專利名稱：丙酸氯倍他索的脂質(zhì)體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有丙酸氯倍他索脂質(zhì)體的皮膚用組合物，并且本發(fā)明屬于用于人類藥物的脂質(zhì)體產(chǎn)品的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
眾所周知，丙酸氯倍他索是一種強有力的合成皮質(zhì)類固醇藥物，具有抗過敏、抗?jié)B出和抗增殖特性，它抑制由機械、化學(xué)或免疫藥劑引起的炎癥反應(yīng)。常見的處方藥為霜劑(CLOVATE)或為膏劑(DECLOBAN)，用于對常用的外部皮質(zhì)類固醇藥物耐藥的諸如牛皮癬、復(fù)發(fā)性濕疹、盤狀紅斑狼瘡扁平苔癬等皮膚病的短期治療。然而，由于產(chǎn)生副作用，特別是隨著制劑的效力、應(yīng)用表面以及治療的時間的延長而風(fēng)險增加的垂體-腎上腺抑制，因此這種藥物的使用被嚴(yán)格限制在14天內(nèi)。
專利申請WO 93/15740，EP 0391033，WO98/36753，WO96/27376，JP11130679以及美國專利US5998395公開了包含類固醇抗炎藥的制劑，包括Valerate和丙酸氯倍他索(ClobetasolPropionate)。在這些組合物中，丙酸氯倍他索被分散于其中，盡管它對于增強制劑的治療活性作用很大，但與藥物使用相關(guān)的副作用仍不能消除。
另一方面，專利US 5192528，US 4427649，WO 97/13500，US4693999，WO 96/22764和US 5190936公開了皮質(zhì)類固醇的脂質(zhì)體制劑，但是沒有一種在脂質(zhì)體內(nèi)包含有丙酸氯倍他索或前述皮質(zhì)類固醇的任何其它衍生物的包囊。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于局部使用的丙酸氯倍他索脂質(zhì)體制劑，其特征在于它使用低濃度的活性成分(在0.01到0.03之間)，但卻在皮膚上使藥品呈現(xiàn)高濃度從而將這種作用更集中在角質(zhì)層，在角質(zhì)層藥品可以控制釋放，這減小了活性成分向全身循環(huán)的擴散，從而減小了毒性及副作用。
本發(fā)明組合物的效力與傳統(tǒng)的分散有丙酸氯倍他索的霜劑和膏劑的相似。出人意料的發(fā)現(xiàn)，將活性成分包含在脂質(zhì)體包囊內(nèi)，它的濃度可以減少到常規(guī)藥劑中用于維持它的有效抗炎作用所需的活性成分的量的一半，這是由于屬于脂質(zhì)體脂質(zhì)雙分子層的化合物與生物膜的高親合力所致，使能夠達到最大的局部作用。
本發(fā)明提供優(yōu)選以凝膠形式供外部使用的脂質(zhì)體制劑，它包含低濃度的丙酸氯倍他索、磷脂、親脂性添加劑、抗氧化劑和用于丙酸氯倍他索的溶劑，例如磷脂、親脂性添加劑和抗氧化劑，還有形成脂質(zhì)體懸浮液的一部分的水性溶液，以及在凝膠或適宜的外部制劑(霜劑、膏劑和洗液)中常用的助劑。
本組合物優(yōu)選包括多層囊泡(尺寸在2000-5000nm，優(yōu)選在3500-4500nm之間)的脂質(zhì)體懸浮液。
以占組合物的總重量計，本發(fā)明的組合物包含以下基本成分-適應(yīng)制劑使用的磷脂，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸及其混合物。特別是在無毒性、有機和可藥用溶劑中與丙酸氯倍他索一起可溶的那些。在這些當(dāng)中優(yōu)選例如磷脂酰膽堿、卵磷脂或大豆卵磷脂。在制劑中磷脂的含量可以在1.0-1.5％之間，優(yōu)選為1.2％。
-親脂性添加劑，用于選擇性修飾脂質(zhì)體的特性。這些可包括膽固醇、磷脂酸、芳基胺脂(estearylamine)，膽固醇是理想的添加劑。親脂性添加劑的量可以在0.1-0.6％之間，優(yōu)選在0.2-0.4％之間變化，并且優(yōu)選是0.3％?？偟膩碚f，親脂性添加劑與磷脂的比例在1∶1-1∶3之間變化，在這種情況下為1∶2.5。
-用于脂質(zhì)體制劑的抗氧化劑，其中α-生育酚和丁化羥基甲苯(BHT)可用作抗氧化劑。BHT比較理想。
為了配置制劑，將上述磷脂、添加劑、抗氧化劑和活性成分(丙酸氯倍他索)溶解于水溶性、無毒并且可藥用的有機溶劑中。
-用于脂質(zhì)體懸浮液中的有機溶劑可以是乙二醇、特別是丙二醇，其量在8-15％，特別是在10.0-12.5％之間變化，優(yōu)選為11.8％。
術(shù)語“有機成分”在這里是指由磷脂、親脂性添加劑、抗氧化劑和有機溶劑組成的混合物。
-將活性成分丙酸氯倍他索溶于有機成分中?；钚猿煞衷诮K組合物中的量在0.01-0.06％之間，優(yōu)選在0.02-0.055％，更優(yōu)選在0.02-0.05％之間。
-本發(fā)明制劑的液體成分主要由水構(gòu)成，并可包含多種添加劑，諸如電解液或優(yōu)選緩沖液系統(tǒng)，優(yōu)選為Tris鹽酸緩沖液。這種緩沖液系統(tǒng)將保持液體成分的pH值在5-7.5之間，優(yōu)選在6-7.2之間，更優(yōu)選在6.5-7之間。
本發(fā)明包括用于外部使用的完成的凝膠產(chǎn)品，它包括防腐劑、抗氧化劑和制備凝膠過程中常用的標(biāo)準(zhǔn)成分。
-可用作避免被微生物降解的防腐劑是苯甲酸、羥苯甲酸甲酯和對羥苯甲酸丙脂。后兩種防腐劑的量優(yōu)選分別為0.2％和0.02％。
-可用作保藏組合物的抗氧化劑是乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四乙酸二鈉(disodic edetate)和焦亞硫酸鈉(sodiummethabisulphite)。優(yōu)選是EDTA或焦亞硫酸鈉，它們的含量分別為0.0 1％和0.2％。
-本發(fā)明的組合物還包括適宜的膠凝劑，用于獲得外部使用的終產(chǎn)品形式，這些試劑可以是例如羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、它們的混合物或聚羧乙烯940，優(yōu)選聚羧乙烯940和三乙醇胺一起。這些膠凝劑的量將根據(jù)剩余成分而變化，一般為大約0.5-1.0％，特別是大約0.85％的聚羧乙烯940和0.65％的三乙醇胺。
為了避免在制備脂質(zhì)體制劑的過程中材料的降解，有益的是使用惰性氣體，例如氬或氮氣清洗所有的溶液，并且在惰性氣體氛圍下進行所有的步驟。
根據(jù)組合物的總重量，在終產(chǎn)品中理性的比例是(a)0.01-0.03％的丙酸氯倍他索；(b)0.5-4.0％的磷脂；(c)0.1-0.6％的膽固醇；(d)8-15％的丙二醇；(e)0.003-0.007％的BHT；(f)用于保持液體成分的pH值在5-7.5之間的緩沖劑；(g)足量的皮膚可接收的防腐劑和抗氧化劑，用以防止降解；(h)用于調(diào)節(jié)凝膠的pH的堿性劑；(i)0.5-1.0％的膠凝劑；(j)水優(yōu)選的組合物應(yīng)該如下，其中各成分丙酸氯倍他索的量是0.02-0.025％；磷脂的量為1.0-1.5％；膽固醇的量為0.2-0.4％；丙二醇的量為10-12.5％；膠凝劑的量為0.6-0.9％；較佳的組合物包括大約(根據(jù)組合物的總重量計)(a)0.025％的丙酸氯倍他索；(b)1.2％的磷脂；(c)0.3％的膽固醇；(d)11.8％的丙二醇；(e)0.005％的BHT；(f)0.1％的Tris(羥甲基)-氨基甲烷和0.02％的鹽酸水溶液(hydrochlorhydric acid)；(g)0.2％的羥苯甲酸甲酯和0.02％的對羥苯甲酸丙脂；(h)0.01％的EDTA和0.2％的焦亞硫酸鈉；
(i)0.65％的三乙醇胺；(j)0.85％的聚羧乙烯940；(k)水。
本發(fā)明中的丙酸氯倍他索脂質(zhì)體制劑優(yōu)選以下列方式制備(a)于第一個燒杯中在100-140℃，優(yōu)選在120-135℃之間加熱親脂性添加劑和一部分有機溶劑，使混合物冷卻到70-90℃，將磷脂、活性成分和抗氧化劑溶于其中并攪拌直到完全溶解；(b)優(yōu)選在70-90℃之間于第二個燒杯中加熱緩沖溶液，將其一部分加入到第一個燒杯中，其中所述第一個燒杯的溫度應(yīng)該保持在70-90℃之間，直到形成糊狀；(c)仍然在70-90℃之間，將第二個燒杯中的剩余物轉(zhuǎn)移到第一個燒杯中并在高效混合器下攪拌該混合物；(d)在第三個燒杯中將防腐劑溶于有機溶劑，優(yōu)選溶于混合物中，直到完全溶解；(e)向一部分水中加入第三個燒杯，優(yōu)選在混合器中的內(nèi)容物，溶解抗氧化劑和膠凝劑，向剩余的水中加入溶解的三乙醇胺和第一燒杯中的內(nèi)容物，優(yōu)選維持混合作用以使其均勻；在步驟(c)，可以使用任何類型的混合儀或勻化器，它可以在混合物上施加強力切割作用。通常，能夠達到2000-16000rpm，特別是2500-6000rpm轉(zhuǎn)速的混合器比較理想。在下面的階段中可以使用任何混合方法，特別是使用螺旋槳型攪棒的那些。
按照上述方式制備的脂質(zhì)體通常含有最高量的包封的活性成分，并且不需要分離未包封的脂質(zhì)體的步驟。
實施例實施例1.包封的丙酸氯倍他索制劑的制備用于制劑中的各成分的比例如下(表1)
步驟1.將膽固醇在大約六分之一的丙二醇中加熱到120-135℃。將混合物冷卻到大約70-90℃。在70-90℃將丙酸氯倍他索、大豆卵磷脂和丁化羥基甲苯溶于該混合物中。通過攪拌使之完全溶解。
2.在70-90℃下，在另一燒杯中將0.1g Tris(羥甲基)-氨基甲烷和0.02g的鹽酸溶于大約四分之一份水中。取出大約5毫升這種溶液并加入到在步驟1獲得的混合物中?；旌现钡叫纬珊隣?。
3.在70-90℃之間，將步驟2的混合物的剩余部分加入到糊狀物中。在高效混合器中以3000rpm勻化該混合物5分鐘。
4.在另一燒杯中將對羥基苯甲酸酯溶于剩余的丙二醇中，并通過持續(xù)攪拌使之完全溶解。
5.將大約一半的水加入到步驟4獲得的產(chǎn)物中，并持續(xù)攪拌。加入EDTA和焦亞硫酸鈉并持續(xù)攪拌直至完全溶解。分批加入聚羧乙烯940并劇烈攪拌連續(xù)30分鐘。將溶解的三乙醇胺加入到剩余的水中并立即將步驟3的產(chǎn)物混入。
所用的勻化器是具有高效剪切作用的POLYTRON分散器，在步驟4和5中所用的混合器是具有螺旋攪棒的機械攪拌器IKA。
在步驟5中獲得的脂質(zhì)體凝膠可以分配到適宜的容器，例如涂敷有PVC的鋁管中。
實施例2.該制劑對于用巴豆油誘發(fā)的小鼠耳朵水腫作用的試驗準(zhǔn)備一組10個動物(雄性小鼠，體重在28-32g)，通過應(yīng)用50μg巴豆油(5％)和乙醇(95％)(v/v)在小鼠右耳上誘發(fā)水腫。將同樣體積的乙醇應(yīng)用到左耳上。在誘發(fā)水腫30分鐘前局部施用試驗制劑。在每種情況下，將20毫克樣本施加到每只耳朵上。陰性對照組僅接收巴豆油。
按照如下形成試驗組組 劑量(μg氯倍他索/耳)DECLOBAN10Clovate霜 10表1的脂質(zhì)體凝膠5對照 未處理在誘發(fā)水腫后1，2，3，4，5和6小時所有組的動物經(jīng)頸椎脫位法處死。從切下的兩只耳朵上各獲取并稱重直徑5mm的圓片組織。
在表2中顯示了根據(jù)各治療組的耳朵的重量差異的平均值。可以看出在誘發(fā)水腫后4-6小時所有試驗組與對照組相比都具有顯著性差異(p＜0.05)，這顯示了試驗劑量的膏劑、霜劑和脂質(zhì)體制劑的抑制作用。
表2時間對照 膏劑10微克/耳霜劑10微克/耳脂質(zhì)體凝膠5(h) X±DSX±DSX±DS微克/耳X±DS1 0.77±0.71.70±1.12.74±1.61.08±0.62 3.17±2.02.65±2.72.51±0.91.86±0.63 6.84±2.83.16±1.64.47±2.15.03±2.44 7.72±2.62.35±1.55.17±2.44.41±3.75 9.42±1.93.47±2.43.86±2.24.26±2.66 7.76±2.03.51±2.82.88±1.72.95±2.7統(tǒng)計分析顯示，在以5微克(0.025％)丙酸氯倍他索/耳劑量的膏劑、霜劑和脂質(zhì)體凝膠之間在任何研究時間均無統(tǒng)計學(xué)差異。分別在4和5小時期間于膏劑治療組發(fā)現(xiàn)對水腫有較大的抑制。
在

圖1中顯示了對于由巴豆油誘發(fā)的水腫的抑制作用。用丙酸氯倍他索治療的各組的抑制反應(yīng)相似，但是在5微克/耳劑量的霜劑和脂質(zhì)體凝膠治療的組顯示較高的抑制作用。
比較用脂質(zhì)體凝膠治療的各組所獲得的結(jié)果，觀察到在炎癥最嚴(yán)重期間(5小時)對水腫的抑制作用最大。
實施例3試驗制劑對用棉球誘發(fā)的肉芽腫的影響使用體重在250-300克的雄性Wistar大鼠。將它們飼養(yǎng)在溫度控制在2℃±20℃，并12小時明/暗交替的環(huán)境中。
動物用30mg/kg的苯巴比妥鈉經(jīng)腹膜內(nèi)麻醉。在背區(qū)切一個切口，并插入兩個35±2mg的棉球，使其從傷口向下深入(settling)2厘米?？p合傷口并施用消炎藥以避免膿毒血癥。動物經(jīng)局部治療7天(0.3g樣本/棉球)，在第8天于醚環(huán)境下處死，取出肉芽腫并稱重。在65℃恒溫箱中干燥肉芽腫約24小時，以確定肉芽腫中的水含量(濕重-干重)和纖維粒度(干重-棉球重量)。如下形成各試驗組
組 劑量(μg氯倍他索/棉球)DECLOBAN膏劑150Clovate霜 150表1的脂質(zhì)體凝膠75對照 未處理在分析期間觀察到所有治療組的棉球的干重增加。
皮下插入棉球引起血管纖維囊形成，其中有單核細(xì)胞浸潤；它導(dǎo)致在植入原位形成肉芽腫。
圖2和3顯示了在應(yīng)用試驗藥物7天后獲得的水和纖維粒度含量。
圖2顯示含有丙酸氯倍他索的不同制劑所獲得的結(jié)果。觀察到在所有組中的抑制作用大小呈下列順序霜劑＞表1的脂質(zhì)體凝膠＞膏劑?？梢钥闯?，相對于對照組，所有試驗組的水分含量都有顯著性差異(p＜0.05)。從這些結(jié)果可得出結(jié)論，在實驗劑量時膏劑、霜劑和凝膠都發(fā)揮了抑制作用。
圖3顯示含有丙酸氯倍他索的不同制劑所獲得的結(jié)果。觀察到在所有組中的抑制作用大小呈下列順序霜劑＞表1的脂質(zhì)體凝膠＞膏劑。可以看出，相對于對照組，所有試驗組的纖維粒度含量都有顯著性差異(p＜0.05)。從這些結(jié)果可得出結(jié)論，在實驗劑量時膏劑、霜劑和凝膠都發(fā)揮了抑制作用。
將丙酸氯倍他索包封入脂質(zhì)體中是有利的，因為劑量可減少到用于其它制劑中常規(guī)劑量的一半，卻可以獲得相同的治療效果。
在前臨床研究中獲得的結(jié)果表明，0.025％的丙酸氯倍他索脂質(zhì)體凝膠在評估的試驗?zāi)Ｐ蜕嫌芯植靠寡鬃饔?，類似甚至在某些情況下優(yōu)于在常規(guī)霜劑和膏劑中觀察到的結(jié)果。
實施例4“體外”透皮吸收性的研究預(yù)先通過在固相中的同位素、催化和異種交換用氚進行丙酸氯倍他索的放射性標(biāo)記。獲得95％放射化學(xué)純的150mCi/mmol的比活性。將標(biāo)記的丙酸氯倍他所與不同成分制劑混合，它們?nèi)缦?.025％的丙酸氯倍他索的脂質(zhì)體凝膠；0.05％的丙酸氯倍他索凝膠；0.05％的丙酸氯倍他索霜劑；0.05％的丙酸氯倍他索膏劑；用于”體外”透皮吸收性研究的人類皮膚是從整形乳房手術(shù)中獲得的。
在皮膚上施用該制劑后24小時從接受部位中獲取樣本。接著進行剝離步驟，分離角質(zhì)層、表皮層和真皮層。通過液體閃爍儀測定所取的各樣本的放射活性。用這種方式進行的剝離基本上代表所施用的殘余物，盡管還存在角質(zhì)層的大多數(shù)表面層。
圖4顯示了在各種情況下相對于所施用活性測定的蓄積在樣本中的放射性活性百分率。它表明脂質(zhì)體制劑使較大濃度的丙酸氯倍他索沉積在皮膚上(大約所用劑量的50％)，與傳統(tǒng)的制劑相比，這在角質(zhì)層向其它接收部分較低的擴散率上尤其明顯，甚至在丙酸氯倍他索的劑量降低到一半時亦如此。
另一方面，觀察到在非脂質(zhì)體制劑中可于接受部分中發(fā)現(xiàn)最大量的丙酸氯倍他索，特別是膏劑為70％的情況下。從這個結(jié)果看出，在體內(nèi)應(yīng)用包封在脂質(zhì)體內(nèi)部的丙酸氯倍他索后向全身循環(huán)擴散的很低。
附圖簡述圖1通過對時間(小時)比較耳朵重量(毫克)的差異，顯示在研究期間該制劑對巴豆油誘發(fā)的水腫的抑制作用。
圖2在用各種實驗物質(zhì)進行治療7天后獲得的水含量值。
圖3顯示用各種實驗物質(zhì)治療7天后的纖維粒度含量。在圖中，相同的字母表示根據(jù)Duncan’s實驗無顯著性差異。
圖4顯示蓄積在分析樣本中的放射活性計數(shù)，和每一評估的制劑與所用的放射活性相關(guān)。
權(quán)利要求
1.一種用于局部施用的脂質(zhì)體制劑，它包含(a)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的丙酸氯倍他索；(b)磷脂；(c)親脂性添加物；(d)抗氧化劑；(e)有機溶劑；(f)緩沖劑，用于維持水成分的pH值在5-7.5之間；(g)防腐物質(zhì)；(h)膠凝劑；(i)水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中的脂質(zhì)體是多層囊泡。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制劑，其中所述脂質(zhì)體的大小在2000-5000nm，優(yōu)選在3500-4500nm之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所述磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酰膽堿和它們的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的制劑，其中所述磷脂是卵磷脂，優(yōu)選是大豆卵磷脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的制劑，其中卵磷脂在0.5-4.0％(重量/重量)，優(yōu)選在1.0％-1.5％之間，特別為1.2％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所述親脂性添加劑選自膽固醇、磷脂酸、芳基胺酯，其中膽固醇為優(yōu)選的添加劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制劑，其中所述親脂性添加劑的含量在0.1-0.6％(重量/重量)，優(yōu)選在0.2-0.4％之間，特別為大約0.3％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中在親脂性防腐劑的量和磷脂的量之間的比例在1∶1和1∶3之間，特別是在大約1∶2.5。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中用于脂質(zhì)體制備中的抗氧化劑是α-生育酚或丁化羥基甲苯(BHT)，優(yōu)選BHT，它的量為0.003-0.007％(重量/重量)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中在終形式中用于防腐的抗氧化劑是乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四乙酸二鈉和焦亞硫酸鈉。優(yōu)選是EDTA或焦亞硫酸鈉，它們的含量分別為0.01％和0.2％。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的制劑，其中所述有機溶劑是乙二醇，優(yōu)選它是丙二醇。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的制劑，其中所述有機溶劑在8-15％(重量/重量)，特別在10.0-12.5％之間，優(yōu)選為11.8％。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中用于維持水成分的pH值在5-7.5之間的的所述緩沖劑是0.1％(重量/重量)的Tris(羥甲基)-氨基甲烷和0.02％(重量/重量)的鹽酸水溶液。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所述防腐物質(zhì)是羥苯甲酸甲酯和對羥苯甲酸丙脂，它們的量分別為0.2％(重量/重量)和0.02％(重量/重量)。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所述膠凝劑選自羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、它們的混合物或聚羧乙烯940，優(yōu)選0.85％的聚羧乙烯940。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一的制劑，其終形式是凝膠。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種局部使用的含丙酸氯倍他索的脂質(zhì)體制劑，用于治療諸如過敏性皮炎和牛皮癬一類皮膚疾病，它具有極佳的感官性能，非常好的治療效果和在角質(zhì)層中良好的分布。脂質(zhì)體包括低濃度的作為活性成分的丙酸氯倍他索。這些脂質(zhì)體是穩(wěn)定的并具有雙層的大小在2000－5000nm的多層囊泡?；钚猿煞值牧績?yōu)選在0.02－0.025％之間。產(chǎn)品的藥物形式優(yōu)選為凝膠。
文檔編號A61K8/63GK1547465SQ01812895
公開日2004年11月17日 申請日期2001年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月17日
發(fā)明者X·佩茲古特茨, X 佩茲古特茨, L·D·L·C·加希亞萊昂, L C 加希亞萊昂, N·德拉帕茲馬丁－維阿納, 磷嚷磯 維阿納, A·羅切岡薩雷斯, 懈勻 姿, I·赫南德岡薩雷斯, 系賂勻 姿, ┩型吣傻掖錕, N·艾爾博托瓦納狄達克, D·格蘭德科特達, 嫉驢鋪卮 申請人:藥物研發(fā)中心