專利名稱：脈康合劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種治療腦血栓及其后遺癥藥物的制作方法，方法涉及合劑的組配方案以及有效成份的加工方法。
本發(fā)明的關(guān)鍵是借助微生物制品中的有效成分與中草藥性的配伍互補(bǔ)達(dá)到本發(fā)明的確定的目標(biāo)。其微生物選取的菌種是黑木耳(學(xué)名Auricularia auricular)(編號(hào)AS5.452，保藏單位中科院微生物研究所)有效成分為木耳多糖，終極產(chǎn)品載體為黑木耳菌絲體。中草藥配伍所采用的是菊花和絲瓜絡(luò)。
經(jīng)專利權(quán)人多年來的研究，黑木耳菌絲體在發(fā)酵罐中。濕重達(dá)60-80％時(shí)，其木耳多糖的有效含量足以產(chǎn)生明顯的藥效。這種藥效在對(duì)小白鼠做的藥理實(shí)驗(yàn)中可以得出以下結(jié)論6.5-7克/公斤的注入量可使血小板聚散反應(yīng)產(chǎn)生，表現(xiàn)出對(duì)ADP的明顯抑制性。對(duì)照組實(shí)驗(yàn)中，對(duì)血漿比粘度，血清比粘度纖維蛋白質(zhì)指標(biāo)改善統(tǒng)計(jì)學(xué)意義明顯。對(duì)高脂飼料大白鼠中膽固醇和甘油三酯增長有明顯抑制作用。血栓形成對(duì)比試驗(yàn)效果表明，木耳多糖對(duì)血栓形成的速度和大小有顯著影響。
以上的藥理研究決定本發(fā)明中以含黑木耳菌絲體濕重或密度為60-80％的黑木耳發(fā)酵濾過液為基料，配比所選取的可以強(qiáng)化療效的菊花、絲瓜絡(luò)浸出液進(jìn)行配伍可以有效地強(qiáng)化木耳多糖的藥用效果，進(jìn)一步成份化驗(yàn)證明，黑木耳混合液體發(fā)酵所生成的濾過液中除去含木耳多糖，還含有極其豐富的氨基酸種類達(dá)21項(xiàng)之多，以及很多有利于軟化和營養(yǎng)血管的微量元素，所以采取以上原料所進(jìn)行基本配伍可以很好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。
下面進(jìn)一步說明脈康合劑配伍的方法和比例a、選取混合發(fā)酵罐中含菌絲體的濕重或密度達(dá)60-80％的濾過液1000個(gè)體積單位為標(biāo)準(zhǔn)。
b、在121℃，1.5個(gè)大氣壓加熱加壓裂解加工并濃縮為850-950體積單位，c、取重量相當(dāng)于8-10體積單位對(duì)應(yīng)水菊花和絲瓜絡(luò)，加40-50倍的水煎煮并濃縮淬取液其體積為90-100個(gè)體積單位，d、將兩種含有效成份的液體混合成為脈康合劑，然后分裝，清毒，包裝成為成品。
下面根據(jù)給出的工藝操作實(shí)施例進(jìn)一步說明脈康合劑是如何制作成功的。
通過試管斜面，搖瓶轉(zhuǎn)移，液體種子罐三級(jí)種子培養(yǎng)最后制成定容發(fā)酵罐1/10體積的液體種子罐內(nèi)實(shí)現(xiàn)液體菌種的培育。
將液體菌種引入發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)60-70小時(shí)。
2、在發(fā)酵罐中濾過液中菌絲體濃度或濕重達(dá)60-80％時(shí)完成發(fā)酵，過濾后獲取濾過液。濾去發(fā)酵罐中的固體殘?jiān)鼘V過液加溫至121℃，加壓1.5個(gè)大氣壓促進(jìn)菌絲體斷開，分裂變小，并經(jīng)進(jìn)一步過濾濃縮去除10％的水份及雜物，成為脈康合劑的配伍原料。
在培養(yǎng)種子和實(shí)行菌絲體繁殖時(shí)均要采用培養(yǎng)基，所采用的培養(yǎng)基碳氮比基本上是18-22∶1，但基本配比上略有區(qū)別試管斜面培養(yǎng)采取的是固態(tài)混合物，具體由以下原材料組成(重量組份比)蛋白質(zhì) 麩皮 葡萄糖 土豆粉 瓊脂1份 4-6份 1-2份 15-20份 1-3份采取搖瓶或種子罐、發(fā)酵罐所用的混合配比的液體培養(yǎng)基具體實(shí)施例如下(重量組份百分比)

利用發(fā)酵罐和種子罐進(jìn)行發(fā)酵育種工作時(shí)由于體積已放大，例如液體種子罐可采用75升種子罐，發(fā)酵罐可采用750升-1000升發(fā)酵罐。所以為使得菌種擴(kuò)散均勻，以及反應(yīng)條件一致，亦使得菌絲生長過程得到充足的氧和營養(yǎng)成份，所以加以攪拌，通氣和溫度氣壓控制。使其工藝條件有利于菌絲體的快速生長。這個(gè)反應(yīng)中發(fā)酵基本碳氮比C∶N＝18-22∶1，溫度控制在26℃-31℃之間，并時(shí)刻注視大罐溫升不超31℃，攪拌速度為180-200轉(zhuǎn)/分。溫度超過28℃可考慮送風(fēng)降溫，發(fā)酵罐內(nèi)接種時(shí)液體菌種內(nèi)菌絲體含量應(yīng)達(dá)40克/100毫升以上，發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵時(shí)間為60-70小時(shí)，最終指標(biāo)為濾過液內(nèi)菌絲體濕重或密度達(dá)60-80％。
加工菊花和絲瓜絡(luò)粹取有效成份的具體方法是按對(duì)等的菊花和絲瓜絡(luò)重量取得基料，如1000毫升的木耳菌絲體發(fā)酵濾過液，取8-10克的菊花和對(duì)等絲瓜絡(luò)經(jīng)處理(121℃、1.5氣壓濃縮)成為900毫升的濃縮液。然后洗凈、浸泡透，加10×50＝500毫升水煎煮，最后濾去藥渣后剩下90-100毫升的濃縮淬取液。
將900毫升濃縮黑木耳菌絲體濾過液和100毫升的菊花、絲瓜絡(luò)煎煮濃縮液混配在一起，然后再分裝成四瓶(250毫升一瓶)就制成四瓶脈康合劑。
經(jīng)過相應(yīng)的藥性，藥理試驗(yàn)，黑木耳菌絲體中的有效藥用成份木耳多糖的降低血脂、降低血液粘稠度，血清粘稠度，血纖維蛋的原得到了進(jìn)一步的檢證，由于有效中藥成份的加入，木耳多糖阻止血栓形成的時(shí)間和血栓形成的大小進(jìn)一步改善加強(qiáng)，這說明本合劑所采用的配伍取得了相當(dāng)好的強(qiáng)化療效作用。
通過進(jìn)一步的毒理試驗(yàn)證明，在加大人體臨床藥量60倍情況下，對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的飲食，糞便，毛質(zhì)活動(dòng)特性，體重增長均不見明顯影響，各組試驗(yàn)動(dòng)物血常規(guī)(白細(xì)胞，紅細(xì)胞數(shù)量，血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血色素)均在正常生理范圍之內(nèi)，各對(duì)照組白鼠的肝腎功能均在正常范圍，其它臟器經(jīng)長期應(yīng)用觀察均未發(fā)現(xiàn)異常，可見本合劑無毒副作用。
本合劑通了過進(jìn)一步急性毒理實(shí)驗(yàn)。
以上述黑木耳菌絲體濃度標(biāo)準(zhǔn)制成的脈康合劑按人體劑量80毫升/日為標(biāo)準(zhǔn)，折合100毫升/日最大劑量給試驗(yàn)的白鼠灌胃800，1200連續(xù)二次，白鼠無異常表現(xiàn)。1700第三次白鼠表現(xiàn)安靜少動(dòng)，30分鐘后恢復(fù)正常，分析原因是胃漲所致。七日內(nèi)飲食、糞便、毛色、呼吸活動(dòng)均正常，多次試驗(yàn)亦無死亡發(fā)生，臨床給出劑量人體最大忍耐量105毫升/公斤，可見藥性安全。
脈康合劑的藥效試驗(yàn)。
療效標(biāo)準(zhǔn)(一) 腦梗塞后遺癥神經(jīng)缺損按衛(wèi)生部發(fā)布制定的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》有關(guān)中風(fēng)病療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(即尼莫地平法[(治療前積分—治療后積分)/治療前積分]*100％顯效中醫(yī)癥狀積分藥后較藥前下降2/3以上，神經(jīng)缺損積分下降≥50％。
有效中藥癥狀積分下降1/3-2/3，神經(jīng)缺損積分下降≥20％無效中藥癥狀下降＜1/3，神經(jīng)缺損積分下降＜20％。
(二)高脂血癥血脂參照衛(wèi)生部試行了《15類藥物臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》中有關(guān)調(diào)整血脂藥物研究制定的標(biāo)準(zhǔn)。
顯效達(dá)以下任一項(xiàng)者，TC下降≥20，TG下降≥40％，HDL-C上升≥10mg/dl，AI下降≥20％。
有效達(dá)以下任一項(xiàng)者，TC下降10-19％，TG下降20-39％，HDL-C上升4-9mg/dl，AI下降10-20％。
無效未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)者惡化達(dá)以下任一項(xiàng)者TC上升≥10％，TG上升≥10％，HDL-C下降≥4mg/dl，AI上升≥10％。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果(一)梗塞后遺癥中藥癥狀療效評(píng)定藥后 顯效23例有效68例無效9例總有效率91％對(duì)照 顯效 8例 有效21例 無效39 總有效率42.65％神經(jīng)功能缺損恢復(fù)療效評(píng)定

對(duì)血流變學(xué)指標(biāo)的影響

P＜0.05p＜0.01對(duì)纖維蛋白質(zhì)、細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞電泳時(shí)間的影響

P＜0.05 p＜0.01小結(jié)藥前后兩組對(duì)照中醫(yī)癥狀效評(píng)定有顯著性差異，神經(jīng)功能缺損恢復(fù)療效評(píng)定，兩組有顯著性差異，血液變學(xué)指的影響，治療組藥后，全血比粘度，血漿比粘度，全血還原粘度，紅細(xì)胞壓積，纖維蛋白質(zhì)，紅細(xì)胞電泳時(shí)間均有顯著降低。高脂血癥兩組療效比較

對(duì)TC、TG、HDL-C、AI的變化

P＜0.05 p＜0.01小結(jié)兩組對(duì)比有顯著性差異藥后TC、TG、AI均下降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異；HDL-C有所上升，但無顯著差異。
通過以上的各項(xiàng)試驗(yàn)證明，脈康合劑做為一種新型微生物中草藥合劑，對(duì)降低血脂五項(xiàng)中的相當(dāng)高脂癥指標(biāo)有十分明顯作用，進(jìn)一步的分析證明脈康合劑中還包含有豐富的氨基酸和血管營養(yǎng)中所必需的稀有元素，所以該合劑可以適應(yīng)在腦血栓急性期的輔助治療，對(duì)急性期后的后遺癥恢復(fù)和防止復(fù)發(fā)有明顯的治療預(yù)防作用。
權(quán)利要求
1.脈康合劑的制作方法，其特征在于該合劑由含黑木耳(Auriculariaauricular)菌絲體的發(fā)酵濾過液和菊花、絲瓜絡(luò)煎煮淬取液混配而成，具體方法如下a、選取黑木耳菌絲體濕重達(dá)60-80％的黑木耳發(fā)酵濾過液1000體積單位，b、在121℃、1.5個(gè)大氣壓下熱解濃縮至850-950個(gè)體積單位，c、選取重量相當(dāng)8-10個(gè)體積單位水的菊花和絲瓜絡(luò)，加40-50倍重量的水煎煮，使其濃縮生成90-100個(gè)體積單位的淬取液，d、然后將兩種液體混合形成脈康合劑，e、然后分瓶，包裝，消毒成為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說的脈康合劑制作方法，其特征在于所采用的黑木耳濾過液中的黑木耳菌絲體濕重達(dá)60-80％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所說的脈康合劑制作方法，其特征在于所說的濕重為60-80％黑木耳菌絲體的濾過液是采用以下方法制取的①采選健康菌種，②斜面菌種培育，搖床液體育種，種子罐液體菌種三級(jí)菌種培育，③引入發(fā)酵罐發(fā)酵60-70小時(shí)，④菌絲體生長濃度或濕重比達(dá)60-80％時(shí)停止發(fā)酵，過濾發(fā)酵液中的固體殘?jiān)?，獲得標(biāo)準(zhǔn)藥劑原料液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所說的脈康合劑制作方法，其特征在于以上所說的發(fā)酵或育種過程中所掌握的工藝條件是，發(fā)酵溫度23-26℃，環(huán)境壓力為0.05+10％MPA，培養(yǎng)基C/N比為18-22∶1，接種量為斜面按種6-10mg/100ml，搖瓶按種0.05-0.1％濕重比，種子罐或發(fā)酵罐按種5-10％濕重比。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所說的脈康合劑制作方法，其特征在于采用的發(fā)酵或育種培養(yǎng)基料的配方如下a、斜面培養(yǎng)基(重量組份比)蛋白質(zhì) 麩皮 葡萄糖土豆粉 瓊脂1份 4-6份 1-2份 15-20份1-3份b、固液混合培養(yǎng)基(重量百分比)玉米面麩皮 蔗糖酵母 豆粉 花生油 硫酸鎂磷酸二氫鉀水1-1.51.5-2.5 1.5-2 0.3-0.5 0.3-0.5 0.3-0.4 0.05-0.1 0.15-0.2余量
6.根據(jù)權(quán)利要求5所說的脈康合劑制作方法，其特征在于在種子罐發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)應(yīng)加入攪拌和通風(fēng)條件，攪拌速度為180-200轉(zhuǎn)/分，通入空氣的壓力為0.12-0.75MPA，通入空氣溫度為26-31℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所說的脈康合劑制作工藝，基特征在于加工提取菊花和絲瓜絡(luò)有效成份淬取液可采取以下步驟①按對(duì)等的重量配比菊花和絲瓜絡(luò)，②漂洗，浸泡，③加上種藥總重40-50倍給水煎煮，④煎煮蒸發(fā)自然濃縮至原加水量的20％即得到中間提取液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型腦血栓后遺癥治療與康復(fù)的微生物和中草藥合劑,該合劑采用黑木耳混合液態(tài)發(fā)酵中生成的富含菌絲體的發(fā)酵濾過液和菊花,絲瓜絡(luò)的有效成份淬取液配比制成的合劑。對(duì)腦血栓后遺癥的治療,防止愈后復(fù)發(fā),以及降血液粘稠度和血脂五項(xiàng)指標(biāo)有顯著的臨床效果,同時(shí)亦是血管的營養(yǎng)劑。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1386543SQ0212406
公開日2002年12月25日 申請日期2002年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月18日
發(fā)明者富曉斌 申請人:富曉斌