專利名稱：基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體及其注射劑、栓劑、滴眼劑、噴霧劑、膏劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域。具體地說，屬于基因重組人干擾素α2b的制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國乙型肝炎發(fā)病率及病死率均較高，嚴(yán)重危害著病人的健康和生命。臨床應(yīng)用已證實基因重組人干擾素具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用，在古巴、美國和我國都已被批準(zhǔn)，用于治療乙型肝炎、丙型肝及其他病毒性疾病和腫瘤。臨床應(yīng)用結(jié)果表明基因重組人干擾素α用于治療乙型肝炎，存在著臨床有效率低，毒副作用大，給藥次數(shù)多的缺點。
目前干擾素治療中主要存在以下問題1)進入體液后易被體內(nèi)的酶系統(tǒng)破壞失活，體內(nèi)生物半衰期短。轉(zhuǎn)運中途耗損大，真正產(chǎn)生療效的干擾素太少。2)干擾素吸收后體內(nèi)分布于全身，到達(dá)病灶部位的干擾素的量很有限。因此，干擾素肌注后到達(dá)肝臟并發(fā)揮療效的有效藥量很少，達(dá)不到干擾素治療肝臟疾病應(yīng)有的療效。3)長期應(yīng)用產(chǎn)生抗體，降低療效。
脂質(zhì)體作為藥物載體具有以下特點1、靶向性和淋巴定向性；2、緩釋性；3、細(xì)胞親和性與組織相容性；4、降低藥物毒性；5、保護藥物提高穩(wěn)定性。制劑均不同程度具備上述特點。存在的問題是現(xiàn)有的脂質(zhì)體包封率仍有待于提高；且藥物在生產(chǎn)、儲存過程中即有部分滲漏，因此失去了脂質(zhì)體固有的保護藥物，提高穩(wěn)定性的作用；最終導(dǎo)致藥物療效下降。
近年來，國內(nèi)外已有制劑采用明膠、膠原蛋白、瓊脂與水介質(zhì)為內(nèi)相制成的凝膠型脂質(zhì)體為載體；其包封率可高達(dá)80％，20℃，半年可保證藥物穩(wěn)定，12個月以上藥物有部分滲漏。其缺點在于穩(wěn)定性仍然較差，不利于制成的注射劑、栓劑、滴眼劑、噴霧劑、膏劑等制成品的貯存。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對目前干擾素脂質(zhì)體制劑中主要存在的問題，利用一種新型脂質(zhì)體為載體，其基因重組人干擾素α 2b脂質(zhì)體在貯存過程中包封率更高，氧化程度更低，藥物滲出更少。由此制備的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體的注射劑、栓劑、滴眼劑、噴霧劑、膏劑也具有穩(wěn)定的特性。
本發(fā)明的目的是通過以下方法實現(xiàn)的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂45~150mg，膽固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，膠體硅10~200μg，干擾素2×106IU~8×107IU。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體的制法，稱取處方量的注射用大豆磷脂、膽固醇，置于圓底燒瓶中，加入氯仿∶乙醇為1∶1的混合溶劑適量，溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去溶劑，繼續(xù)真空干燥12小時，在燒瓶壁上形成脂質(zhì)膜，加入脂肪油和膠體硅凝膠(含藥)，于40℃水浴中水化1小時，磁力攪拌1小時，冷卻至室溫，即得。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射劑，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂70~150mg，膽固醇5~50mg，脂肪油20~150μg，膠體硅35~150μg，基因重組人干擾素α 2b 4×106IU~8×107IU。脂質(zhì)體制法同上。再加入一般的注射劑輔料及注射用水，采用通常的注射劑制法取得。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體栓劑，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂70~135mg，膽固醇10~45mg，脂肪油20~150μg，膠體硅35~125μg，基因重組人干擾素α2b4×106IU~5×107IU。脂質(zhì)體制法同上，再加入一般的栓劑輔料，采用通常的栓劑制法取得。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體滴眼劑，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂45~125mg，膽固醇10~45mg，脂肪油20~100μg，膠體硅20～100μg，重組人干擾素α2b 6×106IU~2×107IU。脂質(zhì)體制法同上，再加入一般的滴眼劑輔料，采用通常的滴眼劑制法取得。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂50~150mg，膽固醇10~50mg，脂肪油20~100μg，膠體硅20~100μg，基因重組人干擾素α2b4×106IU~2×107IU。脂質(zhì)體制法同上，再加入一般的噴霧劑輔料，采用通常的噴霧劑制法取得。
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑，包括以下組分物質(zhì)含有注射用大豆磷脂50~150mg，膽固醇10~50mg，脂肪油20~125μg，膠體硅10~200μg，基因重組人干擾素α2b 2×106IU~4×107IU。脂質(zhì)體制法同上，再加入一般的膏劑輔料，采用通常的膏劑制法取得。
本發(fā)明采用脂肪油與膠體硅為內(nèi)相的凝膠脂質(zhì)體。其內(nèi)相更加穩(wěn)定，藥物可被網(wǎng)羅在膠體硅形成的立體結(jié)構(gòu)中，不易被外界物質(zhì)破壞；特別是可使生物活性物質(zhì)(如干擾素)空間構(gòu)象得以保持，不易滲漏。25℃貯存24個月以上仍很穩(wěn)定；穩(wěn)定性大幅提高，同時生物活性不變，緩釋作用更強。無論脂質(zhì)體粒徑大小，室溫條件下，24個月貯存，無滲漏。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)體可以用作多種藥物，可以成為多種藥物制劑的載體。
穩(wěn)定性實驗數(shù)據(jù)將本發(fā)明制成的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體封裝于安瓶中，于25℃恒溫箱中放置24個月，分別于0、3、6、9、12、18、24個月取樣，采用細(xì)胞病變抑制法測定其生物活性結(jié)果見表1

說明在貯存24個月后其生物活性基本保持不變。
實施例例1、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體處方注射用大豆磷脂125mg，膽固醇15.25mg，脂肪油75μg，膠體硅40μg，基因重組人干擾素α2b 6×106IU。
制法，稱取注射用大豆磷脂、膽固醇，置于圓底燒瓶中，加入氯仿∶乙醇為1∶1的混合溶劑適量，溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去溶劑，繼續(xù)真空干燥12小時，在燒瓶壁上形成脂質(zhì)膜，加入脂肪油和膠體硅凝膠(含藥)，于40℃水浴中水化1小時，磁力攪拌1小時，冷卻至室溫，即得。無菌條件下，0.45μg的微孔濾膜過濾，游離藥物用高速離心法分離(250000r/m，30min)，取清液采用CPE法測定游離藥物生物活性，計算包封率包封率＝(6×106-0.3×106)/6×106＝95％。
例2、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體處方注射用大豆磷脂150mg，膽固醇50mg，脂肪油200μg，膠體硅200μg，基因重組人干擾素8×107IU。
制法同上。
例3、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體處方注射用大豆磷脂45mg，膽固醇5mg，脂肪油10μg，膠體硅10μg，基因重組人干擾素2×106IU。
制法同上。
例4、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 1.32×107IU注射用大豆磷脂 125mg膽固醇 19.5mg脂肪油 80μg膠體硅 45μg維生素E 50mg甘油適量注射用水加至5g制法脂質(zhì)體制法同前從略，將脂質(zhì)體在40℃水浴中水化50分鐘，再加入注射用水30℃繼續(xù)水化20分鐘，勻化5分鐘，加入維生素E、甘油勻化5分鐘，40℃保溫，用0.22μm微孔濾膜無菌過濾，無菌分裝。
穩(wěn)定性考察結(jié)果將本發(fā)明制成的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射液裝于安瓶中，于37℃恒溫箱中放置，不同時間取樣，用丙二醛(MDA)法測定脂質(zhì)體氧化的程度，結(jié)果見表2表2

結(jié)果表明37℃放置3天，本發(fā)明所制得的注射液氧化穩(wěn)定性較好，有利于貯存。
例5基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 8×107IU注射用大豆磷脂150mg膽固醇50mg脂肪油150μg膠體硅150μg維生素E 70mg甘油 適量注射用水加至 5g制法同前。
例6、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 4×106IU注射用大豆磷脂70mg膽固醇5mg脂肪油20μg膠體硅35μg維生素E 40mg甘油 適量注射用水加至 5g制法同前。
例7、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體栓劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 6×106IU注射用大豆磷脂125mg膽固醇15.25mg脂肪油75μg膠體硅40μg維生素E 10g維生素A 100000U羥苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯805ml甘油明膠加至 1000g共制240枚制法脂質(zhì)體制法同前從略；取脂質(zhì)體加乙醇煮沸溶解，加入羥苯乙酯攪拌溶解，緩緩加入明膠甘油基質(zhì)中，保溫待用。
另取維生素E、維生素A混合后加入聚山梨酯80，攪拌均勻后，緩慢攪拌下加入上述基質(zhì)中，充分?jǐn)嚢琛１?5℃，灌模。
穩(wěn)定性考察結(jié)果將本發(fā)明制成的α-2b干擾素脂質(zhì)體栓劑于37℃恒溫箱中放置，不同時間取樣，用丙二醛(MDA)法測定脂質(zhì)氧化的程度，結(jié)果見表3表3

結(jié)果表明37℃放置，本發(fā)明所制得的α-2b干擾素脂質(zhì)體栓劑脂質(zhì)氧化程度基本不變。
例8、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體栓劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 4×106IU注射用大豆磷脂 70mg膽固醇 10mg脂肪油 20ug膠體硅 35ug維生素E 80g維生素A 80000U羥苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯80 5ml甘油明膠加至 1000g共制240枚制法同前。
例9、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體栓劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 5×107IU注射用大豆磷脂 135mg膽固醇 45mg脂肪油 150ug膠體硅 125ug維生素E 1200g維生素A 120000U羥苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯80 5ml甘油明膠加至 1000g制法同前。
例10、基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體滴眼劑處方基因基因重組人干擾素伐α2b(rhIFNα-2b) 1.30×107IU注射用大豆磷脂 125mg
并且，匯總初始圖像濃度、打印100,000頁后的圖像濃度、色粉飛散水平的評估結(jié)果，進行顯影劑的性能評估。綜合評估的評估標(biāo)準(zhǔn)如下所示。
◎良好。全部◎。
○實際使用上沒有問題。評估項目中沒有不良評估(×)，即使有一個評估(○)的。
×不可實際使用。評估項目中只要有一個不良評估(×)的。
以上評估結(jié)果如表3所示。
(表3)

蒸餾水加至1000ml例13基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 1.30×107IU注射用大豆磷脂125mg膽固醇18mg脂肪油25μg膠體硅50μg三油酸山梨坦 5gF114 495gF12 495g制法脂質(zhì)體制法如前，將制得的脂質(zhì)體物溶于乙醇，加三油酸山梨坦、F114、F12混溶，分裝，裝閥門軋緊，壓入拋射劑，搖勻即得。
本發(fā)明基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑過氧化程度測定方法同上，結(jié)果見表5表5

結(jié)果表明37℃放置，本發(fā)明所制得的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體包裹物噴霧劑脂質(zhì)氧化程度基本不變。
例14基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑處方基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 2×107IU注射用大豆磷脂150mg膽固醇50mg脂肪油100μg膠體硅100μg三油酸山梨坦 5gF114 500gF12 500g制法同前。
例15基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα2b) 4×106IU注射用大豆磷脂 50mg膽固醇 10mg脂肪油 20μg膠體硅 20μg
三油酸山梨坦 5gF114 480gF12 480g制法同前。
例16基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα2b) 2.52×106IU注射用大豆磷脂 110mg膽固醇 40mg脂肪油 50μg膠體硅 12.5μg液狀石蠟 250g白凡士林 25g單硬脂酸甘油酯 60g羥苯乙酯 0.5g聚山梨酯80 5g蒸餾水加至 1000g制法取單硬脂酸甘油酯、白凡士林及液狀石蠟加熱熔化為油相。另將羥苯乙酯、聚山梨酯80及蒸餾水加熱至90℃為水相。將水相緩緩倒入油相中，邊加邊攪直至冷凝。將依前法制成的脂質(zhì)體加入上述基質(zhì)中，攪拌均勻即得膏劑。
將本發(fā)明制成的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑無菌分裝于5ml安瓶中，于室溫(25℃)保存，并分別于0、1、3、6、9、12個月取樣，采用細(xì)胞病變抑制法測定其生物活性(中國生物制品檢定規(guī)程)結(jié)果見表6表6

結(jié)果表明本發(fā)明制成的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑(膏劑I)在25℃條件下貯存，生物活性無明顯變化。說明本發(fā)明滴眼劑貯存穩(wěn)定性較高，有利于該制劑產(chǎn)品的保存。
例17基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 2×106IU注射用大豆磷脂50mg膽固醇10mg脂肪油20μg膠體硅10μg
液狀石蠟 250g白凡士林 25g單硬脂酸甘油酯60g羥苯乙酯 0.5g聚山梨酯805g蒸餾水加至1000g制法同前。
例18基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑處方基因基因重組人干擾素α2b(rhIFNα-2b) 4×107IU注射用大豆磷脂150mg膽固醇100mg脂肪油125μg膠體硅200μg液狀石蠟 250g白凡士林 25g單硬脂酸甘油酯60g羥苯乙酯 0.5g聚山梨酯805g蒸餾水加至1000g制法同前。
權(quán)利要求
1.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體，包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂50~150mg，膽固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，膠體硅10~200μg，基因重組人干擾素α2b2×106IU~8×107IU。
2.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體注射劑，包括注射劑常用輔料和注射用水，其特征在于，還包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂70~150mg，膽固醇5~50mg，脂肪油20~150μg，膠體硅35～150μg，基因重組人干擾素α2b4×106IU~8×107IU。
3.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體栓劑，包括栓劑常用輔料，其特征在于，還包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂70~135mg，膽固醇10~45mg，脂肪油20~150μg，膠體硅35～125μg，基因重組人干擾素α2b4×106IU~5×107IU。
4.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體滴眼劑，包括滴眼劑常用輔料和蒸餾水，其特征在于，還包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂45~125mg，膽固醇10~45mg，脂肪油20~100μg，膠體硅20～100μg，基因重組人干擾素6×106IU~2×107IU。
5.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體噴霧劑，包括噴霧劑常用輔料，其特征在于，還包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂50~150mg，膽固醇10~50mg，脂肪油20~100μg，膠體硅20～100μg，基因重組人干擾素α2b4×106IU~2×107IU。
6.基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體膏劑，包括膏劑常用輔料，其特征在于，還包括以下組分物質(zhì)注射用大豆磷脂50~150mg，膽固醇10~100mg，脂肪油20~125μg，膠體硅10～200μg，基因重組人干擾素α2b2×106IU~4×107IU。
全文摘要
基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體及其注射劑、栓劑、滴眼劑、噴霧劑、膏劑。本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域。本發(fā)明針對目前干擾素制劑中主要存在的問題，利用一種新型脂質(zhì)體為載體，其基因重組人干擾素α2b包裹物在貯存過程中包封率更高，氧化程度更低，藥物滲出更少。由此制備的基因重組人干擾素α2b脂質(zhì)體的注射劑、栓劑、滴眼劑、噴霧劑、膏劑也具有穩(wěn)定的特性?；蛑亟M人干擾素α2b脂質(zhì)體，包括以下組分物質(zhì)豆磷脂50~150mg，膽固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，膠體硅10~200μg，干擾素2×10
文檔編號A61K38/21GK1704117SQ20041001945
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月31日
發(fā)明者曾群 申請人:天津市衡天生物技術(shù)有限公司