的肺部疾病，2)變態(tài)反應和過敏反應，如變應性鼻炎、接觸性皮炎、變應性結(jié)膜炎等，3)炎癥，如關(guān)節(jié)炎或炎性腸病，4)疼痛，5)皮膚病，如銀屑病、特應性濕疹等，6)心血管疾病，如心絞痛、心肌缺血、高血壓、血小板聚集等，7)由于免疫或化學物質(zhì)(環(huán)孢菌素)導致局部缺血而造成的腎機能不全，8)偏頭痛或叢集性頭痛，9)眼部疾病，如葡萄膜炎，10)化學性、免疫性或傳染性刺激導致的肝炎，11)外傷或休克狀態(tài)，如燒傷、內(nèi)毒素血癥等，12)同種異體移植物排斥，13)預防與施用細胞因子(如白細胞介素II和腫瘤壞死因子)治療有關(guān)的副作用，14)慢性肺病，如囊性纖維性變病、支氣管炎和其它小氣道或大氣道疾病，以及15)膽囊炎。
化學式(V)的化合物預防或治療劑量的大小將隨待治療癥狀的嚴重程度以及隨特定的化學式(V)的化合物及其給藥途徑而改變。它還將隨個體患者的年齡、體重和反應而變。通常，用于抗哮喘、抗變態(tài)反應和抗炎癥目的時，日劑量范圍為每千克哺乳動物體重約0.001-100，優(yōu)選每千克0.01-10mg，最優(yōu)選每千克0.1-1mg，以單一劑量或分份劑量給藥。另一方面，在一些病例中也可以使用這些范圍之外的劑量。
當靜脈內(nèi)施用組合物時，用于抗哮喘、抗炎癥或抗變態(tài)反應的化學式(V)的化合物的合適劑量范圍為每天每千克體重約0.001-25mg(優(yōu)選0.01-1mg)。
當使用口服組合物時，用于抗哮喘、抗炎癥或抗變態(tài)反應的化學式(V)的化合物的合適劑量范圍為每天每千克體重約0.01-100mg，優(yōu)選每千克約0.1-10mg。
除了上述常用劑型，化學式(V)的化合物也可通過美國專利Nos.3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719所述的控釋方法和/或輸遞裝置來給予，這些專利被納入本文作為參考。
含有化學式(V)的化合物的組合物中還可含有白三烯生物合成的抑制劑，如EP138,481、EP 115,394、EP 136,893和EP 140,709中所述的那些，這些專利被納入本文作為參考。含有化學式(V)的化合物的組合物中還可含有(1)白三烯生物合成的抑制劑，(2)前列腺素拮抗劑；(3)組氨酸脫羧酶抑制劑；(4)白三烯拮抗劑；(5)H1或H2-受體拮抗劑；(6)K+/H+ATP酶抑制劑；(7)肥大細胞穩(wěn)定劑；(8)血清素拮抗劑，和/或(9)抗膽堿能藥(如美國專利Nos.4,208,423；5,603,918；5,955,058；6,299,861；6,455,524所述)。
一種優(yōu)選的第二活性劑是孟魯司特鈉(Montelukast Sodium)，它是一種抑制半胱氨酰白三烯CysLT1受體的選擇性和口服活性LTRA。孟魯司特鈉的化學名為[R-(E)]-1-[[[1-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-羥基-1-甲基乙基)苯基]丙基]硫代]甲基]環(huán)丙烷乙酸單鈉鹽。
孟魯司特鈉是一種吸濕性光學活性白色或乳白色粉末。它易溶于乙醇、甲醇和水，在乙腈中幾乎不溶。它可通過商業(yè)獲得。每10mg薄膜包衣Singulair片含有10.4mg孟魯司特鈉，其摩爾量等于10.0mg游離酸，以及各種惰性成分。每5mg可Singulair咀嚼片含有5.2mg孟魯司特鈉，其摩爾量等于5.0mg游離酸，以及各種惰性成分。
LTRA也可用化學式(VI)表示
其中，基團＞X-Y-Z-選自下組 (a)＞CRc-CRaRb-NRd- (b)＞C＝N-Za- (c)＞C＝CRa-Zb- (d)＞N-CRa＝N- (e)＞N-CRbRe-CRcRf-Zb- (f)＞N-N＝N- (g)＞N-NRg-CO- (h)＞N-N＝C.ORd- 其中“＞”表示兩個分開的鍵， Ra是氫或(1-4C)烷基； Rb和Rc分別為氫，或者與已有碳碳鍵一起形成不飽和鍵； Rd是氫或任選含有1或2個雙鍵或三鍵的(1-10C)烷基，且其中的碳原子可任選被氧或硫替代，所述(1-10C)烷基還可任選帶有選自下組的取代基(1-4C)烷氧基、氰基、羧基、1H-四唑-5-基、氨甲?；-(1-4C)氨甲?；?、N、N-二[(1-4C)烷基]氨甲酰基和(1-4C)烷氧基羰基，或者Rd是(3-8C)環(huán)烷基、(3-8C)環(huán)烷基-(1-4C)烷基、(2-6C)烷?；虮交?(1-4C)烷基，其苯基部分可任選帶有選自下組的取代基氰基、鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基和三氟甲基； Re和Rf獨立為氫或(1-4C)烷基； Rg是(1-4C)烷基； Za是氧、硫或式-N(Rd)-的取代的亞氨基，其中Rd具有上文定義的任何含義； Zb是氧或硫； 基團R1.L-代表下式的酰氨基R1.W.CO.NH-或R1.W.CS.NH-，其中R1是任選含有一個或多個氟取代基的(2-10C)烷基；或者R1是苯基-(1-6C)烷基，其中的(1-6C)烷基部分可任選帶有氟或(1-4C)烷氧基取代基，且其中的苯基部分可任選帶有選自下組的取代基鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基和三氟甲基；或R1是(3-8C)環(huán)烷基或(3-8C)環(huán)烷基-(1-6C)烷基，任何一個的環(huán)狀部分可任選含有一個不飽和鍵并可任選帶有1或2個(1-4C)烷基取代基； W是氧、硫、亞氨基或直接連接R1的鍵； R2是氫、鹵素、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基； Q是任選帶有一個或多個獨立選自下組的取代基的亞苯基鹵素、羥基、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基和三氟甲基； A1是(1-2C)亞烷基或亞乙烯基； A2是亞甲基、亞乙烯基或直接連接M的鍵； M是選自下組的酸性基團羧基、式--CO.NH.SOm R3的酰基磺酰胺殘基和1H-四唑-5-基，其中m是整數(shù)1或2的整數(shù)，R3是(1-6C)烷基、(3-8C)-環(huán)烷基、(6-12C)芳基、含有5-12個原子(其中至少一個是碳原子，至少一個選自氧、硫和氮)的雜芳基、(6-12C)芳基-(1-4C)烷基，其中任何一個的芳香部分或雜芳部分可帶有1或2個選自下組的取代基鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、三氟甲基、硝基和氨基； 或其其藥學上可接受的鹽。
某些化學式(VI)的化合物，例如其中的R1包含不對稱取代的碳原子，可以旋光和外消旋混合物形式存在和分離。此外，某些式I的化合物，例如其中Rd或-A1.Q.A2-含有亞乙烯基的化合物，可根據(jù)該基團以分離的立體異構(gòu)形式(‘E’和‘Z’)存在和分離。一些化合物可以一種以上互變異構(gòu)形式存在。一些化合物可具有多態(tài)性。應理解為，本發(fā)明包括任何具有白三烯拮抗劑特性的外消旋、光學活性、互變異構(gòu)、多晶型或立體異構(gòu)形式，或其混合物，制備光學活性形式(例如通過拆分外消旋混合物形式或從光學活性起始物質(zhì)合成)和制備獨立的‘E’和‘Z’立體異構(gòu)體(例如通過層析分離其混合物)以及如何通過下文所述的標準試驗測定白三烯拮抗劑特性的方法是本領(lǐng)域熟知的。
本說明書中，Ra、Rb、Rc等表示一類基團且沒有其它含義。應理解為，“(1-6C)烷基”這類術(shù)語包括直鏈或支鏈烷基，但當提及一種烷基例如“丙基”時只表示直鏈(“正”)基團，支鏈異構(gòu)體如“異丙基”將特別提及。類似的規(guī)定被用于其它類基團，例如“亞烷基”和“亞烯基”等。
Ra、Rb、Rc等基團的具體值如下 當Ra、Re、Rf、Rg或R2為(1-4C)烷基時其具體值為，例如甲基、乙基或丙基。
當R2為(1-4C)烷氧基時其具體值為，例如甲氧基或乙氧基；且當其為鹵素時具體值為，例如氟、氯或溴。
當Rd為(1-10C)烷基時其具體值為，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基、3-甲基丁基、戊基或己基；當其為含有1或2個雙鍵或三鍵的烷基時具體值為，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-甲基烯丙基、3-甲基丁-2-烯基、1，3-戊二烯基、2-丙炔基或3-丁炔基；且當其為1或2個碳原子被氧或硫代替的烷基時其具體值為，例如2-甲氧基乙基或2-甲硫基乙基。
例如，Rd上任選取代基的具體值是對于(1-4C)烷氧基為甲氧基或乙氧基；對于N-(1-4C)烷基氨甲酰基為N-甲基-或N-乙基氨甲?；?；對于N，N-二(1-4C)烷基氨甲?；鶠镹，N-二甲基氨甲?；粚τ?1-4C)烷氧基羰基為甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔-丁氧基羰基。
當Rd為(3-8C)環(huán)烷基時其具體值為，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基；當其為(3-8C)環(huán)烷基-(1-4C)烷基時具體值為，例如環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基或環(huán)己基甲基；當其為(2-6C)烷酰基時具體值為，例如乙酰基或丙?；?；當其為苯基-(1-4C)烷基時具體值為，例如芐基、1-苯基乙基或2-苯基乙基。
當R1為(2-10C)烷基時其具體值為，例如乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、戊基、1-乙基丙基、己基、庚基、1-乙基戊基或壬基；當其含有一個或多個氟取代基時具體值為，例如2，2，2-三氟乙基或七氟丙基。
當R1為苯基-(1-6C)烷基時其具體值包括，例如芐基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、2-苯基丙基、3-苯基丙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-苯基丁基和1-苯基戊基；(1-6C)烷基部分上任選的(1-4C)烷氧基取代基的具體值為，例如甲氧基或乙氧基。
如上文的定義，R1或Rd的苯基部分或其一部分上可出現(xiàn)的某些任選取代基的具體值包括，例如對于鹵素可選自氟、氯和溴；對于(1-4C)烷基可選自甲基和乙基；1對于(1-4C)烷氧基可選自甲氧基和乙氧基。
當R1為(3-8C)環(huán)烷基時其具體值為，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基；當其為(3-8C)環(huán)烷基-(1-6C)烷基時具體值為，例如環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、1-環(huán)戊基乙基、2-環(huán)戊基乙基、1-環(huán)戊基丙基、1-環(huán)己基丙基、1-環(huán)戊基丁基、1-環(huán)己基丁基；在環(huán)烷基環(huán)中含有不飽和鍵的基團的具體值是，例如環(huán)己烯基或環(huán)己烯基-(1-6C)烷基(如環(huán)己烯基甲基或1-(環(huán)己烯基)丁基)；這種基團環(huán)狀部分上的任選(1-4C)烷基取代基的具體值是，例如甲基、乙基或異丙基。
Q的具體值是間-亞苯基或?qū)?亞苯基，優(yōu)選帶有氟、氯、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基或三氟甲基取代基。
當A1為(1-2C)亞烷基時其具體值是，例如亞甲基、乙烯基或亞乙基。
當R3為(1-6C)烷基時其具體值是，例如甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基；當其為(3-8C)環(huán)烷基時具體值為，例如環(huán)戊基或環(huán)己基；當其為(6-12C)芳基時具體值為，例如苯基、1-萘基或2-萘基；當其為雜芳基時具體值為，例如呋喃基、噻吩基或吡啶基；當其為(6-12C)芳基-(1-4C)烷基時具體值為，例如芐基、1-萘基甲基或2-萘基甲基；或吡啶基甲基。
R3的芳香部分或雜芳部分或其一部分上可出現(xiàn)的任選取代基的具體值包括上文在R1的苯基部分中所述的那些。
例如，上述基團更具體的值包括以下這些 對于R1乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、戊基、1-乙基丙基、己基、庚基、1-乙基戊基、壬基、七氟丙基、芐基、4-氯芐基、4-三氟甲基芐基、4-甲基芐基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-苯基丙基、1-苯基戊基、α-氟芐基、α-甲氧基芐基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、2-環(huán)戊基乙基、1-環(huán)戊基丁基、1-環(huán)己基丙基、1-環(huán)己基丁基、5-甲基-2-(1-甲基乙基)環(huán)己基和1-環(huán)己烯-4-基； 對于R2氫、氟、氯、溴、甲基和甲氧基； 對于R3甲基、異丙基、丁基、環(huán)戊基、苯基、4-氯苯基、4-甲基苯基、2-甲基苯基、萘基、噻吩基和6-氯吡啶3-基； 對于Ra氫和甲基； 對于Rb和Rc氫，Rb和Rc以及已有碳碳鍵一起形成不飽和鍵； 對于Rd氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、烯丙基、炔丙基、3-甲基丁基、3-甲基丁-2-烯基、2-氨甲?；一Ⅳ然谆?、羧基乙基、N-乙基氨甲?；谆?、N，N-二甲基氨甲?；谆?、2-羧基乙烯基、2-(甲氧基羰基)乙烯基、2-甲氧基乙基、3-甲氧基丙基、環(huán)戊基、環(huán)丙基甲基、乙酰、芐基、3-氰基芐基和4-氯芐基； 對于Re和Rf氫、甲基和乙基； 對于Rg甲基、乙基和丙基； 對于A1亞甲基和乙烯基； 對于A2鍵和亞甲基； 對于Q間-亞苯基和對-亞苯基(任選帶有氟、氯、羥基、甲基、甲氧基或三氟甲基取代基)；以及 對于W氧、亞氨基、硫代和鍵。
特別感興趣的特定基團的例子包括以下這些 對于R1丁基、戊基、1-乙基戊基、1-苯基丙基、α-氟芐基、α-甲氧基芐基、環(huán)戊基和環(huán)戊基甲基； 對于R2氫； 對于R3苯基和2-甲基苯基； 對于Ra氫； 對于Rb和Rc氫，Rb和Rc以及已有碳碳鍵一起形成不飽和鍵； 對于Rd氫、甲基、乙基、丙基、己基、烯丙基、炔丙基、3-甲基丁基、3-甲基丁-2-烯基、羧基甲基、羧基乙基、N-乙基氨甲?；谆，N-二甲基氨甲酰基甲基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基、環(huán)丙基甲基、乙酰、芐基和3-氰基芐基； 對于Re或Rf氫； 對于Rg丙基； 對于A1亞甲基； 對于A2鍵； 對于Q間-亞苯基和對-亞苯基(任選帶有羥基或甲氧基取代基)；以及 對于W氧、亞氨基和鍵。
在式(VI)的化合物中，上面的定義包括化合物的許多亞類，例如 (i)化學式(VIa)的吲哚和二氫吲哚
(ii)化學式(VIb)的苯并異唑、苯并異噻唑和吲唑；
(iii)化學式(VIc)的苯并[b]呋喃和苯并[b]噻吩；
(iv)化學式(VId)的苯并咪唑
(v)化學式(VIe)的1，4-苯并嗪和1，4-苯并噻嗪；
(vi)化學式(VIf)的苯并三唑；
(vii)化學式(VIg)的吲唑酮；和
(viii)化學式(VIh)的吲唑；
其中，在各個亞類中，m、R1-R3、Ra-Rg、Za、Zb、A1、A2、Q、W和M具有上文定義的任何含義；以及其藥學上可接受的鹽。
在上述亞類中，本發(fā)明化合物的其它亞類包括以下這些 (ix)化學式(VIa)的那些化合物，其中Rb和Rc與已有碳碳鍵一起形成不飽和鍵； (x)化學式(VIe)的那些化合物，其中Zb是氧或硫，Rb和Rc是氫； 其中，在(ix)和(x)的每個亞類中，其余類型的基團具有上文定義的任何含義；以及其藥學上可接受的鹽。
在上述亞類中，A1的優(yōu)選值是，例如亞甲基；A2的的優(yōu)選值是，例如直接連接M的鍵；Q的優(yōu)選值是，例如對-亞苯基(任選被甲氧基取代，尤其是在與A1相對為鄰位的甲氧基)；M的優(yōu)選值是羧基、1H-四唑-5-基或式-CO.NH.SO2R4的基團，其中R4是苯基，任選被如上文對R3的定義例如2-甲基苯基取代。總之，優(yōu)選基團R1.L-以與X基相間但不與Z基相鄰的方式結(jié)合式I的苯部分。R1.L-的優(yōu)選值是，例如R1.W.CO.NH-；W的優(yōu)選值是，例如氧、亞氨基或鍵；當W是氧或亞氨基時R1的優(yōu)選值是，例如環(huán)戊基；當W是鍵時R1的優(yōu)選值是，例如環(huán)戊基甲基。
一組優(yōu)選的本發(fā)明的化合物包括具有以下化學式(VIIa)的吲哚衍生物，
具有以下化學式(VIIb)的吲唑衍生物，
具有以下化學式(VIIc)的苯并[b]噻吩衍生物，
具有以下化學式(VIId)的苯并咪唑衍生物，
具有以下化學式(VIIe)的2，3-二氫苯并-1，4-嗪衍生物，
具有以下化學式(VIIf)的苯并三唑衍生物，
以及具有以下化學式(VIIg)吲唑衍生物，
其中，R1、R2、Ra、Rd、Re、Rf、W、Q、A2和M具有上文定義的任何含義；以及其藥學上可接受的鹽。對于化學式(VIIa)和(VIIb)的衍生物，當M是羧基時，Rd的特別優(yōu)選值包括甲基、丙基、2-甲氧基乙基、N-乙基氨甲?；谆铜h(huán)戊基。對于化學式(VIIa)和(VIIb)的衍生物，當M是式-CO.NH SO2R4的基團(其中R4是苯基)時，Rd的特別優(yōu)選值包括氫、甲基、2-甲氧基乙基和N-乙基氨甲?；谆?。對于化學式(VIIa)和(VIIb)的衍生物，當M是式-CO.NH.SO2R4的基團(其中R4是2-甲基苯基)時，Rd的特別優(yōu)選值包括甲基和N，N-二甲基氨甲?；谆?。對于衍生物(VIIg)，當R1.L-是Rl.W.CO.NH-(其中R1.W-是環(huán)戊氧基)且M是羧基或-CO.NH.SO2R4(其中R4是苯基)時，Rd的特別優(yōu)選值是甲基。對于衍生物(VIIg)，當R1.L-是R1.W.CO.NH-(其中R1是環(huán)戊基甲基)、W是鍵且M是羧基或-CO.NH.SO2R4(其中R4是2-甲基苯基)時，Rd的特別優(yōu)選值是N-乙基氨甲?；谆?br> 附帶的實施例描述了本發(fā)明的具體化合物。然而，在這些化合物中，特別優(yōu)選的是N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-1-甲基吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-1-(N-乙基氨甲酰基甲基)吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-1-甲基吲唑-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-1-甲基吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-2-甲基苯磺酰胺、N-[4-[5-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)-1-(N，N-二甲基氨甲酰基甲基)吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-2-甲基苯磺酰胺、N-[4-[6-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-2，3-二氫苯并-1，4-嗪-4-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]苯磺酰胺、N-[4-[6-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)-2，3-二氫苯并-1，4-嗪-4-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基苯并[b]噻吩-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]苯磺酰胺、N-[4-[6-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)苯并咪唑-1-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-苯磺酰胺、N-[4-[6-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)-2]3-二氫苯并-1，4-嗪-4-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-2-甲基苯磺酰胺、N-[4-[6-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-3-甲氧基吲唑-1-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]苯磺酰胺、N-[4-[5-(N′-環(huán)戊基脲基)-1-甲基吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-2-甲基苯磺酰胺、N-[4-[6-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)苯并三唑-1-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺、N-[4-[5-(環(huán)戊氧基羰基)氨基-1-(2-甲氧基乙基)吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠-苯磺酰胺、N-[4-[5-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)-1-甲基吲哚-3-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]苯磺酰胺、N-[4-[6-(2-環(huán)戊基乙酰氨基)-3-(N-乙基氨甲?；籽趸?吲唑-1-基甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-2-甲基苯磺酰胺和N-[4-[6-(環(huán)戊氧基羰基)氨基苯并咪唑-1-基甲基]-3-甲氧基苯甲?；鵠苯磺酰胺，它們可以游離酸形式或以其相應的藥學上可接受的鹽使用。
合適的藥學上可接受的鹽的例子是由形成生理上可接受的陽離子的堿形成的鹽，如堿金屬(尤其是鈉和鉀)、堿土金屬(尤其是鈣和鎂)、鋁和銨鹽，以及用合適的有機堿如三乙胺、嗎啉、哌啶和三乙醇胺制成的鹽。對于那些基本上呈堿性的式I的化合物，合適的藥學上可接受的鹽的例子包括酸加成鹽，例如那些用強酸如鹽酸、硫酸或磷酸制成的鹽。
一種更加優(yōu)選的化學式(VI)的化合物是扎魯司特，它具有以下化學式
扎魯司特是一種LTRA，其化學名為4(5-環(huán)戊氧基-羰基氨基-1-甲基-吲哚-3-基甲基)-3甲氧基-N-鄰-甲苯磺酰基苯甲酰胺。它是一種白色至淡黃色無定形細粉，基本上不溶于水，微溶于甲醇，完全溶于四氫呋喃、二甲基亞砜和丙酮。扎魯司特可通過商業(yè)以Accolate獲得，這種一種20mg的口服片劑(AstraZeneca PharmaceuticalsLP，Wilmington，DE)。
LTRA也可用化學式(VIII)表示
式中， A表示單鍵或任選被1、2或3個含有1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基和/或苯基取代的亞甲基、亞乙基、三亞甲基、四亞甲基、亞乙烯基、亞丙烯基、亞丁烯基、亞丁二烯基(butadienylene)或亞乙炔基； B表示 (i)4-8元碳環(huán)，未被替代或有1、2或3個任選碳原子被氧、氮和/或硫原子替代(該環(huán)可任選被氧代、硫代和/或羥基取代)，或 (ii)下式表示的二價基團

或
T表示氧原子或硫原子； R1表示以下通式表示的基團
(iv)至多20個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烯基或炔基；其中R5和R6分別表示氫原子或鹵原子或未被替代的或有1、2、3、4或5個任選碳原子被氧原子、硫原子、鹵原子、氮原子、苯環(huán)、噻吩環(huán)、萘環(huán)、4-7個碳原子的碳環(huán)、羰基、羰氧基、羥基、羧基、疊氮基和/或硝基替代的直鏈或支鏈烷基、烯基或炔基； R2表示氫原子或1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基； R3表示氫原子、鹵原子、羥基、硝基、通式-COOR7的基團(其中R7表示氫原子或1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。)或1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基或烷硫基(alkylthio)； R4表示 (i)當B表示閉環(huán)時為以下通式表示的基團 -U-(CH2)n-COOR8
-(CH2)p-COOR8or
(其中，U表示氧原子或硫原子；R8表示氫原子或1-6個原子的直鏈或支鏈烷基，n和m分別表示1-10的整數(shù)，p和q分別表示0或1-10的整數(shù))，或 (ii)當B不表示環(huán)時為以下通式表示的基團
(其中R8、p和q如上文的定義，條件是，當B表示下式的基團時p不是0

)； 以及它的無毒鹽、其制備方法和含有它們作為活性成分的藥劑。
通式(IB)的化合物也是新化合物，除了白三烯具有拮抗活性外，第一次發(fā)現(xiàn)它們對5α-還原酶、脂氧化酶和醛糖還原酶具有抑制活性。
在通式(VIII)中，R5和R6代表的基團的例子如下 氫原子、鹵原子 1-20個碳原子的烷基 2-20個碳原子的烯基或炔基 1-19個碳原子的烷氧基或烷硫基 3-19個碳原子的烯氧基、烯硫基(alkenylthio)、炔氧基或炔硫基(alkynylthio) 被鹵原子和/或羥基取代的1-19個碳原子的烷基 被鹵原子和/或羥基取代的2-19個碳原子的烯基或炔基 被鹵原子和/或羥基取代的1-18個碳原子的烷氧基或烷硫基 被鹵原子和/或羥基取代的3-18個碳原子的烯氧基、烯硫基、炔硫基或炔氧基 至多19個碳原子的烷氧基烷基、烯氧基烷基或烷氧基烯基 4-7個碳原子的環(huán)烷基、環(huán)烷氧基或環(huán)烷硫基 苯基、苯氧基或苯硫基 1-19個碳原子的烷基，在其中間或末端有含有4-7個碳原子的碳環(huán)、苯環(huán)、萘環(huán)或噻吩環(huán) 至多18個碳原子的烷氧基、烷硫基、烯氧基、烯硫基、炔氧基或炔硫基，在其中間或末端有含有4-7個碳原子的碳環(huán)、苯環(huán)、萘環(huán)或噻吩環(huán) 苯硫基烷氧基或苯氧基烷氧基，其中的烷基部分是含有1-17個碳原子的基團 至多19個碳原子的羧基烷氧基或烷氧基羰基烷氧基 3-19個碳原子的烷氧基羰氧基烷氧基 3-20個碳原子的烯基羰氧基 2-20個碳原子的烷基羰基 至多19個碳原子的疊氮基烷基、硝基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基 至多18個碳原子的疊氮基烷氧基、硝基烷氧基、氨基烷氧基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基 3-19個碳原子的烯基羰基氨基 1-19個碳原子烷基氨基 進一步被鹵原子、羥基、疊氮基、硝基和/或羧基取代的上述基團 上述基團中，R5和R6的優(yōu)選基團如下 氫原子 鹵原子 1-20個碳原子的直鏈或支鏈烷基 1-19個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基 3-19個碳原子的直鏈或支鏈烯氧基 3-19個碳原子的直鏈或支鏈炔氧基 1-19個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基 被鹵原子取代的1-18個碳原子的直鏈或支鏈烷基 2-19個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基烷基 任選被1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、羥基、鹵原子和/或硝基取代的環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基(其中的烷基部分含有1-8個碳原子)或環(huán)烷基烷氧基(其中的烷基部分含有1-8個碳原子) 任選被1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、羥基、鹵原子和/或硝基取代的苯基、苯基烷基(其中的烷基部分是含有1-8個碳原子的基團)、苯基烷氧基(其中的烷基部分是含有1-8個碳原子的基團)或苯基烯氧基(其中的烯基部分是含有2-8個碳原子的基團) 任選被直鏈或支鏈烷基、羥基、鹵原子和/或硝基取代的萘基、萘基烷基(其中的烷基部分是含有1-8個碳原子的基團)、萘基烷氧基(其中的烷基部分是含有1-8個碳原子的基團)或萘基烯氧基(其中的烯基部分是含有2-8個碳原子的基團) 被羰基、羰氧基和/或羥基取代的至多18個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基、烯氧基或烷氧基烷氧基 被苯氧基或苯硫基取代的1-17個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基 被噻吩環(huán)取代的1-18個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基 被疊氮基或硝基或氨基取代的至多18個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烯基、烷氧基或烯氧基，所述氨基任選被1-6個碳原子的烷基取代(包括二烷基氨基) 被羧基和氨基這兩種類型的基團替代的至多18個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烯基、烷氧基或烯氧基 1-20個碳原子的烷基在本發(fā)明中是指甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基以及它們的同分異構(gòu)基團。
與上述基團相應的2-20個碳原子的烯基和炔基。
1-6個碳原子的烷基在本發(fā)明中是指甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基，或者其同分異構(gòu)基。
4-7個碳原子的環(huán)烷基在本發(fā)明中是指環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基。
鹵原子在本發(fā)明中是指氯、溴、碘或氟原子。
對于化學式(VIII)的化合物，當某個碳原子被另一個原子、環(huán)或基團替代時，任何碳原子可以被替代，只要這種替代本身是化學上或物理上是可接受的。例如，“在異丁基的中間或末端用苯環(huán)替代”是指異丙基苯基、二甲基苯基甲基或2-苯基丙基。當一個碳原子被替代時，可適當加入或除去氫原子。例如，“在戊基的2位用氮原子替代”是指N-丙基氨基甲基。
同時，例如，2-(苯氧基)乙氧基和5-(2-氯-4-硝基苯硫基)-5-甲基戊-2烯氧基分別取代了戊基和6，8-二甲基壬-3-烯基的1、2、3、4或5個任選的碳原子，因此它們也包括在本發(fā)明之內(nèi)。
在通式(VIII)中用B表示的4-8元碳環(huán)的例子如下，該碳環(huán)未被替代或有1、2或3個任選碳原子被氧、氮和/或硫原子替代(該環(huán)可任選被氧代、硫代和/或羥基取代)
(上述環(huán)可任選被羥基取代) 上述碳環(huán)可以是飽和環(huán)或不飽和環(huán)，或芳環(huán)或非芳香環(huán)。
上述任何環(huán)都是優(yōu)選的。并且，當該環(huán)與苯環(huán)稠合時，特別優(yōu)選以下稠合苯環(huán)，即具有下述通式的環(huán)
如下
其中的B是下式所示開放基團的化合物也是優(yōu)選的

或
一種更加優(yōu)選的化學式(VIII)的化合物是普侖司特，其化學式為
普侖司特是一種化學名為4-氧代-8-[4-(4-苯基丁氧基)苯甲酰基氨基]-2-(四唑-5-基)-4H-1-苯并吡喃半水合物的LTRA。普侖司特在日本可通過商業(yè)獲得(OnoPharmaceutical Co，Ltd.，大阪，日本)。
第一和第二活性劑被用于治療呼吸道和肺部疾病，如上所述，也可給予下述任何額外試劑本身或其藥學上可接受的鹽，所有都被稱為“活性化合物或活性劑”。第一和第二活性劑也可聯(lián)合施用，以分離形式或組合成醫(yī)藥上或獸藥上可接受的制劑。如下所述，所述活性化合物或它們的鹽可全身施用或局部施用。
本發(fā)明還提供了治療哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病的方法，所述方法包括給予需要這種治療的對象所述組合物。該方法被用于預防或治療目的。該方法包括一種體內(nèi)方法。所述方法可有效治療多種疾病，無論其病因如何，其中包括服用類固醇、腺苷或腺苷受體代謝或合成異常，或其它原因。所述方法包括治療呼吸道疾病和肺病，無論是通過降低腺苷或腺苷受體的水平、降低對腺苷的超敏性或其它機制，尤其是在肺、肝臟、心臟和腦內(nèi)，或任何需要這種治療的器官。這里提及的其它呼吸系統(tǒng)疾病包括囊性纖維性變病(CF)，呼吸困難，肺氣腫，喘鳴，肺動脈高壓，肺纖維化，肺癌，氣道高反應性，腺苷或腺苷受體水平升高，尤其是與感染性疾病有關(guān)，肺支氣管收縮，肺炎，肺變態(tài)反應，表面活性物質(zhì)缺失，慢性支氣管炎，支氣管收縮，呼吸困難，肺氣道障礙或梗阻，心臟功能腺苷測驗，肺血管收縮，呼吸障礙，急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，施用某些藥物，如升高腺苷或腺苷水平的藥物或例如治療室上性心動過速(SVT)的其它藥物，以及實施腺苷應激試驗，嬰兒呼吸窘迫綜合征(嬰兒RDS)，疼痛，變應性鼻炎，肺表面活性物質(zhì)減少，嚴重急性呼吸道綜合征(SARS)等。
一實施方案中，本發(fā)明提供了預防或治療哮喘的方法，包括給予需要這種治療的對象組合物，組合物的量足以在該對象中預防或治療哮喘。
一實施方案中，本發(fā)明提供了預防或治療COPD的方法，包括給予需要這種治療的對象組合物，組合物的量足以在該對象中預防或治療COPD。
一實施方案中，本發(fā)明提供了預防或治療支氣管收縮、肺炎或肺變態(tài)反應的方法，包括給予需要這種治療的對象組合物，組合物的量足以在該對象中預防或治療支氣管收縮、肺炎或肺變態(tài)反應。
一實施方案中，本發(fā)明提供了降低或消除對象組織內(nèi)的腺苷的方法，包括給予需要這種治療的對象組合物，組合物的量足以降低或消除所述對象組織內(nèi)的腺苷。
本發(fā)明還提供了所述第一活性劑和第二活性劑在制造用于治療哮喘、COPD或其它呼吸系統(tǒng)疾病(包括肺癌)的藥物中的應用。所述藥物包含本文所述的組合物。
給予對象的第一活性劑和第二活性劑的日劑量將隨總的治療計劃、將使用的第一活性劑和第二活性劑、制劑類型、給藥途徑以及患者的狀態(tài)而改變。實施例11-18描述了根據(jù)本發(fā)明所制備的霧化制劑，可通過一個裝置噴入呼吸道內(nèi)或鼻內(nèi)或通過吸入給藥。對于肺內(nèi)給藥來說，優(yōu)選脂質(zhì)制劑。對于其他生物活性劑來說，F(xiàn)DA都規(guī)定了作為人們?nèi)粘z入的生物活性添加劑的推薦量，如維生素和礦物質(zhì)。但是對于治療特殊的疾病或改善受試者的免疫反應來說可以使用高出幾百甚至幾千倍的量。多數(shù)情況下藥典所推薦的劑量范圍都是很寬的，醫(yī)生可以從中得到指導。本發(fā)明所描述的典型藥物的量位于目前日常服用所推薦的劑量范圍內(nèi)，也可以低于或高于這一水平。治療一般從低劑量的支氣管擴張藥配合非糖皮質(zhì)類固醇或其它合適的生物活性劑開始，然后逐漸增加每個患者的劑量。但是較高和較低的劑量，包括初始劑量都應該在本發(fā)明所定義的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明所用的第一和第二活性劑或其他治療劑的優(yōu)選范圍將隨給藥途徑和所用劑型的不同而有所變化，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可根據(jù)已知的方法和組分進行選擇和制備。活性化合物可以單次劑量(每日一次)或多次劑量(每日數(shù)次)的方式給藥。預防和治療呼吸道疾病、心臟病和心血管疾病的組合物和方法可用于治療成年人、兒童和嬰兒，也可用于治療患上述疾病的非人動物。雖然本發(fā)明主要關(guān)注的是治療人的疾病，但是也可作為獸用藥治療其他哺乳動物，如狗、貓以及大型家畜和野生動物。術(shù)語“高”和“低”水平的“腺苷”和“腺苷受體”以及“腺苷缺失”包括以下兩種情況相比相同對象之前的腺苷水平，此時的腺苷較高或較低(甚至消失)；以及此時的腺苷水平在正常范圍內(nèi)但由于該患者內(nèi)的一些其它癥狀或變化通過降低或升高腺苷或腺苷受體的水平或超敏性可獲得治療益處。因此，這種治療有助于受試者形成良好的生活方式。雖然施用第一活性劑可降低或者甚至消除治療之前腺苷水平正?；蜉^高的對象體內(nèi)的腺苷水平，但進一步施用第二活性劑將有助于短期改善患者的呼吸。進一步加入其它治療劑將幫助升高不理想的低腺苷水平，通過施用本發(fā)明的治療可觀察到這種升高，尤其是當最佳劑量時。
可摻入本發(fā)明組合物的其它治療劑是各種用于人類和動物的治療劑中的一種或多種。
除第一和第二活性劑之外，所述組合物還可包含泛醌和/或亞葉酸。泛醌是一種用下式表示的化合物
或其藥學上可接受的鹽。
優(yōu)選地，泛醌是如上述化學式表示的化合物，其中n＝1-10(輔酶Q1-10)，更優(yōu)選n＝6-10(輔酶Q6-10)，最優(yōu)選n＝10(輔酶Q10)。泛醌以治療靶向的疾病或癥狀的治療量施用，同時其劑量將取決于對象的癥狀、施用的其它藥劑以及所用制劑的類型以及給藥途徑。泛醌的優(yōu)選用量是每天的總量為每千克體重約0.1、約1、約3、約5、約10、約15、約30-50、約100、約150、約300、約600、約900、約1200mg。更優(yōu)選的每天的總量為約1-150mg/kg，約30-100mg/kg，最優(yōu)選為約5-50mg/kg。泛醌是一種天然產(chǎn)生的物質(zhì)，并且可通過商業(yè)獲得。
本發(fā)明的活性劑在組合物中所含的劑量范圍是很寬的。例如，組合物中所包含的活性劑的量可以是約占組合物的0.001％、1％、2％、5％、10％、20％、40％、90％、98％、99.999％。當組合物中另外加入上述與活性劑的活性有重疊的其他藥物時可以適當調(diào)整每種藥物的含量。然而，活性化合物的劑量要根據(jù)受試者年齡、體重和病情的不同而有所變化。治療可以從小劑量即低于本發(fā)明第一活性劑最佳劑量的量開始。第二活性劑也可以此辦理，直到達到理想的水平。反之亦然，例如在使用多種維生素和/或礦物質(zhì)的情況下，受試者首先服用這些藥物穩(wěn)定在預期的水平上，然后再使用第一活性化合物。劑量可以增加直到達到預期的和/或理想的效果。一般來說，活性劑使用的濃度優(yōu)選能產(chǎn)生有效的結(jié)果而不會引起任何過度有害的或有毒的副作用，可以單個單位劑量給藥，如果需要也可以方便的亞單位劑量在每日的適宜時間內(nèi)多次給藥。第二治療或診斷藥物可以本領(lǐng)域所熟知的能有效地達到目的的劑量給藥。如果第二藥物與主藥的活性有重疊，其中一種藥物或者兩種藥物的劑量應該加以調(diào)整以獲得預期的效果而不會因為超出劑量范圍而出現(xiàn)過度的副作用。因此，當組合物中添加其他止痛藥和抗炎藥時，所用的劑量應該是本領(lǐng)域所熟知的達到其預期目的的量或者比其單獨使用時較低的劑量。
藥學上可接受的鹽應該是可用于藥理學的、藥物學的或獸醫(yī)學的鹽，可以制備成堿金屬或堿土金屬鹽的形式，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。有機鹽和酯也適用于本發(fā)明?；钚曰衔飪?yōu)選以藥用或獸用組合物的形式給藥，包括全身給藥制劑和局部用藥制劑。其中優(yōu)選的制劑應該是適于吸入的或者適于呼吸道給藥、口腔給藥、口服、直腸給藥、陰道給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、眼內(nèi)給藥、眼部用藥、腔內(nèi)給藥、氣管內(nèi)給藥、器官內(nèi)給藥、局部用藥(包括口腔、舌下、真皮和眼內(nèi))、胃腸外給藥(包括皮下、真皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi)注射)以及跨真皮給藥。
本發(fā)明還提供了含有所述組合物和輸遞裝置的藥盒。組合物適于制備成單個或多個單位劑量的形式，以及制成塊狀，可用藥學領(lǐng)域所熟知的任何方法制備。藥盒中的組合物可以制成制劑的形式，或者第一和第二活性劑也可以與其他組分一起分別提供，藥盒內(nèi)還包括劑型和使用方法的說明書。藥盒還可以包含其他藥物，如本專利描述的那些藥物，當通過胃腸外途徑給藥時，可與載體一起裝到獨立的容器中，載體應當是無菌的。本發(fā)明的組合物還可以以凍干的形式提供，分裝在不同的無菌容器內(nèi)以便于在注射前加入脂質(zhì)載體。見美國專利No.4,956,355；英國專利No.2,240,472；EPO專利申請No.429,187；PCT專利WO 91/04030；Mortensen，S.A.等，Int.J.Tiss.Reac.XII(3)155-162(1990)；Greenberg，S.等，J.Clin.Pharm.30596-608(1990)；Folkers，K.等，P.N.A.S.(USA)878931-8934(1990)，相關(guān)的制備方法和化合物比例已被上述參考文獻納入。
本發(fā)明的組合物以各種全身制劑和局部制劑提供。本發(fā)明的全身和局部制劑選自口服、頰內(nèi)、肺內(nèi)、直腸、子宮內(nèi)、皮內(nèi)、局部、皮膚、腸胃外、腫瘤內(nèi)、顱內(nèi)、肺內(nèi)、含服、舌下、鼻、皮下、血管內(nèi)、鞘內(nèi)、可吸入的、可呼吸、關(guān)節(jié)內(nèi)、腔內(nèi)、可植入的、經(jīng)皮、離子電滲、眼內(nèi)、眼睛、陰道、光學的、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腺內(nèi)、氣管內(nèi)、淋巴管內(nèi)、緩釋和腸衣制劑。這些不同制劑的實際制備和混合是本領(lǐng)域已知的，在這里不需要詳細說明。所述組合物可每天施用一次或多次。
適于呼吸道、鼻內(nèi)、肺內(nèi)和吸入給藥的制劑是優(yōu)選的，局部給藥制劑、口服制劑和胃腸外給藥制劑也是優(yōu)選的。所有的制備方法都包括將活性化合物加入與其相關(guān)的載體的步驟，載體包含一種或多種輔助組分。一般來說，制劑的制備方法是將活性化合物均勻地與其相關(guān)的液體載體或精確分割的固體載體混合，如果需要再將產(chǎn)物塑型成所需的制劑。
適于口服給藥的組合物可以包含在單個的單位中，如硬膠囊、扁膠囊、菱形或片劑，每種劑型都含有預定劑量的活性化合物；粉末或顆粒；水或非水液體制成的溶液或懸液；水包油或油包水乳劑。
適于通過胃腸外途徑給藥的組合物包括活性化合物的無菌水注射液或非水注射液，制劑優(yōu)選與受體血液等滲。這些制劑可以含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑和使組合物與受體血液等滲的溶質(zhì)。水或非水無菌懸液含有懸浮的藥物和增稠劑。組合物可置于單劑量或多劑量的容器中，例如封口的安瓿和小玻璃瓶內(nèi)，也可以凍干粉的形式儲存，在使用前添加無菌液體載體，如鹽水或注射用水。
鼻內(nèi)噴霧或滴加的制劑由活性化合物的純化水溶液組成，其中還含有防腐劑和等滲劑。這種制劑最好將pH和滲透壓調(diào)整到與鼻粘膜相同的程度。
適于直腸或陰道內(nèi)給藥的制劑可采用栓劑的形式，添加合適的載體如可可脂或氫化脂肪或氫化脂肪酸。
眼用制劑可通過與鼻內(nèi)噴霧制劑相似的方法制備，只是要將其pH和滲透壓調(diào)整到與眼睛相匹配的程度。眼制劑一般用粘性載體制備，如油等，這是本領(lǐng)域所熟知的，這樣可以很容易地滴到眼內(nèi)而不會流出。
適于皮膚局部使用的組合物最好采用軟膏劑、霜劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑的形式?？捎玫妮d體包括凡士林、羊毛脂、聚乙烯甘油、乙醇、真皮穿透增強劑以及上述兩種或多種載體的混合物。適于真皮穿透給藥的組合物可采用能與應用部位表皮緊密接觸的單個皮貼的形式以延長接觸的時間。
這里所揭示的第一和第二活性劑可通過任意合適的方式吸入、呼吸、鼻內(nèi)給藥或肺內(nèi)滴注(進入肺內(nèi))到受體的呼吸系統(tǒng)內(nèi)，優(yōu)選通過制備含粉末狀或液體鼻內(nèi)、肺內(nèi)、可呼吸或可吸入顆粒的氣霧劑或噴霧劑來給藥。含活性化合物的可吸入顆?？杀皇茉囌呶?，即通過吸入或鼻內(nèi)噴霧或通過滴注到呼吸道或肺內(nèi)給予受試者。按照本發(fā)明，制劑可含有可吸入液體或固體活性化合物顆粒，其中包括大小足夠小到可穿過口腔和咽喉進入支氣管和肺泡的可吸入顆粒。一般來說，顆粒的直徑約為0.05、0.1、0.5、1、2-4、6、8、10微米。更優(yōu)選地，約0.5微米到小于約5微米的顆粒是可呼吸或吸入的。氣霧劑或噴霧劑中不能吸入的顆粒沉淀在咽喉中被吞咽下去。因此氣霧劑中不能吸入的顆粒越少越好。對于鼻內(nèi)噴霧或肺內(nèi)滴注來說，優(yōu)選的顆粒尺寸約為8、10、20、25-35、50、100、150、250、500微米，以便于滯留在鼻腔內(nèi)或者滴注和直接沉淀到肺內(nèi)。液體制劑可以噴到呼吸道(鼻)和肺內(nèi)，特別是用于新生兒和嬰兒時。
制備氣霧劑所用的活性化合物的液體藥物組合物可通過將活性化合物與穩(wěn)定的載體相混合而制備，如無熱原的無菌水。含活性化合物的微米級可吸入顆粒的固體顆粒組合物的制備是用研缽和杵將干燥的活性化合物磨碎，然后將磨碎的組合物過400目的篩子以打碎或分離出較大的團塊。由活性化合物組成的固體顆粒組合物還可以含有分散劑以促進氣霧劑的形成。適宜的分散劑是乳糖，乳糖可與活性化合物以合適的比例混合，如按1∶1的重量比混合。美國專利申請序列號10/462,901和10/462,927分別公開了噴霧形式的DHEA的穩(wěn)定干粉制劑和DHEA-S二水合物晶體形式的穩(wěn)定干粉制劑(這些專利申請被全文納入本文作為參考)。
含活性化合物的液滴氣霧劑可通過任何適當?shù)姆绞街苽?，如用噴霧器，見美國專利No.4,501,729(該專利本納入本文作為參考)。噴霧器有商品化的裝置，該裝置是使壓縮氣，一般為空氣或氧氣加速通過一個狹窄的口或者通過超聲震動將活性成分的溶液或懸液變成治療性的氣霧。用在噴霧器中的適宜組合物包含以液體載體稀釋溶解的活性劑，活性劑占組合物的40％w/w以上，但是載體的含量優(yōu)選20％w/w以下，載體一般為水或稀釋的乙醇水溶液，最好通過加入氯化鈉使其與體液等滲。如果組合物不是無菌的，可以加入防腐成分，如甲基羥基苯甲酸鹽、抗氧化劑、調(diào)味劑、揮發(fā)油、緩沖劑和表面活性劑。含活性化合物的固體顆粒氣霧劑同樣也可以用任何固體顆粒藥用氣霧劑發(fā)生器制備。氣霧劑發(fā)生器可以將固體顆粒藥物制備成可吸入的顆粒藥劑，以適于人體給藥的速率產(chǎn)生一定體積的含預定劑量藥物的氣霧劑。這種氣霧劑發(fā)生器的例子包括定量吸入器和吹入器。
可使用能產(chǎn)生液體或固體顆粒氣溶膠的任何裝置如氣溶膠或噴霧發(fā)生器輸遞本發(fā)明的組合物。這些裝置產(chǎn)生可呼吸的顆粒(如上所述)，并以適合于給予人或動物的速率產(chǎn)生含有預定計量劑量的藥劑的氣溶膠或噴沫體積。固體顆粒氣溶膠或噴霧發(fā)生器的一個闡述性類型是吹入器，它適用于給予給予微細粉碎的粉末。在吹入器中，粉末如能有效執(zhí)行本文所述的治療的計量劑量的藥劑包含在膠囊或藥包中。這些膠囊或藥包通常由明膠、箔或塑料制成，可被原位刺穿或打開，之后粉末通過吸入作用或人工操作的泵而被吸過該裝置。吹入器中使用的組合物可單獨由第一和第二藥劑組成，也可由含有第一和第二藥劑的粉末混合物組成，藥劑通常占該制劑的0.01-100％w/w。組合物通常含有約0.01％w/w、約1％w/w、約5％w/w到約20％w/w、約40％w/w、約99.99％w/w的第一和第二藥劑。但其他成分和其他量的藥劑在本發(fā)明范圍內(nèi)也是適用的。
一實施方案中，所述組合物是通過噴霧器輸遞的。這種方法對于自己無法吸入或呼吸組合物的患者或?qū)ο笥绕溆杏谩２∏閲乐貢r，患者或?qū)ο笸ㄟ^人工呼吸器維持生命。這種噴霧器可使用任何醫(yī)藥上或獸藥上可接受的載體，如淡鹽水溶液。噴霧器是一種將粉末藥物組合物輸送到患者或?qū)ο髿獾纼?nèi)的靶點的裝置。
也可提供適合不同給藥方法和輸遞途徑的不同形式的組合物。一實施方案中，所述組合物包含可呼吸的制劑，如氣溶膠或噴沫。本發(fā)明的組合物成批、成單位形式以及成植入物、膠囊、發(fā)泡藥或藥包的形式提供，這些形式都是如本領(lǐng)域已知可打開或刺穿的。還提供藥盒，它包括輸遞裝置和裝在分離的容器中的本發(fā)明的組合物，任選地還包括其他賦形劑和治療劑，還包括指導使用該藥盒組分的說明書。
一實施方案中，以懸浮計量劑量吸附(MDI)制劑輸遞該藥劑?？墒褂醚b備有推進劑如氫氟烷(HFA)的輸遞裝置輸遞這種MDI制劑。較佳的是，HFA推進劑含有100份/百萬(PPM)或更少的水。
一實施方案中，輸遞裝置包括輸遞單劑或多劑所述制劑的干粉吸入器(DPI)。單劑吸入器可以一次性藥物形式提供，該一次性藥盒預先無菌地加了足夠使用一次的制劑。還可以加壓吸入器方式提供吸入器，制劑提供在可刺穿或可打開的膠囊或藥包中。藥盒還可任選地包括裝載單獨的容器中的藥劑，如其他治療化合物、賦形劑、表面活性劑(打算作為治療劑以及制劑成分)、抗氧化劑、調(diào)味劑和著色劑、填充劑、揮發(fā)性油、緩沖劑、分散劑、表面活性劑、抗氧化劑。調(diào)味劑、增量劑、推進劑和防腐劑以及其他用于不同制劑的適當添加劑。
現(xiàn)在對本發(fā)明已經(jīng)作了普遍的描述，通過參考某些特殊的實施例可以更好地理解本發(fā)明，因此本文所包含的實施例用于解釋本發(fā)明，除非特別指出，這些實施例并不意味著對本發(fā)明或其實施方式作出限定。
實施例 實施例1和2亞葉酸和DHEA對腺苷水平的體內(nèi)效應 年輕雄性Fischer 344大鼠(120克)通過管飼法喂服溶于羧甲纖維素中的脫氫表雄酮(DHEA)(300mg/kg)或甲基睪酮(40mg/kg)，每日一次，持續(xù)14天。亞葉酸(50mg/kg)通過腹腔注射給藥，每日一次，持續(xù)14天。在第15天時，通過顱內(nèi)微波脈沖(1.33kw，2450MHZ，6.5秒)處死動物，這種處理可以立即將所有的腦組織變性，阻止腺苷的進一步代謝。取出心臟，在液氮中快速冷凍10秒。肝臟和肺整體取出，在液氮內(nèi)快速冷凍30秒。然后將腦組織切片。提取組織內(nèi)的腺苷，使之衍生成1，N6-亞乙烯基腺苷，并按照Clark和Dar的方法利用熒光光譜測定法用高效液相色譜(HPLC)進行分析(J.of Neuroscience Methods 25243(1988))。這些試驗的結(jié)果總結(jié)在下面的表1中。結(jié)果用平均值±SEM表示，κ代表與對照組比較時p＜0.05，ψ代表與DHEA或甲基睪酮處理組相比p＜0.05。
表1DHEA、δ-1-甲基睪酮和亞葉酸對大鼠各種組織中腺苷水平的體內(nèi)效應 這些試驗的結(jié)果說明大鼠每日一次給予DHEA或甲基睪酮，給予兩周后可使多個器官內(nèi)的腺苷耗竭。耗竭最嚴重的是在腦(DHEA處理耗竭60％，高劑量的甲基睪酮處理耗竭34％)和心臟(DHEA處理耗竭37％，高劑量的甲基睪酮處理耗竭22％)內(nèi)。再添加亞葉酸可完全消除類固醇介導的腺苷耗竭。單獨給予亞葉酸可使所有試驗的器官內(nèi)腺苷水平升高。
實施例3無水DHEA-S的空氣噴射研磨和可呼吸劑量的確定 以哮喘治療的方式評估DHEA-S。已研究了成塊的和研磨的脫氫表雄酮硫酸鈉(NaDHEA-S)的固態(tài)穩(wěn)定性(Nakagawa，H.，Yoshiteru，T.和Fujimoto，Y.，1981，Chem.Pharm.Bull.，29(5)，1466-1469；Nakagawa，H.，Yoshiteru，T.和Sugimoto，I.，1982，Chem.Pharm.Bull.，30(1)，242-248)。DHEA-S是最穩(wěn)定的，并結(jié)晶為二水合物形式。DHEA-S無水形式具有低的結(jié)晶度，并且是非常吸濕的。只要DHEA-S在貯存時沒有吸水，其無水形式是穩(wěn)定的。保持部分晶體的材料無水分需要特定的生產(chǎn)和包裝技術(shù)。對于耐用的產(chǎn)品，在其開發(fā)過程中將其對水分的敏感性減到最低是必需的。
(1)DHEA-S的微粉化 使用噴射研磨機(Jet-O-Mizer#00系列100-120PSI nitrogen)微粉化無水DHEA-S。使大約1g的樣品通過噴射研磨機一次，將大約2g的樣品通過噴射研磨機2次。將從各研磨機中獲得的顆粒懸浮在己烷中，DHEA-S在己烷中不溶，加入Spa85表面活性劑，以阻止結(jié)塊。超聲處理所得溶液3分鐘，顆粒完全分散。在Malvern MastersizerX上用小體積采樣器(SVS)附件測試分散的溶液。測試一份分散的樣品5次。未研磨物質(zhì)的平均粒度或D(v，0.5)是52.56微米，％RSD(相對標準偏差)是7.61(5個值)。通過噴射研磨機一次的D(v，0.5)是3.90微米，％RSD是1.27，通過噴射研磨機2次的D(v，0.5)是3.25微米，％RSD是3.10。這證明可通過噴射研磨而獲得適用于吸入的粒度的DHEA-S。
(2)HPLC分析 使用兩瓶(A通過一次，150mg；B，通過兩次，600mg)微粉化藥物測定噴射研磨微粉化過程中藥物的降解。將從A瓶和B瓶中獲得的等份(重量)的DHEA-S與未研磨DHEA-S(10mg/ml)的乙腈-水溶液(1∶1)的標準溶液比較。未研磨藥物標準溶液的HPLC分析的色譜峰面積是23.427，在乙腈-水溶液(1∶1)中配制A瓶等份(重量)試樣和B瓶等份(重量)試樣。A瓶和B瓶的色譜峰面積分別為11.979和11.677。很明顯，在噴霧研磨微粉化過程中藥物沒有發(fā)生可檢測到的降解。
(3)噴出劑量研究 將DHEA-S粉末收集到Nephele管中，采用HPLC分析。對測試的三個干粉吸入器中的每一個以各空氣流速進行三次試驗(Rotahaler、Diskhaler和IDL的DPI裝置)。將Nephele管的一端裝上玻璃過濾器(Gelman Science，A/E型，25μm)，將其與空氣流連接，以收集從測試的各干粉吸入器噴出的藥物的劑量。在Nephele管的另一端固定一具有開口以接受各測試的干粉吸入器的噴口的硅酮適配器。使所需的氣流，即30、60或90L/min通過Nephele管。然后將各干粉吸入器噴口插入硅酮橡膠適配器中，繼續(xù)吹入氣流約4秒鐘，然后移開該管，用蓋子蓋上各管的該開口端。移開該管不包括過濾器的蓋子，將10毫升HPLC級的水-乙腈溶液(1∶1)加到該管中。重新蓋上蓋子，搖動管子1-2分鐘。然后從管上移走蓋子，將溶液轉(zhuǎn)移到裝有過濾器(Cameo13N Syringe Filter，Nylon，0.22μm)的10毫升塑料注射器中。將等量的溶液直接過濾到HPLC瓶中，用于稍后的HPLC藥物分析。使用裝在明膠膠囊(Rotahaler)或Ventodisk發(fā)泡藥(Diskhaler和單劑DPI(IDL))中的微粉化DHEA-S(約12.5或25毫克)進行上述噴出劑量試驗。當稱重微粉化DHEA-S(僅使用B瓶)，將其加到明膠膠囊或發(fā)泡藥(blister)中時，微粉化粉末出現(xiàn)些許聚集。以30、60和87.8L/min的流速進行的噴出劑量測試的結(jié)果顯示在表2中。表2是Rotahaler試驗中3個不同流速的結(jié)果，Diskhaler試驗中3個不同流速的結(jié)果以及多劑試驗中3個不同流速的結(jié)果。
表2三種不同干粉吸入裝置噴出劑量的比較 (4)可呼吸劑量的研究 使用標準的階式碰撞取樣器(Andersen)進行可呼吸劑量(可呼吸分數(shù))研究，該取樣器由入口錐體(在此使用取樣器預分離器替換)、9個工作臺、8個收集板和8個鋁工作臺內(nèi)的備用過濾器組成，該8個鋁工作臺由3彈簧夾和O-環(huán)密封襯墊一起支撐著，其中各取樣器工作臺包括多個精確鉆孔。當氣流通過取樣器時，各工作臺中的多個空氣噴氣流將氣載顆粒吹向該工作臺收集板的表面。各工作臺的噴氣流的大小是恒定的，但各工作臺的氣流大小依次變小。顆粒是否撞擊到各工作臺上要依賴于各工作臺的噴氣流速度以及當前工作臺的截留值。未被第一工作臺收集的所有顆粒都隨著該板邊緣四周的氣流進入下一工作臺，在那顆粒要么撞擊在板上要么通過該板并進入下一工作臺，依次類推，直到噴氣流的速率足夠用于撞擊。為了防止進行階式碰撞取樣器試驗時顆粒彈起，各取樣器板都包涂有己烷-油脂(高真空)溶液(100∶1)。如上所述，取樣器板上的顆粒截留值依不同空氣流速而改變。例如，工作臺2在60L/min時對應于大于6.2微米顆粒的截留值，在30L/min時對應于大于5.8微米顆粒的截留值；工作臺3在90L/min時的粒度截留值大于5.6微米。因而，在可比的氣流速率時優(yōu)選使用類似的顆粒截留值，即，在5.6-6.2微米的范圍。美國Phamacopeia提出的測試干粉吸入器的裝置由連接于玻璃喉管(用50毫升的圓底燒瓶替換)的噴口適配器(在此實施例中為硅酮)和引導預分離器的玻璃末端咽管(引導部分)以及Andersen采樣器組成。該預分離器樣品包括從噴口適配器、玻璃喉管、末端咽管和預分離器得到的洗滌物。在進行階式碰撞取樣器試驗前，先將5毫升乙腈∶水(1∶1)溶劑放到該預分離器中。對3種不同的干粉吸入器，分別以30、60和90L/min的氣流速率進行兩次該階式碰撞取樣器試驗。采用HPLC分析在階式碰撞取樣器板上收集到的藥物，對各Diskhaler和多劑階式碰撞取樣器試驗進行藥物物料衡算(massbalance)，包括測定殘留在發(fā)泡藥中的藥物的量、殘留在裝置(僅Diskhaler)中的藥物的量、殘留在硅酮橡膠噴口適配器、玻璃喉管、玻璃末端咽管和預分離器上的不可吸入的藥物的量，將它們都混成一份樣品，然后測定可呼吸的劑量，即工作臺2中在30和60L/min的空氣氣流下通過過濾器碰撞取樣器板的劑量和在工作臺1中在90L/min試驗中通過過濾器碰撞取樣器板的劑量。
表3階式碰撞取樣器試驗(90L/min) *a沒有洗滌多劑裝置，因為溶劑會攻擊SLA組分。獲得多劑裝置滯留百分比不同。
*b烘烤干燥的藥物80分鐘 *c烘烤干燥的藥物20小時 下述結(jié)論得自噴出劑量和階式碰撞取樣器試驗。在階式碰撞取樣器試驗中獲得低的可吸入劑量值，這是因為藥物顆粒集結(jié)的緣故，集結(jié)的藥物顆粒即使在最高的氣流速率下也不能被分離。我們的意見是，藥物的集結(jié)是在用于減少粒度的機械研磨加工中建立起來的靜電而導致的結(jié)果，這一狀態(tài)進一步被接下來的顆粒水分吸收復合。產(chǎn)生較少靜電或較少吸濕的完全水合的DHEA-S晶體(即二水合物形式)的微粉化方法應能提供減少集結(jié)可能性的更自由流動的粉末。
實施例4無水DHEA硫酸鹽的噴干和可呼吸劑量的測定 (1)藥物的微粉化 將1.5g無水DHEA硫酸鹽溶解在100毫升50％乙醇水中，得到1.5％溶液。用B-191Mini噴干器(Buchi，F(xiàn)lawil，Switzerland)噴干該溶液，入口溫度為55℃、出口溫度為40℃、100％吸入器、10％泵、氮氣氣流為40mbar、噴霧流速為600單位。將噴干產(chǎn)品懸浮在己烷中，加入Span85表面活性劑以減少聚集。超聲處理分散液，冷卻3-5分鐘以完全分散，在裝備有小體積采樣器(SVS)附件的Malvem Mastersizer X上測試該分散液。發(fā)現(xiàn)兩批噴干物質(zhì)的平均粒度分別為5.07±0.70微米和6.66±0.91微米。采用光學顯微鏡對各批分散物的肉眼檢查證實，噴干產(chǎn)生了小的可呼吸粒度。各批的平均粒度分別是2.4微米和2.0微米。這證明可將DHEA-S噴干成適合于吸入的粒度。
(2)可呼吸劑量的研究 如實施例3所述進行階式碰撞取樣器試驗。進行四個階式碰撞取樣器試驗，其中三個使用IDL多劑裝置，一個使用Diskhaler，所有試驗的氣流速度都是90L/min。所有階式碰撞取樣器試驗的結(jié)果列在表4中。與微粉化無水DHEA-S的可呼吸劑量相比，這些試驗中噴干的無水物質(zhì)產(chǎn)生了兩倍的增加。雖然與噴射研磨相比噴干方法確實獲得了增加的可呼吸劑量，但是可呼吸劑量的％仍然是低的。這是因為可能是無水形式吸水聚集而導致的結(jié)果。
表4使用噴干的藥物產(chǎn)品進行的階式碰撞取樣器試驗結(jié)果 實施例5DHEA-S二水合物(DHEA-S·2H2O)的空氣噴射研磨和可呼吸劑量的測定 (1)DHEA-S二水合物的重結(jié)晶 將無水DHEA-S溶解在90％乙醇/水的沸騰混合物中。在干冰/乙醇浴中快速冷卻此溶液，使DHEA-S重結(jié)晶。濾出晶體，用冷的乙醇洗滌兩次，然后放在室溫下的真空干燥器中總共36小時。干燥過程中，用刮刀定期攪拌該物質(zhì)，以破壞大的聚集塊。干燥后，使該物質(zhì)通過500微米篩。
(2)微粉化和物理化學測試 在氮氣中在噴射研磨機中微粉化DHEA-S，文氏管壓力為40PSI、研磨機壓力為80PSI、進料裝置為25、產(chǎn)品進料速率約為120-175g/小時。使用5點BET分析測定表面積，使用Micromeritics TriStar表面積分析儀以氮氣作為吸附氣體(P/Po＝0.05到0.30)進行該BET分析。使用Micromeritics Satum Digisizer通過激光衍射分析粒度分布，其中顆粒懸浮在礦物油中，使用磺基琥珀酸二辛酯鈉鹽作為分散劑。采用KarlFischer滴定(Schott Titroline KF)測量藥物物質(zhì)的水含量。以純水作為標準，三個試驗的所有相對標準偏差小于1％。直接將粉末加到滴定培養(yǎng)基中。微粉化前和微粉化后的DHEA-S二水合物的物理化學特性列在表5中。
表5微粉化前和微粉化后的DHEA-S二水合物的物理化學特性 所測得明顯變化僅僅是粒度的變化。水的損失并不明顯，雜質(zhì)的增加也不明顯。微粉化物質(zhì)的表面積與平均大小為3-4微米的無規(guī)則形狀顆粒的表面積一致。微粉化成功經(jīng)粒度減少到適合于吸入的范圍，而且在固態(tài)化學中沒有產(chǎn)生可測量的變化。
(3)DHEA-S二水合物的氣溶膠化 用單劑Acu-Breathe裝置評估DHEA-S二水合物。將約10毫克純DHEA-S二水合物填充到箔發(fā)泡藥中，并密封。促使這些發(fā)泡藥進入流速為30-75L/min的Andersen的8個工作臺階式碰撞取樣器中，該取樣器具有一玻璃雙碰撞器喉管。一起清洗Andersen碰撞取樣器的1-5工作臺，獲得細粉末分數(shù)的估計值。將從多個工作臺收集得到的藥物合并為一個檢測樣品使此方法更佳靈敏。這一系列試驗的結(jié)果顯示在圖1中。在所有的流速下，二水合物產(chǎn)生的細顆粒分數(shù)高于實際上無水物質(zhì)的分數(shù)。由于使用單劑吸入器將二水合物粉末氣溶膠化，因此可以合理得出氣溶膠特征明顯好于實際上無水物質(zhì)結(jié)論。較高的結(jié)晶度和穩(wěn)定的水分含量是導致二水合物具有如此優(yōu)異的氣溶膠特征的最有可能的因素。DHEA-S二水合物的這種獨特特征還未在現(xiàn)有技術(shù)中報道。雖然二水合物形式的DHEA-S氣溶膠性能的改善很明顯，但是純藥物物質(zhì)可能并不是最佳的制劑。使用粒度較大的載體通常能提高微粉化藥物物質(zhì)的氣溶膠性能。
實施例6有或無乳糖的情況下無水DHEA-S和DHEA-S二水合物的穩(wěn)定性 采用高壓液相色譜(HPLC)測定無水DHEA和DHEA-S二水合物的初始純度(時間＝0)。然后以純粉末的形式或以50∶50的比例將DHEA和DHEA-S二水合物分別與乳糖混合，放在開口玻璃瓶中，然后將溫度維持在50℃4周。利用這些條件使這些制劑受到應力，以預測它們的長時間穩(wěn)定性結(jié)果。密封僅含有DHEA-S(無水或二水合物)的對照瓶，并將其溫度保持在25℃至4周。在第0、1、2和4周獲得樣品，并進行HPLC分析，測定降解的量，即通過測定DHEA的形成測定降解的量。1周后，在50℃下貯存的密封玻璃瓶中混合有乳糖的實際上無水的DHEA-S(50％，標稱)產(chǎn)生褐色的色調(diào)，比乳糖混合物暗。這種顏色變化伴隨著色譜的顯著變化(如圖1所示)。主要的降解物是脫氫表雄酮或DHEA。從圖2的定量數(shù)據(jù)看，混合物中DHEA的量高于其他兩份樣品中的量。為了定量測定樣品中的DHEA％，將DHEA峰的面積除以DHEA-S和DHEA峰的總面積(結(jié)果列于表6中)。混合物的較高的降解比例表明乳糖和實際上無水的DHEA-S之間發(fā)生了特殊的反應。與DHEA增加相對應的是，加速貯存(accelerated storage)的粉末的褐色也隨著時間的推移而增加。稱取樣品用于化學分析過程中發(fā)生的結(jié)塊現(xiàn)象也證實了加速貯存的物質(zhì)顯示出與時間更緊密的關(guān)系?；谶@些結(jié)果，不能用乳糖配制實際上無水的DHEA-S。這是非常不利的，因為乳糖是干粉制劑最常用的吸入賦形劑。繼續(xù)用實際上無水的形式則意味著要將制劑限制到純粉末，或者要使用新的賦形劑的話需要進行更廣泛的安全性研究。
表650℃從無水DHEA-S形成的DHEA的百分比 與圖2不同，在50℃下貯存1周后實際上沒有DHEA產(chǎn)生(見圖3)。此外，物質(zhì)的顏色沒有發(fā)生變化。DHEA-S二水合物的水分含量在50℃貯存1周后實際上沒有改變。與初始的8.8％相比，加速貯存后水分含量是8.66％。在此穩(wěn)定性程序中測得的DHEA％顯示在表7中。
表750℃下由DHEA-S二水合物形成的DHEA百分比 通過比較圖1、2和表6、7，可以看出DHEA-S的二水合物形式是更穩(wěn)定的形式，適用于進一步的研究?，F(xiàn)有專利和研究文獻中也沒有報道DHEA-S二水合物與乳糖混合物相對于實際上無水物質(zhì)的優(yōu)異兼容性。下一部分將描述這種物質(zhì)的溶解性，作為噴霧器溶液研發(fā)工作的一個部分。
實施例7DHEA-S二水合物/乳糖混合物、可呼吸劑量和穩(wěn)定性的測定 (1)DHEA-S二水合物/乳糖混合物 手動混合等重量的DHEA-S二水合物和吸入等級的乳糖(Foremost Aero Flo 95)，然后使混合物通過500μm篩，制得預混合物。然后將此預混合物和余下的乳糖放到BelArt Micro研磨機中，獲得10％w/w的DHEA-S混合物?；旌掀髋c可變電壓電源連接，以調(diào)節(jié)攪拌器的速率?；旌掀鞯碾妷悍謩e以30％、40％、45％和30％的全壓循環(huán)1、3、1.5和1.5分鐘。通過HPLC分析測定混合物的含量均一性(contentuniformity)。表8顯示此混合物含量均一性樣品的結(jié)果。目標值是10％w/w的DHEA-S?；旌衔锖渴橇钊藵M意的，接近目標值和含量差異。
表8DHEA-S二水合物與乳糖的混合物的含量差異 (2)DHEA-S二水合物/乳糖混合物的氣溶膠化 將大約25毫克的該粉末填充到箔發(fā)泡藥中，并密封，然后使用單劑裝置以60L/min氣溶膠化。各測試分別使用兩劑發(fā)泡藥，細顆粒分數(shù)(工作臺1-5中的物質(zhì))的結(jié)果顯示在表9中。此初步研究的粉末混合物的氣溶膠結(jié)果對于呼吸藥物輸遞系統(tǒng)而言是令人滿意的。優(yōu)化粉末混合物和發(fā)泡藥/裝置構(gòu)型是有可能獲得較高的細顆粒分數(shù)的。測試2的整個粒度分布顯示在表10中。此DHEA-S氣溶膠的平均直徑約為2.5微米。此直徑小于采用激光衍射所測得的微粉化的DHEA-S二水合物的平均直徑。無規(guī)則形狀的顆粒在空氣動力學上可作為較小的顆粒發(fā)揮作用，這是因為它們的最長的尺度傾向于與氣流場排列。因此，通常可以看到兩種方法之間存在差異。衍射測量是用于輸入物質(zhì)的質(zhì)量控制測試，而階式碰撞取樣器則是用于最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制測試。
表9兩個不同試驗中乳糖混合物的細顆粒分數(shù) 表10氣溶膠化的DHEA-S二水合物/乳糖混合物的粒度分布 (3)DHEA-S二水合物/乳糖混合物的穩(wěn)定性 還將此乳糖制劑置于50℃的加速穩(wěn)定性程序中。關(guān)于DHEA-S含量的結(jié)果顯示在表11中。對照是在室溫貯存的混合物。在任一種條件下DHEA-S含量都沒有隨著時間推移而改變的趨勢，所有結(jié)果都在含量均一性測試中采集的樣品的范圍之內(nèi)(參見表11)。此外，沒有發(fā)生顏色變化，色譜中也沒有觀察到不規(guī)則的地方。混合物表現(xiàn)出化學穩(wěn)定性。
表11DHEA-S二水合物/乳糖混合物50℃的應力穩(wěn)定性 實施例8DHEA-S的噴霧制劑 DHEA-S的溶解性。
將根據(jù)“DHEA-S二水合物的重結(jié)晶(實施例5)”制得的過量的DHEA-S二水合物加到溶劑介導中，使其平衡至少14小時，同時定期搖動。然后將該懸浮液濾過0.2微米注射器過濾器，然后立即稀釋，以進行HPLC分析。為制備冷卻的樣品，使用前將注射器和過濾器保存在電冰箱中至少1小時。吸入純水可導致咳嗽刺激。因此，重要的是要將鹵化物離子加到噴霧制劑中，氯化鈉是作常用的鹽。由于DHEA-S是鈉鹽，因此由于共同離子效應的緣故，氯化鈉會降低溶解性。圖4顯示了作為氯化鈉濃度的函數(shù)的DHEA-S在室溫(24-26℃)和在冷藏(7-8℃)時的溶解度。DHEA-S的溶解度隨著氯化鈉濃度而下降。在所有氯化鈉濃度下，降低貯存溫度都會降低溶解度。在高氯化鈉濃度時，溫度影響較弱。在三個平行試驗中，約25℃和0％氯化鈉的溶解度為16.5-17.4mg/mL，相對標準偏差為2.7％。在0.9％氯化鈉冷藏情況中，三個試驗的溶解度范圍是1.1-1.3mg/mL，相對標準偏差為8.3％。
固態(tài)和液態(tài)DHEA-S之間的平衡如下所示 NaDHEA-S固態(tài)DHEA-S-+Na+ K＝[DHEA-S-][Na+]/[NaDHEA-S]固態(tài) 由于DHEA-S固態(tài)的濃度是恒定的(即，物理狀態(tài)穩(wěn)定的二水合物)，該平衡式可簡化表示為 Ksp＝[DHEA-S-][Na+] 基于此假設，將DHEA-S溶解度與總的鈉陽離子濃度的倒數(shù)作圖，所得直線的傾斜等于Ksp。這分別在圖5和圖6中顯示，分別為室溫和冷藏情況下的平衡?；谙嚓P(guān)系數(shù)，該模型與室溫和冷藏情況下的數(shù)據(jù)都能合理吻合，在該兩種情況下，平衡常數(shù)分別為2236和665mM2。為了使溶解度最大，氯化鈉的水平應盡可能地低。噴霧用溶液的最小鹵化物離子含量應為20mM或0.12％氯化鈉。
為了評估溶液的DHEA-S濃度，在使用時將噴霧器中的溫度下降10℃(即15℃)。平衡常數(shù)與絕對溫度倒數(shù)間的插值，即15℃時的Ksp為約1316mM2。各摩爾的DHEA-S向溶液提供1摩爾的鈉陽離子，因此 Ksp＝[DHEA-S][Na+]＝[DHEA-S-][Na++DHEA-S-] ＝[DHEA-S-]2+[Na+][DHEA-S-] 它用二次方程來計算[DHEA-S-]。Ksp為1316mM2的20mM Na+溶液是27.5mM的DHEA-S-或10.7mg/mL。因此，選用10mg/mL DHEA-S的0.12％氯化鈉溶液為好的候選制劑，用于進一步的測試。此式子的估算值并沒有將由于水從噴霧器中蒸發(fā)而導致的濃度影響加以考慮。含有10mg/mL DHEA-S的0.12％氯化鈉溶液的pH為4.7-5.6。雖然對于吸入制劑而言這是個可以接受的值，但是評估了使用20mM磷酸鹽緩沖液的效果。緩沖液和非緩沖液在室溫下的溶解度結(jié)果顯示在圖7中。制劑中緩沖液的存在抑制了溶解度，尤其是氯化鈉水平低的時候。如圖8所示，緩沖溶液的溶解度數(shù)據(jù)落在與非緩沖溶液的平衡直線相同的直線上。使用緩沖液導致的溶解度下降是由額外的鈉陽離子含量所引起的。使溶解度最大是一個重要的目標，而用緩沖液配制制劑降低了溶解度。此外，Ishihora和Sugimoto〔1979，Drug.Dev.Indust.Pharm.，5(3)263-275〕的研究并沒有顯示在中性pH時NaDHEA-S的穩(wěn)定性有顯著提高。
穩(wěn)定性研究。
在0.12％氯化鈉中配制10mg/mL的DHEA-S制劑，用于短期的溶液穩(wěn)定性研究。將此溶液的等份試樣加到透明的玻璃瓶中，分別在室溫(24-26℃)和40℃保存。每天檢測樣品中的DHEA-S含量、DHEA含量和外觀。在各時間點上，從各瓶中獲得雙份試樣并稀釋。圖9和10顯示了DHEA-S含量與此次研究時間長度的關(guān)系。在加速條件下，溶液顯示較快的降解，并在保存兩天后出現(xiàn)渾濁。在室溫下保存的溶液較穩(wěn)定，在第3天出現(xiàn)些許沉淀。在第3天停止該研究。DHEA-S的分解伴隨著DHEA含量的增加，如圖10所示。由于DHEA在水中是不溶的，在制劑中它只需要少量即可產(chǎn)生渾濁的溶液(加速保存)或結(jié)晶沉淀(室溫保存)。這就解釋了為什么對DHEA-S溶解度進行的較早的肉眼評估嚴重低估了該化合物的溶解度少量的DHEA將導致試驗者得出已超出DHEA-S的溶解度限度的結(jié)論。雖然這并不是一個有商業(yè)前途的制劑，但是在臨床試驗中，在重新配制的那一天溶液應當是穩(wěn)定的。以下部分描述該制劑的氣溶膠特性。
噴霧研究。
使用Pari ProNeb Ultra壓縮機和LC Plus噴霧器使DHEA-S霧化。圖11顯示了此試驗裝置的示意圖。將5毫升溶液加到噴霧器中，持續(xù)進行霧化，直到輸出的物質(zhì)變得視覺上不明顯為止(4.5到5分鐘)。使用具有USP喉管的Califonia InstrumentsAS-6型6工作臺碰撞取樣器測試霧化溶液。在霧化一分鐘后，以30L/min操作該碰撞取樣器8秒鐘，收集樣品。在該試驗的所有其他時間里，以約33L/min將氣溶膠引入旁路收集器中，用流動相清洗收集裝置、噴霧器和碰撞取樣器，進行HPLC分析。在噴霧器中使用5毫升DHEA-S的0.12％氯化鈉溶液。將此體積選擇為臨床研究中實際使用的上限。第一批5個試驗的結(jié)果列在下表中。
表12使用DHEA-S進行噴霧研究的結(jié)果 *僅僅評估從噴霧器中倒出的液體，沒有稱重氣溶膠化前和之后的重量或清洗全部單元 使噴霧器#1干燥約5分鐘，而使噴霧器#2干燥稍少于約4.5分鐘。在各種情況下，殘留在噴霧器中的液體體積大約是2毫升。從噴霧器中取出后，該液體最初是渾濁的，然后在3-5分鐘內(nèi)變?yōu)榍逦?。即使過了該時間后，10mg/mL的溶液也顯示少量的粗糙沉積物。看起來是該液體中細空氣泡導致了最初的渾濁。DHEA-S顯示出了表面活性(即，促進泡沫形成)，這使液體中的氣泡穩(wěn)定。10mg/mL中的沉積物表明，藥物的溶解度在噴霧器環(huán)境中超過在其他環(huán)境中的溶解度。因此，在較低的濃度下進行表13所示的額外噴霧試驗。表13顯示“劑量”線性對溶液濃度的額外數(shù)據(jù)。
表13使用DHEA-S進行的額外噴霧試驗的結(jié)果 干燥噴霧器#3用了稍少于約4.5分鐘達到干燥。將旁路收集器中的質(zhì)量與最初的溶液濃度作圖，如圖12所示。半定量地，從0到7.5mg/mL顯示出良好的線性，之后所收集的量開始出現(xiàn)偏離。雖然冷卻減少的溶解度也包括在10mg/mL溶液的計算中，但是對藥物和氯化鈉含量的任何濃度影響都被忽略。因此，通過噴霧液體的過飽和來形成沉淀物是有可能的。圖12所示的數(shù)據(jù)和在噴霧后10mg/mL溶液中觀察到的一些顆粒表明，作為臨床制劑概念上的證據(jù)，最高的溶液濃度大約為7.5mg/mL。將一氣溶膠樣品引入階式碰撞取樣器中，進行粒度分析。沒有可檢測的與溶液濃度或噴霧器數(shù)量相關(guān)的粒度分布的傾向。所有噴霧試驗中所獲得的平均粒度分布顯示在圖13中。氣溶膠顆粒測量值與該噴霧器的公開/廣告結(jié)果一致(即，直徑中值約2微米)。雖然體外試驗證明噴霧器制劑可輸遞可呼吸的DHEA-S氣溶膠，但是該制劑是不穩(wěn)定的，而且需要4-5分鐘的連續(xù)霧化。因此，穩(wěn)定的DPI制劑具有顯著的優(yōu)點。DHEA-S二水合物被鑒定為用于DPI制劑的最穩(wěn)定的固態(tài)狀態(tài)。如果通過消除該無水形式在霧化前與水接觸而維持其穩(wěn)定性的話，無水形式也適合用噴霧器給予。對于DHEA-S的臨床試驗，最佳的噴霧制劑是7.5mg/mL的DHEA-S的0.12％氯化鈉溶液。不需要緩沖系統(tǒng)制劑的pH也是可以接受的。通過將鈉陽離子濃度減到最小而使DHEA-S的水溶解度最大化。無緩沖液的最低的氯化鈉水平可實現(xiàn)此目標。這是用20mM的Cl-獲得的最高的藥物濃度，它在霧化過程中將不會產(chǎn)生沉淀。這種制劑在室溫下至少能穩(wěn)定存在1天。
實施例9試驗模型的制備 獲得細胞培養(yǎng)物HT-29SF細胞，其為HY-29細胞(ATCC，Rockville，Md.)的一個亞系，可在完全定義的無血清的PC-1培養(yǎng)基(Ventrex，Portland，Me.)內(nèi)生長。培養(yǎng)細胞在這種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃(含5％CO2的濕潤空氣中)。細胞長滿時用胰酶/EDTA(Gibco，Grand Island，N.Y.)消化后傳代，每24小時換一次培養(yǎng)基。在這種培養(yǎng)條件下，HT-27SF細胞處于對數(shù)生長期時倍增的時間為24小時。
流式細胞術(shù) 將細胞一式兩份接種到60mm培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿接種105個細胞。在細胞培養(yǎng)物內(nèi)加入0、25、50或200μM DHEA以分析細胞周期的分布。細胞培養(yǎng)物內(nèi)加入0或25μM DHEA用于分析DHEA對細胞周期的影響的反轉(zhuǎn)，培養(yǎng)基中添加MVA、CH、RN、MVA加CH、或MVA加CH加RN、或什么都不添加。培養(yǎng)物在0、24、48、74小時后用胰酶消化、固定并用Bauer等，Cancer Res.，46，3173-3178(1986)描述的方法染色。簡言之，離心收集細胞，重懸到冷磷酸鹽緩沖的鹽水中。細胞用70％的乙醇固定，洗滌，然后在重懸到冷磷酸鹽緩沖的鹽水中。然后加入1ml低滲染色液(50μg/ml碘化丙啶(Sigma Chemical Co.)，20μg/ml RNA酶A(BoehringerMannheim，Indianapolis，Ind.)，30μg/ml聚乙二醇，0.1％Triton X-100，溶于5mM檸檬酸鹽緩沖液中)，室溫下靜置10分鐘，然后加入1ml等滲染色液(碘化丙啶，聚乙二醇，Triton X-100，溶于0.4M氯化鈉溶液中)，用裝備有脈沖幅度/脈沖區(qū)域雙分辨率的流式細胞儀(Becton Dickinson Immunocytometry Systems，San Jose，CA)進行分析。用熒光束校正后進行分析，每個樣品最少分析2×104個細胞，1024個通道中每個通道內(nèi)熒光強度增強的細胞總數(shù)用s代表，所得到的直方圖用Cellfit分析程序(Becton Dickinson)進行分析。
DHEA對細胞生長的影響 細胞接種到30mm培養(yǎng)皿中，每種細胞接種4個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿接種25000細胞，2天后加入0、12.5、25、50或200μM DHEA。1、24、48和72小時后用Coulter計數(shù)儀(Z型；Coulter Electronics，Inc.Hialeah，F(xiàn)L)進行細胞計數(shù)。將DHEA(AKZO，瑞士，巴塞爾)溶于二甲基亞砜中，過濾除菌，儲存于-20℃?zhèn)溆谩?br> 圖14顯示的是DHEA對HT-29細胞生長的抑制。點代表細胞數(shù)，橫條代表SEM。每個數(shù)據(jù)點代表4個復孔，試驗重復三次。SEM橫條不明顯的地方說明SEM比符號還要小。與對照組相比，加入12.5μM DHEA后72小時、25或50μM DHEA后48小時、200μM DHEA后24小時可使細胞數(shù)減少，說明DHEA可以時間依賴的方式和劑量依賴的方式抑制細胞的生長。
DHEA對細胞周期的影響 為了檢驗DHEA對細胞周期分布的影響，接種HT-29SF細胞(105細胞/60mm培養(yǎng)皿)，48小時后用0、25、50或200μM DHEA處理。圖15顯示的是DHEA對HT-29SF細胞周期分布的影響。24、48和72小時后收獲細胞，用乙醇固定，然后用碘化丙啶染色，通過流式細胞儀分析DNA含量/細胞。用Cellfit細胞周期分析程序計算處于G1、S和G2M期的細胞百分數(shù)。為了區(qū)分S期用四角形標記。兩次測定得到的數(shù)據(jù)用典型直方圖顯示。試驗重復三次。
25或50μM DHEA處理后的最初24小時內(nèi)細胞培養(yǎng)物中的細胞周期分布沒有變化。但是隨著處理時間的延長，處于S期的細胞比例逐漸減少，處于G1、S和G2M期的細胞百分數(shù)用Cellfit細胞周期分析程序計算。為了區(qū)分S期用四角形標記。兩次測定得到的數(shù)據(jù)用典型直方圖顯示。試驗重復三次。
25或50μM DHEA處理后的最初24小時內(nèi)細胞培養(yǎng)物中的細胞周期分布沒有變化，但是隨著處理時間的延長，處于S期的細胞比例逐漸減少，處于G1期的細胞百分數(shù)在處理后72小時增加。處于G2M期的細胞在處理后48小時有一個瞬時的明顯增加。用200μM DHEA處理所得到的結(jié)果類似，在處理后24小時處于S期的細胞比例開始減少，并且一直持續(xù)到試驗結(jié)束。這說明可以時間依賴的方式和劑量依賴的方式將HT-29SF阻斷在G1期。
實施例10DHEA介導的細胞生長和細胞周期效應的反轉(zhuǎn) DHEA介導的生長抑制的反轉(zhuǎn)。
細胞按上述方法接種，2天后用含0或25μM DHEA的培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加甲羥戊酸(“MVA”；mM)、鯊烯(SQ；80μM)、膽固醇(CH；15μg/ml)、MVA+CH、核糖核苷(RN；尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和鳥嘌呤核苷，終濃度為30μM)、脫氧核糖核苷(DN；胸腺嘧啶核苷、脫氧胞苷、脫氧腺苷和脫氧鳥苷，終濃度為20μM)、RN+DN、MVA+CH+RN或不添加上述物質(zhì)的培養(yǎng)基。所有化合物都購自Sigma Chemical Co.(St.Louis，Mo.)。膽固醇在使用前用乙醇即時溶解。結(jié)果顯示，在不含DHEA時即使RN和DN達到最大濃度對細胞的生長也沒有影響。
圖16顯示的是DHEA誘導的HT-29SF細胞生長抑制的反轉(zhuǎn)。在A中，培養(yǎng)基內(nèi)添加了2μM MVA、80μM SQ、15μg/ml CH或MVA+CH或者不添加上述物質(zhì)(CON)。在B中，培養(yǎng)基添加了RN的混合物，其中含30μM的尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和鳥嘌呤核苷；或者DN的混合物，其中含20μM的胸腺嘧啶核苷、脫氧胞苷、脫氧腺苷和脫氧鳥苷；RN加DN(RN+DN)；或MVA加CH加RN(MVA+CH+RN)。分別于處理前或處理后48小時進行細胞計數(shù)，細胞的生長計算為48小時處理期間內(nèi)細胞數(shù)目的增加值。柱形代表未處理對照的細胞生長百分數(shù)；橫條代表SEM。未處理對照組的細胞數(shù)目增加值是173，370″6518。每個數(shù)據(jù)點代表了四次獨立試驗中四個重復培養(yǎng)皿所得到的數(shù)據(jù)平均值。統(tǒng)計學分析采用斯氏t檢驗，與對照組相比κ代表p＜0.01；ψ代表p＜0.001。在無DHEA的條件下加入上述物質(zhì)對細胞的生長沒有影響。
在這些條件下，DHEA誘導的生長抑制可被MVA或MVA+CH部分克服。單獨加入SQ或CH沒有這種效應。這說明DHEA的細胞增殖抑制活性部分是由內(nèi)源性甲羥戊酸的缺失造成的，內(nèi)源性甲羥戊酸的缺失可導致對膽固醇通路中早期即時生物合成的抑制，這是細胞生長所必須的。而且，加入RN或RN+DN后可使其生長得到部分恢復，但是加入DN沒有這種效果，說明甲羥戊酸和核苷酸池的耗竭參與DHEA誘導的生長抑制作用。但是加入這些物質(zhì)，包括聯(lián)合加入MVA、CH和RN也不能完全克服DHEA的生長抑制效應，說明DHEA具有細胞毒效應或者可能有其他的生化通路參與其中。
DHEA對細胞周期效應的反轉(zhuǎn) HT-29SF細胞用25μM DHEA和其他化合物如MVA、CH或RN處理以檢測其阻斷DHEA介導的細胞周期特異性效應的能力。在處理后48和72小時通過流式細胞術(shù)分析細胞周期分布。
圖17顯示的使DHEA誘導的HT-29SF細胞周期停滯的反轉(zhuǎn)情況。細胞接種(105細胞/60mm培養(yǎng)皿)后48小時用0或25μM DHEA處理。培養(yǎng)基添加2μM MVA；15μg/mlCH；含30μM尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷、腺苷和尿嘌呤核苷的RN混合物；MVA加CH(MVA+CH)；或MVA加CH加RN(MVA+CH+RN)或不添加任何物質(zhì)。48或72小時后收獲細胞，用乙醇固定，碘化丙啶染色，流式細胞儀分析每個細胞內(nèi)的DNA含量。用Cellfit細胞周期分析程序計算處于G1、S和G2M期細胞的百分數(shù)。為了區(qū)分S期用四角形標記。兩次測定得到的數(shù)據(jù)用典型直方圖顯示。試驗重復2次。在無DHEA的條件下加入上述物質(zhì)對細胞周期的分布沒有影響。
隨著處理時間的延長，DHEA可逐漸降低處于S期的細胞的比例。加入MVA后的48小時內(nèi)可部分阻止這種效應，但是72小時后這種效應消失，加入MVA+CH 72小時也能部分阻止S期細胞的減少，說明在延長接觸時間時MVA和CH都是細胞生長所需要的。加入MVA、CH和RN可明顯使細胞生長得以恢復，但是還是無法恢復到未處理的對照組的S期細胞比例。單獨加入CH或RN后48或72小時都沒有什么效果。從形態(tài)學上來看，加入DHEA后細胞變成圓形，這種變化只需在培養(yǎng)基內(nèi)加入MVA就可以阻止。圖4中所顯示的DHEA處理后72小時的某些DNA直方圖也說明存在DNA含量明顯減少的細胞亞群。由于HT-29細胞系是已知的含各種數(shù)目染色體的細胞群(68-72；ATCC)，因此它代表了一個含減少染色體的亞群。
結(jié)論 上面提供的實施例9-10證明用已知可耗竭內(nèi)源性甲羥戊酸的DHEA濃度處理人結(jié)腸癌細胞系HT-29SF可使細胞的生長受到抑制，并且導致G1停滯，加入MVA到培養(yǎng)基內(nèi)可部分阻止這種效應。DHEA所產(chǎn)生的對蛋白質(zhì)異戊二烯化的效應在許多方面與特異性3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A還原酶抑制劑如洛伐他丁和抗帕丁所觀察到的效應類似。但是，DHEA并不是直接抑制甲羥戊酸的生物合成，而是以多效性的方式發(fā)揮其對細胞周期和細胞生長的影響，這種方式涉及核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸的生物合成，還可以有其他因素參與。
實施例11定量吸入器 實施例12定量吸入器 實施例13定量吸入器 實施例14定量吸入器 在下面的實施例15-18中，第一和第二活性劑被微粉化，并與乳糖按上面所給的比例潤濕成塊?；旌衔锾畛涞接裁髂z膠囊或藥筒中或裝入特制的雙箔泡狀包裝(Rotadisks泡狀包裝，使用吸入器如Rotahaler吸入器(Glaxo)來施用Glaxo吸入器，或用Diskhaler吸入器來輸遞泡狀包裝(Glaxo)。
實施例15定量干粉制劑 實施例16定量干粉制劑 實施例17定量干粉制劑 實施例18定量干粉制劑 實施例19硫酸DHEA和白三烯拮抗劑的組合 白三烯是在細胞(不僅僅是肥大細胞)內(nèi)合成的(Gilchrist，M.，McCauley，S.D.和Befus，A.D.(2004)《人類肥大細胞系中NOS的表達、定位和調(diào)節(jié)對白三烯產(chǎn)生的作用》(Expression，localization，and regulation ofNOS in human mast cell lineseffectson leukotriene production)Blood 104，462-469)。我們測定了在大鼠腹膜肥大細胞內(nèi)用化合物48/80刺激之后硫酸DHEA是否會降低肥大細胞的脫粒?？赏ㄟ^測量組胺(肥大細胞分泌粒中所含的另一種物質(zhì))來量化肥大細胞的脫粒。通過簡單測量釋放的組胺作為白三烯釋放的方便的替代標記物。
大鼠腹膜肥大細胞 將新鮮分離的大鼠腹膜肥大細胞(2×105細胞)在含有150mM NaCl(pH7.4)、2.7mM KCL、0.9mM CaCl2、4mM Na2HPO4、2.7mM KH2PO4、1.75mg/ml BSA和0.1μg/ml化合物48/80的平衡鹽溶液中于37℃預培育5分鐘。之后加入DHEAS或水(對照)并將混合物在37℃溫育2分鐘。
溫育之后將混合物冷卻至4℃，然后4500rpm離心5分鐘。收集上清并在4℃與5％TCA(三氯乙酸)混合30分鐘以使蛋白質(zhì)沉淀。9500xg離心15分鐘之后收縮劑上清并與0.25M HCl混合。然后將樣品與2M NaOH和0.2％OPT(鄰苯二醛(ortho-phtalaldehyde))混合并在4℃黑暗培養(yǎng)30分鐘，之后加入0.5M H2SO4終止反應。
用分光熒光計(GeminiXS，Molecular Devices)在λex＝360nm和λem＝450nm測量熒光強度來量化分泌的組胺的量。結(jié)果表示為對照組胺分泌的抑制百分比。
圖18顯示，培育硫酸DHEA造成對大鼠肥大細胞脫粒的濃度依賴性抑制，0.1uM時的最大效力為69.9％。EC50為170nM。需要注意的是，采用目前的試驗條件，10-4M時DHEAS的溶解度是高度受限的，且這說明了該濃度時標志性的偽生物效應(spurious biological effect)。
LTRA對于治療呼吸道疾病非常有效，它們可阻斷LT從肥大細胞釋放之后對靶組織的作用。通過以上發(fā)現(xiàn)可見，硫酸DHEA和LTRA的組合將以乘性或協(xié)同方式發(fā)揮作用DHEAS將降低肥大細胞脫粒同時減少組胺和白三烯釋放，然后LTRA將阻斷任何釋放的白三烯的藥理作用。因此，患者將從這兩種藥物的組合中受益。
除硫酸DHEA，其它合適的非糖皮質(zhì)類固醇也可用作第一活性劑，包括但不限于異雄酮及其衍生物、類似物和藥學上可接受的鹽。例如這里式的I、III和IV描述的化合物。
雖然已結(jié)合前述優(yōu)選實施例描述了本發(fā)明，但是應理解，在不偏離本發(fā)明經(jīng)書的情況下可作出各種改動。
所有的出版物、專利和專利申請以及網(wǎng)頁上的內(nèi)容在此被全文納入本文作為參考，納入程度達到如這些單獨的出版物、專利或?qū)＠暾埍粏为毣蚍謩e表明要全文納入作為參考的情況。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其包含醫(yī)藥上或獸藥上可接受的載體、第一活性劑和和第二活性劑，可有效治療哮喘、慢性阻塞性肺病或呼吸道或肺部疾病，
(a)所述第一活性劑是至少一種選自具有如下化學式(III)所示的非糖皮質(zhì)類固醇和化學式(IV)所示的非糖皮質(zhì)類固醇的非糖皮質(zhì)類固醇
式中，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R12、R13、R14和R19獨立為H、OR、鹵素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，R5和R11獨立為OH、SH、H、鹵素、藥學上可接受的酯、藥學上可接受的硫酯、藥學上可接受的醚、藥學上可接受的硫醚、藥學上可接受的無機酯、藥學上可接受的單糖、二糖或寡糖、螺環(huán)氧乙烷、螺環(huán)硫乙烷、-OSO2R20、-OPOR20R21或(C1-C10)烷基，R5和R6一起為＝O，R10和R11一起為＝O；R15是(1)當R16是-C(O)OR22時為H、鹵素、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷氧基，(2)當R16是鹵素、OH或(C1-C10)烷基時為H、鹵素、OH或(C1-C10)烷基，(3)當R16是OH時為H、鹵素、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、甲?；?、(C1-C10)烷?；颦h(huán)氧，(4)當R16是H時為OR、SH、H、鹵素、藥學上可接受的酯、藥學上可接受的硫酯、藥學上可接受的醚、藥學上可接受的硫醚、藥學上可接受的無機酯、藥學上可接受的單糖、二糖或寡糖、螺環(huán)氧乙烷、螺環(huán)硫乙烷、-OSO2R20或-OPOR20R21，或R15和R16一起為＝O；R17和R18獨立為(1)當R6是H OR、鹵素、(C1-C10)烷基或-C(O)OR22時為H、-OH、鹵素、(C1-C10)烷基或-(C1-C10)烷氧基，(2)當R15和R16一起為＝O時為H、(C1-C10烷基)氨基、((C1-C10)烷基)n氨基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、羥基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基、(鹵素)m(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷?；⒓柞；?、(C1-C10)烷氧羰基或(C1-C10)烷酰氧基，(3)R17和R18一起為＝O；(4)R17或R18與它們所連接的碳一起形成含有0或1個氧原子的3-6元環(huán)；或(5)R15和R17與它們所連接的碳一起形成一環(huán)氧環(huán)；R20和R21獨立為OH、藥學上可接受的酯或藥學上可接受的醚；R22是H、(鹵素)m(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基；n是0、1或2；m是1、2或3；或其醫(yī)藥上或獸藥上可接受的鹽；和
(b)所述第二活性劑是白三烯受體拮抗劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述第一活性劑是具有如下化學式的非糖皮質(zhì)類固醇
式中，虛線表示單鍵或雙鍵；R是氫或鹵素；5位的H以α或β構(gòu)型出現(xiàn)，或者化學式I的化合物包含兩種構(gòu)型的外消旋混合物；R1是氫或與該化合物共價結(jié)合的多價無機或有機二羧酸。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述第一活性劑是具有化學式(I)的非糖皮質(zhì)類固醇，其中，所述多價有機二羧酸是SO2OM、磷酸鹽或碳酸鹽，其中M包括平衡離子，其中所述平衡離子是H、鈉、鉀、鎂、鋁、鋅、鈣、鋰、銨、胺、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、三乙胺、乙醇胺、膽堿、三乙醇胺、普魯卡因、芐星青霉素、丁三醇胺、吡咯烷、哌嗪、二乙胺、硫苷脂
和磷脂
式中R2和R3可以相同或不同，是直鏈或支鏈(C1-C14)烷基或葡糖苷酸
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，所述第一活性劑是脫氫表雄酮。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，所述第一活性劑是硫酸脫氫表雄酮。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述白三烯受體拮抗劑是孟魯司特、扎魯司特或普侖司特。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，還包含泛醌或其醫(yī)藥上或獸藥上可接受的鹽，其中所述泛醌具有如下化學式
式中，n是1-12。
8.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含可吸入或可呼吸大小的顆粒。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述顆粒大小約為0.01-10μm。
10.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述顆粒大小約為10-100μm。
11.一種包含輸遞裝置和權(quán)利要求1所述藥物組合物的藥盒。
12.如權(quán)利要求11所述的藥盒，其特征在于，所述輸遞裝置是氣溶膠發(fā)生器或噴霧發(fā)生器。
13.如權(quán)利要求12所述的藥盒，其特征在于，所述氣溶膠發(fā)生器包括吸入器。
14.如權(quán)利要求13所述的藥盒，其特征在于，所述吸入器裝置輸送制劑的各種預定劑量。
15.如權(quán)利要求13所述的藥盒，其特征在于，所述吸入器包括噴霧器或吹入器。
16.一種在對象中降低哮喘概率或治療哮喘的方法，所述方法包括給予需要這種治療的對象預防或治療有效量的權(quán)利要求1所述的藥物組合物。
17.一種在對象中降低慢性阻塞性肺病概率或治療慢性阻塞性肺病的方法，所述方法包括給予需要這種治療的對象預防或治療有效量的權(quán)利要求1所述的藥物組合物。
18.一種在對象中治療呼吸道、肺或惡性疾病或癥狀，或降低腺苷或腺苷受體水平或?qū)ο佘栈蛳佘帐荏w的敏感性的方法，所述方法包括給予需要這種治療的對象預防或治療有效量的權(quán)利要求1所述的藥物組合物。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述疾病或癥狀包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纖維性變病(CF)、呼吸困難、肺氣腫、喘鳴、肺動脈高壓、肺纖維化、氣道高反應性、腺苷或腺苷受體水平升高、腺苷超敏感性、感染性疾病、肺支氣管收縮、呼吸道炎癥或變態(tài)反應、肺表面活性物質(zhì)或泛醌缺失、慢性支氣管炎、支氣管收縮、呼吸困難、肺氣道障礙或梗阻、心臟功能腺苷測驗、肺血管收縮、呼吸障礙、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、施用升高腺苷或腺苷水平的藥物、嬰兒呼吸窘迫綜合征(嬰兒RDS)、疼痛、變應性鼻炎、癌癥或慢性支氣管炎。
全文摘要
一種藥用或獸用組合物，其包含選自脫氫表雄酮和/或硫酸脫氫表雄酮或其鹽的第一活性劑，以及含有白三烯受體拮抗劑的第二活性劑，用于治療哮喘、慢性阻塞性肺病或其它呼吸系統(tǒng)疾病。所述組合物可以各種制劑提供，并且可以是藥盒的形式。本發(fā)明的產(chǎn)品被用于預防和治療哮喘、慢性阻塞性肺病或其它呼吸系統(tǒng)疾病。
文檔編號A61K31/42GK101119731SQ200480025268
公開日2008年2月6日 申請日期2004年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月31日
發(fā)明者C·B·羅賓森, H·A·鮑爾 申請人:埃匹吉尼斯醫(yī)藥有限公司