專利名稱：四逆散及其活性部位的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥及其活性部位的新用途，特別是涉及四逆散及其活性部位的新用途。
背景技未隨著多種應(yīng)急因素的加劇，抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)的常見病和高發(fā)病，其發(fā)病率正在快速攀升。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前全世界抑郁癥患者已占世界人口的3～5％。WHO預(yù)測，到2005年，抑郁癥發(fā)病率將達(dá)到總?cè)丝诘?0％，抑郁癥在21世紀(jì)造成社會(huì)最沉重負(fù)擔(dān)的疾病中居第2位。目前臨床使用的抗抑郁藥主要有三環(huán)類、5-HT再攝取抑制劑、5-HT-NE再攝取抑制劑和單胺氧化酶-A抑制劑等，但因?yàn)橐钟舭Y發(fā)病機(jī)理比較復(fù)雜，誘發(fā)因素較多，上述僅針對某單一環(huán)節(jié)的藥物往往難以取得滿意療效。同時(shí)這些藥物存在抗抑郁譜窄、副作用大、易復(fù)發(fā)等缺陷。近年來，國內(nèi)外在抗抑郁藥的研制與開發(fā)方面越來越注重傳統(tǒng)藥物。但目前從純中藥制劑中分離出具有抗抑郁活性的藥物有效部位及活性成分的方法及相關(guān)制劑并不多見。
本發(fā)明抗抑郁活性部位為淡棕色的粉末，具有一定的吸濕性，易溶于水和稀乙醇，難溶于氯仿、石油醚等親脂性有機(jī)溶劑。三氯化鐵反應(yīng)陽性，三氯化鋁反應(yīng)陽性，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，醋酐-濃硫酸反應(yīng)陽性，α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)陽性。主要含有黃酮類和皂苷類成分，其中總黃酮類成分的含量為39.5～45.5％，總皂苷類成分的含量為11.0～12.0％。HPLC測定新橙皮苷含量為19.5～21.5％，甘草酸含量為3.0～3.5％。另含有一定量的單萜苷類和其它成分。
本發(fā)明的抗抑郁活性部位的制備方法按6∶6∶6∶9的比例稱取柴胡、炙甘草、枳實(shí)、白芍，將4味藥混合均勻，加水煎煮2～3次，合并各次水煎液，濃縮，通過弱極性的大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，待水煎液全部通過樹脂柱后，用水繼續(xù)沖洗樹脂柱，至水洗液近無色止，然后再用30～80％乙醇對樹脂柱上吸附的物質(zhì)進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得到復(fù)方中藥抗抑郁活性部位；以下實(shí)驗(yàn)例采用小鼠強(qiáng)迫游泳模型、小鼠懸尾模型、大鼠強(qiáng)迫游泳模型、大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型藥物篩選方法，考察了四逆散及四逆散有效部位抗抑郁作用。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明藥物組合物制備成多種臨床藥物劑型，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當(dāng)中的一種；所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。本發(fā)明藥物還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。
實(shí)驗(yàn)例1小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾模型藥物篩選實(shí)驗(yàn)1.動(dòng)物及分組雄性昆明種三級小鼠90只，重量20～25g，15只1組飼養(yǎng)。分對照組、氯丙咪嗪組及四逆散、四逆散提取物(抗抑郁有效部位)大小劑量組，共12組。每天8:00～10:00am給藥，共3周。強(qiáng)迫游泳、懸尾實(shí)驗(yàn)前24h、5h、1h給藥。
2.行為學(xué)測試方法強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)量筒內(nèi)裝21～23℃水10cm，量筒之間放置一個(gè)不透明板，防止小鼠彼此看到。末次灌藥后1小時(shí)，小鼠被投入量量筒，并滯留6min，計(jì)算后4min的不動(dòng)時(shí)間，四只小鼠同時(shí)測量。判斷不動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn)停止掙扎，垂直體位，不動(dòng)漂浮，僅做一些必要的活動(dòng)使它的頭露出水面。懸尾實(shí)驗(yàn)?zāi)┐喂嗨幒?小時(shí)，水平放置一棒狀物，用膠帶在距離小鼠尾尖30mm處將之固定于其上，中間用板隔開，防止彼此看到對方。小鼠距離最近的物體大約100mm。懸掛6min，記錄后4min的不動(dòng)時(shí)間，每次測量5只。
3.結(jié)果氯丙咪嗪明顯減少了小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾的不動(dòng)時(shí)間。大劑量四逆散有效部位(抗抑郁有效部位)明顯減少了小鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間，效果與氯丙咪嗪相近。大劑量四逆散減少了小鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間。
表1 藥物對小鼠強(qiáng)迫游泳模型不動(dòng)時(shí)間的影響組別 例數(shù) 不動(dòng)時(shí)間 與空白組相比變化(n) (s) (％)對照15 158.35±32.84 -氯丙咪嗪 15 75.64±37.88 -52四逆散大劑量 15 128.02±44.54 -19四逆散小劑量 15 132.69±54.99 -50四逆散有效部位大劑量 15 79.58±38.94**-50四逆散有效部位小劑量 15 132.78±46.85 -16*p＜0.05與對照組相比，**p＜0.01與對照組相比表2藥物對小鼠懸尾模型不動(dòng)時(shí)間的影響組別 例數(shù) 不動(dòng)時(shí)間與空白組相比變化(s) ％空白15 113.08±24.15-四逆散大劑量15 42.49±30.79 -62四逆散小劑量15 60.75±26.39 -46四逆散有效部位大劑量15 75.80±37.85 -32四逆散有效部位小劑量15 91.71±30.07 -19**p＜0.01，與對照組相比4.結(jié)論四逆散及其有效部位(抗抑郁有效部位)具有抗抑郁作用。不同模型對二者的敏感性有一定差別。實(shí)驗(yàn)例2四逆散有效部位對大鼠強(qiáng)迫游泳模型作用1、動(dòng)物及分組雄性SD大鼠45只，體重180g。隨機(jī)分為3組對照組15只，四逆散組15只，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)組15只。每組動(dòng)物分3籠飼養(yǎng)，每籠5只。每天上午8-9h進(jìn)行灌胃，以使動(dòng)物適應(yīng)給藥時(shí)的抓摸刺激。
2、實(shí)驗(yàn)方法灌胃12天，實(shí)驗(yàn)第13天大鼠被投入40cm高，直徑18cm的容器中，內(nèi)含25℃水20cm，強(qiáng)迫游泳15min，取出后烘干。于第14天第二次強(qiáng)迫游泳前23.5h、5h、1h分別給藥。實(shí)驗(yàn)第14天第二次強(qiáng)迫游泳，觀察大鼠不動(dòng)時(shí)間。強(qiáng)迫游泳結(jié)束60min后，同籠中5只動(dòng)物在5min內(nèi)，迅速給與1％戊巴比妥鈉(80mg/kg)腹腔內(nèi)注射，麻醉后腹主動(dòng)脈取血，離心取血清，測定皮質(zhì)醇。開胸經(jīng)心臟灌注固定，先用生理鹽水100ml沖凈血液，然后用預(yù)冷(4℃)的4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(PB，0.1mol/L，PH7.4)灌注，先快灌，繼之慢灌。取腦，用4％多聚甲醛后固定2h，再將腦組織塊放入含20％蔗糖磷緩液(PB，0.1mol/L，PH7.4)，4℃過夜。組織塊完全沉底后用冰凍切片機(jī)行40μm連續(xù)冠狀切片，免疫組化檢測C-FOS陽性神經(jīng)元表達(dá)。
3.結(jié)果3.1與對照組比較，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)可以顯著縮短大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。
表3 四逆散有效部位對強(qiáng)迫游泳大鼠模型的影響組別 例數(shù) 不動(dòng)時(shí)間(s)對照組 14 138.77±32.90四逆散組15 146.58±28.40四逆散有效部位組14 109.42±32.60**p＜0.005，與對照組相比3.2對血清皮質(zhì)醇的影響FST對大鼠血清皮質(zhì)醇含量有明顯的影響，對照組FST1小時(shí)后皮質(zhì)醇仍保留在較高水平，四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)組預(yù)防能明顯降低其含量。
表4 四逆散有效部位對大鼠強(qiáng)迫游泳模型血清皮質(zhì)醇的影響組別 例數(shù) 血清皮質(zhì)醇濃度(ng/ml)對照組87.185±2.607四逆散組 85.045±1.699四逆散有效部位 84.287±0.9873.3對腦神經(jīng)元C-FOS蛋白表達(dá)的影響強(qiáng)迫游泳可使大鼠腦內(nèi)C-FOS陽性神經(jīng)元表達(dá)增加，而四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)可以降低大鼠前額葉皮層、海馬CA3區(qū)C-FOS陽性神經(jīng)元表達(dá)。
4.結(jié)論證實(shí)四逆散、四逆散有效部位(抗抑郁活性部位)對強(qiáng)迫游泳模型具有抗抑郁作用。實(shí)驗(yàn)例3四逆散有效部位對大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型的影響1、動(dòng)物及方法SD大鼠18只，重量180～200g。分組適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，期間進(jìn)行蔗糖水消耗和曠場實(shí)驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果，半隨機(jī)分3組。對照組每籠6只，模型組孤養(yǎng)。第21天動(dòng)物斷頭處死，取大鼠大腦，于冰皿分離海馬，稱重。用高效液相電化學(xué)檢測法測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的變化。
2、結(jié)果模型組大鼠海馬多巴胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量比值下降，四逆散有效部位對多巴胺代謝有影響，能顯著增加抑郁模型大鼠的水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)。
表5海馬多巴胺遞質(zhì)含量比值分組 例數(shù)DA/DOPAC對照組 6 6.65±1.73模型組 6 2.49±4.62四逆散有效部位組 6 26.62±5.67表6 四逆散及其有效部位對大鼠抑郁模型行為學(xué)作用分組例數(shù) 水平運(yùn)動(dòng)垂直運(yùn)動(dòng)模型組10 11.47±10.33 3.65±3.99四逆散有效部位組 10 39.11±33.10 6.28±5.03下列實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。實(shí)施例1按比例稱取柴胡2.4kg、炙甘草2.4kg、枳實(shí)2.4kg、白芍3.6kg，混合均勻，加水煎煮2次，其中第一次加水100L，煎煮2小時(shí)；第二次加水80L，煎煮1.5小時(shí)；合并2次水煎液，濃縮至60L；通過弱極性的AB-8大孔吸附樹脂，樹脂體積為15L，進(jìn)行吸附，吸附流速為2L/h；待水煎液全部通過樹脂柱后，用8倍樹脂體積，約120L的水繼續(xù)沖洗樹脂柱，至水洗液近無色止，然后再用8倍樹脂體積，約120L的50％7醇對樹脂柱上吸附的物質(zhì)進(jìn)行洗脫，洗脫流速為2L/h；收集50％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得到本發(fā)明抗抑郁有效部位707.4g。其中總黃酮類成分的含量為39.5～45.5％，總皂苷類成分的含量為11.0～12.0％，HPLC測定新橙皮苷含量為19.5～21.5％，甘草酸含量為3.0～3.5％，加入賦形劑按常規(guī)工藝制成膠囊2000粒，每粒0.33克，治療抑郁癥，每日4粒。實(shí)施例2膠囊劑的制備本發(fā)明抗抑郁有效部位1000g，藥用淀粉1000g，混合均勻，裝入1號膠囊，每粒0.2g，每次口服2-3粒，每日兩次。實(shí)施例3片劑的制備本發(fā)明抗抑郁有效部位1000g，藥用淀粉400g，糊精100g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次2片，每日兩次。實(shí)施例4顆粒劑的制備本發(fā)明抗抑郁有效部位100g，淀粉1000g，糖粉100g，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥、整粒、分裝即得?？诜淮?g，一日兩次。實(shí)施例5注射劑的制備本發(fā)明抗抑郁有效部位10g，丙二醇20ml，聚乙二醇-400 50ml，注射用水300m1，混合，水浴加熱30分鐘，加苯甲醇50ml，再用注射用水加至1000ml，在超聲波中處理10分鐘，再水浴上加熱30分鐘，調(diào)PH值5.5-6.5，過濾澄明，灌封，滅菌即得。每支2ml，肌肉注射，一次2ml，一日1-2次。實(shí)施例6柴胡6kg、炙甘草6kg、枳實(shí)6kg、白芍9kg，制成口服液，10ml/瓶，治療抑郁癥，一次10-20ml，一日2-3次。
權(quán)利要求
1.一種四逆散的有效部位，其特征在于該有效部位的理化性質(zhì)為淡棕色的粉末，具有一定的吸濕性，易溶于水和稀乙醇，難溶于氯仿、石油醚等親脂性有機(jī)溶劑；三氯化鐵反應(yīng)陽性，三氯化鋁反應(yīng)陽性，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，醋酐-濃硫酸反應(yīng)陽性，α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)陽性。
2.如權(quán)利要求1所述的有效部位，其特征在于該有效部位主要含有黃酮類和皂苷類成分，其中總黃酮類成分的含量為39.5～45.5％，總皂苷類成分的含量為11.0～12.0％；HPLC測定新橙皮苷含量為19.5～21.5％，甘草酸含量為3.0～3.5％。
3.一種四逆散的有效部位的制備方法，其特征在于該制備方法為按6∶6∶6∶9的比例稱取柴胡、炙甘草、枳實(shí)、白芍，將4味藥混合均勻，加水煎煮2～3次，合并各次水煎液，濃縮，通過弱極性的大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，待水煎液全部通過樹脂柱后，用水繼續(xù)沖洗樹脂柱，至水洗液近無色止，然后再用30～80％乙醇對樹脂柱上吸附的物質(zhì)進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得到復(fù)方中藥抗抑郁活性部位。
4.如權(quán)利要求3所述的有效部位的制備方法，其特征在于該制備方法為按6∶6∶6∶9的比例稱取柴胡、炙甘草、枳實(shí)、白芍，將4味藥混合均勻，加水煎煮2次，其中第一次加水100L，煎煮2小時(shí)；第二次加水80L，煎煮1.5小時(shí)；合并2次水煎液，濃縮至60L；通過弱極性的AB-8大孔吸附樹脂，樹脂體積為15L，進(jìn)行吸附，吸附流速為2L/h；待水煎液全部通過樹脂柱后，用8倍樹脂體積，約120L的水繼續(xù)沖洗樹脂柱，至水洗液近無色止，然后再用8倍樹脂體積，約120L的50％乙醇對樹脂柱上吸附的物質(zhì)進(jìn)行洗脫，洗脫流速為2L/h；收集50％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，即得到本發(fā)明抗抑郁有效部位。
5.如權(quán)利要求1或2所述的有效部位在制備抗抑郁的藥物中的應(yīng)用。
6.四逆散在制備抗抑郁的藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于抗抑郁是指提高多巴胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量比值或降低腦神經(jīng)元C-FOS陽性神經(jīng)元表達(dá)。
8.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于抗抑郁是指提高多巴胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量比值或降低腦神經(jīng)元C-FOS陽性神經(jīng)元表達(dá)。
9.如權(quán)利要求1或2所述的有效部位，其特征在于還可加入藥學(xué)上可接受的敷料或賦形劑。
10.如權(quán)利要求1或2所述的有效部位，其特征在于可制成臨床可接受的劑型。
11.如權(quán)利要求10所述的有效部位，其特征在于可制成的劑型為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑、注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開四逆散及其活性部位新用途，該活性部位為淡棕色的粉末，具有吸濕性，易溶于水和稀乙醇，難溶于親脂性有機(jī)溶劑。三氯化鐵、三氯化鋁、鹽酸－鎂粉、醋酐－濃硫酸、α－萘酚－濃硫酸反應(yīng)陽性。該活性部位主要含有黃酮類和皂苷類成分，其中總黃酮類成分的含量為39.5～45.5％，總皂苷類成分的含量為11.0～12.0％。該活性部位是將四逆散中的柴胡、炙甘草、枳實(shí)、白芍按比例混合、煎煮，通過大孔吸附樹脂純化分離而制得。該四逆散及其活性部位具有良好的抗抑郁作用。
文檔編號A61P25/00GK1416880SQ0215331
公開日2003年5月14日 申請日期2002年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月27日
發(fā)明者石任兵, 王慶國, 劉斌, 暢洪升, 李軍 申請人:北京中醫(yī)藥大學(xué)