專利名稱：復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的應(yīng)用的制作方法
專利說明復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的應(yīng)用 本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的應(yīng)用。肥大細(xì)胞脫顆粒是一復(fù)雜的生物化學(xué)過程，且受多種刺激影響。經(jīng)典理論認(rèn)為變應(yīng)原與肥大細(xì)胞表面的IgE分子橋聯(lián)后，使IgE分子發(fā)生變構(gòu)，后者改變了肥大細(xì)胞膜的能量代謝和通透性，并促進(jìn)細(xì)胞膜磷脂甲基化過程和鈣離子通道開放。細(xì)胞外液鈣離子的內(nèi)流可能通過腦漿內(nèi)微絲的活動(dòng)(細(xì)胞肌作用)導(dǎo)致顆粒圍膜與細(xì)胞膜的融合，并和顆粒圍膜間的相互融合一起，形成了連接細(xì)胞外液的復(fù)雜通路、顆粒物質(zhì)即藉此通路釋放，此種顆粒釋放方式組織學(xué)上稱為“胞吐”，它包括細(xì)胞和顆粒及其膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的生化過程。肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚、淋巴組織、子宮、膀胱以及呼吸道和消化道粘膜及粘膜下結(jié)締組織中毛細(xì)血管及淋巴管周圍。肥大細(xì)胞脫顆粒是很多機(jī)體病理反應(yīng)的原因之一，它與腫瘤發(fā)生、血脂清除、血管發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)功能、生殖系統(tǒng)的性周期變化、過敏反應(yīng)等都有不等程度的關(guān)系。肥大細(xì)胞不僅在過敏反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，而且在許多疾病的過程中表現(xiàn)出功能的多態(tài)性，如，炎癥反應(yīng)、細(xì)胞毒性作用、血管的生長與形成以及免疫調(diào)節(jié)作用等都有肥大細(xì)胞的參與。
丹參對缺血再灌注引起的微循環(huán)障礙有預(yù)防和治療作用。其作用機(jī)制包括保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、清除過氧化物、抑制白細(xì)胞與血管內(nèi)皮粘附、抑制肥大細(xì)胞脫顆粒、抑制細(xì)靜脈內(nèi)的白蛋白漏出等。丹參通過對微循環(huán)的多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)綜合作用，發(fā)揮了其預(yù)防和治療缺血再灌注引起的微循環(huán)障礙作用。然而，在心腦血管疾病的預(yù)防和需要長期治療時(shí)，丹參需靜脈給藥受到各方面因素的限制。如果口服的丹參制劑也能取得與靜脈給藥近似效果的話，對于預(yù)防和治療心腦血管疾病或其他微循環(huán)障礙性疾病將是非常有意義的。
經(jīng)過多年的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究，復(fù)方丹參滴丸的應(yīng)用范圍得到了很大的拓展，目前已證實(shí)具有以下方面的作用增加冠脈血流量，舒張血管平滑肌，促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的開放，提高靜脈竇血氧含量，明顯改善急性心肌缺血和梗塞；保護(hù)細(xì)胞免受缺氧及缺氧/復(fù)氧的損傷；對缺血心肌細(xì)胞再灌注心肌細(xì)胞壞死性變化有良好的保護(hù)作用；改善微循環(huán)；抗心律失常；抗血小板聚集，促進(jìn)纖溶，抗血栓形成；降低血液粘滯度，調(diào)節(jié)血脂，防止動(dòng)脈粥樣硬化；提高缺氧耐受力，抗脂質(zhì)過氧化，清除有害的自由基；降低血漿內(nèi)皮素的含量，顯著改善動(dòng)物的肝、腎和胰腺等臟器功能；阻止血管及神經(jīng)病變的發(fā)生發(fā)展；增強(qiáng)免疫；調(diào)節(jié)植物神經(jīng)平衡，等等，并應(yīng)用于相應(yīng)的有關(guān)疾病(中國專利CN1348815A)。目前，尚未見復(fù)方丹參滴丸抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的報(bào)道。雖然有復(fù)方丹參滴丸改善微循環(huán)方面的報(bào)道，但微循環(huán)的改善是結(jié)果，并未詳細(xì)說明是通過哪一個(gè)或幾個(gè)環(huán)節(jié)或靶點(diǎn)的作用而使微循環(huán)改善，亦未見復(fù)方丹參滴丸抑制肥大細(xì)胞脫顆粒而改善微循環(huán)的報(bào)道。本發(fā)明的目的是提供復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的新用途。
本發(fā)明研究顯示在缺血再灌注30分鐘觀察結(jié)束后，用0.1％的toluidine blue(甲苯胺藍(lán))對腸系膜肥大細(xì)胞進(jìn)行活體染色，可見復(fù)方丹參滴丸經(jīng)口給藥可以抑制由缺血再灌注引起的肥大細(xì)胞脫顆粒，并且復(fù)方丹參滴丸的口服作用與丹參靜脈給藥的作用幾乎相同。因此，復(fù)方丹參滴丸可治療因肥大細(xì)胞脫顆粒所致的疾病。
缺血再灌注產(chǎn)生的過氧化物損傷血管內(nèi)皮和血管基膜，促使白蛋白外漏，肥大細(xì)胞脫顆粒釋放的血管活性物質(zhì)更加劇了白蛋白外漏。白蛋白外漏和肥大細(xì)胞脫顆粒是微循環(huán)障礙的重要標(biāo)志之一。另外，復(fù)方丹參滴丸具有服用和攜帶方便，可以長期服用等優(yōu)點(diǎn)，所以，復(fù)方丹參滴丸可作為預(yù)防和治療微循環(huán)障礙性疾病的理想藥物。

圖1復(fù)方丹參滴丸預(yù)給藥在缺血再灌注后30分鐘時(shí)大鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒率。
圖2復(fù)方丹參滴丸后給藥在缺血再灌注后30分鐘時(shí)大鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒率。下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做一步說明，下述各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而并非對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例一 復(fù)方丹參滴丸在缺血再灌注前給藥對大鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用(一)實(shí)驗(yàn)方法1.試驗(yàn)組和對照組
(1)正常對照組不進(jìn)行缺血再灌注處理。
(2)缺血再灌注組經(jīng)10分鐘基礎(chǔ)觀察之后，用4G聚乙稀管將還流于觀察部的腸系膜動(dòng)靜脈血管同時(shí)結(jié)扎10分鐘(缺血)，解除結(jié)扎(再灌注)。將時(shí)間記錄儀調(diào)至0處。在同一視野連續(xù)觀察30分鐘。
(3)復(fù)方丹參滴丸給藥組在缺血再灌注60分鐘前，按0.4g/kg的給藥量，將復(fù)方丹參滴丸用生理鹽水溶解，一次性灌胃。
(4)丹參靜脈給藥組在缺血再灌注10分鐘前，經(jīng)頸靜脈緩慢推注丹參注射液1ml(1g丹參提取物/ml)，再用連續(xù)推注器按每小時(shí)1.2g/kg的給藥量，經(jīng)頸靜脈連續(xù)注入丹參注射劑至觀察結(jié)束。
2.實(shí)驗(yàn)方法取日本慶應(yīng)義塾大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)的Wistar雄性大鼠(體重200～250g，Charles River實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，東京)，按30mg/kg的劑量腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。從右側(cè)頸靜脈插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中線作2～3cm切口，輕柔地把近回盲部的回腸移至腹腔外，將腸系膜在附有薄玻片的臺(tái)板上展開。為維持溫度和濕度，在展開的腸系膜的表面持續(xù)滴加37℃的Krebs-Ringer緩沖液。腸系膜微循環(huán)的動(dòng)態(tài)，用置于37℃恒溫槽內(nèi)的倒置生物顯微鏡(Diaphot TMD-2S，Nikon，東京)觀察，并用高感度攝像機(jī)攝像，S-VHS錄像機(jī)錄像。
選直徑在25～40μm之間的細(xì)靜脈非分支部(長200μm以上)為觀察部位。經(jīng)10分鐘基礎(chǔ)觀察之后，用4G聚乙烯管將觀察部的腸系膜動(dòng)靜脈血管同時(shí)結(jié)扎10分鐘(缺血)，解除結(jié)扎(再灌注)，將時(shí)間記錄儀調(diào)至0處。在同一視野連續(xù)觀察30分鐘。
3.測定方法腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒率計(jì)數(shù)缺血再灌注30分觀察結(jié)束后，將0.1％的toluidineblue滴加于腸系膜表面，1分鐘之后，用生理鹽水緩慢地沖洗腸系膜表面。用連接于倒置生物顯微鏡的高感度攝影系統(tǒng)，沿觀察的血管記錄5個(gè)視野，計(jì)數(shù)脫顆粒和未脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)，用脫顆粒的肥大細(xì)胞占計(jì)數(shù)的肥大細(xì)胞總數(shù)的百分比來表示肥大細(xì)胞脫顆粒率。
每組6只大鼠的各測定值用one-way analysis of variance(ANOVA)處理，F(xiàn)isher’spost hoc test檢驗(yàn)。各組數(shù)值用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，設(shè)P＜0.05為有顯著意義。
(二)結(jié) 果圖1顯示復(fù)方丹參滴丸和丹參靜脈給藥對缺血再灌注后大鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用。缺血再灌注30分鐘之后，腸系膜細(xì)靜脈周圍的肥大細(xì)胞脫顆粒率與正常對照組相比顯著增加。而復(fù)方丹參滴丸經(jīng)口給藥組和丹參靜脈給藥組的肥大細(xì)胞脫顆粒率與缺血再灌注組相比顯著減少，其作用相同。
實(shí)施例二 復(fù)方丹參滴丸在缺血再灌注后給藥對大鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用(一)實(shí)驗(yàn)方法1.試驗(yàn)組和對照組(1)正常對照組不進(jìn)行缺血再灌注處理。
(2)復(fù)方丹參滴丸給藥組在缺血再灌注后，將復(fù)方丹參滴丸用生理鹽水配成50mg/ml的溶液，在觀察的腸系膜表面連續(xù)滴加(2.6ml/min)。
(3)SOD(超氧化物歧化酶)給藥組在缺血再灌注10分鐘時(shí)，用連續(xù)推注器按12000u/kg/hr的給藥量，經(jīng)頸靜脈連續(xù)注入SOD至觀察結(jié)束。
2.實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例一。
3.測定方法同實(shí)施例一。
(二)結(jié) 果圖2顯示缺血再灌注30分鐘時(shí)，SOD后給藥組肥大細(xì)胞脫顆粒率與缺血再灌注組相比沒有顯著差異，而復(fù)方丹參滴丸后給藥組的肥大細(xì)胞脫顆粒率顯著低于缺血再灌注組。
權(quán)利要求
1.復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的應(yīng)用。
2.復(fù)方丹參滴丸在制備治療肥大細(xì)胞脫顆粒所致疾病的藥物中的應(yīng)用。
3.復(fù)方丹參滴丸在制備改善肥大細(xì)胞脫顆粒所致微循環(huán)障礙藥物中的應(yīng)用。
4.復(fù)方丹參滴丸在制備治療肥大細(xì)胞脫顆粒所致微循環(huán)障礙之心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制肥大細(xì)胞脫顆粒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明研究顯示在缺血再灌注后對腸系膜肥大細(xì)胞進(jìn)行活體染色，可見復(fù)方丹參滴丸經(jīng)口給藥可以抑制由缺血再灌注引起的肥大細(xì)胞脫顆粒，并且復(fù)方丹參滴丸的口服作用與丹參靜脈給藥的作用幾乎相同。復(fù)方丹參滴丸可作為預(yù)防和治療肥大細(xì)胞脫顆粒所致疾病，特別是肥大細(xì)胞脫顆粒所致微循環(huán)障礙性疾病的理想藥物。
文檔編號A61K9/20GK1522714SQ0310450
公開日2004年8月25日 申請日期2003年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月17日
發(fā)明者韓晶巖, 秋葉保忠, 鈴木秀和, 永田博司, 三浦總一郎, 織田正也, 石井裕正, 一郎, 也, 司, 和, 忠, 正 申請人:天津天士力制藥股份有限公司