專利名稱：發(fā)酵大豆萃取液的利用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵大豆(學(xué)名Glycine max)萃取液(fermented soybeanextract，簡稱FSE)的利用方法，尤其是指一種可增加動物及人類自然殺手細(xì)胞活性，且可對γ-氨基丁酸(GABA)受體及谷氨酸(glutamate)受體結(jié)合配體的能力具有抑制性的萃取液的制造方法。
背景技術(shù)：
一般而言，單一氨基酸GABA及谷氨酸，分別為主要的抑制性及興奮性神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)，在人腦中，大部分腦中的神經(jīng)細(xì)胞，具有結(jié)合胞外GABA及谷氨酸的細(xì)胞膜受體；具有高專一性的蛋白質(zhì)，能維持這些氨基酸于細(xì)胞外的低濃度，且這些蛋白質(zhì)也能移除由突觸所釋放的GABA及谷氨酸，因此能快速的終止GABA及谷氨酸于突觸的活性。
所述GABA可活化三種不同類型的受體，其分別為GABAA、GABAB和GABAC受體，其中，GABAA受體為一種配基門控的氯離子通道，這些受體受到GABA、蠅蕈醇(muscimol)及四氫吡啶甲酸(isoguvacine)的活化，并受到biscuculline、gabazine及(+)-β-白毛莨堿((+)-β-hydrastine)的抑制；該GABAA受體具有高度重要性，因它是調(diào)節(jié)腦部刺激反應(yīng)的中樞角色，且許多重要的藥物如苯二氮卓類(benzodiazepines)、巴比妥類(barbiturates)、酒精、神經(jīng)性類固醇(neurosteroids)及一些抗痙攣劑(anticonvulsants)及一般的麻醉劑都會與這些受體結(jié)合。
所述谷氨酸可與兩種型態(tài)的專一性受體結(jié)合，造成相關(guān)離子通道(離子性受體)打開，使陽離子Na+及Ca2+通過而進(jìn)入細(xì)胞。至目前為止，有三種離子性受體被確認(rèn)，分別為N-methyl-D-aspartate(NMDA)、kainate及α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole roprionate(AMPA)，谷氨酸傳遞作用的改變與許多CNS病理癥狀有關(guān)，包含中風(fēng)、大腦漸進(jìn)式退化、慢性疼痛、憂郁癥、藥物依賴性、癲癇、帕金森氏癥及精神分裂癥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供一種發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，藉由萃取液對GABA受體及谷氨酸受體產(chǎn)生抑制性，延長巴比妥所引起的睡眠時間，以及降低癌癥病人于化療期所產(chǎn)生的疲勞感。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所述的利用方法，包含乳酸菌及酵母菌共同培養(yǎng)和發(fā)酵而成，將該乳酸菌及酵母菌馴化培養(yǎng)以及經(jīng)由濃縮制成濃縮液等步驟。
具體而言，本發(fā)明提供的一種發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，包含以下步驟a、混合天然營養(yǎng)物及培養(yǎng)液，以產(chǎn)生特殊的培養(yǎng)基；b、將前述的培養(yǎng)基于控制環(huán)境下，分別恒溫培養(yǎng)不同種類的乳酸菌及酵母菌；c、將乳酸菌及酵母菌所產(chǎn)生的培養(yǎng)菌液分別移植至大豆培養(yǎng)液中，于控制的環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；d、藉由分組將乳酸菌及酵母菌分別接入有機培養(yǎng)液中，分組馴化培養(yǎng)；e、將步驟中所有分組培養(yǎng)液加入所制備的大豆培養(yǎng)液中，開始共生發(fā)酵培養(yǎng)；f、給予個人一定數(shù)量的上述萃取液，以增加自然殺手細(xì)胞活性，并對γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(glutamate)受體結(jié)合配體的能力具有抑制性，進(jìn)而延長巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠時間，且可降低癌癥病人在化療期間所產(chǎn)生的疲勞感。
其中，最少有一種乳酸菌及酵母菌移送至上述培養(yǎng)基。
根據(jù)本發(fā)明所述的利用方法，其工藝中所使用的微生物包含Lactobacillusparacasei，Lactobacillus burglarious，Saccharomyces cerivisiae等。
根據(jù)本發(fā)明所述的利用方法，所產(chǎn)生的萃取液，可制成膠囊、片劑或粉末。
本發(fā)明中所制成的萃取液產(chǎn)品可抑制神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸受體及NMDA及kainate興奮劑的結(jié)合、延長巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠時間，以及降低癌癥病人于化療期間所產(chǎn)生的疲勞感。


圖1為本發(fā)明對ICR老鼠活動力的影響圖表。
圖2為本發(fā)明對巴比妥誘導(dǎo)的睡眠時間的影響圖表。
具體實施例方式
本發(fā)明的利用方法，主要包含以下的步驟1、混合天然營養(yǎng)物及培養(yǎng)液，產(chǎn)生特殊的培養(yǎng)基；2、將前述步驟1的培養(yǎng)基于控制環(huán)境下，分別恒溫培養(yǎng)不同種類的乳酸菌及酵母菌；3、去除大豆中的脂肪，加入蒸餾水經(jīng)由約兩小時的煮沸以產(chǎn)生液體，將液體過濾后成為有機的大豆培養(yǎng)液；4、將乳酸菌及酵母菌與步驟2所產(chǎn)生的培養(yǎng)菌液，分別移植至步驟3的大豆培養(yǎng)液中，于控制的環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；5、藉由分組將乳酸菌及酵母菌分別接入步驟3的有機培養(yǎng)液中，分組馴化培養(yǎng)；6、將步驟5中所有分組培養(yǎng)液加入步驟3所制備的大豆培養(yǎng)液中，開始共生發(fā)酵培養(yǎng)；7、將步驟6的微生物培養(yǎng)液加熱，以高溫終止微生物的生長，移去培養(yǎng)液中的微生物，并濃縮過濾液至原體積的十五分之一(去除約93％-96％的水分)；8、將步驟7中所制備的濃縮液置于室溫至少兩個月，以分離濃縮液，收集上層液體至容器中，并予以加熱獲得萃取液產(chǎn)品。
在上述工藝中，同時完成不同的化學(xué)、制造及控制組的分析，包括genistein及daidzein的含量、HPLC圖譜、pH值及物理性質(zhì)(氣味、外表、顏色、透明度、味覺及沉淀物)。
GABA受體及谷氨酸受體結(jié)合力的體外試驗進(jìn)行放射線配體-結(jié)合分析，藉由測量[3H]Muscimol結(jié)合GABAA受體的能力，研究本發(fā)明對于GABA受體的影響。首先，將雄性Wistar老鼠的整個小腦膜(重量為175±25克)，根據(jù)實驗步驟，置于Tris-HCl，pH7.4的緩沖液中，然后將10mg的腦膜及1nM[3H]Muscimol于4℃中培養(yǎng)10min，并計算在100nMmuscimol環(huán)境下的非專一性吸附量；將腦膜印于過濾膜上，并以緩沖液清洗3次，計數(shù)過濾膜上的放射線量，以決定[3H]Muscimol的專一性結(jié)合力。
在前述的放射線標(biāo)定-結(jié)合實驗中，以不同稀釋濃度的本發(fā)明萃取液進(jìn)行實驗，測得本發(fā)明萃取液的IC50為0.00075％(見表1)，顯示其在GABA受體興奮性配體結(jié)合區(qū)上，具有強烈的結(jié)合活性。
表1本發(fā)明對GABAA受體結(jié)合的影響列表

估算FSE對GABAA的IC50為0.00075％的稀釋濃度另，藉由測量CGP-39653(一種選擇性的抑制性配體)結(jié)合NMDA受體的能力，研究本發(fā)明對于谷氨酸受體的影響，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實驗步驟，分離雄性老鼠腦皮層的細(xì)胞膜，將20mg的腦膜及2.0nM[3H]CGP-39653于4℃中培養(yǎng)20min；并計算在1000mM L-glutamate環(huán)境下的非專一性吸附量；將腦膜印于過濾膜上，并用緩沖液清洗3次，計數(shù)過濾膜上的放射線量，以決定[3H]CGP-39653的專一性結(jié)合力，以類似的實驗步驟，同樣利用5.0nM[3H]kainite作為配體，測量與glutamate及kainite受體的結(jié)合能力，以不同稀釋濃度的本發(fā)明萃取液進(jìn)行實驗，對于NMDA及kainite兩個受體，本發(fā)明的IC50分別為0.069％及0.096％(如表2所示)。
表2本發(fā)明對谷氨酸受體結(jié)合的影響列表

估算FSE對NMDA和kainate受體興奮劑的IC50分別為0.069％和0.096％的稀釋濃度又，利用ICR老鼠研究本發(fā)明的攝取對于動物活動力以及由巴比妥引起睡眠行為的影響，老鼠口服劑量相當(dāng)于人類攝取13mL的量，顯示本發(fā)明大幅降低了老鼠的活動力，并延長了巴比妥引起的睡眠時間(如圖1、圖2所示)。
再者，本發(fā)明于人體的臨床實驗，采用測量10-cm視覺類比評分表(visualanalog scale)，顯示在服用本發(fā)明的萃取液經(jīng)14至28天后，癌癥病人的疲勞感明顯的降低，且食欲明顯的變好(如表3所示)。
表3本發(fā)明對癌癥患者于化療期間所引起的食欲不振及疲勞的影響列表

10-cm視覺類比評分分?jǐn)?shù)越高表示越疲勞，食欲越差經(jīng)由重復(fù)測量分析所得到的p值*表示與未服用組比較顯著差異在0.05的范圍**表示與未服用組比較顯著差異在0.01的范圍
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，包含以下的步驟a、混合天然營養(yǎng)物及培養(yǎng)液，以產(chǎn)生特殊的培養(yǎng)基；b、將前述的培養(yǎng)基于控制環(huán)境下，分別恒溫培養(yǎng)不同種類的乳酸菌及酵母菌；c、將乳酸菌及酵母菌所產(chǎn)生的培養(yǎng)菌液分別移植至大豆培養(yǎng)液中，于控制的環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；d、藉由分組將乳酸菌及酵母菌分別接入有機培養(yǎng)液中，分組馴化培養(yǎng)；e、將步驟中所有分組培養(yǎng)液加入所制備的大豆培養(yǎng)液中，開始共生發(fā)酵培養(yǎng)；f、給予個人一定數(shù)量的上述萃取液，以增加自然殺手細(xì)胞活性，并對γ-氨基丁酸及谷氨酸受體結(jié)合配體的能力具有抑制性，進(jìn)而延長巴比妥所引起的睡眠時間，且可降低癌癥病人在化療期間所產(chǎn)生的疲勞感。
2.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，其中最少有一種乳酸菌及酵母菌移送至上述培養(yǎng)基。
3.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，其中該萃取液可增加γ-氨基丁酸及谷氨酸受體結(jié)合配體的能力具有抑制性。
4.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，其中該萃取液可延長睡眠時間。
5.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，其中該萃取液可降低癌癥病人在化療期間所產(chǎn)生的疲勞感。
6.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵大豆萃取液的利用方法，其中該萃取液可制成膠囊、片劑或粉末。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵大豆(學(xué)名Glycine max)萃取液(fermented soybean extract，簡稱FSE)的利用方法，主要是由乳酸菌及酵母菌共同培養(yǎng)及發(fā)酵而成，其中所述乳酸菌、酵母菌經(jīng)由馴化、發(fā)酵培養(yǎng)以及經(jīng)由濃縮制成濃縮液等步驟，所制成的萃取液產(chǎn)品具有抑制神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸受體及NMDA及kainate興奮劑的結(jié)合、延長巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠時間，以及降低癌癥病人于化療期間所產(chǎn)生的疲勞感。
文檔編號A61P25/00GK1720954SQ200410058419
公開日2006年1月18日 申請日期2004年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月15日
發(fā)明者路孔明 申請人:中天生物科技股份有限公司