專利名稱：通塞脈浸膏在制備治療腦中風藥物中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的用途，具體地說是涉及一種用中草藥為原料制備的通塞脈浸膏在治療腦中風藥物中的應用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的中藥通塞脈浸片是由當歸、牛膝、黃芪、、黨參、金銀花、石斛、玄參、甘草八味中藥，每味中草藥用量為400～500克，按上述用量配比，用常規(guī)的中藥制備工藝制取。其方法將上述八味藥材加水煎煮兩次，第一次煎煮1～2小時，第二次煎煮1～2小時，將兩次煎液合并，靜置，取上清液濃縮成相對密度為1.2左右的稠膏，加乙醇使含醇量達60～70％，攪勻，靜置，回收乙醇并濃縮成稠膏即得到浸膏，再經(jīng)過干燥、粉碎、過篩、制粉、壓片、包衣制成片劑。
通塞脈片具有培補氣血，養(yǎng)陰清熱，活血化瘀，通經(jīng)活絡之功效。臨床常用于治療血栓閉塞性脈管炎(脫疽)的毒熱癥。
血栓閉塞性脈管炎是慢性頑固性周圍血管疾病，確切的病因尚未完全了解。建國以來我國以中西醫(yī)結(jié)合、中醫(yī)中藥為主治療，取得了較好的效果，高位截肢率一般為2.5～9.5％。江蘇省中醫(yī)研究所等單位，于1962年開始，以中西醫(yī)結(jié)合、辨證論治的方法治療，先后經(jīng)過三次總結(jié)以顧步湯為基礎，篩選制成“通塞脈片”進行臨床觀察，從1976年至1982年共治療135例，顯效率95.6％，總有效率97.8％，高位截肢率0.74％。對84例患者進行了1～4年的隨訪觀察，優(yōu)良率為66.6％。此外，從實驗研究中提示“通塞脈片”具有一定的擴張血管、促進血液循環(huán)、降低血液凝固度等作用，135例應用結(jié)果未發(fā)現(xiàn)明顯的副作用。經(jīng)1982年江蘇省衛(wèi)生廳等單位鑒定意見與會者認為“通塞脈片”，是治療血栓閉塞性脈管炎的一種有效藥物，建議批量生產(chǎn)以滿足臨床需要。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明目的在于提供通塞脈浸膏的新用途，即在制藥中的新應用，具體地說是涉及通塞脈浸膏在制備治療腦中風藥物中的應用。
2、技術(shù)方案通塞脈浸膏的制備方法，其步驟如下(1)稱取下列中藥材作原料當歸 400～500g 牛膝 400～500g 黃芪 400～500g 黨參400～500g金銀花 400～500g 石斛 400～500g 玄參 400～500g 甘草400～500g(2)加水煎煮兩次，煎液合并，靜置；(3)取上清液濃縮成相對密度為1.2左右的稠膏；(4)用乙醇進行醇沉，攪勻，靜置，將上清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮成浸膏。
用通塞脈浸膏可以制成如下的各種劑型，其工藝方法步驟是a.片劑通塞脈浸膏→干燥→粉碎→過篩→制?！鷫浩耣.膠囊劑通塞脈浸膏→干燥→粉碎→過篩→裝膠囊c.顆粒劑通塞脈浸膏→干燥→粉碎→過篩→制粒d.軟膠囊劑通塞脈浸膏→干燥→粉碎→過篩→制丸→干燥e.口服液通塞脈浸膏→配液→過濾→灌裝→滅菌f.注射液通塞脈浸膏→醇沉→離心→配液→過濾→灌裝→滅菌為了更好的理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用通塞脈浸膏的動物實驗結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
A.對大鼠大腦中動脈阻斷的保護作用通塞脈浸膏對大鼠大腦中動脈阻斷所致的神經(jīng)行為學評分有改善作用；可明顯降低腦梗塞率、腦指數(shù)、腦含水量；降低MDA及蛋白含量，提高SOD活性；病理組織學檢查提示，通塞脈浸膏對大腦中動脈阻斷所致?lián)p傷具有明顯保護作用。
B.對插線法所致大腦中動脈缺血再灌注大鼠的保護作用通塞脈浸膏可提高缺血再灌注損傷大鼠的存活率；可改善動物的神經(jīng)行為學評分，明顯降低動物的腦梗塞率、腦指數(shù)、腦含水量；組織病理學檢查提示，對缺血再灌注所致的組織病理學損傷具有明顯保護作用。
C.對急性實驗性不完全性腦缺血小鼠的保護作用通塞脈浸膏可延長急性腦缺血的小鼠存活時間。
D.對急性微循環(huán)障礙家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的影響通塞脈浸膏對高分子右旋糖酐所致家兔急性微循環(huán)障礙具有明顯的對抗作用，縮短線粒流時間；加快血流速度。提示通塞脈浸膏能減輕家兔急性微循環(huán)障礙，具有改善微循環(huán)的作用。
E.對麻醉犬血流動力學及對麻醉犬腦循環(huán)的影響通塞脈浸膏可以降低總外周血管及腦血管阻力，在不增加心臟負擔的前提下，增加腦血流量，從而為腦部提供充分的血液供應。
3、有益效果從以上動物實驗的結(jié)果，可以得出本發(fā)明的優(yōu)點在于(1)本發(fā)明對已知通塞脈浸膏拓寬了新的醫(yī)療用途，具體來說，是在制備治療腦中風藥物中的應用。
(2)通塞脈浸膏安全無毒，藥理作用強，有著很好的藥用前景。
(3)通塞脈浸膏能改善梗塞后的神經(jīng)行為障礙，縮小梗塞面積；降低缺血大腦的腫脹程度；增加心搏出量，心搏指數(shù)及腦血流量；改善微循環(huán)及血液流變量等功能。
(4)本發(fā)明的藥物原料來源豐富，制備工藝簡單并可以制成各種不同劑型，使用方便。
具體實施例方式
實施例1通塞脈浸膏的制備方法(1)稱取下列中藥材作原料當歸 480g 牛膝 480g 黃芪 480g 黨參 480g金銀花 480g 石斛 480g 玄參 480g 甘草 480g(2)加水覆蓋藥材面10cm左右，煎煮兩次，第一次煎煮1.5小時，第二次煎煮1小時，將兩次煎液合并，靜置；(3)取上清液濃縮成相對密度為1.25左右的稠膏；(4)用95％的乙醇進行醇沉，使含醇量達60％，攪勻，靜置，將上清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮成浸膏。
實施例2對大鼠大腦中動脈阻斷的保護作用1、實驗方法取SD雄性大鼠108只，體重250～350g，隨機分為6組，即假手術(shù)組、模型組(以上兩組給予等容積的蒸餾水)、陽性藥物組(尼莫地平20mg/kg)、通塞脈浸膏I(2.10g/kg)、II(4.20g/kg)、III(8.40g/kg)3個劑量組，動物分為2批，第一批每組10只，檢測梗塞率、腦含水量及腦指數(shù)；第二批每組8只，檢測SOD、MDA、NOS、蛋白含量及組織學檢查。各組口服給藥，每天1次，連續(xù)給藥五天，給藥容積為10ml/kg，于末次給藥0.5h后，以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，以側(cè)臥位沿右外耳道與右眼外眥連線的中點，垂直于連線切開皮膚約2cm，剪開筋膜，鈍性分離肌肉，暴露出顴弓。用止血鉗咬斷顴弓，將顴弓和下頜骨撐開，用小拉鉤拉住固定于鼠板上，暴露鱗狀骨的大部分，然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2～4mm處用臺式電車鉆孔，開一直徑約2mm的小顱窗，此時透過硬腦膜就可見一條較直且少分支的小血管，即為大腦中動脈(MCA)。它幾乎垂直路過嗅束向上而行，用細針灸針刺破硬腦膜，暴露中動脈，確認后將電刀置雙極電凝位置，選擇最大檔電凝開關(guān)，除假手術(shù)組不做電凝術(shù)外，其余各組動物電凝嗅束內(nèi)1mm至大腦下靜脈之間的一段大腦中動脈，電凝4～6秒，電凝時避免出血及傷害腦組織，可用濕棉球保護。阻斷大腦中動脈后用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，然后逐層縫合傷口。以上過程均在室溫恒定(24～25℃)情況下進行，以利于評價腦缺血情況。MCAO后24小時斷頭取腦，肉眼進一步確證右側(cè)大腦中動脈已在嗅束與大腦下靜脈之間燒斷，且腦實質(zhì)無損害者，將腦置冰冷的生理鹽水中(2～3℃)10min，去除嗅球、小腦和低位腦干后，冠狀切四刀，切成五片。第一刀在腦前極與視交叉連線中間；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置5ml含有1％TTC的磷酸緩沖溶液中，避光溫孵30分鐘，其中每隔7～8分鐘翻動一次，經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。溫孵完畢后將腦片照相。
2、實驗觀測指標①大鼠局灶性腦缺血行為評分法待MCAO大鼠麻醉清醒后，進行行為學檢測。方法為在MCAO后4小時及24小時，進行行為學評分。
②TTC染色測量腦梗塞面積分離并稱重梗塞區(qū)域，求出梗塞區(qū)重量占腦重的百分比，即腦梗塞率。
③測定腦指數(shù)及腦含水量[4]MCAO后24小時斷頭取腦，稱濕重；106℃烘干至恒重，即干重，按下列公式計算腦指數(shù)和腦含水量。
腦指數(shù)＝腦濕重(g)/體重(100g)腦含水量(％)＝腦濕重(g)-腦干重(g)/腦濕重(g)×100％④組織學檢查MCAO后24小時斷頭取腦，冠狀切一刀，切成兩片，前片置10％甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色。鏡檢腦缺血的病理改變。
⑤對腦勻漿SOD活性、MDA、NOS及蛋白含量的影響MCAO后24小時斷頭取腦，冠狀切一刀，切成兩片，后片取固定位置腦片勻漿測定SOD活性(化學發(fā)光法)、MDA(TBA比色法)含量、NOS活性及蛋白含量(雙縮脲法)。
3、實驗結(jié)果行為學評分通塞脈浸膏4.2g/kg、8.4g/kg組動物的行為學評分均明顯低于模型組，差異顯著(P＜0.05).結(jié)果見表1。
對腦梗塞率的影響通塞脈浸膏4.2g/kg組、8.4g/kg組動物的腦梗塞率均明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計學處理，均呈顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。結(jié)果見表1。
對腦指數(shù)及含水量的影響通塞脈浸膏4.2/kg組、8.4g/kg組動物的腦含水量明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計學處理，均呈顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)果見表2。
對MCAO大鼠的腦組織的病變的改善作用通塞脈浸膏8.4g/kg組動物對神經(jīng)元變性有明顯的改善作用，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)果見表3。
對腦勻漿SOD活性、MDA含量及NOS活性的影響通塞脈浸膏8.4g/kg組升高SOD活性，降低蛋白含量及MDA含量，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表4。
組織學檢查假手術(shù)組本組所有腦組織均基本正常。皮層、海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清楚，無胞體固縮或腫脹，尼氏小體無減少或消失，神經(jīng)元數(shù)目未見減少，無軟化灶形成。模型組本組所有腦組織均見皮層神經(jīng)元因缺血而出現(xiàn)不同程度變性壞死，表現(xiàn)為皮層和/或海馬結(jié)構(gòu)模糊，胞體固縮，胞漿嗜酸性染色增強、核深染、核固縮、核溶解，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少；在白質(zhì)區(qū)可見多發(fā)性軟化灶形成，所有腦組織均有不同程度水腫，且多為中到重度。此外個別標本還見腦組織出血及炎細胞浸潤。尼莫地平組本組3例腦組織基本正常，余均見神經(jīng)元因缺血而出現(xiàn)的不同程度變性壞死以及腦水腫，但明顯輕于模型組。未見腦組織出血及炎細胞浸潤。通塞脈浸膏III組腦組織總體病變程度輕于模型組，但較尼莫地平略重。通塞脈浸膏II組腦組織總體病變程度較通塞脈浸膏III組為重，略輕于模型組，通塞脈浸膏I組腦組織病理學改變基本同給藥通塞脈浸膏II組。
表1通塞脈浸膏對MCAO大鼠行為學評分及腦梗塞率的影響(X±S)劑量 n行為學評分 腦梗塞率組別(g/kg) (只) 4h24h (％)假 手 術(shù) 組 -- 101.10±0.99 0.70±0.67 0.00±0.00模型組 -- 106.90±1.20△△7.40±0.97△△10.32±2.45△△尼 莫 地 平 組 20mg/kg 105.40±0.97**5.70±1.06**3.74±2.52**通 塞 脈浸膏I 2.10 9 6.44±1.24 7.00±1.41 8.69±2.26通 塞 脈浸膏II 4.20 9 5.67±1.10*6.22±1.20*7.82±2.68*通 塞 脈浸膏III 8.40 105.80±0.92*6.10±1.10*4.88±2.36**與假手術(shù)組比較△△P＜0.01。
與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表2通塞脈浸膏對MCAO大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響(X±S)劑量動物數(shù)組別腦指數(shù)(g/100g)腦含水量(％)(g/kg)(只)假 手 術(shù) 組 -- 100.52±0.04 79.12±2.67模型組 -- 100.57±0.03△81.37±1.48△尼 莫 地 平 組 20mg/kg 100.53±0.03*79.54±1.76*通 塞 脈 浸膏I 2.10 9 0.56±0.04 80.97±1.62通 塞 脈 浸膏II 4.20 9 0.54±0.04 79.83±1.25*通 塞 脈 浸膏III 8.40 100.54±0.03 79.78±1.16*與假手術(shù)組比較△P＜0.05。
與模型組比較*P＜0.05。
表3-1通塞脈浸膏對MCAO大鼠腦神經(jīng)細胞的保護作用
N 神經(jīng)細胞變性 神經(jīng)細胞壞死組別(只)-++++++P -++++++P假手術(shù)組 6 600 0 ＜0.01 60 0 0 ＜0.01模型組6 024 0 - 03 1 2 -通塞脈浸膏I組5 041 0 ＞0.05 05 0 0 ＞0.05通塞脈浸膏II組 6 113 1 ＞0.05 11 3 1 ＞0.05通塞脈浸膏Ⅲ組 8 251 0 ＜0.05 25 1 0 ＞0.05尼莫地平組 8 251 0 ＜0.05 35 0 0 ＜0.05注采用秩和檢驗，與模型組比較。
表3-2通塞脈浸膏對MCAO大鼠腦組織病變的保護作用N 軟化灶 腦水腫組別(只)- +++ +++ P -+ ++ +++ P假手術(shù)組6 600 0 ＜0.05 60 0 0 ＜0.01模型組 6 212 1 - 02 2 2 -通塞脈浸膏I 5 020 3 ＞0.05 03 2 0 ＞0.05通塞脈浸膏II 6 321 0 ＞0.05 30 3 0 ＞0.05通塞脈浸膏Ⅲ 8 701 0 ＞0.05 33 2 1 ＞0.05尼莫地平組 8 611 0 ＞0.05 34 1 0 ＜0.05注采用秩和檢驗，與模型組比較。表4通塞脈浸膏對腦勻漿SOD活性、MDA含量、NOS活性的影響(n＝8，X±S)劑量 SODMDANOS 蛋白含量組別(g/kg)(U/mgprot)(nmol/mgprot)(U/mgprot)(mgprot/ml)假手術(shù)組 -6.67±1.99 5.00±1.57 0.85±0.301.75±0.42模型組 -4.78±1.03△7.74±2.93△1.22±0.40△2.16±0.17△尼莫地平組 20mg/kg6.50±1.56*5.36±2.09*0.90±0.23*1.86±0.37*通塞脈浸膏I 2.10 4.75±0.78 6.30±1.37 1.04±0.360.92±0.39通塞脈浸膏II 4.20 5.59±1.65 6.01±2.54 0.92±0.392.10±0.52通塞脈浸膏III 8.40 6.62±2.02*5.38±1.86*0.89±0.371.82與假手術(shù)組比較△P＜0.05。
與模型組比較*p＜0.05。
實施例3對插線法所致大腦中動脈缺血再灌注大鼠的保護作用1、實驗方法(1)尼龍栓子的制備參考Zealonga方法，將一長40mm，直徑0.2mm的尼龍線的一端加熱為光滑的球形。用酒精擦干凈并于距球端18.5mm處標記，置于生理鹽水中備用。
(2)大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型的復制及分組取大鼠75只，隨機分為6組，除假手術(shù)組10只外，其余五組每組13只。即假手術(shù)組、模型組(以上兩組給予等容積的蒸餾水)、陽性藥物組(尼莫地平20mg/kg)、通塞脈浸膏I(2.10g/kg)、II(4.20g/kg)、III(8.40g/kg)3個劑量組。各組口服連續(xù)給藥五天，每天一次，每次給藥容積為10ml/kg，于末次給藥0.5h后，用10％水合氯醛(300mg/kg，ip)麻醉。仰臥于手術(shù)臺上，頸正中切開，分離左側(cè)頸總動脈(CCA)，頸外動脈(ECA)，頸內(nèi)動脈(ICA)，用0號線接扎并剪斷ECA的分支，分離ICA的顱外分支翼突腭動脈。夾閉CCA、ICA，將準備好的尼龍栓自ECA插入，經(jīng)CCA分叉處通過ICA入顱至大腦前動脈(ACA)，尼龍線插入深度約為18mm。再灌注時外拉尼龍線使其球端回至ECA內(nèi)即可恢復大腦中動脈的血供。假手術(shù)組不插尼龍線外其余步驟同上。
2、檢測指標觀察各項指標同實施例2。
3、實驗結(jié)果結(jié)果顯示通塞脈浸膏III、II兩組動物的存活率均為76.92％，較模型組69.23％高，經(jīng)統(tǒng)計學處理無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果見表5。
行為學評分4小時及24小時，通塞脈浸膏4.2g/kg、8.4g/kg組動物的行為學明顯低于模型組，差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表6。
對腦梗塞率的影響通塞脈浸膏組動物的腦梗塞率明顯低于模型組，差異顯著(P＜0.05)，結(jié)果見表6。
對腦指數(shù)及含水量的影響通塞脈浸膏8.4g/kg組動物的腦含水量明顯低于模型組，差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表7。
組織學檢查假手術(shù)組本組所有腦組織均基本正常。皮層、海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清楚，無胞體固縮或腫脹，尼氏小體無減少或消失，神經(jīng)元數(shù)目未見減少，無軟化灶形成。模型組本組所有腦組織均見皮層神經(jīng)元因缺血而出現(xiàn)不同程度變性壞死，表現(xiàn)為皮層和/或海馬結(jié)構(gòu)模糊，胞體固縮，胞漿嗜酸性染色增強、核深染、核固縮、核溶解，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少；在白質(zhì)區(qū)可見多發(fā)性軟化灶形成，所有腦組織均有不同程度水腫，且多為中到重度。此外個別標本還見腦組織出血及炎細胞浸潤。尼莫地平組本組1例腦組織基本正常，另1例見神經(jīng)元因缺血而出現(xiàn)的輕到中度變性壞死以及腦水腫，但明顯輕于模型組。未見腦組織出血及炎細胞浸潤。通塞脈浸膏III組腦組織總體病變程度輕于模型組，因缺血而出現(xiàn)變性壞死的神經(jīng)元較少，腦水腫較輕，但較尼莫地平略重。通塞脈浸膏II組腦組織總體病變程度輕于模型組，與通塞脈浸膏III組相當。通塞脈浸膏I組腦組織病理學改變基本同給藥通塞脈浸膏II組。
表5對缺血再灌注大鼠死亡率的影響(X2)劑量 動物數(shù)(只) 存活率組別(g/kg)總數(shù)死亡數(shù)(％)假 手 術(shù) 組 -- 100 100模型組 -- 134 69.23尼 莫 地 平 組20mg/kg133 76.92通塞脈浸膏 I 2.1 134 69.23通塞脈浸膏 II 4.2 133 76.92通塞脈浸膏 III 8.4 133 76.92本表采用卡方檢驗，p＞0.05表6通塞脈浸膏對缺血再灌注大鼠行為學評分及腦梗塞率的影響(n＝10，X±s)劑量 行為學評分腦梗塞率組別(g/kg) 4h 24h (％)假 手 術(shù) 組 -- 0.50±0.70 0.80±0.63 0.00±0.00模型組 -- 6.44±1.01△△6.89±1.05△△29.71±7.88△△尼 莫 地 平 組 20mg/kg 4.78±1.30**5.11±1.27**17.35±6.37**通塞脈浸膏 I 2.1 6.11±1.27 6.56±0.88 24.42±7.40通塞脈浸膏 II 4.2 5.40±0.97*6.00±1.15 22.26±7.10*通塞脈浸膏 III 8.4 5.20±0.92*5.70±1.06*21.10±7.25*與假手術(shù)組比較△△P＜0.01。與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表7通塞脈浸膏對缺血再灌注大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響(n＝10，X±s)劑量組別 腦指數(shù)(g/100g)腦含水量(％)(g/kg)假 手 術(shù) 組 -- 0.50±0.03 78.07±1.20模型組 -- 0.54±0.05△80.44±2.06△△尼 莫 地 平 組 20mg/kg 0.50±0.02* 78.75±0.93*通塞脈浸膏 I 2.1 0.53±0.03 79.90±1.41通塞脈浸膏 II 4.2 0.52±0.01 79.52±0.74通塞脈浸膏 III8.4 0.51±0.03 78.82±1.27*與假手術(shù)組比較△P＜0.05、△△P＜0.01。與模型組比較*P＜0.05。
實施例4對急性實驗性不完全性腦缺血小鼠的保護作用1、實驗方法取ICR小鼠75只，雌雄兼?zhèn)?，體重18～22g。隨機分為5組，即模型組(給予等容積的蒸餾水)、陽性藥物組(尼莫地平40mg/kg)、通塞脈浸膏I(4.2g/kg)、II(8.4g/kg)、III(16.8g/kg)3個劑量組共5組；各組口服給藥，每天1次，連續(xù)給藥五天，給藥容積為20ml/kg，于末次給藥0.5h后，仰臥位固定，用0號手術(shù)縫線兩端結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈(合并迷走神經(jīng))后中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時間。
2、實驗結(jié)果結(jié)果顯示，通塞脈浸膏16.8g/kg劑量組均能延長急性腦缺血的小鼠存活時間，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表8。
表8通塞脈浸膏對小鼠急性腦缺血的保護作用(X±SD)劑量動物數(shù)呼吸維持時間組別(g/kg)(只) (min)模型組 -151.97±0.62尼 莫 地 平 組 40mg/kg 154.02±2.64**通塞脈浸膏 I 4.2 152.33±0.90通塞脈浸膏 II 8.4 152.86±1.52通塞脈浸膏 III16.8 154.06±2.88*與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01實施例5通塞脈浸膏對家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的影響1、實驗方法取家兔30只，體重1.8-2.2kg，雌、雄兼用，隨機分為6組，每組5只。(1)正常對照組給予等體積的蒸餾水；(2)模型組給予等體積的蒸餾水；(3)丹參酮組0.6g·kg-1；(4)通塞脈浸膏I組0.35g·kg-1；(5)通塞脈浸膏II組0.70g·kg-1；(6)通塞脈浸膏III組1.40g·kg-1。ig給藥，連續(xù)給藥7d，各組灌胃容積均為5ml·kg-1。末次給藥后20min，iv 20％烏拉坦0.8g·kg-1麻醉，剪去眼睫毛，用膠布分開眼瞼，以WX彩色多部位微循環(huán)儀，觀察各組家兔正常左眼球結(jié)膜微循環(huán)，記錄細動脈和細靜脈口徑比、血液流速，然后自耳緣靜脈緩緩注入10％高分子右旋糖酐(平均分子量490000)生理鹽水溶液，造成急性微循環(huán)障礙，觀察10、20、30min家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)變化情況。
2、實驗結(jié)果由表910實驗結(jié)果表明，通塞脈浸膏1.40g.kg-1劑量組可使正常家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)血流明顯加快，通塞脈浸膏0.70g.kg-1、1.40g.kg-1劑量組可明顯降低V/A，與模型組比較，差異顯著(p＜0.05)；提示通塞脈浸膏對正常家兔具有活血作用。通塞脈浸膏各劑量組對高分子右旋糖酐所致家兔急性微循環(huán)障礙具有明顯的對抗作用，縮短線粒流時間，血流速度與造模前比較，略有減慢，統(tǒng)計學結(jié)果未見明顯差異；通塞脈浸膏各劑量組與造模后的模型組比較，血流速度明顯加快，經(jīng)統(tǒng)計學處理具有非常顯著差異(p＜0.05、p＜0.01)。提示通塞脈浸膏能減輕家兔急性微循環(huán)障礙，具有改善微循環(huán)的作用。表9通塞脈浸膏對家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的影響(X±S)組別動物數(shù) 劑量 V/A 血流速度(只) (g.kg-1)(um.s-1)正常對照組 5——1.52±0.23 870.47±95.77丹參酮組 50.6 1.22±0.08* 1039.68±105.57*通塞脈浸膏I組 50.35 1.48±0.24 910.66±40.29通塞脈浸膏II組 50.70 1.22±0.08* 1009.86±115.42通塞脈浸膏III組51.40 1.20±0.10* 1000.46±80.08*與正常對照組比較*p＜0.05表10通塞脈浸膏對家兔急性微循環(huán)障礙眼球結(jié)膜微循環(huán)的影響(X±S)組別 動物數(shù) 劑量血流速度(um.s-1)造模前 造模后(只) (g.kg-1) 10min 20min 30min模型組5 -- 870.47±95.77 809.23±90.29 775.72±86.68 772.79±87.11丹參酮組5 0.6 1039.68±105.57*977.23±128.27*896.08±114.32948.70±92.60*通塞脈浸膏I組 5 0.35 910.66±40.29 867.56±29.75 858.09±24.36 885.74±41.53*通塞脈浸膏II組 5 0.70 1009.86±115.4 909.97±59.29 933.40±80.90*968.38±94.86**通塞脈浸膏III組5 1.40 1000.46±80.08*963.67±963.67*958.48±42.17** 967.95±38.40**與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01實施例6對麻醉犬血流動力學的影響1、實驗方法家犬25只，體重為7-11Kg，雌雄兼用。分為5組空白對照組(給予等容積生理鹽水)、尼莫地平組(2.7mg/kg)、通塞脈浸膏I劑量組(0.8g/kg)、II劑量組(1.6g/kg)、通塞脈浸膏III劑量組(3.2g/kg)，各組給藥容積為2ml/kg。
用3％戊巴比妥鈉30mg/kg前肢皮下頭靜脈麻醉，背位固定于手術(shù)臺上，剪去頸部、胸部和左后肢內(nèi)側(cè)的毛。分離氣管并插入氣管插管；分離股靜脈插入靜脈插管，緩慢恒速輸入生理鹽水(約1ml/min)；分離股動脈插入動脈插管(管內(nèi)充滿500u/ml的肝素生理鹽水)，以測量動脈血壓。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，縫于胸壁，分離升主動脈根部和左冠狀動脈前降支，放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計探頭(12mm，2mm)，連接于電磁血流量計上測量心輸出量(CO)和冠脈流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部創(chuàng)口插入左心室內(nèi)，測量左室內(nèi)壓(LVSP)、左室舒張末期壓力(LVEDP)、室內(nèi)壓最大上升速率(LVdp/dtmax)；將針狀電極插入犬四肢皮下，記錄心電圖(ECG)。待穩(wěn)定后，用恒流泵經(jīng)股靜脈給藥(1ml/min)，直接記錄動脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均動脈壓(MAP)、心率(HR)、心輸出量(CO)、冠脈流量(CBF)，并于八道生理記錄儀上描記ECG、左室內(nèi)壓(LVSP)、LVdp/dtmax、LVEDP及動脈壓(BP)曲線。測量并計算給藥前后各時間段麻醉犬的BP(SAP、DAP、MAP)、HR、CO、CBF、LVSP、LVEDP、+dp/dtmax(心肌收縮參數(shù))、-dp/dtmax(心肌舒張參數(shù))、t～dp/dtmax(左室開始收縮至左室內(nèi)壓上升速率峰值時間)、SV(每搏輸出量)、CI(心臟指數(shù))、SI(心搏指數(shù))、LVWI(左室作功指數(shù))、TTI(總耗氧指數(shù))、TPVR(總外周血管阻力)。
2、實驗結(jié)果通塞脈浸膏通塞脈浸膏III劑量組能明顯降低血管總外周阻力(與生理鹽水組比較P＜0.05)，I、II劑量組則無明顯影響(與生理鹽水組比較P＞0.05)。通塞脈浸膏III、II兩個劑量組能明顯增加麻醉犬心搏出量和心搏指數(shù)，與生理鹽水對照組比較，差異顯著(P＜0.05)；I劑量組則無明顯影響(與生理鹽水組比較P＞0.05)。通塞脈浸膏三個劑量組對麻醉犬動脈收縮壓、舒張壓、心輸出量、心臟指數(shù)、心率、射血時間、總耗氧指數(shù)、左室內(nèi)壓、左室舒張末期壓、+dp/dtmax、-dp/dtmax、t-dp/dtmax以及左室做功指數(shù)均無顯著影響(與生理鹽水組比較，P＞0.05)。
實施例7對麻醉犬腦循環(huán)的影響1、實驗方法家犬25只，體重為7-11Kg，雌雄兼用。分為5組空白對照組(給予等容積生理鹽水)、尼莫地平組(2.7mg/kg)、通塞脈浸膏I劑量組(0.8g/kg)、II劑量組(1.6g/kg)、通塞脈浸膏III劑量組(3.2g/kg)，各組給藥容積為2ml/kg。
取家犬，用3％戊巴比妥鈉30mg/kg前肢皮下頭靜脈麻醉，背位固定于手術(shù)臺上，剪去頸部和左后肢內(nèi)側(cè)的毛。分離股靜脈插入靜脈插管，緩慢恒速輸入生理鹽水(約1ml/min)；分離股動脈插入動脈插管(管內(nèi)充滿500u/ml的肝素生理鹽水)，以測量動脈血壓。分離頸內(nèi)動脈和椎主動脈沿頸部正中線切口，沿氣管右部分離出右頸總動脈，以粗絲線提起頸總動脈并略向外牽引，沿頸總動脈向胸鎖乳突肌方向分離，以手指觸摸出頸部最下的橫突，在這一突出向中線1cm向下肢方向1.5cm有一凹陷，能觸摸到搏動明顯的動脈即為椎動脈，以小彎止血鉗椎將動脈與周圍結(jié)締組織分離，以左手手指為引導，以長止血鉗輕輕夾起椎動脈，并穿線，放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計探頭(1.5mm)，測量椎動脈血流量(VAF)；沿頸總動脈向頭端分離出在下頜深部進入顱內(nèi)之前的頸外動脈，并將其結(jié)扎，這時放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計探頭(2mm)，此時測得頸總動脈血流即為頸內(nèi)動脈血流量(ICBF)。實驗結(jié)束時，處死動物，開顱取出全腦稱重，將全腦重量除以2得一側(cè)腦重。按下列公式計算腦血流量(ICF)和腦血管阻力(ICR)，并采用組間t檢驗法進行統(tǒng)計學比較。 /100g·min) 2、試驗結(jié)果通塞脈浸膏III、II劑量組能明顯降低麻醉犬腦血管阻力，增加麻醉犬腦血流量(與生理鹽水組比較，P＜0.05，P＜0.01)，I劑量組對麻醉犬腦血管阻力未見明顯影響(與生理鹽水組比較，P＞0.05)。
結(jié)果表明通塞脈浸膏三個劑量組對麻醉犬動脈收縮壓、舒張壓、平均動脈壓及心率均未見明顯影響(與生理鹽水組比較P＞0.05)。
表11 通塞脈浸膏對麻醉犬腦血管阻力(ICR)的影響(X±S)(n＝5)ICR(kPa·100g·min/ml)劑量組別 給藥后(min)(g/kg)給藥前30 45 60 90 120 150 1801.371.351.351.381.351.351.371.36生理鹽水組 --0.460.450.440.490.450.440.450.46-0.68 -0.600.76 -0.20 -0.600.63 -0.34變化率％2.484.167.776.933.592.593.621.161.080.930.850.910.991.111.12尼莫地平0.00270.100.110.080.080.050.050.080.07-6.74 -20.33 -26.57 -21.65 -14.81 -4.17 -3.41變化率％4.92* 2.88** 2.43** 2.80** 5.88** 8.97 10.061.011.00 1.011.021.021.02 1.03 1.02I劑量組0.80.250.23 0.220.190.180.18 0.19 0.21-1.03 1.510.69 -0.271.07 0.87 -0.87變化率％4.14 2.194.603.195.97 3.61 4.151.031.01 0.940.870.950.97 0.99 1.00II劑量組 1.60.190.18 0.170.120.170.19 0.20 0.21-1.47 -8.30 -13.87 -6.94 -5.27-3.71 -2.46變化率％8.00 9.2910.53 8.26* 7.27 5.22 5.891.061.00 0.900.890.900.96 1.00 1.04III劑量組 3.20.200.19 0.170.170.180.19 0.25 0.31-5.32 -14.67 -15.65 -15.22 -9.04-6.14 -2.67變化率％5.56 4.55** 6.38** 7.35* 3.58** 7.50 11.40與生理鹽水組比較*P＜0.05 **P＜0.01
表12 通塞脈浸膏對麻醉犬腦血流量(ICF)的影響(X±S)(n＝5)ICF(ml/100g·min)劑量組別 給藥后(min)(g/kg)給藥前304560 90 120 150 180103.34103.60102.50102.14102.10103.10102.02103.08生理鹽水組--±25.88±26.83 ±22.95 ±25.52 ±22.27 ±25.27 ±25.14 ±26.680.20 -0.25 -0.88 -0.23 -0.03 -0.91 -0.19變化率％±2.33±3.91±7.26±9.39 2.68 ±5.80±4.422013.08 2013.08 2013.08 2013.08 2013.08 2013.08 2013.08 2013.08尼莫地平 0.0027±30.47 ±30.47 ±30.47 ±30.47 ±30.47 30.47 ±30.47 ±30.471.64 11.92 14.3815.78 10.08 2.23 3.04變化率％ ±±±1.97 ±2.87**±9.30* ±3.36±4.442.01**2.77**128.96128.90128.34129.52128.92 128.14 126.52126.62I劑量組0.8±12.65 ±12.66 ±9.15±9.63±9.90 ±7.98 ±9.06±9.040.02 -0.19 0.93 -0.42 -0.39 -1.27 0.09變化率％±3.84±3.58±2.86±3.68 ±5.89 ±3.20±1.93129.68130.38135.34142.62132.20 131.62 131.76130.26II劑量組 1.6±22.09 ±24.56 ±25.26 ±23.96 ±24.56±25.13 ±24.13 ±23.000.35 4.26 10.27 1.82 1.20 1.43 0.33變化率％±3.56±3.67±5.97* ±2.99 ±3.52 ±1.77±1.54121.46125.66137.84137.10136.34 126.82 123.78124.12III劑量組 3.2±18.94 ±20.86 ±21.71 ±22.96 ±24.12±18.17 ±18.17 ±22.463.44 13.59 12.90 12.15 4.64 2.04 1.87變化率％±4.23±5.07** ±5.87* ±6.52*±3.55* ±2.79±5.29與生理鹽水組比較*P＜0.05結(jié)果表明通塞脈浸膏III、II劑量組能明顯降低麻醉犬腦血管阻力、增加麻醉犬腦血流量(與生理鹽水組比較，P＜0.05，P＜0.01)，I劑量組對麻醉犬腦血管阻力、腦血流量未見明顯影響(與生理鹽水組比較，P＞0.05)。
權(quán)利要求
1.由下述藥物原料制成的通塞脈浸膏在制備治療腦中風藥物中的應用當歸 400～500g 牛膝 400～500g 黃芪 400～500g 黨參 400～500g金銀花 400～500g 石斛 400～500g 玄參 400～500g 甘草 400～500g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通塞脈浸膏，其特征是該浸膏的制備方法如下(1)稱取上述八味中藥材的重量份作原料；(2)加水煎煮兩次，煎液合并，靜置；(3)取上清液濃縮成相對密度為1.2左右的稠膏；(4)用乙醇進行醇沉，攪勻，靜置，將上清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮成浸膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的通塞脈浸膏，其特征在于用該浸膏可以制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、口服液、注射溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及通塞脈浸膏在制藥領(lǐng)域的新用途，該浸膏由當歸、牛膝、黃芪、黨參、金銀花、石斛、玄參、甘草八味藥材，按中藥常規(guī)制備工藝方法制成，該藥物具有改善中風后的神經(jīng)行為障礙，縮小梗塞面積，降低缺血大腦的腫脹程度，增加心搏輸出量，心搏指數(shù)及腦血流量；改善微循環(huán)及血液流變量等功能，它是預防和治療腦中風的有效藥物，且具有良好的藥用前景。
文檔編號A61P9/10GK1442183SQ0311317
公開日2003年9月17日 申請日期2003年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月11日
發(fā)明者陳榮明, 殷書梅, 李吉峰 申請人:江蘇南中醫(yī)大藥業(yè)有限責任公司