專利名稱：一種光合細(xì)菌的培養(yǎng)及制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種光合細(xì)菌的培養(yǎng)和在醫(yī)藥保健營養(yǎng)領(lǐng)域的應(yīng)用。
光合細(xì)菌(photosynthesis bacteria PSB)屬原核生物界薄壁菌門中的厭氧光合菌綱，是20億年前地球上出現(xiàn)最早的原核微生物，具有原始光能合成體系，廣泛分布于自然界各類厭氧層里。它是一種厭氧光合異養(yǎng)型革蘭氏陰性細(xì)菌，分解有機(jī)物進(jìn)行不產(chǎn)氧的光合作用而合成自身營養(yǎng)物質(zhì)。目前所知的光合細(xì)菌可分為著色桿菌科，外硫紅螺菌科，紫色非硫細(xì)菌，綠色硫細(xì)菌，多細(xì)胞絲狀綠細(xì)菌，螺旋桿菌科，含細(xì)菌葉綠素的專性好氧菌等7大類群，約80多個菌種。
光合細(xì)菌是一種具有很高營養(yǎng)價值的古老菌體，個體小，但營養(yǎng)成分非常豐富，它含有大量的蛋白質(zhì)和氨基酸，是一種優(yōu)質(zhì)蛋白源，其菌體含有蛋白質(zhì)63.8％，脂肪8.2％，可溶性糖類20.8％，粗纖維2.8％，灰分4.4％；并富含多種生物活性成分，胡蘿卜素含量為0.56mg/g，泛醌10mg/g，維生素B1、B2、B6、B12等B族維生素88mg/g(特別是VB12的含量是酵母的200倍)以及16種人體必須氨基酸(與牛奶、雞蛋相比，其蛋白質(zhì)氨基酸組成齊全，易于消化吸收)、葉酸、生物素、輔酶Q等，尤其輔酶Q含量分別為酵母的13倍，菠菜葉的94倍，玉米幼芽的82倍，同時光合細(xì)菌含有多種人體必須活性微量元素。由于光合細(xì)菌的這些營養(yǎng)價值全面的特點(diǎn)，已在國內(nèi)外作為功能性保健品在一定程度上得到開發(fā)和使用，據(jù)報道，1992年全美保健食品中有6.5％加有不同比例的光合細(xì)菌。它一般應(yīng)用于以光合細(xì)菌為主體的保健生物制品，或作為有效成份添加于其它保健制品和飲料中。
在專利01800254.4中提出使用紅假單胞菌屬莢膜紅假單胞(Rhodopseudomonas capsulatsa)菌種FERMBP-7434菌種的代謝產(chǎn)物作為健康食品應(yīng)用，和專利99107591。9中提出使用紅螺菌屬的紅色非硫黃紅螺菌(Rhodospirillum)菌種作為醫(yī)藥保健品的應(yīng)用。但尚沒有專利涉及紫色非硫細(xì)菌中的沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)和膠狀紅長命菌(Rubrivivax gelatinosus)在醫(yī)藥保健和健康食品中的效果評價和應(yīng)用和開發(fā)。
本發(fā)明的目的在于提供兩種具有延緩衰老，免疫調(diào)節(jié)，血脂調(diào)節(jié)，防癌抗癌，抗疲勞等紅色光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法，以及使用這二種菌種制作醫(yī)藥保健營養(yǎng)品的方法和制成醫(yī)藥保健營養(yǎng)品。
為了實行上述目的，本方面采取了以下技術(shù)方案1、兩種純光合紫色非硫細(xì)菌沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)和膠狀紅長命菌(Rubrivivax gelatinosus)，分別屬于紅假單胞菌屬(前者)和紅長命屬(后者)，制成各種活菌口服制劑，作為延緩衰老，免疫調(diào)節(jié)，血脂調(diào)節(jié)，防癌抗癌，抗疲勞的保健營養(yǎng)品的功效。
2、制作本醫(yī)藥保健口服制劑，其特征在于，該方法包括下列步驟(1)按下述重量配制細(xì)菌培養(yǎng)液酵母提取物(Yeast extract)0.1-0.5克乙醇(Ethanol)0.1-0.8毫升DL-蘋果酸(DL-Malic acid) 0.2-0.6克丁二酸鈉(Di-Sodium succinate)2.0-4.0克乙酸銨(Ammonium acetate) 1-3克檸檬酸鐵溶液(0.05％) 10-40毫升磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.1-0.7克六合水氯化鎂(MgCl2·6H2O) 0.1-0.4克氯化鈉(NaCl) 0.1-0.6克二合水氯化鈣(CaCl2·2H2O) 0.01-0.08克生長因子溶液(維生素B1+B12復(fù)合液，10％) 5毫升微量元素溶液 3毫升蒸餾水 1050毫升上述培養(yǎng)液配制完成后，充入純氮?dú)夂图兌趸細(xì)怏w后，在121℃下高壓滅菌15分鐘，完成培養(yǎng)液的制作。
3、在上述培養(yǎng)液中接入三分之一的純菌種，在充分光照和每天使用純二氧化碳通氣攪拌條件下，培養(yǎng)4-8天，并達(dá)到每毫升5-10億個細(xì)菌數(shù)量的菌液，即制成紅色活菌沼澤紅假單胞菌或膠狀紅長命菌或兩者復(fù)合菌的活菌制劑。
4、按上述2的要求制作醫(yī)藥保健制劑的方法，其劑型在于溶液劑、糖漿劑、酊劑、非水溶液劑、薄膜包衣、泡騰片、腸溶片、緩釋片、速釋片、控釋片、硬膠囊、腸溶膠囊、緩釋膠囊等；與適宜的制備工藝制成的口服制劑組成中還可包括藥物可接受的載體。
5、按上述4方法制作成制劑，其包括液體制劑和固體制劑本發(fā)明的液體制劑制備工藝取主要成份與矯味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等、按液體制劑的方法制備成溶液劑、糖漿劑、酊劑、非水溶液劑。
本發(fā)明固體制劑的制備工藝將主要成份加適宜的輔料均勻混合，通過制劑技術(shù)壓制而成的圓片或異形片的固體制劑，可以制成口服普通片、薄膜包衣片、腸溶片、緩釋片、速釋片、控釋片等。
本發(fā)明固體制劑的制備工藝將主要成份加適宜的輔料如稀釋劑、助流劑、崩解劑等制成均勻的粉末或顆粒充填于空心膠囊中，可以制成硬膠囊。
本發(fā)明固體制劑的制備工藝將一種或主要成份緩釋、速釋、控釋小丸，單獨(dú)填充或混合后充填于空心膠囊中，可以制成緩釋、速釋、控釋膠囊。
本發(fā)明藥物制劑中的輔料有矯味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、填充劑、粘合劑，表面活性劑，濕潤劑，潤濕劑，崩解劑，助崩劑，助懸劑，助流劑，潤滑劑，吸咐劑，混懸劑，包衣材料，包囊材料，包衣材料、緩釋材料、速釋材料、控釋材料等等。
本發(fā)明藥物制劑中的著色劑包括但不限于紅曲色素、甜菜紅、紅花色素、姜黃素、焦糖、食用色素紅色40號、亮黑色等等。
本發(fā)明藥物制劑中的防腐劑包括但不限于苯酚、甲酚、尼泊金丁酯、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮碘、潔爾滅、溴烷銨等等。
本發(fā)明藥物制劑中的填充劑包括但不限于乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硫酸鈣、葡萄糖酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣、淀粉、羧甲基淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素等。
本發(fā)明藥物制劑中的粘合劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、明膠、糊精、麥牙糖糊精、蔗糖、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮、各種粘度甲基纖維素、低粘度羧甲基纖維素、各種粘度乙基纖維素、各種粘度聚乙烯醇、聚乙二醇6000、50MPAS以下羥丙基甲基纖維素等。
本發(fā)明藥物制劑中的崩解劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、海藻酸、純木質(zhì)纖維素、羧甲基淀粉鈉、瓜耳樹膠、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、離子交換樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等。
本發(fā)明藥物制劑中的潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、滑石粉、單硬脂酸甘油酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、苯甲酸鈉、己二酸、富馬酸、硼酸、氯化鈉、三醋酸甘油酯、聚氧乙烯單硬脂酸酯、單月桂蔗糖酸酯、氯化鈉、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂等。
本發(fā)明藥物制劑中的表面活性劑包括但不限于十二烷基硫酸鈉、冶洛沙姆、吐溫80、溴化十六烷三甲胺、月桂醇硫酸鈉、硬脂醇磺酸鈉、聚氧乙烯高級脂肪醇、蔗糖酯、山梨醇脂肪酯、大豆磷脂等。
本發(fā)明藥物制劑中的矯味劑包括但不限于甜菊素、果糖、葡萄糖、果葡糖漿、蜂蜜、阿斯巴坦、蛋白糖、木糖醇、甘露醇、乳糖、山梨醇、麥芽糖醇、甘草甜素、甘茶葉素、環(huán)已氨基磺酸鈉、香蕉香精、菠蘿香精、橘子香精、薄荷香精、茴香、香蘭素、檸檬香精、櫻桃香精、玫瑰香精等。
本發(fā)明藥物制劑所用的輔料材料，可以是任何能夠起到緩釋作用的材料。這些包衣材料包括但不限于纖維素及其衍生物類、丙烯酸樹脂類、乙烯聚合物等。
本發(fā)明藥物制劑所用的包囊材料包括但不限于明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、聚乙烯醇、聚丙烯酸、羥乙基纖維素、聚乳酸、乙基纖維素、聚乙烯、聚酰胺、硬脂酸、硝酸纖維素、硬脂酸甘油酯、蟲膠、苯二甲酸醋酸纖維素。
本發(fā)明藥物制劑所用的緩釋、速釋、控釋骨架材料包括但不限于巴西棕櫚蠟、氫化蓖麻油、蓖麻臘、氫化大豆磷脂、蟲膠、明膠、海藻酸鈉、甲殼胺、支鏈淀粉、瓊脂、角叉菜膠、瓜耳膠、纖維素衍生物、丙烯酸樹脂類、聚乙烯類、高分子材料等。
本發(fā)明制劑以紅假單胞菌和膠狀紅長命菌作為活性成分，它們的含量可以為制劑總量的1--99％，其它成分為藥物可接受的輔料或緩釋材料，這些藥物可接受的輔料或緩釋材料的含量可以為制劑總量的1--99％。
本發(fā)明可以通過以下方法制備(例如緩釋片)將主要成份分別與制藥成分混合，從而獲得優(yōu)選的處理及加工性能，可以使用的藥用成分包括粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑及其他藥用輔料。
將優(yōu)選的主要成份分別與一種或多種緩釋材料、填充劑、崩解劑等混合均勻，分別加入一定量的粘合劑溶液，濕法制粒，將各自所得的顆粒洪干至一定程度，加入潤滑劑，將其中一種顆粒壓制成一定規(guī)格和大小的片劑，再將另一種顆粒與上述所壓的緩釋片混合，壓制成雙層緩釋片。
本發(fā)明可以通過以下方法制備(例如緩釋膠囊)將主要成份分別與適宜的組分混合，包括粘合劑、填充劑等混合均勻，經(jīng)過處理，分別制成核心小丸。所得的小丸用于進(jìn)一步加工。
將優(yōu)選的主要成份分別溶于適當(dāng)溶劑中、加入適當(dāng)?shù)奶畛鋭?、粘合劑等配成包衣溶液，通過流化床包衣法，將上述配制的包衣溶液分別包裹在空白丸芯上，分別得到含藥小丸。
另外，可用隋性種核加層法、粉末層積法、擠出\滾圓法等工藝，制備含活性物質(zhì)的核心材料，所得核心微丸用于進(jìn)一步加工。
使用合適的包衣技術(shù)，將一種或多種緩釋材料分別涂布于上述核心小丸上，緩釋材料可分散或溶解在水中或合適的有機(jī)溶劑中。
將所得的緩釋微丸，按一定比例混合均勻，填入膠囊，即得復(fù)方緩釋膠囊。
在制備過程中，也可以將主要成份包含在同一微丸中，制成復(fù)方含藥小丸，再將所得的復(fù)方含藥小丸包裹緩釋層，最后將所得的緩釋小丸填入膠囊。
本發(fā)明作為醫(yī)藥保健營養(yǎng)品的研究表明在人體細(xì)胞內(nèi)起著傳送電力重要作用的類胡蘿卜素，泛醌等物質(zhì)，而光合細(xì)菌菌體含量較高且與人體細(xì)胞的一樣。這些物資容易進(jìn)入細(xì)胞膜，使線粒體內(nèi)的活性氧被氧化，減少自由基的生成。自由基(羥基自由基；超氧自由基)是人體新陳代謝的副產(chǎn)品，對人體內(nèi)正常的生化反應(yīng)具有破壞作用，被稱作人類衰老因子，光合細(xì)菌對的清除率可高達(dá)90％以上。減少自由基的產(chǎn)生，維持體內(nèi)氧化和抗氧化的平衡被認(rèn)為是預(yù)防腫瘤發(fā)生的有效途徑。因此應(yīng)用于延緩衰老和抗腫瘤。而且光合細(xì)菌能降低血清中總膽固醇和總甘油三酯含量，增加HPL含量，降低LPL含量，降低動脈硬化指數(shù)，有著較強(qiáng)的調(diào)脂作用。
總之光合細(xì)菌的保健作用是綜合的，其根本是菌體含有豐富有較全面的營養(yǎng)物質(zhì)，而且一些作用又相互促進(jìn)，最終達(dá)到對人體具有延緩衰老，免疫調(diào)節(jié)，血脂調(diào)節(jié)，防癌抗癌，抗疲勞等多重保健作用。
兩種純光合紫色非硫細(xì)菌沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)和膠狀紅長命菌(Rubrivivax gelatinosus)的安全性研究表明，其LD50遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于人體可能攝入量的500倍，多種動物試驗均無致毒，致病作用，也無對生殖、生長的不良影響，具有安全性。
權(quán)利要求
1.兩種純光合紫色非硫細(xì)菌沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)和膠狀紅長命菌(Rubrivivax gelatinosus)，分別屬于紅假單胞菌屬(前者)和紅長命屬(后者)，制成各種活菌制劑，可延緩衰老，免疫調(diào)節(jié)，血脂調(diào)節(jié)，防癌抗癌，抗疲勞的功效。
2.制作權(quán)利1所述的醫(yī)藥保健制劑，其特征在于，該方法包括下列步驟按下述重量配制細(xì)菌培養(yǎng)液酵母提取物(Yeast extract)0.1-0.5克乙醇(Ethanol)0.1-0.8毫升DL-蘋果酸(DL-Malic acid) 0.2-0.6克丁二酸鈉(Di-Sodium succinate)2.0-4.0克乙酸銨(Ammonium acetate) 1-3克檸檬酸鐵溶液(0.05％) 10-40毫升磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.1-0.7克六合水氯化鎂(MgCl2·6H2O) 0.1-0.4克氯化鈉(NaCl) 0.1-0.6克二合水氯化鈣(CaCl2·2H2O) 0.01-0.08克生長因子溶液(維生素B1+B12復(fù)合液，10％) 5毫升微量元素溶液 3毫升蒸餾水1050毫升上述培養(yǎng)液配制完成后，充入純氮?dú)夂图兌趸細(xì)怏w后，在121℃下高壓滅菌15分鐘，完成培養(yǎng)液的制作。
3.在上述培養(yǎng)液中接入三分之一的純菌種，在充分光照和每天使用純二氧化碳通氣攪拌條件下，培養(yǎng)4-8天，并達(dá)到每毫升5-10億個細(xì)菌數(shù)量的菌液，即制成紅色活菌沼澤紅假單胞菌或膠狀紅長命菌或兩者復(fù)合菌的活菌制劑。
4.根據(jù)權(quán)利2所述制作醫(yī)藥保健營養(yǎng)品口服液體制劑和口服固體制劑，其特征在于包括溶液劑、糖漿劑、酊劑、非水溶液劑、薄膜包衣、泡騰片、腸溶片、緩釋片、速釋片、控釋片、硬膠囊、腸溶膠囊、緩釋膠囊等；與適宜的制備工藝制成的口服制劑組成中還可包括藥物可接受的載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的液體制劑，其特征在于取主要成份與矯味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等、按液體制劑的方法制備成溶液劑、糖漿劑、酊劑、非水溶液劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的固體制劑，其特征在于取主要成份與填充劑、崩解劑、表面活性劑、助溶劑、粘合劑混合，加濕潤劑制軟材，制粒，干燥，整粒，加入潤滑劑，壓片，制成口服普通片，將該口服普通片，將該口服普通片包薄膜衣或腸溶衣可以進(jìn)一步制成薄膜衣片或腸溶片；取主要成份和緩釋和/或速釋和/或控釋材料混合，加濕潤劑制軟材，制粒，干燥，整粒，加入潤滑劑，壓片，制成緩釋片、速釋片、控釋片；取主要成份與填充劑、崩解劑、表面活性劑、粘合劑混合，加濕潤劑制軟材，制粒，充填入空心膠囊，制成硬膠囊劑，將制備的硬膠囊用包衣腸溶材料處理可以進(jìn)一步制成腸溶膠囊；取主要成份和緩釋和/或速釋和/或控釋材料制成一種或多種緩釋和/或速釋或控釋小丸，單獨(dú)填充或混合后填充了空心膠囊片，制成緩釋和/或速釋膠囊或控釋膠囊。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服制劑的輔料有矯味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、填充劑、粘合劑，表面活性劑，濕潤劑，潤濕劑，崩解劑，助懸劑，助流劑，潤滑劑，吸咐劑，混懸劑，包衣材料，包囊材料，包衣材料、緩釋材料、速釋材料、控釋材料等。
8.權(quán)利要求7所述的著色劑包括但不限于紅曲色素、甜菜紅、紅花色素、姜黃素、焦糖、食用色素紅色40號、亮黑色等等。防腐劑包括但不限于苯酚、甲酚、尼泊金丁酯、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮碘、潔爾滅、溴烷銨等等。填充劑包括但不限于乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硫酸鈣、葡萄糖酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣、淀粉、羧甲基淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素等。粘合劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、明膠、糊精、麥牙糖糊精、蔗糖、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮、各種粘度甲基纖維素、低粘度羧甲基纖維素、各種粘度乙基纖維素、各種粘度聚乙烯醇、聚乙二醇6000、50MPAS以下羥丙基甲基纖維素等；崩解劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、海藻酸、純木質(zhì)纖維素、羧甲基淀粉鈉、瓜耳樹膠、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、離子交換樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、滑石粉、單硬脂酸甘油酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、苯甲酸鈉、己二酸、富馬酸、硼酸、氯化鈉、三醋酸甘油酯、聚氧乙烯單硬脂酸酯、單月桂蔗糖酸酯、氯化鈉、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂等；表面活性劑包括但不限于十二烷基硫酸鈉、冶洛沙姆、吐溫80、溴化十六烷三甲胺、月桂醇硫酸鈉、硬脂醇磺酸鈉、聚氧乙烯高級脂肪醇、蔗糖酯、山梨醇脂肪酯、大豆磷脂等；矯味劑包括但不限于甜菊素、果糖、葡萄糖、果葡糖漿、蜂蜜、阿斯巴坦、蛋白糖、木糖醇、甘露醇、乳糖、山梨醇、麥芽糖醇、甘草甜素、甘茶葉素、環(huán)己氨基磺酸鈉、香蕉香精、菠蘿香精、橘子香精、薄荷香精、茴香、香蘭素、檸檬香精、櫻桃香精、玫瑰香精等。
9.權(quán)利要求8所述的包衣材料包括但不限于纖維素及其衍生物類、丙烯酸樹脂類、乙烯聚合物等。包囊材料包括但不限于明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、聚乙烯醇、聚丙烯酸、羥乙基纖維素、聚乳酸、乙基纖維素、聚乙烯、聚酰胺、硬脂酸、硝酸纖維素、硬脂酸甘油酯、蟲膠、苯二甲酸醋酸纖維素；緩釋、速釋、控釋骨架材料包括但不限于巴西棕櫚蠟、氫化蓖麻油、蓖麻臘、氫化大豆磷脂、蟲膠、明膠、海藻酸鈉、甲殼胺、支鏈淀粉、瓊脂、角叉菜膠、瓜耳膠、纖維素衍生物、丙烯酸樹脂類、聚乙烯類、高分子材料等。
全文摘要
本發(fā)明涉及沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)和膠狀紅長命菌(Rubrivivax gelatinosus)的培養(yǎng)方法及其在作為醫(yī)藥保健方面上的應(yīng)用。這兩種光合細(xì)菌分別屬于屬紫色非硫細(xì)菌的紅假單胞菌屬(前者)和紅長命屬(后者)。經(jīng)過單一接種或混合接種培養(yǎng)后，所制成的紅色液體為活菌制劑，細(xì)菌含量為5－10億個/毫升，可以制成液體制劑或制成各種固體活菌(或滅活菌)固體制劑，包括溶液劑、糖漿劑、酊劑、非水溶液劑、薄膜包衣、泡騰片、腸溶片、緩釋片、速釋片、控釋片、硬膠囊、腸溶膠囊、緩釋膠囊等；與適宜的制備工藝制成的口服制劑組成中還可包括藥物可接受的載體?？裳泳徦ダ?，免疫調(diào)節(jié)，血脂調(diào)節(jié)，防癌抗癌，抗疲勞的功效。
文檔編號A61K35/74GK1775944SQ200410090828
公開日2006年5月24日 申請日期2004年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月15日
發(fā)明者方強(qiáng), 胡才忠, 李輝敏 申請人:方強(qiáng), 胡才忠, 李輝敏