專利名稱：芩貝兒咳顆粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥及其制備方法，具體說是一種具有清宣肺氣、止咳化痰的功效，以治療小兒外感咳嗽的藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
咳嗽是呼吸系統(tǒng)疾病中最常見的癥狀，隨著現(xiàn)代工業(yè)發(fā)展，空氣污染日益嚴(yán)重。有害病菌、有害氣體、粉塵、致敏微生物和致敏源直接吸入肺部，使呼吸系統(tǒng)發(fā)病率日益增加，有些地區(qū)呼吸道疾病占據(jù)首要位置。據(jù)不完全統(tǒng)計，成人的發(fā)病率為5％，而兒童的發(fā)病率更高，因此，開發(fā)治療兒科呼吸系統(tǒng)疾病新藥，市場容量較大，其經(jīng)濟效益和社會效益是明顯的。
呼吸系統(tǒng)疾病最近幾年來開發(fā)出的中藥新藥也不少，但治療兒童咳嗽的藥物療效不夠理想，由于小兒咳嗽為常見病，故研制高效、速效的兒童止咳藥物顯得十分重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種中藥芩貝兒咳顆粒，治療小兒外感咳嗽效果好，并適合兒童服用；本發(fā)明另一個目的是提供該芩貝兒咳顆粒的制備方法，該方法使藥品的有效成分保留率高并便于連續(xù)性GMP條件下大型生產(chǎn)。
中藥芩貝兒咳顆粒是一種用于治療小兒微惡寒、咳嗽、咯痰、痰稠質(zhì)粘、口干苦，煩躁等外感咳嗽的表寒里熱證疾病的中藥成藥制劑，由主原料藥麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、南沙參、僵蠶、甘草制成，具有清宣肺氣、止咳化痰作用；本發(fā)明芩貝兒咳顆粒由600--700重量份麻黃、1000--1500重量份黃芩、1000--1500重量份平貝母、1000--1500重量份炙桑白皮、1000--1500重量份前胡、1000--1500重量份百部、1000--1500重量份南沙參、1000--1500重量份僵蠶、200--500重量份甘草為原料藥制成，制劑還含有輔料β-環(huán)糊精1800--2500重量份，蔗糖粉6000--8000重量份。
本發(fā)明的優(yōu)選方案為由670重量份麻黃、1330重量份黃芩、1330重量份平貝母、1330重量份炙桑白皮、1330重量份前胡、1330重量份百部、1330重量份南沙參、1330重量份僵蠶、330重量份甘草為原料藥制成，制劑還含有輔料β-環(huán)糊精2330重量份，蔗糖粉7400重量份。
本芩貝兒咳顆粒的制備方法按如下步驟按上述重量份稱取原料藥麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、南沙參、僵蠶、甘草其中六味，麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶六味，乙醇提取二次，第一次加60-80％乙醇5-7倍量，回流提取2小時，第二次加60-80％乙醇3-5倍量，回流提取2小時，合并煎液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.1(50℃)，得浸膏，按比例加β-環(huán)糊精，60℃保溫，攪拌包結(jié)，備用。
余三味，黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，第一次加水10-14倍量，提取2小時，第二次加水10--12倍量，提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得相對密度1.1(50℃)清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，在噴霧狀態(tài)下通入熱空氣，進行噴霧干燥，熱空氣進風(fēng)溫度170℃，出風(fēng)溫度70℃，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，物料在≤60℃溫度下干式制粒，整粒即得產(chǎn)品。
上述制備方法的優(yōu)選方案為按上述重量份稱取原料藥麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、南沙參、僵蠶、甘草；其中六味，麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶六味，乙醇提取二次，第一次加70％乙醇6倍量，回流提取2小時，第二次加70％乙醇4倍量，回流提取2小時，合并煎液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.1(50℃)，得浸膏，按比例加β-環(huán)糊精，60℃保溫，攪拌包結(jié)，備用；余三味，黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，第一次加水14倍量，提取2小時，第二次加水12倍量，提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得相對密度1.1(50℃)清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，在噴霧狀態(tài)下通入熱空氣，進行噴霧干燥，熱空氣進風(fēng)溫度170℃，出風(fēng)溫度70℃，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，物料在≤60℃溫度下干式制粒，整粒即得產(chǎn)品。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本藥有抗病毒作用，鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，并有抗炎作用，對小兒外感引起的咳嗽的表寒里熱證療效快，治療效果好。2、本藥所加的輔料β-環(huán)糊精，使藥物不苦，適合小兒服用。3、本藥為顆粒劑，藥物穩(wěn)定性好，易貯藏；按每次服用量分裝成袋，每次1袋，服用方便、劑量準(zhǔn)確，攜帶方便，該制劑不含防腐劑，服用安全無副作用。4、本發(fā)明是由噴霧干燥、干式制粒的新技術(shù)制備而成，噴霧干燥技術(shù)是通過霧化器將藥液噴成霧滴，分散在熱氣流中，使水分瞬間蒸發(fā)干燥，而形成疏松粉狀顆粒，使黃芩苷等有效成分不被破壞而較完全保留；干式制粒方法是將藥物干粉加輔料蔗糖粉，直接干燥狀態(tài)下機械壓制、整粒而成，也使有效成分最大限度地得到保留。5、上述方法操作過程簡單，便于連續(xù)性GMP條件下大型生產(chǎn)。6、本方法藥物分別用乙醇及水提取，既保證有效成分提取率高又使成本較低。
具體實施例方式
實施例按670重量份麻黃、1330重量份黃芩、1330重量份平貝母、1330重量份炙桑白皮、1330重量份前胡、1330重量份百部、1330重量份南沙參、1330重量份僵蠶、330重量份甘草稱取原料藥，再稱取輔料β-環(huán)糊精2330重量份、蔗糖粉7400重量份。
麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶六味，乙醇提取二次，第一次加70％乙醇6倍量，回流提取2小時，第二次加70％乙醇4倍量，回流提取2小時，合并煎液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.1(50℃)，得浸膏，按比例加β-環(huán)糊精，60℃保溫，攪拌包結(jié)，備用；黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，第一次加水14倍量，提取2小時，第二次加水12倍量，提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得相對密度1.1(50℃)清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，在噴霧狀態(tài)下通入熱空氣，進行噴霧干燥，熱空氣進風(fēng)溫度170℃，出風(fēng)溫度70℃，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，物料在≤60℃溫度下干式制粒，整粒即得產(chǎn)品。
實驗(一)芩貝兒咳顆粒的制備中醇、水提取的比較麻黃、平貝母、前胡、百部、炙桑白皮、僵蠶六味藥，主要含醇溶性成分，有效成分的水煎出率較低，故作為醇提組藥材用乙醇提取。
黃芩所含的黃芩苷以及南沙參、甘草中所含的皀苷類成分的水溶性較大，其中以黃芩苷的水溶性略小，我們以其作檢測指標(biāo)，考察了水煎提取與醇提取的比較(如下)，結(jié)果兩種提取方法的黃芩苷提取率相近，故將其合并在一起用水進行提取。
黃芩、南沙參、甘草三味藥的水、醇提取比較實驗如下以黃芩苷為指標(biāo)成分，水、醇提取液中黃芩苷的提取量作為指標(biāo)，以藥材含量為基數(shù)，各試驗樣品與之比較，計算相對提取率，實驗條件及結(jié)果見下表。
表1 水醇提取比較表提取溶劑溶劑量(ml)煎煮時間 提取率％70％乙醇7+5V 2+2hr 69.11水 10+8V 2+2hr 70.52比較實驗結(jié)果表明，兩種溶劑對提取率沒有明顯差異，考慮到生產(chǎn)時的經(jīng)濟成本，故選擇水提取。即將黃芩、南沙參、甘草設(shè)計為水煎組。
實驗(二) 芩貝兒咳顆粒的制備中醇濃度、加醇量、回流提取時間的選擇醇提取正交試驗麻黃、平貝母、前胡、百部、炙桑白皮、僵蠶六味藥，主要含醇溶性成分，有效成分的水煎出率較低，故作為醇提組藥材用乙醇提取。
為了選擇乙醇回流提取的最佳條件，選用L9(34)正交表，以醇提液中的麻黃堿成分的含量作為考察指標(biāo)，進行了9次試驗，各因素水平見表2、表3。
表2 麻黃等乙醇回流提取因素水平表
表3 麻黃等乙醇回流提取正交表 根據(jù)表3，若試驗水平為A1B1C1即表示該試驗號為藥材220g不變(麻黃20g，平貝母40g，前胡40g，百部40g，炙桑白皮40g，僵蠶40g)，乙醇濃度為60％，體積為(7+5v)，煎煮時間(2+2hr)，醇提液用高效液相測定其中麻黃堿的含量，以藥材的含量作為對照，計算相對平均提取率。其余依此類推。
(1)考核指標(biāo)的選擇麻黃堿為麻黃中的主要成分，本正交試驗選用醇提液中麻黃堿的含量作為指標(biāo)，以藥材含量為基數(shù)，各正交試驗樣品與之比較，計算相對提取率，將其作為提取是否完全的考核指標(biāo)。
(2)數(shù)據(jù)處理與分析根據(jù)正交表3，共進行9次試驗，有關(guān)試驗數(shù)據(jù)及其計算分析結(jié)果見表4、表5。
表4 麻黃等乙醇回流提取正交試驗結(jié)果表
表5 麻黃等乙醇回流提取正交試驗方差分析表方差來源 平方和 自由度均方 F顯著性醇濃度20.022 10.013.58 不顯著加醇量89.472 44.7315.99不顯著回流提取時間 73.942 36.9713.21不顯著誤差 5.60 2 2.80由表5的方差分析表可以看出，三因素對藥材提取結(jié)果的影響均不顯著。但由表4的正交試驗結(jié)果表明，其中K2a＞K1a＞K3a，故因素A選擇水平2，即選擇70％的醇作為溶劑；其中K1b＞K2b＞K3b，但是K1b，K2b非常接近，考慮到實際生產(chǎn)成本，故因素B選擇水平2，即選擇加醇量為6V+4V；其中K1c＞K2c＞K3c，故因素C選擇水平1，即選擇煎煮時間為2hr+2hr。
(3)結(jié)論因此，麻黃、平貝母、前胡、百部、炙桑白皮、僵蠶的最佳提取工藝為6+4倍量的70％乙醇，回流提取時間為2小時+2小時。
實驗(三) 芩貝兒咳顆粒的制備中加水量、回流時間、回流次數(shù)的選擇水提取正交試驗黃芩、南沙參、甘草三味藥，以水溶性成分為主，故作為水提組藥材用水提取。
為了選擇水液回流提取的最佳條件，選用L9(34)正交表，以水提液中的黃芩苷成分的含量作為考察指標(biāo)，進行了9次試驗，各因素水平見表6。
表6 黃芩、南沙參、甘草水液回流提取因素水平表 表7 黃芩、南沙參、甘草水液回流提取正交表
根據(jù)表7，若試驗水平為A1B1C1即表示該試驗號為藥材90g不變(黃芩40g，南沙參40g，甘草10g)，加水量為14倍，煎煮時間為2小時，煎煮次數(shù)為1次，水提液用高效液相測定其中黃芩苷的含量，以藥材的含量作為對照，計算相對平均提取率。其余依此類推。
(1)考核指標(biāo)的選擇黃芩苷為黃芩中的主要成分，本正交試驗選用水提液中黃芩苷的含量作為指標(biāo)，以藥材含量為基數(shù)，各正交試驗樣品與之比較，計算相對提取率，將其作為提取是否完全的考核指標(biāo)。
(2)數(shù)據(jù)處理與分析根據(jù)正交表7，共進行9次試驗，有關(guān)試驗數(shù)據(jù)及其計算分析結(jié)果見表8、表9。
表8 黃芩、南沙參、甘草水液回流提取正交試驗結(jié)果表 表9 黃芩、南沙參、甘草水液回流提取正交試驗方差分析表方差來源 平方和 自由度均方 F 顯著性A加水量54.87 2 27.44 6.14 不顯著B回流提取時間 136.77 2 68.39 15.30 不顯著C回流次數(shù) 1313.652 656.83146.98非常顯著誤差 8.94 2 4.47由表9的方差分析表可以看出，加水量、回流提取時間二因素對藥材提取結(jié)果的影響均不顯著。但由表8的正交試驗結(jié)果表明，其中K1a＞K2a＞K3a，故因素A選擇水平1，即選擇加水量為(14+12)倍；其中K1b＞K2b＞K3b，故因素B選擇水平1，即選擇回流提取時間為2小時；方差分析結(jié)果顯示回流次數(shù)的影響非常顯著，其中K3c＞K2c＞K1c，但是K2c比K1c增加較大，而與K3c較接近，考慮到實際生產(chǎn)周期及成本，故因素C選擇水平2，即選擇提取次數(shù)為2次。
(3)結(jié)論因此，黃芩、南沙參、甘草的最佳提取工藝為14+12倍量的水，煎煮時間為2小時+2小時，煎煮次數(shù)為2次。
實驗四 芩貝兒咳顆粒的制備中包結(jié)條件的選擇由于醇提液中所含的生物堿類成分苦味較大，故采用環(huán)糊精包結(jié)的方法減少其苦味，為了選擇包結(jié)的最佳條件，設(shè)計了正交試驗。選用L9(34)正交表，以藥液的苦味作為考察指標(biāo)，進行了9次試驗，各因素水平見表10、表11。
表10 藥液包結(jié)因素水平表 表11 藥液包結(jié)正交表 根據(jù)表11，若試驗水平為A1B1C1即表示該試驗號為取30袋顆粒量的原藥材(220g)按上述工藝提取，所得清膏濃縮至1.5g/ml，在50℃保溫，加入50gβ-環(huán)糊精，攪拌20分鐘，其余依此類推。
(1)考核指標(biāo)的選擇以藥液中的苦味作為指標(biāo)，以藥材含量為基數(shù)，各正交試驗樣品與之比較，計算相對提取率，將其作為提取是否完全的考核指標(biāo)。
(2)數(shù)據(jù)處理與分析根據(jù)正交表11，共進行9次試驗，有關(guān)試驗數(shù)據(jù)及其計算分析結(jié)果見表12、表13。
表12 藥液β-環(huán)糊精包結(jié)正交結(jié)果表 *得分是按照藥液苦味的程度而確定的，以最苦為0分，依次遞減分為2分、4分、6分、8分、10分共六個等級，再分六人測定，取平均評分值。
表13 藥液β-環(huán)糊精包結(jié)正交試驗方差分析表方差來源 平方和自由度均方 F顯著性藥液濃度 17.5062 8.75 13.63不顯著溫度 7.802 2 3.90 6.08 不顯著β-CD用量 28.1732 14.09 21.94顯著誤差 1.284 2 0.64由表13的方差分析表可以看出β-CD用量對苦味有顯著影響，其它二個因素對苦味的影響均不顯著。由表12的正交試驗結(jié)果表明，其中K2a＞K3a＞K1a，故因素A選擇水平2，即選擇藥液濃度為2.0g/ml其中K2b＞K3b＞K2b，故因素B選擇水平2，即選擇溫度為60℃；其中K3c＞K2c＞K1c，故因素C選擇水平3，即選擇β-環(huán)糊精量為70g。
(3)結(jié)論因此，藥液β-環(huán)糊精包結(jié)的最佳工藝為濃縮至藥液濃度為2.0g/ml，保溫為60℃，β-環(huán)糊精用量為70g。
實驗(五) 芩貝兒咳顆粒的制備中濃縮條件選擇為減少藥液濃縮過程中有效成分的損失，采用減壓薄膜濃縮工藝，真空度和溫度是影響薄膜濃縮效果的關(guān)鍵參數(shù)。該方中的主要有效成分是黃芩苷、麻黃堿等。為了減少黃芩苷、麻黃堿的損失，藥液濃縮及回收溶劑時，均在減壓(-0.08Mpa)條件下進行，溫度不超過80℃，結(jié)果見表14。
表14 濃縮條件實驗結(jié)果分析表黃芩苷麻黃堿濃縮方式保留率(％)保留率(％)常壓濃縮92.01 92.87減壓濃縮96.87 95.32真空度小，藥液溫度高，不但能耗高，而且藥液易結(jié)塊、焦化，有效成分損失大。根據(jù)下表，以濃縮液的相對密度1.07～1.10作為濃縮終點。
表15 濃縮液相對密度對噴霧干燥工藝的影響濃縮液的相對密度對噴霧干燥工藝的影響＜1.07 噴霧干燥顆粒太細，且能耗高1.07～1.10 正常噴霧干燥，顆粒均勻＞1.10 藥液粘稠，干燥時間長，顆粒較粗實驗(六) 芩貝兒咳顆粒的制備中噴霧干燥條件的選擇噴霧干燥是一種比較先進的干燥技術(shù)。不僅具有受熱時間短(一般僅為幾秒鐘)、干燥效率高，適用于連續(xù)化大生產(chǎn)，有利于GMP管理的優(yōu)點；根據(jù)有關(guān)文獻，噴霧干燥法更有利于減少有效成分的熱破壞，故我們采用噴霧干燥工藝。
待干燥清膏相對密度1.07-1.10(50℃)，噴霧干燥。由于直接噴干不利于噴干粉的收率，藥液先加入輔料，攪拌均勻后進行噴干。噴干的的進風(fēng)溫度一般為170～200℃，為利于麻黃堿和黃芩苷成分的保留，選擇較低的進風(fēng)溫度170℃。
在其它條件不變的情況下，出風(fēng)溫度對噴霧干燥粉的含量、含水量具有較大的影響，試驗結(jié)果見表16。
表16 出風(fēng)溫度對噴霧干燥粉的影響(進風(fēng)溫度170℃)出風(fēng)溫度(℃)黃芩苷(％)含水量(％)對制粒的影響80 89.46 2.6 不明顯70 96.27 4.1 不明顯60 98.07 7.8 稍差制粒試驗結(jié)果表明，顆粒含水量在4.0～6.0％時，制得的顆粒度、硬度適宜；含水量高于8.0％時，顆粒流動性較差，制粒后水分難以控制在5％以內(nèi)。因此應(yīng)控制噴霧干燥的出風(fēng)溫度在70℃。
實驗(七) 芩貝兒咳顆粒劑的制備中噴干粉成型輔料(糖粉)的選擇由于處方中麻黃、黃芩等藥口味較苦，雖然采用包結(jié)的方法在一定程度上改善了其口味，但是由于本藥主要是針對小兒的，故最終選擇蔗糖粉作為輔料，進行矯味，既能掩蓋苦味，又能增加噴干粉的粘性，以利于干法制粒及成型。
考察了輔料(糖粉)用量對制劑成型、口味、水分、成品率等因素的影響，優(yōu)選其用量。
按處方比例，各取制成1000袋量的噴干粉，加入不同量的輔料(糖粉)，制粒，將其用量與制劑的成型性等因素進行考察，結(jié)果見表17。
表17 輔料對成型的影響蔗糖 結(jié)果編組(Kg) 顆粒 口味 水分(％) 成品率(％)較松脆，粒度不好，溶解劑量1 5.5有苦味 4.995.2性差劑量2 7.4 松脆，粒度好，溶解性好 好 4.197.7較硬，粒度不好，溶解性劑量3 9.0稍甜 3.296.8較好由表17可見，由劑量2所得顆粒松脆，粒度好，溶解性好，口味好，成品率高，故選擇劑量2的蔗糖作為噴干的成型輔料。本發(fā)明芩貝兒咳顆粒主要藥效學(xué)試驗結(jié)果(1)體內(nèi)抗病毒試驗取ICR小鼠114只，體重12～15g，隨機分為6組，即空白對照組、模型組、利巴韋林陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組19只，雌雄兼用。每天ig給藥1次，連續(xù)5天，給藥第2天各組小鼠(除空白對照組外)，在乙醚淺麻醉下以增毒3次的病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠50ul(20個LD50攻擊量)。觀察記錄感染甲型流感病毒后小鼠14天內(nèi)的死亡數(shù)，并采用X2檢驗與模型組進行顯著性測定比較；計算平均存活時間，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為20.8g/kg時，可明顯提高感染流感病毒小鼠的存活率，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05＝?？擅黠@延長感染流感病毒小鼠的平均存活時間，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05＝。結(jié)果見表18。
表18對感染流感病毒小鼠存活率、存活時間的影響劑量動物數(shù)死亡數(shù)存活率存活時間組別(g/kg)(只) (只) (％) (天)14.00±空白對照-- 190 100.00.00***模型組 -- 19185.36.21±2.33利巴韋林0.15 191047.4* 10.15±3.83*芩貝兒咳顆粒5.2 191331.6 9.10±3.73芩貝兒咳顆粒10.4 191331.6 9.78±3.38芩貝兒咳顆粒20.8 191142.1* 10.16±3.59*與模型組比較*P＜0.05，***P＜0.001。(2)對感染甲型流感病毒小鼠肺指數(shù)的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對感染甲型流感病毒小鼠肺指數(shù)的影響，確定藥物是否有抗病毒作用。2.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用利巴韋林，因其為目前常用而有效的藥物。2.2試驗分組與劑量；(1)空白對照組0.5％CMC-Na溶液。
(2)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(3)陽性藥物組0.75％利巴韋林混懸溶液(0.150g/kg)。
(4)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(5)中劑量組52％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
(6)高劑量組104％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?20.8g/kg)。
給藥容積20ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。2.3試驗操作肺指數(shù)測定取ICR小鼠60只，體重13～15g，隨機分為6組，即空白對照組、模型組、利巴韋林陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。每天ig給藥1次，連續(xù)5天，給藥第2天各組小鼠(除空白對照組外)，在乙醚淺麻醉下以增毒3次的病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠50ul(20個LD50攻擊量)。病毒攻擊小鼠第4天時測定肺指數(shù)。測定前禁食不禁水12h，測定當(dāng)日各組小鼠稱重，脫頸處死，解剖，觀察肺部病變，取全肺稱重，計算各鼠肺指數(shù)值及肺指數(shù)抑制率，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。 2.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為20.8g/kg時，可明顯降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05＝。結(jié)果見表19。
表19對感染流感病毒小鼠肺指數(shù)的影響(X±S)劑量動物數(shù)肺指數(shù)值 肺指數(shù)抑制率組別(g/kg)(只) (g/10g) (％)空白對照--10 0.088±0.006**模型組 --80.134±0.022利巴韋林0.15 10 0.0940.009** 29.85芩貝兒咳顆粒5.2 90.115±0.032 14.18芩貝兒咳顆粒10.4 10 0.109±0.031 18.66芩貝兒咳顆粒20.8 10 0.107±0.028* 20.15與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。(3)對枸櫞酸致豚鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對枸櫞酸致豚鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響，確定藥物是否有鎮(zhèn)咳作用。3.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用咳必清(枸櫞酸噴托維林)，因其為目前常用而有效的藥物。3.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組0.25％咳必清混懸溶液(0.025g/kg)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?2.6g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
給藥容積10ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。3.3試驗操作取健康三色豚鼠，雌雄各半，體重180～200g，將豚鼠分別置于20×20×15cm密閉有機玻璃實驗箱內(nèi)，每次每箱1只。將17.5％枸櫞酸溶液50ml置于超聲波霧化器內(nèi)霧化，向?qū)嶒炏鋬?nèi)通霧化枸櫞酸溶液30秒，記錄自噴霧起5分鐘內(nèi)豚鼠咳嗽次數(shù)(咳嗽以豚鼠張嘴并聽到響亮咳聲為一次咳嗽)，低于10次者，不予選用。選取合格豚鼠50只，隨機分為5組，即模型組、咳必清陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。每天ig給藥1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后，將豚鼠再分別置于20×20×15cm密閉有機玻璃實驗箱內(nèi)，每次每箱1只。將17.5％枸櫞酸溶液50ml置于超聲波霧化器內(nèi)霧化，向?qū)嶒炏鋬?nèi)通霧化枸櫞酸溶液30秒，記錄咳嗽潛伏期及自噴霧起5分鐘內(nèi)豚鼠咳嗽次數(shù)，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。3.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為5.2g/kg、10.4g/kg時，可明顯延長枸櫞酸致豚鼠咳嗽潛伏期，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05、P＜0.01)；可明顯減少枸櫞酸致豚鼠咳嗽的次數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05、P＜0.01＝。結(jié)果見表20。
表20對豚鼠咳嗽潛伏期及次數(shù)的影響(X±S)劑量動物數(shù)咳嗽潛伏期 咳嗽次數(shù)組別(g/ (只)(秒) (次/5min)kg)模型組 -- 10 38.3±17.128.3±7.8咳必清 0.02510 120.4±45.8***13.144.3***芩貝兒咳顆粒2.6 10 53.4±20.022.9±7.5芩貝兒咳顆粒5.2 10 59.7±23.1* 19.9±7.8*芩貝兒咳顆粒10.4 10 75.3±28.5** 18.57.3**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(4)對氨水致小鼠咳嗽次數(shù)的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對濃氨水致小鼠咳嗽次數(shù)的影響，確定藥物是否有鎮(zhèn)咳作用。4.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用咳必清(枸櫞酸噴托維林)，因其為目前常用而有效的藥物。4.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組0.25％咳必清混懸溶液(0.05g/kf)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆粒混懸溶液(10.4g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆粒混懸溶液(20.8g/kg)。
給藥容積20ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。4.3試驗操作取KM小鼠，體重19～21g，隨機分為5組，即模型組、咳必清陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。每天ig給藥1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后，將各鼠分別置于20×20×15cm密閉有機玻璃實驗箱內(nèi)，每次每箱1只。將濃氨水50ml置于超聲波霧化器內(nèi)霧化，向?qū)嶒炏鋬?nèi)通霧化氨水20秒，記錄自噴霧起5分鐘內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)(咳嗽以小鼠腹肌收縮同時張大嘴為一次咳嗽)，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。4.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為5.2g/kg、10.4g/kg、20.8g/kg時，可明顯減少濃氨水致小鼠咳嗽次數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001＝。結(jié)果見表21。
表21.對濃氨水致小鼠咳嗽次數(shù)的影響(X±S)劑量 動物 咳嗽次數(shù)組別(g/kg) (只) (次/5min)模型組 -- 10 59.2±14.6咳必清 0.0510 33.2±11.7***芩貝兒咳顆粒5.2 10 43.5±14.2*芩貝兒咳顆粒10.410 39.5±15.3**芩貝兒咳顆粒20.810 34.9±12.5***與模型組比較*P＜0.05，***P＜0.001。(5)對小鼠呼吸道酚紅排出量的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對小鼠呼吸道酚紅排出量的影響，確定藥物是否有祛痰作用。5.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用氯化銨，因其為目前常用而有效的藥物。5.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組5％氯化銨溶液(1g/kg)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?20.8g/kg)。
給藥容積20ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。5.3試驗操作(1)繪制酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取酚紅0.010g，置于容量瓶中，加入5％碳酸氫鈉溶液至100ml，分別吸取此酚紅溶液0.025ml、0.075ml、0.125ml、0.175ml、0.250ml、1.250ml、2.500ml分別置于25ml容量瓶中，以5％碳酸氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，避光放置30分鐘，于754-型紫外可見分光光度計546nm處測定吸收度，以濃度為橫座標(biāo)，吸收度為縱座標(biāo)作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)取KM小鼠，體重20～22g，隨機分為5組，即模型組、氯化銨陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。每天ig給藥1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后，腹腔注射5％酚紅溶液0.1ml/10g，30分鐘后處死，剝?nèi)夤苤車M織，剪下自甲狀軟骨至氣管分支一段氣管，放入已盛有2ml生理鹽水的試管中，再加0.1ml 1M氫氧化鈉，避光放置30分鐘后，在754-型紫外可見分光光度計546nm處測定吸收度，計算酚紅含量，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。5.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為10.4g/kg、20.8g/kg時，可明顯增加小鼠呼吸道酚紅排出量，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.01、P＜0.001＝。結(jié)果見表22。
22對小鼠呼吸道酚紅排出量的影響(X±S)劑量動物數(shù)光密度 酚紅含量組別(g/kg) (只) (OD)(ug/ml)模型組 -- 100.0350±0.0096 0.310±0.112氯化銨 1.0100.1633±0.0676***1.817±0.794***芩貝兒咳顆粒5.2100.0474±0.0182 0.455±0.214芩貝兒咳顆粒10.4 100.0567±0.0217** 0.565±0.255**芩貝兒咳顆粒20.8 100.0864±0.0228***0.924±0.267***與模型組比較**P＜0.01，***P＜0.001。(6)對大鼠氣管排痰量的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對大鼠氣管排痰量的影響，確定藥物是否有祛痰作用。6.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用氯化銨，因其為目前常用而有效的藥物。6.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組10％氯化銨溶液(1g/kg)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?2.6g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
給藥容積10ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。6.3試驗操作取SD大鼠，體重180～220g，隨機分為5組，即模型組、氯化銨陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。實驗前禁食12小時，烏拉坦1g/kg ip麻醉，仰位固定。剪開頸中部皮膚，分離出氣管，在甲狀腺軟骨下緣正中兩軟骨環(huán)之間用尖銳的注射針頭扎一小孔，然后插入內(nèi)徑0.8mm、長6cm的毛細玻璃管一根，使毛細管剛好接觸氣管底部表面，借以吸取氣管后部痰液。當(dāng)毛細管內(nèi)被痰液充滿時，立即另換一根。以毛細管吸取痰液長度作為指標(biāo)，記錄給藥前2小時正常分泌量后，ig給藥1次，繼續(xù)再觀察2小時分泌量。計算每小時痰液分泌量，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。
6.4試驗結(jié)果
結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為2.6g/kg、5.2g/kg、10.4g/kg時，可明顯增加大鼠氣管排痰量，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01＝。結(jié)果見表23表23對大鼠氣管排痰量的影響(X±S)劑量動物數(shù) 每小時痰液分泌量(cm)組別(g/kg)(只) 給藥前 給藥后模型組 --102.26±0.42 2.35±0.46氯化銨 1 102.27±0.38 3.08±0.32***芩貝兒咳顆粒2.6 102.23±0.37 2.80±0.38*芩貝兒咳顆粒5.2 102.28±0.39 2.86±0.32**芩貝兒咳顆粒10.4 102.26±0.47 2.99±0.38**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(7)對豚鼠引喘潛伏期的影響試驗?zāi)康挠^察受試藥物對氯化乙酰膽堿與磷酸組織胺混合引喘液致豚鼠實驗性哮喘潛伏期的影響，確定藥物是否有平喘作用。7.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用氨茶堿，因其為目前常用而有效的藥物。7.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組1.5％氨茶堿溶液(0.15g/kg)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?2.6g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆粒混懸溶液(5.2g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
給藥容積10ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。7.3試驗操作選用幼年三色豚鼠，體重130～160g。將豚鼠分別置于20×20×15cm密閉有機玻璃實驗箱內(nèi)，每次每箱1只。將2％氯化乙酰膽堿和0.1％磷酸組織胺混合液50ml置于超聲波霧化器內(nèi)霧化，向?qū)嶒炏鋬?nèi)通霧15秒，觀察引喘潛伏期(即從噴霧開始，到哮喘發(fā)作，呼吸困難，出現(xiàn)跌倒的時間)，超過120秒者，不予選用。次日取已測定潛伏期的豚鼠，隨機分為5組，即模型組、氨茶堿陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半。ig給藥，給藥1小時后，將豚鼠再次分別置于20×20×15cm密閉有機玻璃實驗箱內(nèi)，每次每箱1只。將2％氯化乙酰膽堿和0.1％磷酸組織胺混合液50ml置于超聲波霧化器內(nèi)霧化，向?qū)嶒炏鋬?nèi)通霧15秒，測定引喘潛伏期，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。7.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為10.4g/kg時，可明顯延長豚鼠引喘潛伏期，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，有顯著性意義(P＜0.05＝。結(jié)果見表24。
表24 對豚鼠引喘潛伏期的影響(X±S)劑量 動物數(shù)引喘潛伏期(秒)組別(g/kg) (只) 給藥前 給藥后模型組 -10 51.3±13.3 57.8±15.5氨茶堿 0.15 10 50.9±11.5 100.2±24.4***芩貝兒咳顆粒2.6 10 51.9±13.3 64.2±18.1芩貝兒咳顆粒5.2 10 52.2±11.7 72.4±19.1芩貝兒咳顆粒10.4 10 51.1±11.3 76.7±19.9*與模型組比較*P＜0.05，***P＜0.001。(8)對二甲苯引起的小鼠耳腫脹程度的影響[9]試驗?zāi)康挠^察受試藥物對二甲苯引起的小鼠耳腫脹程度的影響，確定藥物是否有抗炎作用。8.1試驗對照；(1)模型組選用0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組選用醋酸潑尼松，因其為目前常用而有效的藥物。8.2試驗分組與劑量；(1)模型組0.5％CMC-Na溶液。
(2)陽性藥物組0.025％醋酸潑尼松混懸溶液(0.005g/kg)。
(3)低劑量組26％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?5.2g/kg)。
(4)中劑量組52％芩貝兒咳顆?；鞈胰芤?10.4g/kg)。
(5)高劑量組104％芩貝兒咳顆粒混懸溶液(20.8g/kg)。
給藥容積20ml/kg。
給藥途徑口服灌胃給藥(ig)。8.3試驗操作
取KM小鼠，雄性，體重19～21g，隨機分為5組，即模型組、醋酸潑尼松陽性藥物組、芩貝兒咳顆粒低、中、高3個劑量組，每組10只。每天ig給藥1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后，各鼠右耳涂以二甲苯溶液0.05ml。1小時后處死動物，用直徑8mm圓沖于各鼠的左、右耳的同一部位，分別沖下1圓耳片，稱重，以右耳片重量減去左耳片重量為左、右耳片重量之差，作為腫脹程度的指標(biāo)，按公式計算出腫脹抑制％，并采用組間t檢驗法與模型組進行顯著性測定比較。 8.4試驗結(jié)果結(jié)果顯示芩貝兒咳顆粒在劑量為10.4g/kg、20.8g/kg時，可明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹程度，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與模型組相比，有顯著性意義(P＜0.05、P＜0.01＝。結(jié)果見表25。
表25對二甲苯引起的小鼠耳腫脹程度的影響(X±S)劑量 動物數(shù) 左耳片重右耳片重 左右耳重量差 腫脹抑制組別 (g/ (只) (mg)(mg)(mg) ％kg)模型組 -- 10 15.4±1.628.5±2.9 13.1±3.5醋酸潑尼松 0.00510 15.1±1.222.6±3.6*** 7.5±2.7*** 42.7芩貝兒咳顆粒5.2 10 15.3±1.325.8±3.4 10.5±3.3 19.8芩貝兒咳顆粒10.4 10 15.2±1.125.1±3.3* 9.9±2.9* 24.4芩貝兒咳顆粒20.8 10 15.5±1.324.5±3.2**9.0±2.7**31.3與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(9)對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹率的影響[10]試驗?zāi)康挠^察受試藥物對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹率的影響，確定藥物是否有抗炎作用。
主要藥效學(xué)試驗結(jié)果表明芩貝兒咳顆?？擅黠@提高感染流感病毒小鼠的存活率及明顯延長感染流感病毒小鼠的平均存活時間，明顯降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值；明顯延長枸櫞酸致豚鼠咳嗽潛伏期及明顯減少枸櫞酸致豚鼠咳嗽的次數(shù)，明顯減少濃氨水致小鼠咳嗽的次數(shù)；明顯增加小鼠呼吸道酚紅排出量，明顯增加大鼠氣管排痰量；明顯延長豚鼠引喘潛伏期；明顯減少二甲苯引起的小鼠耳腫脹程度。證明該藥具有抗病毒作用、鎮(zhèn)咳作用、祛痰作用、平喘作用及抗炎作用。
權(quán)利要求
1.一種芩貝兒咳顆粒，其特征在于它由600--700重量份麻黃、1000--1500重量份黃芩、1000--1500重量份平貝母、1000--1500重量份炙桑白皮、1000--1500重量份前胡、1000--1500重量份百部、1000--1500重量份南沙參、1000--1500重量份僵蠶、200--500重量份甘草為原料藥制成，制劑還含有輔料β-環(huán)糊精1800--2500重量份，蔗糖粉6000--8000重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芩貝兒咳顆粒，其特征在于它由670重量份麻黃、1330重量份黃芩、1330重量份平貝母、1330重量份炙桑白皮、1330重量份前胡、1330重量份百部、1330重量份南沙參、1330重量份僵蠶、330重量份甘草為原料藥制成，制劑還含有輔料β-環(huán)糊精2330重量份，蔗糖粉7400重量份。
3.芩貝兒咳顆粒的制備方法，其特征在于按如下步驟按上述重量份稱取原料藥麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、南沙參、僵蠶、甘草；其中六味，麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶六味，乙醇提取二次，第一次加60-80％乙醇5-7倍量，回流提取2小時，第二次加60-80％乙醇3-5倍量，回流提取2小時，合并煎液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.1(50℃)，得浸膏，按比例加β-環(huán)糊精，60℃保溫，攪拌包結(jié)，備用。余三味，黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，第一次加水10-14倍量，提取2小時，第二次加水10--12倍量，提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得相對密度1.1(50℃)清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，在噴霧狀態(tài)下通入熱空氣，進行噴霧干燥，熱空氣進風(fēng)溫度170℃，出風(fēng)溫度70℃，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，物料在≤60℃溫度下干式制粒，整粒即得產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的芩貝兒咳顆粒的制備方法，其特征在于按如下步驟按上述重量份稱取原料藥麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、南沙參、僵蠶、甘草；其中六味，麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶六味，乙醇提取二次，第一次加70％乙醇6倍量，回流提取2小時，第二次加70％乙醇4倍量，回流提取2小時，合并煎液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.1(50℃)，得浸膏，按比例加β-環(huán)糊精，60℃保溫，攪拌包結(jié)，備用；余三味，黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，第一次加水14倍量，提取2小時，第二次加水12倍量，提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得相對密度1.1(50℃)清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，在噴霧狀態(tài)下通入熱空氣，進行噴霧干燥，熱空氣進風(fēng)溫度170℃，出風(fēng)溫度70℃，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，物料在≤60℃溫度下干式制粒，整粒即得產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種芩貝兒咳顆粒及其制備方法，它由麻黃、黃芩、平貝母、炙桑白皮、前胡、百部、沙參、僵蠶、甘草、β－環(huán)糊精、蔗糖粉組成。該藥的制備方法，將麻黃、平貝母、前胡、百部、桑白皮、僵蠶，乙醇提取二次，每次回流提取2小時，合并煎液，濾過，得浸膏，按比例加β－環(huán)糊精，攪拌包結(jié)，備用。黃芩、南沙參、甘草，水煎煮提取二次，每次加水提取2小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮，得清膏。清膏與上述備用清膏合并，混勻，進行噴霧干燥，得噴干粉，按比例加蔗糖粉，混勻，干式制粒。本藥有抗病毒，鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎作用，適合小兒服用。
文檔編號A61P11/12GK1449811SQ0312276
公開日2003年10月22日 申請日期2003年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月21日
發(fā)明者祁文彬, 于麗君, 朱秋穎 申請人:內(nèi)蒙古伊泰醫(yī)藥科技開發(fā)有限責(zé)任公司