專利名稱：化橘紅制劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥化橘紅有效成分的提取方法，化橘紅制劑及其生產(chǎn)方法。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。
將化橘紅未成熟或近成熟的全果粉碎，經(jīng)過水提取，同時收集揮發(fā)油，水提取液濾過，合并濾液，進一步加入有機溶劑分離純化或不使用有機溶劑，濃縮成浸膏，加入輔料，混合，加入已收集的揮發(fā)油，制粒，壓片，包糖衣，制成片劑，或制成膠囊，或沖劑(顆粒劑)，或制成其它口服制劑。
本發(fā)明中可以不收集揮發(fā)油，但其使用效果略有下降。
本發(fā)明的化橘紅以正毛化橘紅為佳。其有效成分含量高于副毛化橘紅。
本發(fā)明的化橘紅可以單味藥作為原料藥，也可以與其它中藥復(fù)合(復(fù)合)制成復(fù)方制劑。
本發(fā)明中的水提取可以采用在室溫或者在加熱沸騰條件下進行。提取次數(shù)至少應(yīng)是一至三次。水的用量為水至少能沒過化橘紅全果藥材，水用量過多不限。
本發(fā)明加入的有機溶劑可以采用乙醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等。乙醇可以采用無水乙醇或者各種濃度乙醇，石油醚可以采用石油醚-30、石油醚-60或石油醚-90。
取上述提取方法制成的化橘紅全果浸膏適量，與化橘紅皮的同樣方法的提取物浸膏適量，加高效液相色譜流動相甲醇—醋酸—水(35∶4∶61)稀釋，過濾，濾液置于容量瓶中，用流動相定量，再用微孔濾膜(0.45um)過濾后，注入高效液相儀中，外標(biāo)法定量，得化橘紅全果或浸膏中柚皮甙的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，全果浸膏中柚皮甙的含量高于化橘紅皮浸膏，表明全果的提取率比皮的提取率高。用全果能更好的開發(fā)利用化橘紅原料資源。同時，化橘紅全果較化橘紅皮其原料來源更廣泛，原料生產(chǎn)工藝更簡單。
色譜條件Agilent1100高效液相色譜儀(手動進樣器，20ul定量環(huán)，真空脫氣機，四元泵，柱溫箱，二極管陣列檢測器)，色譜柱Hypersil ODS柱(5um，4.0×250mm)；流動相甲醇—醋酸—水(35∶4∶61)；檢測波長283nm；柱溫40℃，流速1ml/min。
化橘紅是化痰止咳的中藥，我們通過藥理藥效實驗，對本發(fā)明的化橘紅制劑進行實驗動物小白鼠的止咳化痰，結(jié)果表明本發(fā)明的化橘紅制劑的低、中、高劑量灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間，與空白對照組比較，均有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。與陽性對照藥物美沙芬片比較，耐受時間延長，療效較陽性藥物美沙芬顯著。
本發(fā)明的化橘紅制劑對實驗動物小鼠的化痰實驗表明，本發(fā)明的化橘紅制劑的低、中、高劑量灌胃給藥對小鼠支氣管分泌液增加，與空白對照組比較，均有顯著增加，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。與陽性對照藥物痰咳凈比較，對小鼠支氣管分泌液均有顯著增加，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。提示本發(fā)明的化橘紅制劑具有止咳化痰的藥理藥效作用，且比陽性對照療效要好。
同時，本發(fā)明的化橘紅制劑，有以下特點(1)給藥方便，患者可自行完成。(2)服用量小，療效迅速。(3)攜帶方便。(4)質(zhì)量較穩(wěn)定。
總之，本發(fā)明的化橘紅制劑采用化洲柚的幼果全果或近成熟全果為生藥材原料，具備良好的止咳化痰效果，其生產(chǎn)方法簡單，有效成份提取率高。本發(fā)明的化橘紅制劑成人使用劑量相當(dāng)于6～9克中藥材/次，每日2～3次。
化橘紅全果粉碎，過20目篩，加水100℃沒過藥材，提取三次，每次1小時，過濾，同時收集揮發(fā)油，合并濾液，濾液蒸干，得棕黑色浸膏。浸膏加入輔料，混合后再加入收集得到的揮發(fā)油，混勻，加入適量的本技術(shù)領(lǐng)域熟知的粘合劑，制粒干燥，加入潤滑劑，壓片機壓成片劑，包糖衣，分裝，即得化橘紅糖衣片劑；也可以將制成的顆粒，加入適量潤滑劑裝膠囊制成膠囊劑；也可以顆粒分裝制成顆粒劑。
揮去氯仿，得墨綠色浸膏，浸膏再加入收集得到的揮發(fā)油，混勻，真空干燥或常壓烘干(過80-100目篩)。加入適當(dāng)濃度乙醇制成軟材，制顆粒，干燥，加潤滑劑，混勻，壓片機壓片成片劑，包糖衣，分裝，即得糖衣片劑。
化橘紅全果粉碎，過20目篩，經(jīng)75℃水煎煮三次，每次2小時，過濾，合并濾液，濾液加入石油醚萃取，靜置，濾液分為兩層，水層和石油醚層，去水層，得石油醚層。
揮去石油醚，得墨綠色浸膏，浸膏再加入收集得到的揮發(fā)油，混勻，浸膏自然蒸干，干燥成粉末。過100-120目篩，裝膠囊，分裝，即得膠囊劑。
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀揮去乙酸乙酯，得墨綠色浸膏，浸膏加入收集得到的揮發(fā)油，混勻后，浸膏再常壓烘干，加適量潤滑劑制成軟材，制粒，干燥，壓片機壓片成片劑，薄膜包衣，分裝，即得包衣片劑。
加熱蒸干水層，得棕黑色浸膏，浸膏加入收集得到的揮發(fā)油，混勻。浸膏再噴霧干燥蒸成粉末。加入適量賦形劑后混勻，分裝，成散劑。
化橘紅全果粉碎，不過篩，室溫下水浸泡提取三次，每次三天，過濾，合并濾液，濾液加入乙醇，靜置，濾液沉淀，得水層和沉淀，去水層，得沉淀。
沉淀揮干，得浸膏，浸膏加入收集得到的揮發(fā)油，混勻。浸膏再直接加入賦形劑，矯味劑等后，混合均勻，制成顆粒，干燥后過8-10目篩，分裝，即得顆粒劑。
(2)廣西產(chǎn)化橘紅提取浸膏水溶液廣西產(chǎn)化橘紅提取浸膏水溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(3)美沙芬片劑，美沙芬含量為15mg/片。取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重。
(4)生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9％。3、實驗方法(濃氨水噴霧法)小鼠灌胃1小時后，開始接受濃氨水噴霧。按一定時間噴入濃氨水氣霧，噴霧結(jié)束，立即取出小鼠，觀察有無咳嗽反應(yīng)。觀察一分鐘內(nèi)咳嗽次數(shù)，若1分鐘內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動作(腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。4、實驗過程用序貫法(上下法)求出引起半數(shù)小鼠咳嗽的噴霧時間(EDT50)。計算R值，若R值大于130％，說明藥物有止咳作用。若R值大于150％，則表明有顯著的止咳作用。計算公式如下EDT50＝log-1c/n(式中n為動物數(shù)，c為rx值的總和，r為每劑量組的動物數(shù)，x為劑量(即噴霧時間)的對數(shù)。) 5、實驗結(jié)果
經(jīng)統(tǒng)計，正毛化橘紅和廣西產(chǎn)化橘紅提取物組半數(shù)咳嗽時間及止咳效果見下表1。
本發(fā)明的實施例1正毛化橘紅水提取物和廣西產(chǎn)橘紅水提取所得物，灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間比較，實施例1正毛化橘紅水提取物對小鼠耐受時間有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。而廣西產(chǎn)化橘紅水提取物對小鼠耐受時間無顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上無顯著差異。說明本發(fā)明的正毛化橘紅全果水提取物，對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與廣西產(chǎn)化橘紅水提取物比較，耐受時間延長，療效顯著。本發(fā)明所采用的正毛化橘紅所制成浸膏，止咳效果優(yōu)于廣西產(chǎn)化橘紅浸膏。故本發(fā)明的上述實施例均采用正毛化橘紅。
表1.正毛化橘紅和廣西產(chǎn)化橘紅提取物的止咳效果比較組別劑量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代號樣品名1 生理鹽水 0 11.98 - -2 正毛化橘紅水提物 300017.23111.7 無效3廣西產(chǎn)化橘紅水提物300013.38144.2 有效4 美沙芬 30 18.28153.0 有效
(2)化橘紅皮B水提浸膏水溶液組皮B水提浸膏水溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(3)化橘紅皮C水提浸膏水溶液組皮C水提浸膏水溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(4)美沙芬片劑，美沙芬含量為15mg/片。取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重。
(5)生理鹽水(氯化鈉注射液)NaCl含量0.9％。3、實驗方法同實施例10采用濃氨水噴霧法。4、實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，化橘紅皮與全果提取物組半數(shù)咳嗽時間及止咳效果見下表2。
表2. 化橘紅全果與皮的提取物的止咳效果比較組別劑量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代號 樣品名1 生理鹽水0 26.1 - -2 實施例13000 45.60174.7顯效3 皮B水提物 3000 33.93130.0有效4 皮C水提物 3000 34.32131.5有效5 美沙芬 30 38.86148.9有效本發(fā)明的實施例1化橘紅全果水提取物和化橘紅皮水提取所得物，灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與空白對照組比較，均有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。本發(fā)明的實施例1化橘紅全果水提取物，對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與陽性藥物對照美沙芬片比較，耐受時間延長，療效較陽性藥物組美沙芬顯著，與化橘紅皮水提取物組比較，耐受時間延長，療效較皮水提取浸膏組顯著。
(2)高劑量組取化橘紅制劑A直接給藥(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(3)中劑量組取化橘紅制劑A，加生理鹽水，按1∶2稀釋后給藥(相當(dāng)于生藥含量100mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥1000mg/kg體重)。
(4)低劑量組取化橘紅制劑A，加生理鹽水，按1∶8稀釋，稀釋后給藥(相當(dāng)于生藥含量33mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥330mg/kg體重)。
(5)陽性物采用美沙芬片劑，美沙芬含量為15mg/片。取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重。
(6)生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9％。3、實驗方法同實施例10采用濃氨水噴霧法。4、實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各劑量組半數(shù)咳嗽時間及止咳效果見下表3。
表3. 化橘紅水提取浸膏的止咳效果組別劑量(mg/kg)EDT50(秒)R值(％)止咳效果代號樣品名1 生理鹽水 0 29.08 - -2 美沙芬片 30 38.98 134.04有效3化橘紅浸膏高劑量組 3000 45.14 155.27顯效4化橘紅浸膏中劑量組 1000 41.82 143.81有效5化橘紅浸膏低劑量組 330 10.47 139.17有效本發(fā)明的化橘紅制劑低、中、高劑量灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與空白對照組比較，均有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。與陽性藥物對照美沙芬片比較，耐受時間延長，療效較陽性藥物組美沙芬顯著。
(2)實施例4氯仿提取成分組氯仿提取浸膏水溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(3)實施例6乙酸乙酯提取成分組乙酸乙酯提取浸膏水溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(4)實施例1水提提取成分組水提取溶液(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(5)美沙芬片劑，美沙芬含量為15mg/片。取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重。
(6)生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9％。3、實驗方法同實施例10采用濃氨水噴霧法。4、實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各提取提取成分組半數(shù)咳嗽時間及止咳效果見下表4。
本發(fā)明的化橘紅水提取浸膏及經(jīng)各種有機溶劑分離所得浸膏，灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與空白對照組比較，均有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。與陽性藥物對照美沙芬片比較，耐受時間延長，療效較陽性藥物組美沙芬顯著。實施例9的同樣試驗表明，實施例9的試驗結(jié)果較實施例1為差，表明有機溶劑提取的有效成分的制劑效果不佳。
表4. 化橘紅各提取成分的止咳效果組別 劑量EDT50(秒)R值(％)止咳效果代號樣品名 (mg/kg)1 生理鹽水0 27.54--2 實施例1水提溶液 300050.12 181.99 顯效3實施例5石油醚提成分300035.80 129.99 有效4實施例6乙酸乙酯成分300038.31 139.11 有效5 實施例4氯仿成分 300041.82 151.85 顯效6 美沙芬 30 44.67 162.22 顯效
(2)高劑量組取化橘紅制劑A直接給藥(相當(dāng)于生藥含量300mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3000mg/kg體重)。
(3)中劑量組取化橘紅制劑A，加生理鹽水，按1∶2稀釋后給藥(相當(dāng)于生藥含量100mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥1000mg/kg體重)。
(4)低劑量組取化橘紅制劑A，加生理鹽水，按1∶8稀釋，稀釋后給藥(相當(dāng)于生藥含量33mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥330mg/kg體重)。
(5)陽性物采用痰咳凈散劑，取0.2克溶解于10毫升生理鹽水中，即得陽性對照痰咳凈溶液，濃度為20mg/ml。給藥劑量為200mg/kg體重。
(6)生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9％。3、實驗方法(酚紅法)(1)小鼠禁食不禁水12h。
(2)灌胃給藥。按動物號順序，每只小鼠灌胃后停3分鐘，再灌另外一只，時間間隔為3分鐘，每組10只總共灌胃時間為30分鐘。
(3)各鼠灌胃后半小時，經(jīng)腹腔注射5％酚紅生理鹽水溶液0.2ml。按順序，即每一只小鼠腹腔注射酚紅后3分鐘，再注射另外一只，10只小鼠共30分鐘。
(4)各鼠腹腔注射后半小時，按順序脫頸椎處死小鼠，處死時間間隔3分鐘。動物處死后，仰位固定于手術(shù)板上，剪開頸正中皮膚，分離氣管，用小鑷子支起氣管。
(5)用大注射器吸取生理鹽水沖洗氣管外壁，洗去血液和氣管外壁中的酚紅，濾紙吸干洗液。
(6)先于氣管分支處剪下氣管，再于另一端甲狀軟骨上端剪下氣管(環(huán)狀甲狀軟骨包括在內(nèi))。
(7)將各氣管段放入預(yù)先盛有1.5ml的5％NaHCO3溶液試管中。
(8)在3分鐘內(nèi)完成上述氣管分離剪切工作。再用同樣方法處理第二只小鼠。方法如上。
(9)將各試管置渦流混合器上震蕩2分鐘，使氣管段中的酚紅釋放出來。
(10)將各試管中溶液于721型分光光度計546nm處測OD值。
(11)將各試管含氣管段放置過夜，24h后重測OD值。
(12)將酚紅配制成不同含量的水溶液，測定OD值，計算出回歸方程為Y＝-0.135302794+14.19137583X。線性范圍0.1ng/ml～10ng/ml，r＝0.9999。X為OD值，Y為酚紅含量。X為OD值，Y為酚紅含量。
(13)根據(jù)回歸方程計算出各個動物氣管酚紅的排出量(酚紅含量)。
(14)酚紅含量和動物體重計算出校正酚紅含量，用SPSS8.0統(tǒng)計軟件進行方差分析。校正酚紅含量＝酚紅含量(ng)/小鼠體重(kg)4、結(jié)果判斷將各組結(jié)果進行方差分析，當(dāng)總體有差異時，如果陽性藥物與對照組比較，校正酚紅含量升高，且有顯著性差異(P＜0.05)，確定實驗可靠。再將各劑量組與對照組比較，校正酚紅含量明顯升高，且有顯著性差異(P＜0.05)時，認為該劑量組有效。5、實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，水提取浸膏各劑量組酚紅排出量見下表5。
表5. 化橘紅水提取物各劑量的化痰效果(X±S)
組別 劑量 動物氣管酚校正酚紅含量a化痰率b代號 樣品名 (mg/kg) 紅含量(ng) (ng/kg) P值(％)1 生理鹽水 0 1.6792±0.4379 84.7774±21.0409 - -2痰咳凈 200 2.6073±0.5986132.0956±32.0495P＜0.05 155.783實施例1高劑量組 30003.1702±0.7423158.6855±34.8674P＜0.01 187.154實施例1中劑量組 10003.1267±1.4389160.3666±78.3494P＜0.01 189.165實施例1低劑量組 330 2.7414±0.7917139.6466±42.4319P＜0.05 164.72a校正酚紅含量＝酚紅含量/動物體重b化痰率＝給藥組/空白對照組×100％酚紅含量計算方法(ng)OD值×14.19137583-0.135302794本發(fā)明的化橘紅制劑對實驗動物小鼠的化痰實驗表明，本發(fā)明的化橘紅制劑低、中、高劑量灌胃給藥對小鼠支氣管分泌液增加與空白對照組比較，均有顯著增加，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。與陽性藥物痰咳凈對照比較，實施例高、中劑量組對小鼠支氣管分泌液有顯著增加，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。表明，實施例1化痰效果優(yōu)于陽性對照物痰咳凈。經(jīng)試驗，本發(fā)明的其他實施例顯示與實施例1具備相似的效果。
綜上所述，說明本發(fā)明的化橘紅制劑劑具有很好的止咳化痰效果。
權(quán)利要求
1.化橘紅制劑，其原料是化洲柚的幼果全果或近成熟全果，劑型為口服劑型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化橘紅制劑，其特征在于化橘紅采用正毛化橘紅。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化橘紅制劑，其特征在于制劑為膠囊劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化橘紅制劑，其特征在于原料藥為化橘紅藥單味藥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化橘紅制劑，其特征在于原料藥為化橘紅藥與其它中藥的復(fù)合。
6.化橘紅制劑的生產(chǎn)方法，依次包括以下步驟將化橘紅全果粉碎，水提取一至三次，同時收集揮發(fā)油，水提取液濾過，合并濾液，濃縮成浸膏，與揮發(fā)油合并，按常規(guī)方法制成口服制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化橘紅制劑，其特征在于合并濾液后，加入有機溶劑萃取，回收有機溶劑，取有機溶劑層，濃縮成浸膏。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化橘紅制劑，其特征在于濃縮成浸膏后，與揮發(fā)油合并，加入矯味劑，加水調(diào)節(jié)容量，制成口服液。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化橘紅制劑，其特征在于濃縮成浸膏后，加入輔料，混合，加入已收集的揮發(fā)油，制粒，加入片劑常規(guī)輔料壓片，制成片劑。
10.化橘紅制劑的生產(chǎn)方法，依次包括以下步驟將化橘紅全果粉碎，水提取一至三次，濾過，合并濾液，濃縮成浸膏，按常規(guī)方法制成口服制劑。
全文摘要
一種化橘紅制劑及其生產(chǎn)方法,將化橘紅全果粉碎,經(jīng)過水提取一至三次,同時收集揮發(fā)油,過濾,合并濾液,加入有機溶劑分離再濃縮或者直接濃縮成浸膏,干燥,加入輔料,加入已收集的揮發(fā)油或者不加揮發(fā)油直接制粒,壓片制成片劑或制成膠囊。本發(fā)明采用全果之后,大大提高化橘紅有效成分的利用率,簡化了生產(chǎn)工藝,本發(fā)明的化橘紅制劑具有良好的止咳化痰作用,療效顯著。
文檔編號A61P11/14GK1369306SQ0211484
公開日2002年9月18日 申請日期2002年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月8日
發(fā)明者蘇薇薇, 唐小江, 方鐵錚, 楊翠平 申請人:中山大學(xué)