專利名稱：來源于管花肉蓯蓉的含有苯乙醇苷的制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種來源于肉蓯蓉屬植物的含有苯乙醇苷的制劑及其制備方法，和在抗老年癡呆、抑制血小板聚集的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著世界人口老齡化的日益嚴(yán)重，與衰老有關(guān)的許多疾病如老年癡呆癥等已成為當(dāng)今社會嚴(yán)重威脅老年人身體健康的因素，由于致病機(jī)理復(fù)雜，目前尚未找到針對該病的具有顯著療效的藥物。基于肉蓯蓉長期以來作為傳統(tǒng)補(bǔ)腎、壯陽、強(qiáng)精藥用于臨床，因此成為被深入研究的對象。中藥肉蓯蓉Herba Cistanche為列當(dāng)科肉蓯蓉屬多年生寄生草本植物，主產(chǎn)于中國西北各省，藥用其肉質(zhì)莖，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便之功效，主治男子陽痿、女子不孕、血枯便秘等癥，有“沙漠人參”之美譽(yù)。其中管花肉蓯蓉為肉蓯蓉屬中產(chǎn)量最大的一種。
從八十年代初，日本學(xué)者開始系統(tǒng)研究肉蓯蓉屬植物的化學(xué)成分和藥理活性，發(fā)現(xiàn)苯乙醇苷類化合物是肉蓯蓉屬植物的主要活性成分，具有抗氧化、促進(jìn)物質(zhì)代謝、改善學(xué)習(xí)記憶、增強(qiáng)性功能等作用，并對多種單體苯乙醇苷類化合物進(jìn)行了深入研究(Sato T，et al.YakugakuZasshi，1985，105(12)1131)，有關(guān)這方面的研究還有大量文獻(xiàn)報(bào)道(Jimenez C，et al.Nat Prod Rep，1994，11(6)591；Cometa F，etal.Fitoterapia，1993，64(3)195.)。

發(fā)明內(nèi)容
本案發(fā)明人在對肉蓯蓉屬進(jìn)行十多年研究的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)在該屬植物中管花肉蓯蓉的苯乙醇苷類化合物含量最高，并提出了一種從管花肉蓯蓉提取苯乙醇苷類化合物的新穎工藝，制備出含有苯乙醇苷的制劑，經(jīng)過大量藥理試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該制劑具有明顯的增強(qiáng)記憶力、抑制血栓、抑制血小板聚集形成等作用。
本發(fā)明的目的之一是提供一種來源于管花肉蓯蓉的含有苯乙醇苷的制劑；本發(fā)明的目的之二是提供從管花肉蓯蓉獲得一含有苯乙醇苷的制劑的制備工藝；本發(fā)明的目的之三是提供抗老年癡呆的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供抑制血小板聚集的醫(yī)藥組合物。
為實(shí)現(xiàn)上述本發(fā)明目的，依照本發(fā)明內(nèi)容完成的一種從管花肉蓯蓉獲得的含有苯乙醇苷的制劑，包含10-70％松果菊苷(echinacoside)及1-40％類葉升麻苷(acteoside)，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑包含25-70％松果菊苷(echinacoside)及5-40％類葉升麻苷(acteoside)，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑從管花肉蓯蓉的肉質(zhì)莖制備。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制劑進(jìn)一步包含2′-乙?；惾~升麻苷(2’-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、管花肉蓯蓉苷A(cistantubuloside A)、B1、B2、C1、C2、crenatoside、去咖啡?；惾~升麻苷(decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷(isoacteoside)、紅景天苷(rhodioloside)、syringalide A3′-α-L-rhamnopyranoside和管花苷A(tubuloside A)，它們于該制劑的含量均低于5％，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
本發(fā)明提供一種從管花肉蓯蓉制備一含有苯乙醇苷的制劑的方法，包含下列步驟a)將管花肉蓯蓉的地下部分以一第一極性溶劑加予萃??；b)將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上；c)用第二極性溶劑作為流動相流洗液洗脫該柱以除去游離的化合物，而實(shí)質(zhì)上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在聚合物上；以及d)用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，該第三極性溶劑與第二極性溶劑相比極性較低。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法的步驟a)的管花肉蓯蓉的地下部分為其肉質(zhì)莖。
優(yōu)選的，本發(fā)明制備方法的步驟a)的萃取包含將管花肉蓯蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合物煮沸0.5-10小時(shí)，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份作為該萃取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏(extract)作為該萃取物。優(yōu)選的，該管花肉蓯蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合物中的管花肉蓯蓉的地下部分與第一極性溶劑的重量比例為1∶4～20。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法的步驟a)的第一極性溶劑為水，或水與乙醇的混合溶劑。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法的步驟b)的該聚合物由交聯(lián)聚芳族物質(zhì)組成。更優(yōu)選的，該聚合物由交聯(lián)的聚苯乙烯，或交聯(lián)的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所組成。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法的步驟c)的第二極性溶劑為水，步驟d)的第三極性溶劑包含甲醇，乙醇，水與甲醇的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑，更優(yōu)選的第三極性溶劑為水與乙醇的混合溶劑。
優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法還包含除去含有苯乙醇苷的洗脫液中的溶劑以得到干燥產(chǎn)物。
本發(fā)明還提供一種用于抗老年癡呆癥的醫(yī)藥組合物，包含一抗老年癡呆癥治療有效量作為有效成分的本發(fā)明的含有苯乙醇苷的制劑；及與該有效成分共同使用的醫(yī)藥容許載體或稀釋劑。
本發(fā)明還提供一種用于抑制血小板聚集的醫(yī)藥組合物，包含一抑制血小板聚集有效量作為有效成分的本發(fā)明的含有苯乙醇苷的制劑；及與該有效成分共同使用的醫(yī)藥容許載體或稀釋劑。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的含有苯乙醇苷的制劑作為活性成分在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的含有苯乙醇苷的制劑作為活性成分在制備抑制血小板聚集藥物中的應(yīng)用。
實(shí)施方式本發(fā)明從管花肉蓯蓉制備的一種含有苯乙醇苷的制劑其中主要成分松果菊苷(echinacoside)和類葉升麻苷(acteoside)分別含10～70％和1～40％，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。本發(fā)明所述的來源于管花肉蓯蓉的苯乙醇苷類化合物的結(jié)構(gòu)通式為
包括松果菊苷、類葉升麻苷、2′-乙酰基類葉升麻苷(2’-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、管花肉蓯蓉苷A(cistantubuloside A)、B1、B2、C1、C2、crenatoside、去咖啡?；惾~升麻苷(decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷(isoacteoside)、紅景天苷(rhodioloside)、syringalide A3′-α-L-rhamnopyranoside和管花苷A(tubuloside A)等成分(表1)，其中除松果菊苷及類葉升麻苷外均以少量或微量存在于本發(fā)明的制劑中。表1中各成分是經(jīng)高效液相色譜指紋圖譜確定，該高效液相色譜指紋圖譜是在以下條件下獲得的固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相為乙腈-0.05M磷酸水溶液(4∶96→15∶85)梯度洗脫，流速1ml/min，檢測波長330nm。
表1含有苯乙醇苷的制劑所含主要成分Compound Name R1R2R3R4R5R6R72′-Acetylacteoside Ac Rha Cf H HOH OHActeoside H Rha Cf H HOH OHCampneoside I H Rha Cf H OMe(S/R) OH OHCampneoside II H Rha Cf H OH(S/R) OH OH*Cistantubuloside A H Rha Cf Glc HH OH*Cistantubulosides H Rha Cm/c-Cm Glc HOH OHB1/B2*Cistantubulosides H Rha Cf Glc OH(S/R) OH OHC1/C2Decaffeoylacteoside H Rha H H HOH OHEchinacosideH Rha Cf Glc HOH OHIsoacteosideH Rha H Cf HOH OH
Rhodioloside H HH H H H OH(Salidroside)Syringalide A3′α-L-rhamnopyrano H Rha Cf H H H OHsideTubuloside A Ac Rha Cf GlcH OH OHCrenatoside結(jié)構(gòu)見下式*新化合物AcAcetyl Cftrans-Caffeoyl Cmtrans-Coumaroylc-Cmcis-CoumaroylGlcβ-D-GlucopyranoseRhaα-L-Rhamnopyranose Crenatoside本發(fā)明是通過如下方案實(shí)現(xiàn)的(1)溶劑提取法以管花肉蓯蓉Cistanche tubulosa(Schenk.)Wight藥材，切成飲片或粉碎成粉末，選用一定量的水或乙醇或甲醇或其它低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒浸泡，在室溫下滲漉提取，或用超聲波震蕩提取，或在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取，濾液備用。藥渣再加適量溶液煎煮或回流提取數(shù)次，濾過。合并濾液，減壓濃縮，即得提取浸膏。(2)純化方法將提取浸膏以水加熱溶解，注入如D-101型、AB-8型或其它類型的大孔吸附樹脂柱內(nèi)，先用水洗脫，棄去；再用水、甲醇、乙醇、含水甲醇或含水乙醇的一種或多種進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，利用常用干燥方法干燥，即得管花肉蓯蓉制備含苯乙醇苷的制劑，并將該制劑作為抗老年癡呆癥、抑制血小板聚集的有效成分，使之與藥學(xué)上可接受的載體或其它適宜賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成膠囊劑、顆粒劑、散劑、片劑、糖漿劑、酊劑等劑型，用于預(yù)防和治療老年癡呆癥，及抑制血小板聚集。
本發(fā)明的藥理試驗(yàn)方案為利用水迷宮實(shí)驗(yàn)，通過與空白組和對照組比較，判斷給藥組小鼠學(xué)習(xí)記憶增加的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明含有苯乙醇苷的制劑可以明顯提高正常小鼠的學(xué)習(xí)記憶；對乙醇誘導(dǎo)小鼠記憶再現(xiàn)缺失有明顯的保護(hù)作用；對東莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙有明顯的改善記憶作用；對亞硝酸鈉引起的小鼠記憶鞏固障礙有明顯的保護(hù)作用；能明顯改善氫化可的松所致腎陽虛小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，并顯著降低氫化可的松引起的小鼠死亡率；改善局灶性腦缺血一再灌注癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，此外，還能明顯抑制大鼠動—靜脈旁路血栓形成和血小板聚集作用。在上述藥理活性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，臨床可被用于抗衰老、預(yù)防和治療老年癡呆癥〔包括血管性癡呆(VD)和阿爾海默氏綜合癥(AD)〕。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但不以此限制本發(fā)明。
提取方法實(shí)施例1.
管花肉蓯蓉藥材10kg，切成飲片，加8倍量水浸泡1小時(shí)后煎煮提取2小時(shí)，濾過，濾液備用。藥渣再加6倍量水煎煮提取2次，每次1小時(shí)，濾過。合并三次濾液，減壓濃縮至比重1.10(50℃)，加乙醇至含醇量達(dá)60％，冷藏12小時(shí)，傾出上清液，將殘留的懸濁液過濾，合并上清液和濾液，回收乙醇并減壓濃縮至比重1.10(50℃)，得提取浸膏5.6kg。
實(shí)施例2.
管花肉蓯蓉藥材10kg，粉碎成粉末，加15倍量水浸泡2小時(shí)后煎煮提取3小時(shí)，濾過，濾液備用。藥渣再加12倍量水，煎煮提取4次，每次2小時(shí)，濾過。合并濾液，減壓濃縮至比重1.25(50℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，冷藏24小時(shí)，傾出上清液，將殘留的懸濁液過濾，合并上清液和濾液，回收乙醇并減壓濃縮至比重1.25(50℃)，得提取浸膏7.2kg。
實(shí)施例3.
管花肉蓯蓉藥材10kg，切成飲片，加7倍量水浸泡3小時(shí)后煎煮提取4小時(shí)，濾過，濾液備用。藥渣再加5倍量水，煎煮提取4次，每次4小時(shí)，濾過。合并濾液，減壓濃縮至比重1.05(50℃)，加100％乙醇至含醇量達(dá)50％，冷藏10小時(shí)，傾出上清液，將殘留的懸濁液過濾，合并上清液和濾液，回收乙醇并減壓濃縮至比重1.10(50℃)，得提取浸膏6.5kg。
實(shí)施例4.
管花肉蓯蓉藥材10kg，粉碎成粉末，加4倍量40％乙醇浸泡3小時(shí)后回流提取4小時(shí)，濾過，濾液備用。藥渣再加4倍量40％乙醇，回流提取4次，每次4小時(shí)，濾過。合并濾液，減壓濃縮至比重1.05(50℃)，得提取浸膏6.2kg。
純化方法實(shí)施例5.
將提取浸膏6kg加0.5倍量水加熱溶解，徐徐注入已處理好的D-101型大孔吸附樹脂柱內(nèi)，先用水洗脫，收集藥材2倍量水洗脫液備用；再用20％乙醇洗脫，收集藥材2倍量20％乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱中，先用藥材2倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用20％乙醇洗脫，收集藥材2倍量20％乙醇洗脫液備用。合并2次20％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得含有苯乙醇苷的制劑865g。
以高效液相色譜法測定松果菊苷及類葉升麻苷的含量的測定固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠；甲醇-0.15％醋酸(30∶70)為流動相，流速1ml/分鐘，檢測波長333nm。
精密稱取60℃減壓干燥24小時(shí)的松果菊苷和類葉升麻苷對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備是取前述含有苯乙醇苷的制劑50mg，置于25ml量瓶中，加50％甲醇適量，超音波處理使溶解，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置于10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，用0.45μm濾膜濾得過供試品溶液。
分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定松果菊苷及類葉升麻苷的色譜峰的峰面積，采用峰面積計(jì)算即得。松果菊苷的含量經(jīng)計(jì)算為37.5重量％，及類葉升麻苷的含量經(jīng)計(jì)算為6.7重量％。
實(shí)施例6.
將提取浸膏6kg加5倍量水加熱溶解，徐徐注入已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內(nèi)，先用水洗脫，收集藥材8倍量水洗脫液備用；再用60％乙醇洗脫，收集藥材8倍量60％乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用60％乙醇洗脫，收集藥材7倍量60％乙醇洗脫液備用。合并2次60％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得含有苯乙醇苷的制劑1203g。采用實(shí)施例6的方法測定該制劑的松果菊苷及類葉升麻苷的含量，它們分別為48.6重量％及11.8重量％。
實(shí)施例7.
將提取浸膏6kg加3倍量水加熱溶解，徐徐注入已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內(nèi)，先用水洗脫，收集藥材8倍量水洗脫液備用；再用95％乙醇洗脫，收集藥材8倍量95％乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用95％乙醇洗脫，收集藥材8倍量95％乙醇洗脫液備用。合并2次95％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得含有苯乙醇苷的制劑1260g。采用實(shí)施例6的方法測定該制劑的松果菊苷及類葉升麻苷的含量，它們分別為41.3重量％及7.4重量％。
實(shí)施例8.
將提取浸膏6kg加1倍量水加熱溶解，徐徐注入已處理好的大孔吸附樹脂柱內(nèi)，先用水洗脫，收集藥材4倍量水洗脫液備用；再用40％乙醇洗脫，收集藥材5倍量40％乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱中，先用藥材3倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用40％乙醇洗脫，收集藥材4倍量40％乙醇洗脫液備用。合并2次40％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得含有苯乙醇苷的制劑1107g。采用實(shí)施例6的方法測定該制劑的松果菊苷及類葉升麻苷的含量，它們分別為31.7重量％及6.1重量％。
藥理作用實(shí)施例9.
含有苯乙醇苷的制劑對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響試驗(yàn)LACA系小鼠，采用水迷宮實(shí)驗(yàn)，以吡拉西坦片(腦復(fù)康)為陽性對照藥每周測定6天，共測27天。
結(jié)果各給藥組與對照組小鼠逐日水迷宮測定反應(yīng)時(shí)間d值結(jié)果總結(jié)于表2。
表2含有苯乙醇苷的制劑經(jīng)口給藥27天對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響d值(n＝27)試驗(yàn) 比較組別 ≥0.5 ≥0.8 ≥0.5合計(jì)天％ 天 ％天％第一 對照組—含有苯乙醇苷的制 414.8 5 18.5 933.3次 劑50mg/kg組對照組—含有苯乙醇苷的制 10 37.0 3 11.1 13 48.2劑200mg/kg組對照組—含有苯乙醇苷的制 00 27 100.0 27 100.0第二 劑400mg/kg組次對照組—腦復(fù)康400mg/kg518.5 2 7.4725.5組腦復(fù)康組—含有苯乙醇苷的 725.9 16 59.3 23 85.2制劑400mg/kg組從表2可見，經(jīng)口服給予小鼠不同劑量含有苯乙醇苷的制劑，各劑量組與對照組的反應(yīng)時(shí)間比較，總趨勢呈含有苯乙醇苷的制劑各劑量組的反應(yīng)時(shí)間短于對照組的天數(shù)，隨含有苯乙醇苷的制劑劑量增加，反應(yīng)時(shí)間呈興奮作用的天數(shù)(反應(yīng)時(shí)間縮短)也增多。在27天測定中，根據(jù)d值分析有顯著性差異的天數(shù)，含有苯乙醇苷的制劑50mg/kg組有9天，200mg/kg組有13天，400mg/kg組有27天。顯示隨含有苯乙醇苷的制劑劑量增加，呈反應(yīng)時(shí)間興奮作用的天數(shù)明顯增加的劑量依賴關(guān)系。腦復(fù)康400mg/kg組與對照組比較呈興奮作用的天數(shù)為7天。與等劑量含有苯乙醇苷的制劑比較明顯少于含有苯乙醇苷的制劑組，表明含有苯乙醇苷的制劑組對小鼠學(xué)習(xí)記憶的興奮作用明顯強(qiáng)于腦復(fù)康組。
實(shí)施例10.
含有苯乙醇苷的制劑對乙醇誘導(dǎo)小鼠記憶再現(xiàn)缺失的保護(hù)作用受試藥物與對照藥同實(shí)施例7。LACA系小鼠，采用水迷宮實(shí)驗(yàn)方法。
各組經(jīng)口分別給藥，于給藥后1小時(shí)，經(jīng)口給予30％乙醇0.1ml/10gBW。給乙醇后30分鐘，進(jìn)行水迷宮測定。
各組小鼠經(jīng)訓(xùn)練后到達(dá)目標(biāo)的游泳時(shí)間，給予乙醇30分鐘后到達(dá)目標(biāo)游泳時(shí)間，以及錯(cuò)誤出現(xiàn)次數(shù)、只數(shù)試驗(yàn)結(jié)果整理見表3。
表3含有苯乙醇苷的制劑經(jīng)口給藥1周對乙醇誘導(dǎo)LACA系雄鼠記憶再現(xiàn)缺失的保護(hù)作用

t檢驗(yàn)與對照組比較##P＜0.01，與200mg/kg組比較*P＜0.05x2檢驗(yàn)與對照組比較ΔΔP＜0.01從表4可見，含有苯乙醇苷的制劑各組及腦復(fù)康組給予乙醇后到達(dá)目標(biāo)反應(yīng)時(shí)間較對照組時(shí)間短，較未給乙醇明顯延長。但僅含有苯乙醇苷的制劑200mg/kg組與對照組間差異有顯著性(P＜0.01)，而且含有苯乙醇苷的制劑50mg/kg組與200mg/kg組間差異有顯著性(P＜0.05)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系。而含有苯乙醇苷的制劑400mg/kg組和腦復(fù)康組與對照組間差異無顯著性。表明含有苯乙醇苷的制劑在200mg/kg劑量經(jīng)口給藥，對乙醇誘導(dǎo)記憶再現(xiàn)缺失有明顯保護(hù)作用。含有苯乙醇苷的制劑其它劑量組和腦復(fù)康組雖然到達(dá)目標(biāo)時(shí)間反應(yīng)短于對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，保護(hù)作用不明顯。另外，從乙醇誘導(dǎo)后，水迷宮測定小鼠出現(xiàn)錯(cuò)誤次數(shù)和出現(xiàn)錯(cuò)誤的動物數(shù)，也顯示含有苯乙醇苷的制劑200mg/kg組具有明顯保護(hù)乙醇誘導(dǎo)小鼠記憶再現(xiàn)缺失作用。其余給藥組雖然錯(cuò)誤次數(shù)或只數(shù)略少于對照組，但保護(hù)作用不明顯，與對照組間差異無顯著性。
實(shí)施例11含有苯乙醇苷的制劑對東莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙的影響(1)藥品與動物受試藥物和對照藥同實(shí)施例9。采用小鼠跳臺訓(xùn)練和測試方法，隨機(jī)分為正常對照組、模型組、吡拉西坦600mg/kg組和含有苯乙醇苷的制劑400，200，100mg/kg組，每組15只。以0.2ml/10g體重的體積灌胃給藥，正常對照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水，每日一次。在連續(xù)給藥至29天時(shí)進(jìn)行訓(xùn)練，訓(xùn)練前1h給藥，訓(xùn)練前15min除正常對照組外各組腹腔注射東莨菪堿1mg/kg。第30天進(jìn)行測試，并于測試前1h給藥。結(jié)果見表4。
從表4可見，給予東莨菪堿后，和正常對照組比較小鼠跳臺試驗(yàn)的測試潛伏期縮短，測試錯(cuò)誤次數(shù)增多。與模型組比較，吡拉西坦600mg/kg，含有苯乙醇苷的制劑400，200mg/kg能明顯延長測試潛伏期，減少測試錯(cuò)誤次數(shù)，有明顯的改善記憶作用。含有苯乙醇苷的制劑100mg/kg能明顯延長測試潛伏期，但測試錯(cuò)誤次數(shù)與模型組比較無顯著差異。
表4含有苯乙醇苷的制劑對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙的影響(X±SD)組別 劑量 動物數(shù) 測試潛伏期 測試錯(cuò)誤次數(shù)(mg/kg) (只) (S) (次/5min)正常對照1 4(1) 194.1±101.5*1.36±1.45*模型組1567.1±78.4 3.13±2.47吡拉西坦600 15144.5±117.4*1.60±1.10*制劑400 12(3) 206.1±98.8**1.08±1.16**200 12(3) 183.2±115.2** 1.42±1.38*100 14(1) 191.8±117.5** 1.50±2.07與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；括號中數(shù)字為電擊死亡數(shù)。
實(shí)施例12.
含有苯乙醇苷的制劑對大鼠動—靜脈旁路血栓形成的影響雄性SD大鼠，以阿斯匹林腸溶片為對照，以下述方程計(jì)算，結(jié)果見表5。血栓抑制率(％)＝(蒸餾水對照組血栓重—用藥組血栓重)/蒸餾水對照組血栓重×100％與蒸餾水對照組比較，含有苯乙醇苷的制劑200，100mg/kg灌胃給藥能抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，抑制率分別為16.04％和19.60％，但均明顯弱于100mg/kg阿斯匹林的作用，其抑制率達(dá)34.97％。含有苯乙醇苷的制劑50mg/kg對大鼠動靜脈旁路血栓形成無影響。
表5含有苯乙醇苷的制劑灌胃給藥對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響組別 劑量 動物數(shù) 血栓濕重 血栓抑制率(mg/kg) (只) (mg，x±SD)(％)蒸餾水 1044.9±3.83阿斯匹林 100 1029.2±4.00** 34.97制劑 200 1037.7±7.42*16.04100 1036.1±5.16*19.6050 1042.6±7.12 5.12與蒸餾水對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01。
實(shí)施例13.
苯乙醇總苷對大鼠血小板聚集功能的影響二磷酸腺苷二鈉(ADP)，中科院上海生化東風(fēng)生化技術(shù)公司產(chǎn)品，批號為9305122，用前配成1mg/ml儲備液冰箱保存，用時(shí)以磷酸緩沖液稀釋3倍。
將雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為5組，分別為蒸餾水對照組、阿斯匹林100mg/kg、含有苯乙醇苷的制劑200，100和50mg/kg組，灌胃給藥，給藥體積為0.5mg/100g體重，對照組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥7天，末次給藥前禁食12小時(shí)，第7天給藥后1小時(shí)從腹主動脈抽取血液，以3.8％的枸櫞酸鈉(1∶9)抗凝，輕輕混勻后，以1000rpm離心3分鐘，吸出上層富含血小板血漿(PRP)，余血繼續(xù)在300rpm離心10min，上清為貧血小皮血漿(PPP)比濁管中加入200μl PRP，并以PPP調(diào)零點(diǎn)，預(yù)保溫5min后加入50μ1的ADP溶液誘尋血小板聚集，測定血小板聚集強(qiáng)度(SPA-4多功能血小板聚集儀，上?？七_(dá)測試儀器廠生產(chǎn))，計(jì)算血小板聚集抑制率。
和蒸餾水對照組比較，含有苯乙醇苷的制劑200，100和50mg/kg灌胃給藥均能抑制ADP誘尋的大鼠血小板聚集，以200mg/kg組的抑制率最高，達(dá)到59.48％，見表6。
表6含有苯乙醇苷的制劑灌胃給藥對大鼠血小板聚集功能的影響組別 劑量 動物數(shù) 血小板最大聚集(％) 血小板聚集抑制率(mg/kg) (只) (*±SD) (％)蒸餾水10 54.82±7.88阿斯匹林 100 11 32.73±11.14**40.30制劑 200 10 22.21±6.23** 59.48100 11 34.54±15.69* 36.9950 10 31.65±12.81**42.26與蒸餾水對照組比較*p＜0.01，**p＜0.001。
權(quán)利要求
1.一種從管花肉蓯蓉獲得的含有苯乙醇苷的制劑，包含10-70％松果菊苷(echinacoside)及1-40％類葉升麻苷(acteoside)，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
2.如權(quán)利要求1所述的制劑，其包含25-70％松果菊苷(echinacoside)及5-40％類葉升麻苷(acteoside)，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
3.如權(quán)利要求1所述的制劑，其中該管花肉蓯蓉包含管花肉蓯蓉的肉質(zhì)莖。
4.如權(quán)利要求1所述的制劑，其進(jìn)一步包含2′-乙?；惾~升麻苷(2’-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、管花肉蓯蓉苷A(cistantubuloside A)、B1、B2、C1、C2、crenatoside、去咖啡酰基類葉升麻苷(decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷(isoacteoside)、紅景天苷(rhodioloside)、syringalide A3′-α-L-rhamnopyranoside和管花苷A(tubuloside A)，它們于該制劑的含量均低于5％，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。
5.一種從管花肉蓯蓉制備一含有苯乙醇苷的制劑的方法，包含下列步驟a)將管花肉蓯蓉的地下部分以一第一極性溶劑加予萃取；b)將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上；c)用第二極性溶劑作為流動相流洗液洗脫該柱以除去游離的化合物，而實(shí)質(zhì)上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在聚合物上；以及d)用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，該第三極性溶劑與第二極性溶劑相比極性較低。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其中的步驟a)的管花肉蓯蓉的地下部分為其肉質(zhì)莖。
7.如權(quán)利要求5的制備方法，其中的步驟a)的萃取包含將管花肉蓯蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合物煮沸0.5-10小時(shí)，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份作為萃取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏(extract)作為萃取物。
8.如權(quán)利要求7的制備方法，其中步驟a)的第一極性溶劑為水，或水與乙醇的混合溶劑。
9.如權(quán)利要求5的制備方法，其中步驟b)的聚合物由交聯(lián)聚芳族物質(zhì)組成。
10.如權(quán)利要求9的制備方法，其中該聚合物由交聯(lián)的聚苯乙烯，或交聯(lián)的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所組成。
11.如權(quán)利要求5的制備方法，其中的步驟c)的第二極性溶劑為水，步驟d)的第三極性溶劑包含甲醇，乙醇，水與甲醇的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑。
12.如權(quán)利要求11的制備方法，其中該第三極性溶劑為水與乙醇的混合溶劑。
13.如權(quán)利要求5的制備方法，其還包含除去步驟d)的含有苯乙醇苷的洗脫液中的溶劑以得到干燥產(chǎn)物。
14.一種用于抗老年癡呆癥的醫(yī)藥組合物，包含一抗老年癡呆癥治療有效量作為有效成分的權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的含有苯乙醇苷的制劑；及與該有效成分共同使用的醫(yī)藥容許載體或稀釋劑。
15.一種用于抑制血小板聚集的醫(yī)藥組合物，包含一抑制血小板聚集有效量作為有效成分的權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的含有苯乙醇苷的制劑；及與該有效成分共同使用的醫(yī)藥容許載體或稀釋劑。
16.一種權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的含有苯乙醇苷的制劑作為活性成分在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。
17.一種權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的含有苯乙醇苷的制劑作為活性成分在制備抑制血小板聚集藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種從管花肉蓯蓉獲得的含有苯乙醇苷的制劑，包含10－70％松果菊苷(echinacoside)及1－40％類葉升麻苷(acteoside)，以該制劑的重量為基準(zhǔn)。本發(fā)明的制劑可作為活性成分在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用，及作為活性成分在制備抑制血小板聚集藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/7028GK1526400SQ0311920
公開日2004年9月8日 申請日期2003年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月4日
發(fā)明者屠鵬飛, 宋志宏, 雷麗 申請人:杭州天力藥業(yè)有限公司