專利名稱:十全大補膏的質量控制方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種由中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g制成的具有溫補氣血作用的十全大補膏的質量控制方法,具體涉及用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參、黃芪和甘草。
背景技術:
一種《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-0471-91)中治療氣血兩虧疾病藥物十全大補膏,該藥物配方由中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g組成;《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-0471-91)頒布了十全大補膏質量控制標準,但衛(wèi)生部頒發(fā)的現有的十全大補膏質量控制方法中,只有有關膏劑項下相對密度、不溶物檢查以及最低裝量差異的質量檢查,難于控制十全大補膏的質量;《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》2001,32(12)文獻《十全大補膠囊中芍藥苷的HPLC測定》中公開了芍藥苷的HPLC測定方法,但其選用的溶劑提取得率低;《中醫(yī)藥導報》2002,21(11)文獻中《高效液相色譜法測定十全大補丸中芍藥苷的含量》測定方法比較,本發(fā)明省略上柱步驟,處理樣品快捷簡便,準確度高,重現性好;本發(fā)明克服現有技術的不足,提高十全大補膏的質量控制標準,建立制劑中含量測定指標及其檢測方法,增加其中黨參、黃芪、甘草藥材的薄層色譜定性鑒別方法,保證了本復方制劑較高的質量標準水平。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是對采用水提工藝的十全大補膏制定新的質量控制方法,利用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量,并經方法學考察試驗,確認方法簡便、結果準確,重現性好;用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黃芪、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材甘草,經方法學試驗,確認方法專屬、可行、陰性無干擾;保證了質量檢測標準的準確性和先進性,能夠有效地控制六味地黃膏的質量。
治療氣血兩虧疾病藥物十全大補膏收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-0471-91)中,該藥物配方由中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g組成,黨參是方中主要藥味,為桔梗科植物黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsis pilosula Nannf.Var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonopsis tangshen Oliv的干燥根,味甘平,具有補中益氣,生津養(yǎng)血的功效,主要含有黨參苷I、黨參苷II、黨參苷III、黨參苷IV、丁香苷等化學成分;黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根,味甘,微溫,具有補氣升陽,益衛(wèi)固表,托毒生肌,利水退腫的功效,主要含有黃酮類、皂甙類、多糖類的有效成分;甘草為豆科植物Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhizaglabra L.的干燥根及根莖,味甘,平,具有補脾益氣,潤肺止咳,緩急止痛,緩和藥性的功效,主要含有甘草甜素,黃酮類化合物。
《中國藥典》2000版一部收載的十全大補膏的質量控制方法,有白芍、當歸的薄層鑒別方法,并有一項理化和一項顯微鑒別,理化鑒別由于專一性不強,現基本采用薄層代替理化鑒別。因《中國藥典》2000版一部收載的十全大補膏的工藝為水提,故顯微鑒別也不適用。當歸、川芎的化學成分基本相同,經試驗研究,用藥典方法,只能鑒別成品中有當歸或川芎,無法單獨鑒別當歸;部頒試行標準收載的十全大補合劑,收載了當歸和川芎、白芍、甘草、黃芪的薄層鑒別方法。經試驗,原有的鑒別方法雜質多,干擾大,斑點分離效果差。因此本申請?zhí)峁┝藢ζ渲械狞h參、黃芪、甘草的新的薄層鑒別方法,與原有鑒別方法相比,專一性強,避免了斑點之間的干擾,操作簡便,靈敏度強;本申請進一步建立了芍藥苷的含量測定方法?!吨袊幍洹?000版一部收載的丸劑,部頒標準收載的十全大補劑型除十全大補合劑為試行標準外,均無含量測定項目。為提高十全大補膏的質量標準,有必要設定含量測定項目,控制和保證十全大補膏的質量。白芍性微寒,味苦、酸。具平肝止痛,養(yǎng)血調經,斂陰止汗之功能,在處方中為主要藥味。由于芍藥苷具水溶性,在本制備工藝中較易被水煎煮提取出來,因此本標準選用芍藥苷為定量指標,進行了考察。部頒試行標準收載的十全大補合劑選用阿魏酸作為定量指標,由于當歸、川芎兩味藥材均含阿魏酸,專一性不強,故本標準選用芍藥苷為定量指標,用高效液相色譜法進行測定。本發(fā)明含量測定方法與現有技術相比,選用的溶劑提取得率高,提取雜質少,選擇的流動相系統(tǒng)對樣品色譜峰分離效果好,處理樣品快捷簡便,準確度高,重現性好,故選用其作為控制本品質量的指標,能更好地反映和控制制劑的內在質量。
本發(fā)明是通過用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量;用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參、中藥材黃芪、中藥材甘草來有效控制十全大補膏藥物的質量。
十全大補膏新的質量控制檢測方法,具體地該方法可以按下列測定步驟進行主要檢驗儀器設備ZF-型三用紫外線分析儀上海顧村電光儀器廠HH-4數顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司Hp1100高效液相色譜儀安捷倫公司Agilent100化學工作站SK-5200超聲波清洗器上??茖С晝x器有限公司溫度數顯調節(jié)干燥箱上海市儀器實驗總廠藥材來源黨參、白術、茯苓、炙甘草、當歸、川芎、白芍、熟地、炙黃芪、肉桂均來源于《中國藥典》2000版一部,經檢驗均符合其標準規(guī)定,藥材均由安徽毫州市中信藥業(yè)有限責任公司提供。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(10-30∶90-70)為流動相;檢測波長為230±2nm,流速0.5-1.0ml/min,柱溫27-30℃,理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b.對照品芍藥苷溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加不同溶度的甲醇、乙醇或水中的任一種制成每1ml含10-60μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品0.5-4g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入不同溶度的甲醇、乙醇、水中的任一種10-100ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用不同溶度的甲醇、乙醇或水補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得。
d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5-20μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2.用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參、甘草、黃芪
a.該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材0.25-2g,加水25-100ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸0.5-2ml和氯仿10-100ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品5-60g,加水10-100ml、鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
(3)照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5-20ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
b.該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液,作為對照品溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品20-50克,加水10-50ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇0.5-1ml溶解,作為供試品溶液。
(3)照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取對照品5-20ul,供試品溶液10-30ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
c.該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5-2g,加水25-100ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品6-30g,加水10-100ml、鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解,作為供試品溶液。
(3)照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液5-40μl,對照藥材溶液0.5-4μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
本發(fā)明優(yōu)選的技術方案可以是1.用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定該藥物中芍藥苷的含量a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)為流動相;檢測波長為230nm。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
c供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
.b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
經過多次重復試驗,確認方法簡便、結果準確,可作為十全大補膏質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
本發(fā)明所述治療溫補氣血,用于氣血兩虧引起面色蒼白,氣短心悸,體倦乏力,四肢不溫的十全大補膏的制備方法,是按照《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-0471-91)中的制備方法制成;方中十味藥材,加水煎煮三次,第一、二次各2小時,第三次1小時,第一次加六倍量水,第二、三次加五倍量水,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85~90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得;服用方法一次10~15g,一日2次。
本發(fā)明提供了中藥材黨參、甘草、黃芪的TCL鑒別,經方法學試驗確認方法可行,陰性無干擾;選擇了芍藥苷為測定指標,并進行了以下方法學考察試驗,建立了十全大補膏的HPLC含量測定方法;經過多次重復試驗,確認方法簡便、結果準確,重現性好,可作為十全大補膏質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
方法學考察(1)提取溶劑的考察提取方法較常用的為回流提取和超聲提取,由于本品白芍藥材經水煎煮提取制成煎膏劑,因此制備供試品溶液時僅為從煎膏劑中分散、溶解芍藥苷的過程,所以采用超聲提取法。芍藥苷為水溶性成分,《中國藥典》2000年版一部有關芍藥苷含量中采用的溶解為甲醇、乙醇,為此,考察了50%乙醇、甲醇、乙醇、50%甲醇的提取情況,取本品2g,精密稱定,加50%的乙醇、甲醇進行提取溶劑考察,結果見表1。從結果可以看出50%乙醇提取得率較高,提取雜質較少,故選擇50%乙醇作為提取溶劑,見表1。
表1提取溶劑的考察提取溶劑 峰面積/g甲醇 195.80乙醇 80.0650%甲醇 224.3050%乙醇 237.70(2)超聲提取時間的考察取本品2g,精密稱定,加50%乙醇進行超聲提取時間考察,結果見表2。從結果來看,提取時間對芍藥苷的含量結果無明顯影響,確定超聲30分鐘已能夠提取完全,見表2。
表2超聲提取時間的考察提取時間(min)峰面積/g15224.5430238.1945235.0960232.96(3)對照品線性關系的考察取濃度為0.0104mg/ml、0.0208mg/ml、0.0416mg/ml、0.0624mg/ml、0.0832mg/ml、0.1040mg/ml對照品溶液,分別進樣10μl,按正文色譜條件測定峰面積,結果見表3。以峰面積為縱坐標,對照品量為橫坐標,繪制標準曲線,計算得回歸方程y=1436.76x-0.03631,R=0.9998表3線性關系的考察對照品量0.1040.208 0.416 0.624 0.832 1.040(μg)面積1155.71 293.61591.09911.651180.87 1503.14峰面積2 155.52 292.94592.44909.961178.66 1499.19平均峰155.62 293.28591.76910.801179.76 1501.16面積結果表明芍藥苷對照品溶液在0.104μg~1.04μg范圍內具有良好的線性關系,且通過原點。
(5)精密度試驗取濃度0.0624mg/ml的芍藥苷對照品溶液,進樣10ul,按正文中液相色譜條件,重復進樣5次,測定結果見表4。
表4精密度試驗結果編號峰面積 RSD1 906.712 903.363 908.65 0.37%4 908.285 91 2.73結果表明該方法精密度較好。
表5重現性試驗結果芍藥苷含量 平均含量RSD序號(mg/g) (mg/g)1 0.3622 0.3673 0.364 0.364 0.57%4 0.3635 0.366(6)穩(wěn)定性試驗取供試品溶液(批號021023),精密吸取10μl,按上述色譜條件,在6小時內測定供試品溶液中芍藥苷峰面積值,結果見表6。說明供試品在6小時內穩(wěn)定性好,見表6。
表6 穩(wěn)定性試驗結果時間(小時)峰面積 RSD(%)0 519.362 531.031.40%3 515.446 528.19(7)回收率試驗精密稱定已知含量的本品(批號021023)5份,每份約1g,分別精密加入芍藥苷對照品,采用加樣回收試驗,按正文中色譜條件測定,計算回收率,RSD為1.76%,表明本方法回收率較好,結果見表7。
表7回收率試驗結果樣品含 加入芍 測出芍 平均回平均回收率 RSD序號量藥苷量 藥苷量 收率峰面積(%)%(mg) (mg) (mg)(%)1 0.4932 0.416 511.97 0.9014 98.122 0.4592 0.416 493.82 0.8695 98.631.763 0.4400 0.416 479.64 0.8445 97.2399.21%%4 0.4379 0.416 488.01 0.8592 101.275 0.4362 0.416 485.8850.8555 100.79 (8)樣品的測定取本品8批,照正文中色譜條件測定,測得結果見表8
表8樣品測定結果白芍藥材含成品芍藥苷含 平均值序號批號白芍藥材批量號 (mg/g)量(mg/g) (mg/g)1 021105 02070623.98 0.384 0.3840.3842 021110 23.98 0.383020706 0.3820.3973 021115 02070623.98 0.3950.3930.3694 021023 02070623.98 0.3690.3690.3795 021028 02070623.98 0.3760.3740.3886 021101 02070623.98 0.3860.3840.2667 021024 02071116.40 0.2640.2630.2578 021029 02071116.40 0.2570.256根據上述試驗結果,考慮到白芍藥材的來源、加工炮制、貯藏等因素,暫定本品每克含芍藥苷不得低于0.20mg.
具體實施例方式
實施例1取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)為流動相;檢測波長為230nm,流速1.0ml/min,柱溫27℃。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
c供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
經過多次重復試驗,確認方法簡便、結果準確,可作為十全大補膏質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例2膏劑制備方法同實施例1,該膏劑的質量控制方法如下1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(30∶70)為流動相;檢測波長為230nm,流速0.5ml/min,柱溫30℃。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含10μg的溶液,即得。
c供試品溶液的制備取本品0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材0.25g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品5g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品20克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例3取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)為流動相;檢測波長為230nm,流速0.5ml/min,柱溫25℃,理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b.對照品芍藥苷溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加60%乙醇制成每1ml含60μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品4g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入60%乙醇10ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用60%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材2g,加水100ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸2ml和氯仿100ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品60g,加水100ml、鹽酸02ml和氯仿60ml,加熱回流60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
(3)照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
2.該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品50克,加水50ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
(3) 照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。,3.該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別(1)對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材2g,加水100ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸2ml和氯仿60ml,加熱回流60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
(2)供試品溶液的制備取本品30g,加水100ml、鹽酸2ml和氯仿60ml,加熱回流60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
(3)照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液5μl,對照藥材溶液0.5μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
實施例4取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88)為流動相;檢測波長為230nm。流速1.0ml/min,柱溫28℃,理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含30μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材2g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿40ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品20g,加水30ml、鹽酸2ml和氯仿40ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品40克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品6g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例5取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相;檢測波長為230nm。流速1.0ml/min,柱溫29℃,理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例6取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相;檢測波長為230nm。流速1.0ml/min,柱溫27℃,理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)式驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例7取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)為流動相;檢測波長為230nm。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
實施例8取中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g,上述原料加水煎煮三次,第一次約六倍量水,第二、三次五倍量水,第一、二次各2小時,第三次1小時,合并煎液,濾過,濾液靜置24小時,取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28~1.32(85-90℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜700g,混勻,加熱至沸,濾過,即得。每袋膏重為10g,每瓶膏重為200g。
1用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)為流動相;檢測波長為230nm。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2500。
b對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
c.供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾,即得d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定芍藥苷的含量;e.每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
2、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品20g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各5ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的暗斑。
3、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作為對照品溶液。
b.供試品溶液的制備取本品40克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml 30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%的硫酸乙醇溶液溶液于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。
4、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品20g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液10μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的二個黃色斑點。
用上述方法作為該藥物質量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標。
權利要求
1.一種由中藥材黨參80g、白術(炒)80g、茯苓80g、甘草(蜜炙)40g、當歸120g、川芎40g、白芍(酒炒)80g、熟地120g、黃芪(蜜炙)80g、肉桂20g制成的十全大補膏的質量控制方法,其特征在于該方法包括(1)用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量;(2)用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參;(3)用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黃芪;(4)用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材甘草。
2.根據權利要求1的十全大補膏的質量控制方法,其特征在于該方法包括下列步驟(1)用高效液相色譜法測定芍藥苷的含量a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,乙腈-0.1%磷酸溶液(10-30∶90-70)為流動相,檢測波長為230±2nm,流速0.5-1.0ml/min,柱溫27-30℃;b.對照品芍藥苷溶液的制備取芍藥苷對照品適量,加不同溶度的甲醇、乙醇或水中的任一種制成每1ml含10-60μg的溶液;c.供試品溶液的制備取本品0.5-4g,精密加入不同溶度的甲醇、乙醇或水中的任一種10-100ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用不同溶度的甲醇、乙醇或水補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾;d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5-20μl,注入液相色譜儀;(2)用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黨參a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材0.25-2g,加水25-100ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解;b.供試品溶液的制備取本品5-60g,加水10-100ml、鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解;c.照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5-20ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑,展開,取出,晾干,將薄層板置紫外光燈下檢視;(2)、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材黃芪a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液;b.供試品溶液的制備取本品10-100克,加水10-50ml,用水飽和的正丁醇萃取,合并萃取液,以NaHCO3洗滌,再用水洗滌,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用水溶解,水溶液加至大孔樹脂柱內,用水洗脫,棄去水液,再用乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用乙醇洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇0.5-1ml溶解;c.照薄層色譜法試驗,吸取對照品5-20ul,供試品溶液10-30ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑,展開,取出,晾干,噴以硫酸乙醇溶液;(3)、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材甘草a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5-2g,加水25-100ml煎煮,濾過,濾液加鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解;b.供試品溶液的制備取本品6-30g,加水10-100ml、鹽酸0.5-2ml和氯仿10-60ml,加熱回流15-60分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯0.5-1ml使溶解;d.照薄層色譜法試驗,吸取供試品溶液5-40μl,對照藥材溶液0.5-4μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑,展開,取出,晾干,噴以硫酸乙醇溶液;
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于(1)、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)為流動相;檢測波長為230nm。b.對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加50%乙醇制成每1ml含40μg的溶液;c.供試品溶液的制備取本品2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm濾膜過濾;d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀;(2)、該藥物中藥材黨參用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材1g,加水50ml煎煮30分鐘,棉花濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解;b.供試品溶液的制備取本品10g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解;另按本處方,取除去黨參外的其他各藥材,同法制成缺黨參的陰性對照溶液。c.照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶3∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。將薄層板置紫外光燈(254nm)下檢視;(3)、該藥物中藥材黃芪用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液;b.供試品溶液的制備取本品30克,加水20ml,用水飽和的正丁醇萃取4次(40、30、30、20ml),合并萃取液,以0.5mol/LNaHCO3洗滌3次(10、10、5ml),再用水10ml洗滌1次,棄去洗液,正丁醇溶液置水浴上蒸干,殘渣用5ml水溶解,水溶液加至D101型大孔樹脂柱(1cm×10cm)內,用50ml水洗脫,棄去水液,再用100ml30%乙醇洗脫,棄去洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解;c.照薄層色譜法試驗,吸取對照品5ul,供試品溶液15ul,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干;噴以10%的硫酸乙醇溶液于100℃烘約10分鐘;(4)、該藥物中藥材甘草用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取甘草對照藥材0.5g,加水50ml煎煮30分鐘,濾過,濾液加鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作為對照藥材溶液。b.供試品溶液的制備取本品8g,加水15ml、鹽酸1ml和氯仿20ml,加熱回流30分鐘,放冷,分取氯仿液,蒸干,殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解;e.照薄層色譜法試驗,吸取供試品溶液20μl,對照藥材溶液2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干;噴以20%硫酸乙醇溶液,于100℃烘約10分鐘。
4.根據權利要求2-3任一所述的方法,其特征在于每克含白芍以芍藥苷計,不得低于0.20mg。
全文摘要
本發(fā)明公開了《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第三冊(WS
文檔編號A61J3/00GK1600365SQ200410060978
公開日2005年3月30日 申請日期2004年10月12日 優(yōu)先權日2004年10月12日
發(fā)明者盧建中, 王偉蘭, 李詒光, 徐昌瑞 申請人:江西江中藥業(yè)股份有限公司