專利名稱：用抗cd40l化合物治療狼瘡性腎炎的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對患者施用抗CD40L化合物，以治療免疫綜合性腎小球腎炎，更具體地說是狼瘡性腎炎。
本發(fā)明涉及對免疫綜合性腎小球腎炎進行治療的方法和組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及可與B細胞和多種其它細胞之CD40表面分子的配體結(jié)合的化合物單獨或與其它藥劑結(jié)合用于治療腎炎相關(guān)的抗體介導性疾病(如狼瘡或藥物誘導的血清病)、或降低這類疾病的進程、嚴重性、癥狀或影響。根據(jù)一個實施方案，本發(fā)明應用了單克隆抗體5c8。
背景技術(shù)：
免疫綜合性疾病是由免疫復合物在某些組織、包括腎小球和血管壁內(nèi)的沉積所介導的。這些復合物是抗原與抗體的聚集物。當機體產(chǎn)生了針對其自身組織成分的抗體時，抗原可以是自身抗原，或者也可以是外源抗原，如感染性因子或藥物。在每一種情形下，免疫復合物在血管內(nèi)的沉積物都會導致皮疹、心包炎和血管炎。腎小球內(nèi)的免疫復合物沉積物會影響腎臟的過濾能力，極端情形下會導致腎衰竭和死亡。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種危及生命的自身免疫疾病，其特征在于會產(chǎn)生針對各種組織(并且通常是DNA)的自身抗體。在美國，有近140,000人患有SLE，在歐洲有105,000人，其中主要是育齡婦女。
SLE的特征在于影響結(jié)締組織(包括皮膚、關(guān)節(jié)和器官系統(tǒng))的炎癥。受影響的器官常常包括腎臟、心臟、肺和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。SLE的臨床表現(xiàn)包括一般性病癥、疼痛、出疹、可覺察的功能障礙、血栓形成、貧血、胸膜炎、胃腸功能障礙以及懷孕婦女的流產(chǎn)。大多數(shù)患者中，狼瘡相關(guān)性免疫球蛋白和免疫復合物沉積在腎小球內(nèi)，導致腎功能降低。在占狼瘡患者總?cè)藬?shù)70％的中度至重度SLE患者中，一半發(fā)展成臨床性腎炎，這種疾病的特征在于尿液中存在蛋白質(zhì)。雖然其中一些患者可以用免疫抑制性和/或細胞毒性藥物成功地進行治療，但這些藥物的臨床效果可能比較短暫，這種藥物治療可能會導致不希望的副作用，并且目前可用的這些藥物治療對許多患者沒有什么作用。這些患者中有明顯多人會發(fā)展成腎衰竭，為了生存，必須進行重復多次透析，或進行腎移植。而移植物本身壽命可能也不會太長，因為新腎臟也易受到SLE患者血液中始終存在的自身抗體的損傷。SLE患者開始透析的居中年齡是35歲。最終許多SLE患者直接或間接死于腎炎。
治療SLE所用方法可分成多類水楊酸鹽類和非類固醇性抗炎劑，類固醇性抗炎劑(系統(tǒng)性皮質(zhì)類固醇)，免疫抑制劑或細胞毒性劑、抗瘧藥、透析、移植、淋巴輻射或血漿提取法。其中大部分是作為癥狀性藥劑，旨在減輕炎癥，目標是疾病的癥狀，在用藥時和整個期間產(chǎn)生效果。癥狀性藥劑的實例有水楊酸、糖皮質(zhì)類固醇和非類固醇性抗炎劑，如消炎痛。其它治療方法作用于該疾病的病理發(fā)生，以抑制自身免疫反應，只有在用藥開始幾周后才產(chǎn)生效果，然后在治療停止后仍能維持一段時間的療效。這種藥劑包括免疫抑制劑，如化療劑硫唑嘌呤和環(huán)磷酰胺，以及可的松類，如強的松。
目前用來治療SLE的常規(guī)免疫抑制劑常常會產(chǎn)生副作用，如使患者對感染更為敏感，這樣使得這些藥劑無法長期使用。現(xiàn)已開始開發(fā)使用靶向該疾病病理發(fā)生某些特定步驟的選擇性免疫抑制劑，試圖降低SLE患者體內(nèi)免疫球蛋白濃度，或使其正?；?；預期這對疾病的腎臟指數(shù)有有益效果。產(chǎn)生抗體的必要反應之一是B細胞上的CD40與活化T細胞上的CD40配體(CD40L)之間的相互作用，這是B細胞生長和隨后產(chǎn)生抗體所需的一個步驟。CD40L在本領(lǐng)域也稱為“gp39”和“T細胞-B細胞活化分子(T-BAM)”。本文中將CD40L、gp39和T-BAM視作同一種分子。例如，PCT公開WO93/09812(1993年5月27)公開了一種命名為5c8的鼠單克隆抗體，它特異結(jié)合活化T細胞表面的T-BAM，從而抑制了T細胞對B細胞的激活。
Durie等(1993)261，科學，1328-1330公開的一項小鼠模型體系研究考察了施用抗CD40L單克隆抗體MR1對慢性免疫系統(tǒng)紊亂、膠原蛋白誘導的關(guān)節(jié)炎的預防作用。這種小鼠模型體系包括用雞II型膠原蛋白(CII)免疫小鼠從而誘發(fā)關(guān)節(jié)炎、再三周后用額外的CII進行激發(fā)。只在此激發(fā)后觀察到疾病癥狀。Durie等人在初次免疫小鼠一周后用MR1處理小鼠，此后每4天給以MR1繼續(xù)處理。Durie等報導，MR1療法能夠抑制所有處理小鼠的臨床疾病(關(guān)節(jié)炎)，并得出結(jié)論對CD40L進行阻斷，由于影響了自身免疫疾病的發(fā)作，因而具有很好的治療效果。
在NZB雜交幼鼠中，兩個研究小組用抗CD40L單克隆抗體(mAb)阻斷了CD40-CD40L相互作用，并檢查了對小鼠中腎炎后續(xù)發(fā)展的影響。(Mohan等，免疫學雜志，1541470-1480，1995；Early等，免疫學雜志，1573159-3164，1996)。新西蘭黑(NZB)小鼠與新西蘭白(NZW)小鼠或正常SWR小鼠雜交的雌性后代[分別稱作(NZB×NZW)F1和(SWR×NZB)F1]出現(xiàn)的癥狀在許多方面與人類中的SLE比較相似(Steinberg等，國際醫(yī)學年鑒(Ann.Int.Med.)115548，1991；Wofsy和Seaman，實驗醫(yī)學雜志，161378，1995)。隨著長大，每一雜交的雌性F1小鼠出現(xiàn)了異常血清自身抗體和腎小球腎炎。
Mohan等人(出處同前)的研究中，用250mg MR1處理雌性(SWR×NZB)F1幼鼠，給藥三次，給藥方式為每隔一天對三月齡的小鼠給藥，共三天。在動物患腎炎(由動物連續(xù)兩周的蛋白尿水平至少為300μg/dl可確定)后處死動物。未處理動物在6月齡時開始出現(xiàn)腎炎，其中60％在10月齡之前患腎炎。第一只MR1處理動物只在9月齡時開始出現(xiàn)腎炎，其中僅40％的處理動物在研究結(jié)束時的12月齡時顯示患有腎炎。這種療法也與抗單鏈DNA(抗ssDNA)和抗雙鏈DNA(抗dsDNA)自身抗體血清水平的長期降低有關(guān)未治療的或MR1治療4個月后的7月齡動物中，抗ssDNA中值分別為4.5U/ml或0.6U/ml，抗dsDNA中值分別為2.2U/ml或0.4U/ml。這種療法對總IgG血清水平?jīng)]有影響。
在Early等(出處同前)的研究中，對雌性(NZB×NZW)F1小鼠用倉鼠抗muCD40L mAb MR1進行處理(Noelle等，美國國家科學院學報，896550，1992)，給藥方式為在4-10月齡之間，每周兩次以基本劑量200mg MR1腹膜內(nèi)給藥。處理開始于小鼠發(fā)展成重度腎炎的年齡之前，重度腎炎可由至少500mg/dl的顯著量蛋白尿證實。(10只發(fā)展嚴重蛋白尿癥的對照小鼠中，最早發(fā)展蛋白尿癥的小鼠是在4.5月齡時(Early等，出處同前，第3161頁))。
MR1療法能顯著抑制處理動物內(nèi)的腎炎發(fā)展，并延長它們的壽命一半未處理F1小鼠在6月齡之前發(fā)展腎炎，到10月齡時全部未處理F1小鼠都死亡，而MR1處理動物中，當MR1處理結(jié)束時，不到一半的處理動物具有腎炎，僅35％在10月齡之前死亡。MR1療法也能使得抗DNA自身抗體滴度在治療開始之后穩(wěn)定數(shù)月，而未處理對照在同一時期的抗ssDNA抗體滴度升高，水平要高得多。
雖然這些研究的結(jié)果頗有知識性，但對于患有自發(fā)SLE的患者進行類似治療，它們的相關(guān)性很有限，原因如下。首先，上述研究中，小鼠在蛋白尿癥明顯之前用抗CD40L mAb進行處理。因此，雖然研究結(jié)果暗示在癥狀性疾病出現(xiàn)之前開始治療時，抗CD40L療法有可能抑制腎炎的發(fā)展，但結(jié)果并未反映出在患者已發(fā)展了癥狀性腎炎時的臨床相關(guān)環(huán)境下會出現(xiàn)什么情況。此外，Early等所用的模型-(NZB×NZW)F1小鼠的腎炎病理性發(fā)生機理與人SLE患者的發(fā)生機理之間的相似性可能不足以預知治療性干預的結(jié)果。例如，(NZB×NZW)F1小鼠具有比較高的逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白血液水平，人們認為這種蛋白質(zhì)與血清自身抗體一起引起了動物的腎炎。由于絕大多數(shù)人SLE患者在其血液中都沒有逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白，而抗CD40L化合物對逆轉(zhuǎn)錄病毒水平的影響也未可知，因此，從(NZB×NZW)F1小鼠內(nèi)的治療性干預結(jié)果并不能預知抗CD40L化合物對自身抗體相關(guān)性人狼瘡性腎炎的效果。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供了一種通過給患者施用治療有效量的抗CD40L化合物，對免疫綜合性疾病或癥狀性SLE患者的腎炎進程進行治療、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或抑制的方法?！鞍Y狀性SLE”是指患者具備下述情況之一或多種；蛋白尿水平超過150mg/L；尿蛋白總水平超過150mg/天；或者抗ds DNA抗體的血清水平比正常人水平要高。蛋白尿水平超過300mg/L常常指示腎炎比較嚴重。
抗CD40L化合物可以是能與位于CD40L表達細胞(例如活化T細胞)表面的CD40L結(jié)合的任何化合物。在一個實施方案中，該化合物是一種抗CD40L抗體，優(yōu)選是一種單克隆抗體。所述單克隆抗體可以是5c8(ATCC保藏號HB10916)。
可以將抗CD40L化合物制成治療用組合物，其中含有治療有效量的抗CD40L化合物和一種藥學可接受的載體。這種治療用組合物還可以包含另一種治療上有效的化合物。
本發(fā)明還提供了改善免疫綜合性疾病患者腎功能的一種方法，包括給患者施用治療有效量的抗CD40L化合物，然后測量患者尿液中的蛋白質(zhì)水平，這一水平比在施用抗CD40L化合物之前測得的尿蛋白水平要低。
本發(fā)明還提供了一種包含治療組合物的醫(yī)療產(chǎn)品；該組合物中包括治療有效量的抗CD40L化合物和一種藥學可接受載體，它們無菌包裝在容器中，并提供了用于治療狼瘡性腎炎或其它免疫綜合性疾病的說明。在這種組合物中，該抗CD40L化合物可以是單克隆抗體，如5c8。
另一方面，本發(fā)明提供了抑制免疫綜合性疾病患者體內(nèi)腎臟同種移植物的腎炎發(fā)展或進程的方法。在該方法中給患者施用治療有效量的抗CD40L化合物。對于任何免疫綜合性疾病(包括SLE和血清病)患者，該方法可能有用?？梢栽谝浦睬?、移植時或移植后，在將同種移植物移植到患者體內(nèi)后周期性地或按照上述給藥方案中的多種方式，將抗CD40L化合物施用于患者。
附圖簡述

圖1是實驗II中對對照和實驗組(SWR×NZB)F1小鼠血液和尿液測量的幾種特性隨時間的變化圖。在小鼠4月齡時，以500μg/動物的劑量腹膜內(nèi)施用抗CD40L mAb MR1一次，7月齡時再給藥一次，9月齡時又給藥一次，然后以一個月的間隔給藥。圖中上面5行(標有AR-BN)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)，下面6行(標有CL-CR)中的每一行包含得自單只實驗動物的數(shù)據(jù)。于1996年2月對4月齡動物開始這項實驗。雙豎線分隔了4組數(shù)據(jù)，每一數(shù)據(jù)組給出了在列于各數(shù)據(jù)之上的日期采集的尿樣和血樣中測得的數(shù)值。蛋白尿癥(PU)水平定為微量到4級。1級對應30mg尿白蛋白/dl白蛋白，2級對應100mg/dl，3級對應300mg/dl，4級對應2000mg/dl以上?？筂R1抗體水平(標有“抗MR1”欄給出)、抗ssDNA抗體水平以及抗dsDNA抗體水平以μg/ml血液表示。合適的情況下，以幾個樣品的平均值和標準誤差，采用平均值(標準誤差)形式表示數(shù)值。破折號表示通常由于動物已經(jīng)死亡而未采集樣品。ND代表“未作”。
圖2是實驗II動物隨時間的蛋白尿癥測量值。第一欄給出動物號(同圖1)。每欄上標樣品采集日期。NC代表“未采集”。
圖3是實驗V中對照和未處理小鼠(4.5月齡開始處理)的血液和尿特性與時間的關(guān)系圖。于小鼠4.5月齡時，以500μg/動物的劑量腹膜內(nèi)施用MR1于處理組動物一次，然后每月腹膜內(nèi)注射500μg一次。表中上面7行(標有AR-BLR)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)，下面7行(標有CR-CLR)中的每一行包含得自單只處理動物的數(shù)據(jù)。于1996年5月對4.5月齡動物開始這項實驗。圖的其它描述與圖1相同。
圖4是實驗V動物的蛋白尿測量值的時間變化表。動物號與圖3所述相同。圖的其它描述與圖2相同。
圖5是實驗VII中對照和未處理小鼠(5.5月齡時開始處理)的血液和尿特性與時間的關(guān)系圖。以500μg/動物的劑量，每周對處理動物腹膜內(nèi)施用MR1一次，持續(xù)6周，隨后每月腹膜內(nèi)注射500μg。圖中上面3行(標有AN-BL)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)(如圖6中提到的那樣，一些對照動物在采集圖5數(shù)據(jù)前即已死亡)，下面7行(標有CR-DN)中的每一行包含得自單只處理動物的數(shù)據(jù)。于1996年6月對5.5月齡動物開始這項實驗。圖的其它描述與圖1相同。
圖6是實驗VII動物的蛋白尿測量值的時間變化圖。圖中上面7行(標有AR-BN)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)，下面7行(標有CR-DN)中的每一行包含得自單只處理動物的數(shù)據(jù)。圖的其它描述與圖2相同。
圖7是實驗X中對照和未處理小鼠(5.5月齡時開始處理)的血液和尿特性與時間的關(guān)系圖。以500μg/動物的劑量，每周對處理動物腹膜內(nèi)施用MR1一次，持續(xù)4周，隨后每月腹膜內(nèi)注射200μg。圖中上面8行(標有AR-BLR)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)，下面8行(標有CR-DLR)中的每一行包含得自單只處理動物的數(shù)據(jù)。于1996年10月對5.5月齡動物開始這項實驗。圖的其它描述與圖1相同。
圖8是實驗X中動物的蛋白尿測量值的時間變化圖。第一欄給出與圖7相同的動物號。其它描述與圖2相同。
圖9是實驗VI中對照和未處理小鼠(7月齡時開始處理)的血液和尿特性與時間的關(guān)系圖。以500μg/動物的劑量，每周對處理動物腹膜內(nèi)施用MR1一次，持續(xù)6周，隨后每月腹膜內(nèi)注射500μg。圖中下面4行(標有DN-EN)中的每一行包含得自每只處理動物的數(shù)據(jù)。采集該表中第一個數(shù)據(jù)時，全部對照動物即已死亡(如圖10所示)。于1996年6月對7月齡動物開始這項實驗。圖的其它描述與圖1相同。
圖10是實驗VI中動物的蛋白尿測量值的時間變化圖。圖中上面4行(標有AR-CN)中的每一行包含得自單只對照動物的數(shù)據(jù)，下面4行(標有DN-EN)中的每一行包含得自單只處理動物的數(shù)據(jù)。圖的其它描述與圖2相同。
發(fā)明詳述本發(fā)明方法包括對免疫綜合性疾病患者或者已發(fā)展的SLE患者進行治療、預防、逆轉(zhuǎn)或穩(wěn)定腎炎。對這種患者用能阻斷位于T細胞上的CD40L與B細胞上的CD40間相互作用的化合物進行處理，人們認為這樣可以抑制病原性抗體的產(chǎn)生，由此降低與免疫復合物相關(guān)性發(fā)展和惡化腎炎相關(guān)的病原性自身抗體水平。
化合物可用于本發(fā)明方法的治療用化合物包括能阻斷位于B細胞上的CD40與活化T細胞表面上表達的CD40L間相互作用的任何化合物。具體涉及的抗CD40L化合物包括多克隆抗體和單克隆抗體(mAb)，以及抗體衍生物，例如嵌合分子、人源化分子、效應子作用弱化了的分子、雙特異性分子和抗體的偶聯(lián)物。在一個優(yōu)選實施方案中，抗體是美國專利5474771中描述的5c8(該專利的說明書此處引作參考文獻)。已知抗5c8抗原的其它抗體包括抗體ImxM90、ImxM91、ImxM92(得自Immunex)，可從Ancell購買的抗CD40L mAb(克隆24-31，目錄號353-020，Bayport，MN)，可從Genzyme購買的抗CD40LmAb(Cambridge，MA，目錄號80-3703-01)。還可以買到的是PharMingen的一種抗CD40L mAb(San Diego，目錄號33580D)。已生產(chǎn)和鑒定了多種其它抗CD40L抗體(參見例如Bristol-Myers Squibb的WO96/23071，該專利申請的說明書此處引作參考文獻)。
本發(fā)明還包括其它類型的抗CD40L分子，例如完整Fab片段、F(ab’)2化合物、VH區(qū)、FV區(qū)、單鏈抗體(參見例如WO96/23071)、多肽、多肽的融合構(gòu)建體、CD40的融合體(例如此處引作參考文獻的Hollenbaugh等，免疫方法雜志1881-7，1995文中的CD40Ig)，以及一些小分子化合物(如小亞肽化合物或非肽化合物)，它們都能夠阻斷CD40-CD40L相互作用。專利申請PCT/US96/10664(1996年6月21日遞交申請，該專利申請的說明書此處引作參考文獻)提供了小分子的設(shè)計、篩選和優(yōu)化步驟。
還可以用標準重組DNA技術(shù)制備各種形式的抗體(Winter和Milstein，自然349293-99，1991)。例如，可以構(gòu)建嵌合抗體，在這種抗體中來自動物抗體的抗原結(jié)合區(qū)與人恒定區(qū)連接在一起(一種來源于非人哺乳動物的抗體，其中已通過重組DNA技術(shù)將重鏈的全部或部分鉸鏈區(qū)和恒定區(qū)和/或輕鏈的恒定區(qū)用人免疫球蛋白輕鏈或重鏈上的相應區(qū)取代)(參見例如Cabilly等的美國國家專利4816567；Morrison等，美國國家科學院學報816851-55，1984)。嵌合抗體用于人臨床治療中時能減少動物抗體引起的免疫原性應答。
另外，可以合成重組的人源化抗體。人源化抗體是最初來源于非人哺乳動物的抗體，其中已通過重組DNA技術(shù)用人免疫球蛋白輕或重鏈相應區(qū)域的氨基酸取代了抗原結(jié)合所不必需的部分或全部氨基酸(主要由人IgG序列組成的嵌合體，其中插入了特異抗原結(jié)合所需區(qū)域)(參見例如PCT專利申請WO94/04679)。用所需抗原免疫動物，分離相應的抗體，取出可變區(qū)序列中為特異抗原結(jié)合所需的部分。然后將動物源的抗原結(jié)合區(qū)克隆到已缺失了抗原結(jié)合區(qū)的人抗體基因中的適當位置。人源化抗體使在人抗體中使用異源(種間)序列達到最小程度，更不太可能引起處理對象的免疫反應。
也能用于本發(fā)明方法和組合物中的是靈長動物抗體或靈長動物源化抗體。
抗體片段和單價抗體也可用于本發(fā)明方法和組合物。單價抗體包含與另一重鏈FC(或莖)區(qū)結(jié)合的重鏈/輕鏈二聚體?！癋ab”區(qū)指的是與包含重鏈Y形部分的序列以及全部輕鏈大致相同或相似的部分，它們一起(以聚合體形式)顯示出抗體活性。Fab蛋白包括一條重鏈和一條輕鏈的聚合體(通常稱為Fab’)，以及相當于抗體Y的兩個分支片段的四聚體(通常稱為F(ab)2)，上述任何聚合體可以是共價或非共價聚合的只要能夠與特異抗原或抗原族選擇性反應即可。
另外，可以用標準重組DNA技術(shù)，通過改變抗原結(jié)合位點附近的氨基酸殘基來改變重組抗體與其抗原的結(jié)合親和力。根據(jù)分子模型進行誘變可以提高人源化抗體的抗原結(jié)合親和力(Queen等，美國國家科學院學報8610029-33，1989；PCT專利申請WO94/04679)。提高或降低抗體對CD40L的親和力都有可能是需要的，這取決于目標組織的類型或預想的具體治療方案。用噬菌體展示技術(shù)(參見例如此處引作參考文獻的Winter等，免疫學年度綜述12433-455，1994；及Schier等，分子生物學雜志25528-43，1996)可以實現(xiàn)這一點。例如，用一定量的對CD40L親和力有所減弱的抗體處理患者，以進行半預防性治療是有好處的。同樣，用對CD40L親和力有所增強的抗體進行短期治療也比較有利。
作用對象本發(fā)明方法的作用對象患有免疫綜合性疾病。這些疾病的特征在于血液中存在循環(huán)性免疫球蛋白和免疫復合物。一類免疫綜合性疾病稱作血清病，可由于對外源性抗原(如感染因子、藥物、外源抗血清或血液產(chǎn)品)的免疫反應所致。當患者產(chǎn)生“自身抗體”，即針對患者自身組織成分的抗體時，也可以發(fā)生免疫綜合性疾病。這種免疫綜合性自身免疫疾病的實例有SLE、類風濕性關(guān)節(jié)炎、古德帕斯徹綜合癥、韋格納肉芽腫病、顯微性多動脈炎、多動脈炎結(jié)節(jié)、丘-施綜合癥以及其它多種形式的血管炎。不歸為上述各類的免疫相關(guān)疾病相關(guān)性腎炎也可用本發(fā)明方法治療。屬于這類疾病的例子有亨諾赫-舍恩萊因紫癜、特發(fā)性(混合型)冷免疫球蛋白血癥[essential(mixed)cryoimmunoglobinemia]、ANCA相關(guān)性腎小球腎炎，以及單克隆丙球蛋白病，如多發(fā)性骨髓瘤、良性單克隆丙球蛋白病和瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥。
術(shù)語“患者”是指可以施用抗CD40L化合物的任何哺乳動物患者。可用本發(fā)明方法進行治療的具體患者包括人以及非人靈長動物、綿羊、馬、牛、山羊、豬、狗、貓、兔、豚鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠和小鼠，以及由這些宿主衍生或來源的器官、腫瘤和細胞。
給藥途徑本發(fā)明化合物可以采用醫(yī)學上可接受的任何方式給藥。包括通過腸胃外途徑注射，例如靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、表皮內(nèi)或其它方式，以及經(jīng)口、鼻、眼、直腸或局部給藥。本發(fā)明還特別包括緩釋給藥方式(通過諸如儲存注射途徑)。某些形式的抗CD40L化合物可能適合口服給藥，可以制成懸液或丸劑。
治療劑量和頻率針對特定免疫綜合性疾病施用于患者的任何特定化合物的劑量和給藥頻率要由患者的醫(yī)生根據(jù)多方面因素作出判斷。通常劑量由臨床前和臨床試驗(包括大量試驗，以確定不同劑量化合物對患者的有益和有害影響)確定。即使已有這種建議，醫(yī)生也常常應該基于多方面考慮(例如患者年齡、醫(yī)療狀況、體重、性別以及同時使用其它藥物)，改變不同患者的劑量。確定用于治療狼瘡性腎炎的每種抗CD40L化合物的最佳劑量對醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)人員而言是一項常規(guī)工作。
根據(jù)本發(fā)明可以用多種方案治療狼瘡或其它免疫綜合性疾病。通常，給藥頻率應由主治醫(yī)生確定，可以是單次給藥，或者每天重復給藥，或以2-6天、一周、兩周或一月的間隔給藥。
為了舉例說明抗CD40L化合物的給藥因素，以下提供針對抗CD40LmAb的給藥策略實例。其它類型抗CD40L化合物的劑量可以很容易地調(diào)節(jié)。通常，考慮每次劑量為約0.05-50mg/kg患者體重，最常用劑量在1-20mg/kg范圍。用于急性治療時，有效抗體劑量為約1mg/kg體重到約20mg/kg體重，每天給藥，持續(xù)約1-5天，優(yōu)選通過靜脈內(nèi)大量給藥方式。負荷保持療法的負荷期可以使用相同的劑量和給藥方案，而保持期經(jīng)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給予抗體約0.1mg/kg體重到約20mg/kg體重，療程間隔期為一周到3個月。長期治療還可以通過保持療法進行，這種方法中抗體經(jīng)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)途徑給藥，劑量為約0.1mg/kg體重到約20mg/kg體重，連續(xù)給藥之間的間隔期為約1周到約3個月。施用的抗體量也可以是約0.2mg/kg體重到約10mg/kg體重。另外，可以通過間歇性的靜脈內(nèi)大量給藥方案進行長期治療，其中給予的抗體量為約1.0mg/kg體重到約100mg/kg體重，連續(xù)治療間的間隔為1到6個月。除了間歇性的大量給藥方案外，其它方案中均可經(jīng)口、肺、鼻或皮下途徑給藥。
通常，治療開始時采用低劑量的抗體。例如，通過例如注射或輸液將起始量的抗體給予患者。對70kg的患者，起始劑量應含有每天約1.0mg到約30mg的抗體。對幾天內(nèi)重復給藥的方式，這樣的劑量可以連續(xù)每天給予，每2到6天給予，每周一次給予，每2到4周給予或每月一次給予，直到觀察到疾病癥狀受到所需抑制。但是，其它給藥方案也適用。當癥狀已減輕到希望的水平，則可以停止治療。但由于病癥復發(fā)，患者可能需要進行長期的間歇性治療。
根據(jù)本發(fā)明用于治療狼瘡的候選方案，可以通過連續(xù)給藥或與常規(guī)抗狼瘡治療劑或藥物(例如，水楊酸鹽、皮質(zhì)類固醇或免疫抑制劑)結(jié)合使用而增強抗體的效力。或者，可以將抗體與常規(guī)試劑偶聯(lián)。這樣可以有利地使給予的常規(guī)藥劑比在單一療法中的用量更低，例如低于常規(guī)劑量的大約50％。因此，可以避免產(chǎn)生這種藥劑帶來的許多副作用。
本發(fā)明治療狼瘡的結(jié)合療法包括與靶向B細胞的藥劑同時使用抗CD40L抗體，如抗CD19、抗CD28或抗CD20抗體(未偶聯(lián)物或放射標記物)、IL-14拮抗劑、LJP394(LaJolla Pharmaceuticals受體阻斷因子)、IR-1116(Takeda小分子)和抗Ig獨特型單克隆抗體?；蛘?，這種結(jié)合可以包括靶向T細胞/B細胞的藥劑，例如CTLA4Ig、IL-2拮抗劑、IL-4拮抗劑、IL6拮抗劑、受體拮抗劑、抗B7單克隆抗體、TNF、LFA1/ICAM拮抗劑、VLA4/VCAM拮抗劑、brequinar和IL-2毒素偶聯(lián)物(如DAB)、強的松、環(huán)磷酰胺及其它免疫抑制劑。這種結(jié)合還可以包括靶向T細胞的藥劑，例如CD4拮抗劑、CD2拮抗劑、IL-12。
對非狼瘡性免疫綜合性疾病患者進行治療的結(jié)合療法可以包括給予抗CD40L化合物以及通常用于所述具體免疫綜合性疾病的藥劑。
一旦患者狀況好轉(zhuǎn)，如果需要就將維持量的抗CD40L抗體單獨給予或與常規(guī)抗狼瘡藥物結(jié)合使用。隨后，可以根據(jù)癥狀情況將給藥量或給藥頻率或兩者減少到能夠維持改善狀況的水平。當癥狀緩和到預期水平，則可以停止治療。在另一些情況下，可以由患者的醫(yī)生確定采用非經(jīng)常性療法(例如間隔4周或以上)。但由于病癥復發(fā)，患者可能需要進行長期的間歇性治療。
劑型將本發(fā)明方法中所用的抗CD40L化合物以藥學有效量(即對免疫綜合性疾病、特別是SLE患者的腎臟能產(chǎn)生有益療效的量)給予患者。醫(yī)學上的有益效果應包括避免患者腎功能或健康狀況惡化或使其有所改善。腎功能和健康狀況可以采用一種或多種實驗室檢測法進行監(jiān)控，這些檢測法中測量的是血液或尿液中相關(guān)物質(zhì)的濃度，其它尿特征，或者將各種物質(zhì)從血液清除到尿液中的速率。醫(yī)生可以單獨或結(jié)合使用這些檢測法中測得的各參數(shù)來評估腎功能或損傷程度。這種參數(shù)的實例包括血液中尿素、肌酸酐或蛋白質(zhì)的濃度；尿液中蛋白質(zhì)或各種血細胞(如紅細胞或白細胞)的濃度；尿液比重；尿量；菊粉、肌酸酐、尿素或?qū)Π被R尿酸的清除速率；以及高血壓或浮腫的存在與否。醫(yī)學上的有益效果還應包括自身抗體，如狼瘡患者血清中抗dsDNA抗體的減少。
以藥學可接受的組合物形式將本發(fā)明抗CD40L化合物施用于患者，所述組合物中可包含藥學可接受的載體。在與抗CD40L化合物或其它活性組分有效活性一致的濃度下，這種載體相對無毒，對患者也無害，因此由載體引起的任何副作用不會破壞組合物中活性成分的有益效果。組合物中還可包含其它相容性物質(zhì)；本文中所稱的“相容性”是指藥物組合物中的諸組分能夠與抗CD40L化合物混合，并能互相混合，而不會存在能顯著降低藥物療效的相互作用。鼻腔噴霧制劑中包含活性化合物的純化水溶液和防腐劑及等滲劑。這種制劑優(yōu)選被調(diào)整到與鼻粘膜相容的pH和等滲狀態(tài)。適于口服的本發(fā)明劑型可以作為離散單元提供，如膠囊、cachet、藥片、藥丸或錠劑，每一單元內(nèi)含粉末或顆粒形式的預定量強效抗CD40L化合物；作為脂質(zhì)體提供；作為含水液體或不含水液體中的懸浮液提供，如糖漿、酏劑(elixir)、乳劑或頓服劑。
本發(fā)明組合物可以提供于容器中，從而適于在適當分裝和保存期間維持無菌狀態(tài)，保護活性成分的活性，并便于方便有效地將組合物施用于患者。對于CD40L化合物的可注射性劑型，組合物可以作為貯于適于利用針頭和注射器從中取出各成分的帶塞小瓶中的形式提供。這種小瓶可供一次性使用或多次使用。組合物也可作為預充滿的注射器的形式提供。在某些情形下，各組分可以作為液體制劑提供，而另一些情況下，它們可以干燥或凍干狀態(tài)提供，這樣就需要用標準或供給的稀釋劑重溶制劑，使之呈液態(tài)。若化合物作為靜脈內(nèi)給藥的液體形式提供，即可以將其貯于適合連接到靜脈內(nèi)給藥線或者catheter的無菌包或容器內(nèi)。在以片劑或丸劑形式口服抗CD40L化合物的情形下，化合物即可貯于帶可移動瓶蓋的瓶子中。容器上可以貼有信息單，如化合物類型，生產(chǎn)商或分裝者名稱，各指數(shù)，建議使用的劑量，恰當貯存的建議或者給藥建議。
用抗CD40L化合物治療非人對象中狼瘡性腎炎的用途在以下描述的幾項研究中，我們檢測了倉鼠抗muCD40L mAb MR1對雌性(SWR×NZB)F1小鼠腎炎發(fā)展進程的影響。給對照動物注射Syrian倉鼠多克隆Ig或Ha4/8(針對KLH的Armenian倉鼠mAb)。將蛋白尿水平定為微量到4級。1級對應30mg尿白蛋白/dl白蛋白，2級對應100mg/dl，3級對應300mg/dl，4級大于2000mg/dl。2級代表中度腎炎，2.5或更高值代表重度腎炎。
如果不處理，或者用非特異性的倉鼠免疫球蛋白處理對照動物，則小鼠正常在12月齡時死亡。盡管未處理動物開始時的蛋白尿水平各不相同，但多數(shù)在3月齡時達到中度蛋白尿水平；蛋白尿水平趨向于隨年齡增加。在大約5月齡時，所有對照動物中通常已具有可檢測量的抗dsDNA抗體，多數(shù)具有可檢測量的抗ssDNA抗體；這與正常小鼠(例如(SWR×NZB)F1小鼠的雌性SWR親代)中完全檢測不到這些抗體形成鮮明對比。
實驗II4月齡時開始處理(圖1和2)MR1處理在小鼠4個月大時開始。當小鼠長到4個月大時，用MR1以500μg/動物的劑量對處理動物腹膜內(nèi)給藥一次，7個月時給藥一次，9個月時再給藥一次，隨后每月注射一次。處理4個月后，5只對照動物中已死亡4只，而6只處理動物中有4只存活。這4只本來存活的處理小鼠有3只分別在12、13和13.5個月的死亡。一只仍活著，現(xiàn)在已15個月，對這個品系的小鼠來說這是極其長壽的。有趣的是，這只存活動物(小鼠II圖2中的DN)在8到13月齡有中度腎炎(蛋白尿2+)，而最近兩個月已降低到微量蛋白尿水平。這是這一品系小鼠中腎炎功能性逆轉(zhuǎn)的首次報道。
實驗V4.5月齡時開始處理(圖3和4)MR1處理在小鼠4.5個月大時開始。當小鼠長到4.5個月大時，用MR1以500μg/動物的劑量對處理動物腹膜內(nèi)給藥一次，隨后每月腹膜內(nèi)注射500μg。4.5個月后，7只對照動物中已死亡6只，而7只處理動物中有6只存活。處理8個月后，對照全部死亡，而7只處理小鼠中只有3只死亡。如圖4所示，7只MR1處理動物中有4只的蛋白尿水平維持降低，表明腎炎發(fā)生逆轉(zhuǎn)。這4只動物仍活著，已12.5月齡.
實驗VII5.5月齡時開始處理(圖5和6)MR1處理在小鼠5.5個月大時開始。用MR1以500μg/動物的劑量對處理動物腹膜內(nèi)給藥，每周給藥一次，共6周，隨后每月注射。處理5個月后(小鼠10.5月齡)，7只對照動物中已死亡6只，而7只處理動物在12月大時仍全部存活。以下數(shù)值是在8.5月齡時(處理3.5個月后)仍存活的動物中測得的。
抗ssDNA 抗dsDNA PU對照2.4 0 48.8 6.3 46.3 10.1 4平均值(標準誤差)5.8(2.6) 5.4(4.1) 4(0)MR1 2.7 0 12.0 0 1.52.0 1.5 30 0 22.7 0 10 0 23.5 0 1.5平均值(標準誤差)1.8(1.2) 0.2(0.5) 1.7( )實驗X5.5月齡時開始的低頻率處理(圖7和8)
MR1處理在小鼠5.5個月大時開始。用MR1以500μg/動物的劑量對處理動物腹膜內(nèi)給藥，每周給藥一次，共4周，隨后每月腹膜內(nèi)注射200μg。研究中所用16只小鼠(對照和處理組各8只，現(xiàn)在8.5月大)，只有一只對照動物在7.5月大時死亡。如圖8所示，8只對照動物中7只的蛋白尿水平穩(wěn)步增長到高水平，7只存活對照小鼠平均為+3.4。所有8只MR1處理小鼠中除1只外均維持低水平蛋白尿，目前8只處理小鼠平均水平為+2。如圖7所示，處理動物中的6只，而對照中只有1只沒有可檢測水平的抗dsDNA抗體。
實驗VI7月齡時開始處理(圖9和10)MR1處理在小鼠7個月大時開始。將MR1以500μg/動物的劑量對4只處理動物腹膜內(nèi)給藥，每周一次，共6周，隨后每月腹膜內(nèi)注射500μg。至10個月大時，4只對照動物全部死亡。而處理小鼠中的2只在11個月時死亡，第3只在13個月時死亡，4只處理動物中的1只經(jīng)7個月處理，目前仍存活(14個月大)。這只存活的處理動物(編號VIER)目前蛋白尿水平為1級，具有可檢測水平的抗dsDNA抗體和抗ssDNA抗體。
這些實驗表明，用抗CD40L mAb處理(SWR X NZB)F1小鼠，與對照動物相比，可以延長小鼠生命，并且減慢腎炎發(fā)展(由蛋白尿水平指示)。在某些動物中這種處理確實逆轉(zhuǎn)了腎炎，這一點可由蛋白尿水平的下降證實。32只處理動物中，11只由于抗CD40L mAb治療而尿蛋白水平下降；而對照動物中沒有類似的下降。進行血清血尿氮(BUN)檢測的24只處理動物中，3只在處理后BUN水平下降，這在任何對照動物中都未觀察到。另外，MR1處理會導致抗DS和抗SS DNA自身抗體的血清濃度降低，而這些抗體是未處理的這類動物正常產(chǎn)生的。
雖然為了便于清楚理解，通過圖解和實例方式比較詳細地描述了以上發(fā)明，然而，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，很顯然，可以在本發(fā)明范圍內(nèi)進行某些改變和調(diào)整，這只受到后附權(quán)利要求書范圍的限制。
權(quán)利要求
1.抗CD40L化合物在生產(chǎn)用于治療免疫綜合性疾病患者的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物中含有量能夠使得在患者內(nèi)有效達到下述目的的所述化合物(a)抑制腎炎的進程；(b)穩(wěn)定腎炎；或者(c)逆轉(zhuǎn)腎炎。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物中含有量能夠使得在患者內(nèi)有效達到下述目的的所述化合物(a)抑制血管炎的進程；(b)穩(wěn)定血管炎；或者(c)逆轉(zhuǎn)血管炎。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物中含有量能夠使得在患者內(nèi)有效達到下述目的的所述化合物(a)抑制蛋白尿的進程；(b)穩(wěn)定蛋白尿；或者(c)逆轉(zhuǎn)蛋白尿。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述患者在治療前的蛋白尿水平為(a)150mg/L以上；或者(b)300mg/L以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物中含有量能夠使得在患者內(nèi)有效達到下述目的的所述化合物(a)抑制抗DNA抗體血清水平的升高；(b)穩(wěn)定抗DNA抗體血清水平；或者(c)使抗DNA抗體的升高血清水平降低。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物中含有量能夠使得在患者內(nèi)有效穩(wěn)定或者降低選自下述的臨床參數(shù)的所述化合物(a)患者血液中的尿素，肌酸酐或蛋白質(zhì)濃度；(b)患者尿液中的蛋白質(zhì)或血細胞濃度；(c)患者尿液的比重；(d)患者尿量；(e)患者對菊粉，肌酸酐，尿素或?qū)Π被R尿酸的清除速率；(f)患者的高血壓；(g)患者的浮腫情況；和(h)患者的循環(huán)性自身抗體水平。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中患者感染了選自下述的免疫綜合性疾病(a)血清病；(b)自身免疫疾?。缓?c)單克隆丙球蛋白病。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述血清病是由(a)對外源性抗原的免疫反應，或者(b)對感染因子，藥物，外源抗血清或血液產(chǎn)品的免疫反應所致。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述自身免疫疾病(a)特征在于患者內(nèi)存在自身抗體；或者(b)是SLE(例如癥狀性SLE)、類風濕性關(guān)節(jié)炎、古德帕斯徹綜合癥、韋格納肉芽腫病、顯微性多動脈炎、多動脈炎結(jié)節(jié)、丘-施綜合癥，亨諾赫-舍恩萊因紫癜，特發(fā)性冷免疫球蛋白血癥和ANCA相關(guān)性腎小球腎炎。
11.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述單克隆丙球蛋白病是多發(fā)性骨髓瘤、良性單克隆丙球蛋白病或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述患者具有腎臟同種移植物，而且其中所述藥物的量能夠使得在患者內(nèi)有效達到下述目的(a)抑制同種移植物中腎炎的發(fā)展；或者(b)抑制同種移植物中腎炎的進程。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中在將同種移植物移植到患者后，周期性地將所述化合物施用于患者。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中所述患者患有SLE。
15.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所述抗CD40L化合物是一種抗體或者抗體片段。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中所述抗體是一種單克隆抗體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的用途，其中所述單克隆抗體是由ATCC保藏號HB10916產(chǎn)生的5c8。
18.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所述患者是人。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的用途，其中所述抗CD40L化合物是一種人源化抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了用抗CD40L化合物治療與免疫綜合性疾病相關(guān)的腎炎的方法。在一個實施方案中，將抗CD40L化合物施用于已接受了腎臟同種移植物的免疫綜合性疾病患者，以抑制移植腎臟內(nèi)免疫綜合性腎小球腎炎的發(fā)展。
文檔編號A61P37/00GK1572325SQ20041003536
公開日2005年2月2日 申請日期1997年12月31日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月10日
發(fā)明者S·L·卡里德, D·W·托瑪斯 申請人:拜奧根Idec馬薩諸塞公司