專利名稱：嘧啶化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，它們具有細胞循環(huán)抑制活性并因此可使用其抗癌(如抗細胞增殖、抗細胞遷移和/或編程性細胞死亡(apoptotic))活性，所以可用于治療人或動物體的方法中。本發(fā)明也涉及制備所述嘧啶衍生物的方法、含有所述嘧啶衍生物的藥物組合物和所述嘧啶衍生物在制備用于在溫血動物如人中產(chǎn)生抗細胞增殖作用的藥物中的用途。
一類稱作細胞周期蛋白的細胞內(nèi)蛋白質(zhì)在細胞循環(huán)中起重要的作用。細胞周期蛋白的合成和降解被嚴格控制以使其細胞循環(huán)期間的表達水平波動。細胞周期蛋白與周期表蛋白依賴性的絲氨酸/蘇氨酸激酶(CDKs)結(jié)合并且這種關(guān)系對于細胞中的CDK(如CDK1、CDK2、CDK4和/或CDK6)的活性來說是必要的。盡管對這些因子各自如何組合來調(diào)節(jié)CDK活性的細節(jié)了解甚少，但兩者之間的平衡決定細胞是不是經(jīng)細胞周期向前發(fā)展。
致癌基因和腫瘤抑制基因研究的最新綜合確定對進入細胞周期的調(diào)節(jié)是腫瘤有絲分裂期發(fā)生的關(guān)鍵控制點。而且，CDKs似乎是在多種致癌基因傳遞信號途徑的下游。因細胞周期蛋白的上調(diào)和/或內(nèi)源性抑制劑的缺失而失去對CDK活性的調(diào)節(jié)似乎是有絲分裂期發(fā)生的信號傳遞途徑和腫瘤細胞增殖之間的重要的軸心。
因此，意識到細胞循環(huán)激酶，特別是CDK2、CDK4和/或CDK6(它們分別操縱S-階段、G1-S和G1-S階段)抑制劑作為細胞增殖如哺乳動物癌細胞生長的選擇性抑制劑是有價值的。
此外，相信粘著斑激酶(FAK)(包括在信號傳道途徑中)的抑制誘導編程性細胞死亡(細胞死亡)和/或抑制細胞遷移并因此FAK抑制劑作為抗癌劑是有價值的。
本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)某些嘧啶化合物意想不到地抑制顯示CDK2、CDK4和CDK6選擇性的細胞循環(huán)激酶的作用，也抑制FAK并因此具有抗癌(抗細胞遷移/增殖和/或程序性細胞死亡)的作用。期望這些特性在在治療與異常細胞循環(huán)和細胞增殖相關(guān)疾病是有價值的，所述疾病如癌癥(固體腫瘤和白血病)、成纖維細胞增殖和分化疾病、牛皮癬、類風濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、粥樣硬化、動脈restenosis、自身免疫疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和視網(wǎng)膜血管增殖的眼疾病。
本發(fā)明提供式(I)或(I’)的嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯 其中Rx選自氫，鹵素，羥基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2個取代基取代的，所述取代基獨立地選自鹵素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羥基和三氟甲基]，C3-5鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基，或一個三氟甲基取代基取代的]，C3-5鏈炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不與-NH-鍵相連的一個有效碳原子上攜帶一個式(Ia)取代基，并且NO2(下文定義的)可以不攜帶或在任何有效碳原子上攜帶另一式(Ia)取代基 其中X是-CH2-，-O-，-NH-，-NRy-或-S-[其中Ry是C1-4烷基，未取代的或由一個選自鹵素，氨基，氰基，C1-4烷氧基或羥基的取代基取代的]；Y1是H，C1-4烷基或如Z的定義；Y2是H或C1-4烷基；Z是RaO-，RbRcN-，RdS-，ReRfNNRg-，連接雜芳基的氮或雜環(huán)的氮[其中所述雜環(huán)是未取代的或在環(huán)碳或環(huán)氮上由C1-4烷基或C1-4烷?；〈腯，其中Ra，Rb，Rc，Rd，Re，Rf和Rg獨立地選自氫，C1-4烷基，C2-4鏈烯基，C3-8環(huán)烷基，并且其中所述C1-4烷基C2-4鏈烯基是未取代的或由一個或多個苯基取代的；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季銨N-連接的5-，6-或7-元單環(huán)雜環(huán)部分，它包含一個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫的雜原子或者-NQ2是非季銨N-連接的8-，9-或10-元單環(huán)雜環(huán)部分，它包含一個或兩個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫的雜原子，其中如果所述雜環(huán)部分包含-NH-部分，那么氮可以是未取代的或由下列取代基取代的，所述取代基選自C1-6烷基，C1-6烷?；?，C1-6烷基磺?；?，C1-6烷氧基羰基，芐基，苯甲酰基或苯基磺?；?；并且Q1和-NQ2可以可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達4個取代基，所述取代基獨立地選自鹵素，羥基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基或一個三氟甲基取代基取代的]，C2-4鏈炔基，C1-5烷?；?，C1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羥基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲酰基-C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；?C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，嗎啉-C1-3烷基，硫嗎啉-C1-3烷基，咪唑-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基，嗎啉基，硫嗎啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，鹵素-C1-4烷氧基，2-羥基乙氧基，C2-4烷?；?C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，2-吡咯烷-1-基-乙氧基，2-哌啶子基-乙氧基，2-哌嗪-1-基-乙氧基，2-嗎啉-乙氧基，2-硫嗎啉-乙氧基，2-咪唑-1-基-乙氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亞磺酰基，C1-4烷基磺?；?，羥基-C2-4烷硫基，羥基-C2-4烷基亞磺?；u基-C2-4烷基磺?；?，脲基(H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲?；?，N-[C1-4烷基]氨基甲酰基，N，N-二-[C1-4烷基]氨基甲酰基，氨基，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷?；被被酋?，N-[C1-4烷基]氨磺酰，N，N-二-[C1-4烷基]氨磺酰，并且如果適宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可以可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達2個其他取代基，所述取代基獨立地選自C3-8環(huán)烷基，苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯硫基，苯基，萘基，苯甲?；窖趸?，苯并咪唑-2-基，和5-或6-元芳族雜環(huán)(通過環(huán)碳原子連接并且包含1-3個獨立地選自氧，硫和氮的雜原子)；其中所述萘基，苯基，苯甲酰基，苯氧基，5-或6-元芳族雜環(huán)取代基并且在所述苯基-C1-4烷基，苯硫基和苯基-C1-4烷氧基取代基中的苯基可以可有可無地攜帶一或兩個獨立地選自鹵素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
適宜的作為非季銨N-連接的包含一個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫雜原子的5-，6-或7-元單環(huán)雜環(huán)部分的-NQ2是單環(huán)雜環(huán)部分，它包含(在與(I)或(I’)中的嘧啶環(huán)連接之前)游離的-NH，如吡咯，2-二氫吡咯，3-二氫吡咯，吡咯烷，咪唑，咪唑啉，咪唑烷，吡唑，吡唑啉，吡唑烷，三唑，哌啶，嗎啉，硫嗎啉，哌嗪，高哌嗪或高哌啶。
適宜的作為非季銨N-連接的包含一個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫雜原子的8-，9-或10-元單環(huán)雜環(huán)部分的-NQ2是二環(huán)雜環(huán)部分，它包含(在與(I)或(I’)中的嘧啶環(huán)連接之前)游離的-NH，如1H-咪唑并[1，2-a]吡咯，吲哚，異吲哚，二氫吲哚，異吲唑(苯并吡唑)，苯并咪唑或嘌呤(或這些基團中任一基團的部分或全部氫化變型)；或部分或全部飽和的芳族雜環(huán)，它飽和(在與(I)或(I’)中的嘧啶環(huán)連接之前)游離的-NH，如部分或全部飽和的喹啉衍生物(如1，2-二氫喹啉基或1，2，3，4-四氫喹啉基)，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基，喹喔啉基，2，3-二氮雜萘基，萘啶基，苯并噁唑，苯并噻唑，咪唑并[1，2-a]吡啶，咪唑并[1，5-a]吡啶，咪唑并[1，2-c]嘧啶，咪唑并[1，2-a]嘧啶，咪唑并[1，5-a]嘧啶，咪唑并[1，2-a]吡嗪或咪唑并[1，5-a]吡嗪或4，5，6，7-四氫噻吩并[2，3-c]吡啶-6-基。
對于適宜的作為非季銨N-連接的包含一個氮雜原子(并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫雜原子)的8-，9-或10-元單環(huán)雜環(huán)部分的-NQ2來說，與(I)或(I’)中嘧啶環(huán)的連接可以通過兩個二環(huán)雜環(huán)部分中的任一氮原子進行，前提條件是所述環(huán)系統(tǒng)保持非季銨化。
例如，適宜的-NQ2為吲哚，異吲哚，二氫吲哚，異吲唑(苯并吡唑)，苯并咪唑，嘌呤或1，2，3，4-四氫喹啉基。
或者，例如，-NQ2為吲哚，二氫吲哚，苯并咪唑，1，2，3，4-四氫喹啉基哌嗪或嗎啉。
當所述環(huán)是5-或6-元芳族雜環(huán)(通過環(huán)碳原子連接并且包含1-3個獨立地選自氧，硫和氮的雜原子)時，適宜的環(huán)取代基是，例如吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，異噁唑，噻唑，吡啶基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基或?qū)?異噁嗪。
當基團(Ia)是“氮連接的雜芳基”時，基團(Ia)中適宜的Z是具有不飽和度的單環(huán)或二環(huán)，它包含4-12個原子，其中至少一個原子選自氮，并且可有可無地包含1-3個其他選自氮，硫或氧的原子，其中-CH2-可以不被替代或被-C(O)-替代，并且環(huán)上硫和/或氮原子可以不被氧化或氧化形成S-氧化物和/或N-氧化物。適宜的“氮連接的雜芳基”是包含5或6個原子的單環(huán)或包含9或10個原子的二環(huán)。氮連接導致中性化合物形成。適宜的“氮連接的雜芳基”包括咪唑-1-基，吡咯啉-1-基，咪唑啉-1-基，吡唑啉-1-基，三唑-1-基，吲哚-1-基，異吲哚-2-基，二氫吲哚-1-基，苯并咪唑-1-基，吡咯-1-基或吡唑-1-基。優(yōu)選地，“氮連接的雜芳基”是咪唑-1-基。
當基團(Ia)是“氮連接的雜環(huán)”時，基團(Ia)中適宜的Z是不飽和的單環(huán)或二環(huán)，它包含4-12個原子，其中至少一個原子選自氮，并且可有可無地包含1-3個其他選自氮，硫或氧的原子，其中-CH2-可以不被替代或被-C(O)-替代，并且環(huán)上硫可以不被氧化或氧化形成S-氧化物。適宜的“氮連接的雜環(huán)”是包含5或6個原子的單環(huán)或包含9或10個原子的二環(huán)。適宜的“氮連接的雜環(huán)”包括吡咯烷-1-基，哌啶子基，哌嗪-1-基，嗎啉，硫嗎啉，高哌啶-1-基或高哌嗪-1-基。優(yōu)選地，“氮連接的雜環(huán)基”是吡咯烷-1-基，哌嗪-1-基或嗎啉。
在本說明書中，術(shù)語“烷基”包括直鏈和支鏈烷基，但對于個別烷基如“丙基”的參考僅對直鏈變型是特異性的。類似的約定也適用于其他一般術(shù)語。
以上提到適宜的一般基團(如在Q1和-NQ2上的取代基)包括下列基團鹵素如氟，氯，溴和碘；C2-4鏈烯基如乙烯基和烯丙基；C3-5鏈烯基如烯丙基和丁烯-3-基；C3-5鏈炔基如丙炔-2-基；C2-4鏈炔基如乙炔基和丙炔-2-基；C1-5烷酰基如甲?；鸵阴；?；C1-3烷氧基羰基如甲氧基羰基，乙氧基羰基和丙氧基羰基；C1-4烷氧基羰基如甲氧基羰基，乙氧基羰基，丙氧基羰基和叔丁氧基羰基；C1-3烷基如甲基，乙基，丙基，異丙基；C1-4烷基如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基或叔丁基；C1-6烷基如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，3-甲基丁基或己基；羥基-C1-3烷基如羥甲基，1-羥乙基，2-羥乙基和3-羥丙基；氟-C1-4烷基如氟甲基，二氟甲基，三氟甲基和2-氟乙基；氨基-C1-3烷基如氨基甲基，1-氨基乙基和2-氨基乙基；C1-4烷基氨基-C1-3烷基如甲基氨基甲基，乙基氨基甲基，1-甲基氨基乙基，2-甲基氨基乙基，2-乙基氨基乙基和3-甲基氨基丙基；二-[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基如二甲基氨基甲基，二乙基氨基甲基，1-二甲基氨基乙基，2-二甲基氨基乙基和3-二甲基氨基丙基；氰基-C1-4烷基如氰基甲基，2-氰基乙基和3-氰基丙基；C2-4烷酰氧基-C1-4烷基如乙酰氧基甲基，丙酰氧基甲基，丁酰氧基甲基，2-乙酰氧基乙基和3-乙酰氧基丙基；C1-4烷氧基-C1-3烷基如甲氧基甲基，乙氧基甲基，1-甲氧基乙基，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基和3-甲氧基丙基；羧基-C1-4烷基如羧甲基，1-羧基乙基，2-羧乙基和3-羧丙基；C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基如甲氧基羰基甲基，乙氧基羰基甲基，叔丁氧基羰基甲基，1-甲氧基羰基乙基，1-乙氧基羰基乙基，2-甲氧基羰基乙基，2-乙氧基羰基乙基，3-甲氧基羰基丙基和3-乙氧基羰基丙基；氨基甲酰基-C1-4烷基如氨基甲?；谆?，1-氨基甲?；一?，2-氨基甲?；一?-氨基甲酰基丙基；N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷基如N-甲基氨基甲?；谆琋-乙基氨基甲?；谆?，N-丙基氨基甲酰基甲基，1-(N-甲基氨基甲?；?乙基，1-(N-乙基氨基甲?；?乙基，2-(N-甲基氨基甲?；?乙基，2-(N-乙基氨基甲?；?乙基和3-(N-甲基氨基甲酰基)丙基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；?C1-4烷基如N，N-二甲基氨基甲?；谆?，N-乙基-N-甲基氨基甲酰基甲基，N，N-二乙基氨基甲酰基甲基，1-(N，N-二甲基氨基甲?；?乙基，1-(N，N-二乙基氨基甲酰基)乙基，2-(N，N-二甲基氨基甲?；?乙基，2-(N，N-二乙基氨基甲?；?乙基和3-(N，N-二甲基氨基甲?；?丙基；吡咯烷-1-基-C1-3烷基如吡咯烷-1-基甲基和2-吡咯烷-1-基乙基；哌啶-1-基-C1-3烷基如哌啶-1-基甲基和2-哌啶-1-基乙基；哌嗪-1-基-C1-3烷基如哌嗪-1-基甲基和2-哌嗪-1-基乙基；嗎啉-C1-3烷基如嗎啉甲基和2-嗎啉乙基；硫嗎啉-C1-3烷基如硫嗎啉甲基和2-硫嗎啉乙基；咪唑-1-基-C1-3烷基如咪唑-1-基甲基和2-咪唑-1-基乙基；C1-3烷氧基如甲氧基，乙氧基，丙氧基或異丙氧基；C1-4烷氧基如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基或丁氧基；氰基-C1-4烷氧基如氰基甲氧基，1-氰基乙氧基，2-氰基乙氧基和3-氰基丙氧基；氨基甲酰基-C1-4烷氧基如氨基甲?；籽趸?，1-氨基甲?；已趸?-氨基甲?；已趸?-氨基甲酰基丙氧基；N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷氧基如N-甲基氨基甲酰基甲氧基，N-乙基氨基甲酰基甲氧基，2-(N-甲基氨基甲酰基)乙氧基，2-(N-乙基氨基甲酰基)乙氧基和3-(N-甲基氨基甲?；?丙氧基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；?C1-4烷氧基如N，N-二甲基氨基甲?；籽趸?，N-乙基-N-甲基氨基甲?；籽趸?，N，N-二乙基氨基甲?；籽趸?-(N，N-二甲基氨基甲酰基)乙氧基，2-(N，N-二乙基氨基甲?；?乙氧基和3-(N，N-二甲基氨基甲酰基)丙氧基；2-C1-4烷基氨基乙氧基如2-(甲基氨基)乙氧基，2-(乙基氨基)乙氧基和2-(丙基氨基)乙氧基；2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基如2-(二甲基氨基)乙氧基，2-(N-乙基-N-甲基氨基)乙氧基，2-(二乙基氨基)乙氧基和2-(二丙基氨基)乙氧基；C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基如甲氧基羰基甲氧基，乙氧基羰基甲氧基，1-甲氧基羰基乙氧基，2-甲氧基羰基乙氧基，2-乙氧基羰基乙氧基和3-甲氧基羰基丙氧基；鹵代-C1-4烷氧基如二氟甲氧基，三氟甲氧基，2-氟乙氧基，2-氯乙氧基，2-溴乙氧基，3-氟丙氧基和3-氯丙氧基；C2-4烷酰氧基-C2-4烷氧基如2--乙酰氧基乙氧基，2-丙酰氧基乙氧基，2-丁酰氧基乙氧基和3-乙酰氧基丙氧；2-C1-4烷氧基乙氧基如2-甲氧基乙氧基，2-乙氧基乙氧基；羧基-C1-4烷氧基如羧基甲氧基，1-羧基乙氧基，2-羧基乙氧基和3-羧基丙氧基；C3-5鏈烯氧基如烯丙氧基；C3-5鏈炔氧基如丙炔氧基；C1-4烷硫基如甲硫基，乙硫基或丙硫；C1-4烷基亞磺?；缂谆鶃喕酋；一鶃喕酋；虮鶃喕酋；?；C1-4烷基磺?；缂谆酋；?，乙磺酰基或丙磺?；?；N-C1-4烷基氨基甲?；鏝-甲基氨基甲?；?，N-乙基氨基甲?；蚇-丙基氨基甲酰基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；鏝，N-二甲基氨基甲?；?，N-乙基-N-甲基氨基甲酰基和N，N-二乙基氨基甲酰基；C1-4烷基氨基或C1-3烷基氨基如甲氨基，乙氨基或丙氨基；二-[C1-4烷基]-氨基或二-[C1-3烷基]-氨基如二甲基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，二乙基氨基，N-甲基-N-丙基氨基或二丙基氨基；C2-4烷?；被缫阴０被?，丙酰氨基或丁酰氨基；苯基-C1-4烷基如芐基或2-苯乙基；苯基-C1-4烷氧基如芐氧基；C3-8環(huán)烷基如環(huán)丙基，環(huán)戊基或環(huán)己基；羥基C2-4烷硫基如2-羥基乙硫基或2-羥基丙硫基；羥基C2-4烷基亞磺?；?-羥基乙基亞磺?；?-羥基丙基亞磺酰基；羥基C2-4烷基磺酰基如2-羥基乙基磺?；?-羥基丙基磺?；籒-(C1-4烷基)氨磺?；鏝-甲基氨磺酰基或N-乙基氨磺?；籒，N-二-(C1-4烷基)氨磺?；鏝，N-二甲基氨磺?；琋-乙基-N-甲基氨磺?；?；或N，N-二乙基氨磺酰基。
本發(fā)明嘧啶衍生物適宜的可藥用鹽是，例如本發(fā)明具有足夠堿性的嘧啶衍生物的酸加成鹽，例如與無機或有機酸酸的酸加成鹽，所述酸的實例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸，三氟乙酸，檸檬酸或馬來酸。另外，本發(fā)明具有足夠酸性的嘧啶衍生物適宜的可藥用鹽是堿金屬鹽，例如鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽，銨鹽或與提供生理上可耐受陽離子的有機堿的鹽，例如與甲胺，二甲胺，三甲胺，哌啶，嗎啉或三-(2-羥乙基)胺的鹽。
式(I)或(I’)化合物可以以前藥的形式給予，所述前藥在人體或動物體內(nèi)裂解得到式(I)或(I’)化合物。前藥的實例包括體內(nèi)可水解的式(I)或(I’)化合物的酯。
體內(nèi)可水解的包含羥基或羧基的式(I)或(I’)化合物的酯是，例如在人體或動物體內(nèi)水解產(chǎn)生原始酸或醇的可藥用酯。羧酸適宜的可藥用酯包括C1-6烷氧基甲酯如甲氧基甲酯，C1-6烷酰氧基甲酯如新戊酰氧基甲酯，肽基酯，C3-8環(huán)烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯如1-環(huán)己基羰基氧基乙酯；1，3-二dioxolen-2-only甲酯如5-甲基-1，3-二dioxolen-2-only甲酯；和C1-6烷氧基羰基氧基乙酯如1-甲氧基羰基氧基乙酯并且可以在本發(fā)明化合物的任一羧基上形成。
體內(nèi)可水解的包含羥基的式(I)或(I’)化合物的酯包括無機酯如磷酸酯(包括氨基磷酸環(huán)酯)和α-酰氧基烷基醚及其在體內(nèi)水解產(chǎn)生原始羥基的相關(guān)化合物。α-酰氧基烷基醚的實例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。可與羥基形成體內(nèi)可水解酯的基團包括烷?；?，，苯甲?；?，苯乙?；鶄€取代的苯甲?；捅揭阴；?，烷氧基羰基(提供碳酸酯)，二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲?；?提供氨基甲酸酯)，二烷基氨基乙?；汪然阴；１郊柞；〈膶嵗ㄓ傻油ㄟ^亞甲基連接到苯甲?；h(huán)3-或4-位的嗎啉基和哌嗪基。
某些式(I)或(I’)化合物可能具有手性中心和/或幾何異構(gòu)中心(E-和Z-異構(gòu)體)，并且可以理解，本發(fā)明包括所有具有CDK和/或FAK抑制劑活性的光學非對映異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體(及其混合物)。
本發(fā)明涉及具有CDK和/或FAK抑制劑活性的式(I)或(I’)化合物的任一和所有互變異構(gòu)形式。
也可以理解，某些式(I)或(I’)化合物可以異溶劑化以及非溶劑化形式如水合形式存在?？梢岳斫?，本發(fā)明包括所有具有CDK和/或FAK抑制劑活性的溶劑化形式。
本發(fā)明另一方面提供式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯 其中
Rx選自氫，鹵素，羥基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2個取代基取代的，所述取代基獨立地選自鹵素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羥基和三氟甲基]，C3-5鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基，或一個三氟甲基取代基取代的]，C3-5鏈炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不與-NH-鍵相連的一個有效碳原子上攜帶一個式(Ia’)取代基，并且-NO2(下文定義的)可以不攜帶或在任何有效碳原子上攜帶另一式(Ia’)取代基 其中X是CH2，O，NH或S；Y是H或如Z的定義；Z是OH，SH，NH2，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，-NHC1-4烷基，-N[C1-4烷基]2，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，嗎啉代或硫嗎啉基；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季銨N-連接的8-，9-或10-元雙環(huán)雜環(huán)部分，它包含一個或兩個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫的雜原子；并且Q1和-NQ2可以可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達4個取代基，所述取代基獨立地選自鹵素，羥基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基或一個三氟甲基取代基取代的]，C2-4鏈炔基，C1-5烷?；珻1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羥基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲?；?C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；?C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，嗎啉-C1-3烷基，硫嗎啉-C1-3烷基，哌嗪-1-基，嗎啉基，硫嗎啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲?；?C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲?；?C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，鹵素-C1-4烷氧基，2-羥基乙氧基，C2-4烷酰基-C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亞磺?；?，C1-4烷基磺?；?，脲基(H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲?；?，N-[C1-4烷基]氨基甲?；琋，N-二-[C1-4烷基]氨基甲?；被?，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷酰基氨基，并且如果適宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達2個其他取代基，所述取代基獨立地選自苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯基，萘基，苯甲?；?-或6-元芳族雜環(huán)(通過環(huán)碳原子連接并且包含1-3個獨立地選自氧，硫和氮的雜原子)；其中所述萘基，苯甲?；?，5-或6-元芳族雜環(huán)取代基和在所述并且在所述苯基-C1-4烷基和苯基-C1-4烷氧基取代基上的苯基可有可無地攜帶一或兩個獨立地選自鹵素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包含式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中RX，Q1，-NQ2，X，Y，Z，m和n具有上文所定義的任一含義，或任一下列值(a)、優(yōu)選地，-NQ2為二氫吲哚；(b)、更優(yōu)選地，-NQ2為二氫吲哚，哌嗪，嗎啉，二氫吲哚，1，2，3，4-四氫化萘，苯并咪唑或吲哚；(c)、優(yōu)選地，RX選自氫，鹵素，羥基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2個取代基取代的，所述取代基獨立地選自鹵素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羥基和三氟甲基]，C3-5鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基，或一個三氟甲基取代基取代的]，C3-5鏈炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基；(d)、更優(yōu)選地，RX選自氫，鹵素(尤其氯)，硝基和C1-3烷基(尤其甲基)；RX特別優(yōu)選氫或氯；(e)、RX特別是氫，氟，氯，溴或甲基；(f)、優(yōu)選地，在式(Ia’)取代基中，X為O，Y為OH并且Z為-N[C1-4烷基]2；優(yōu)選地，n為1并且m為1；(g)、優(yōu)選地，在式(Ia)取代基中，X為O，Y1為OH，Y2為H并且Z為-N[C1-4烷基]2；優(yōu)選地，n為1并且m為1；(h)、最優(yōu)選地，式(Ia)或(Ia’)取代基為3-二甲基氨基-2-羥基丙氧基；(i)、優(yōu)選地，有一個式(Ia)或(Ia’)取代基，即優(yōu)選-NQ2不攜帶式(Ia)或(Ia’)取代基；(j)、Q1中式(Ia)或(Ia’)取代基必須在-NH-的對位或間位，優(yōu)選地在對位；(k)、其他優(yōu)選的-NQ2的取代基包括鹵素(特別是溴)，C1-5烷?；?特別是乙?；?和C1-4烷基(特別是甲基)；(l)、優(yōu)選地，不攜帶式(Ia)或(Ia’)取代基的環(huán)-NQ2由一個或兩個其他取代基取代，優(yōu)選鹵素(特別是溴)，C1-5烷?；?特別是乙?；?和C1-4烷基(特別是甲基)；(m)、優(yōu)選地，-NQ2是未取代的或由鹵素，C1-5烷?；駽1-4烷基取代的，并且如果-NQ2中的雜環(huán)部分包含-NH-部分，那么優(yōu)選地，氮是未取代的或由C1-6烷氧基羰基取代的；(n)、-NQ2是二氫吲哚，4-叔丁氧基羰基哌嗪，哌嗪，嗎啉，2-甲基二氫吲哚，5-溴二氫吲哚，5-乙?；溥胚幔?，3-二甲基二氫吲哚，1，2，3，4-四氫化萘，苯并咪唑或吲哚；(o)、優(yōu)選地，如果-NQ2中的雜環(huán)部分包含-NH-部分，那么優(yōu)選地，氮是未取代的或由C1-6烷氧基羰基取代的；(p)、一方面，本發(fā)明優(yōu)選化合物是式(I)化合物；并且(q)、另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式(I’)化合物。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式(I)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1為苯基并且-NQ2為二氫吲哚；
RX為氫或氯(特別是氫)；Q1攜帶一個式(I)或(I’)取代基(特別是3-二甲基氨基-2-羥基丙氧基)，優(yōu)選地在對位；-NQ2攜帶一個或兩個獨立地選自鹵素(特別是溴)，C1-5烷酰基(特別是乙酰基)和C1-4烷基(特別是甲基)的取代基。
更優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Q1為苯基并且-NQ2為二氫吲哚，哌嗪(未取代的或在4-氮上由叔丁氧基羰基取代的)，嗎啉，1，2，3，4-四氫化萘，苯并咪唑或吲哚；RX為氫，氟，氯，溴或甲基；Q1在式(I)或(I’)的對位攜帶一個取代基，該取代基為3-二甲基氨基-2-羥基丙氧基；-NQ2在碳上攜帶一個或兩個獨立地選自溴，乙?；图谆娜〈?。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物是實施例5(下文描述)中的式(I)嘧啶衍生物；或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
在本發(fā)明另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括任一實施例化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
本發(fā)明優(yōu)選的方面是與所述化合物或其可藥用鹽有關(guān)的化合物。
可通過已知用于制備化學相關(guān)化合物的任何方法來制備式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。當用于制備式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯時，所述方法作為本發(fā)明另一特征描述并且由下列代表性實施例說明，其中(除非另外說明)，Q1，-NQ2，RX，X，Y1，Y2，Z，m和n具有上文關(guān)于式(I)或(I’)嘧啶衍生物所定義的任何含義，并且除非環(huán)Q1或-NQ2上的另一取代基被取締，否則，所述環(huán)可以攜帶上文所描述的任一取代基(未保護的或者如果需要也可以是保護的)。如果環(huán)Q1上的一個取代基被取締，那么這種情況包括(除非另外說明)除了或者代替在環(huán)Q1上，所述取代基在環(huán)-NQ2上的可能性(視情況而定)。如果X在該部分定義為-NH-，那么可以理解這也包括X作為-NRy-的可能性。必需的起始物質(zhì)可通過標準有機化學方法(例如，參見Advanced Organic Chemistry(Wiley-Interscience)，Jerry March-也用作反應(yīng)條件和試劑的一般指導)獲得。所述起始物質(zhì)的制備在補充非限制性方法和實施例中描述。或者，必需的起始物質(zhì)可通過有機化學普通技術(shù)范圍內(nèi)所描述的類似方法獲得。2，4-嘧啶方法因此，本發(fā)明另一特征是本發(fā)明提供下列制備式(I)化合物的方法，該方法包括方法a)、將式(II)嘧啶 其中L為下文所定義的可替換基團；與式(III)化合物反應(yīng) 方法b)、將式(IV)嘧啶 其中L為下文所定義的可替換基團；與式(V)化合物反應(yīng) 方法c)、對于其中n為1，2或3，m＝1，Y2為H并且Y1為OH，NH2或SH的式(I)化合物來說，將包含式(VI)化合物的3元雜烷基環(huán) 其中A為O，S或NH；與式(VII)親核試劑反應(yīng)Z-D(VII)其中D為H或適宜的反荷離子；方法d)、對于其中X為氧的式(I)化合物來說，將式(VIII)醇 與式(IX)醇反應(yīng) 方法e)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1為OH，Y2為H并且m為2或3的式(I)化合物來說，將式(X)化合物 其中LgO為下文所定義的離去基團；與式(VII)親核試劑反應(yīng)；方法f)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1為H，Y2為H，n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I)化合物來說，將式(XI)化合物 其中LgO為下文所定義的離去基團；與式(VII)親核試劑反應(yīng)；方法g)、對于其中X為-O-，-NH-或-S-，Y1為H，Y2為H，n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I)化合物來說，將式(XII)化合物 與式(XIII)化合物反應(yīng)； 其中L為下文所定義的可替換基團；方法h)、對于其中Z為HS-的式(I)化合物來說，將相應(yīng)化合物中的硫代乙酸根基進行轉(zhuǎn)化；并且如果需要i)、將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I)化合物；ii)、除掉任何保護基；iii)、形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
L為可替換基團，適宜的L基為例如鹵素或磺酰氧基，例如氯，溴，甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。其他適宜的L基包括鹵素，甲磺?；?，甲硫基和甲基亞磺?；?。
D為氫或反荷離子，當D為反荷離子時，適宜的D包括鈉和鉀。
LgO為離去基團。適宜的LgO包括甲磺酸根和甲苯磺酸根。
上述反應(yīng)的特定反應(yīng)條件如下方法a)、式(II)嘧啶和式(III)化合物可以一起反應(yīng)i)、可有可無地在適宜的酸例如無機酸如鹽酸或硫酸，或者有機酸如乙酸或甲酸存在下。優(yōu)選地，該反應(yīng)在適宜的惰性溶劑或稀釋劑，例如二氯甲烷(DCM)，乙腈，丁醇，四甲基砜，四氫呋喃，1，2-二甲氧基乙烷，N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷-2-酮中，在溫度范圍，例如0-150℃，優(yōu)選在回流溫度或其附近進行；或者ii)、在標準Buchwald條件下(例如，參見J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Org.Chem.，62，1568和6066)，例如在醋酸鈀存在下，在適宜的溶劑，例如芳族溶劑如甲苯，苯或二甲苯中，用適宜的堿，例如無機堿如碳酸銫或有機堿如叔丁醇鉀，在適宜的配體如2，2’-二(二苯基膦)-1，1’-二萘基存在下并且在25-80℃的溫度范圍。
式(II)嘧啶可以按照下列合成方案制備 其中Ra是未取代的或取代的烷基或芳基并且L是上述定義的可替換基團。優(yōu)選地，Ra為甲基，乙基或?qū)妆交?br> 式(V)和(III)化合物可通過商業(yè)渠道獲得或者可通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法b)、式(IV)嘧啶和式(V)化合物可以一起在適宜的溶劑，例如酮如丙酮，或醇如乙醇或丁醇，或芳香烴如甲苯或N-甲基吡咯烷，或溶劑如四甲基砜存在下，可有可無地在適宜的酸(如上述方法a)中所定義的那些或Lewis酸)或堿(如Hunig’s堿或碳酸鈣)存在下，在0℃-回流溫度，優(yōu)選地在回流溫度下反應(yīng)。
式(IV)嘧啶可以按照下列合成方案制備
式(IVA)，(III)和(V)化合物可通過商業(yè)渠道獲得或者可通過本領(lǐng)域已知的方法制備。例如，式(IVA)嘧啶可通過將其中L為-OH的式(IVA)化合物(即尿嘧啶)與POCl3反應(yīng)，得到其中L為-Cl的式(IVA)化合物來制備。方法c)、將包含式(VI)化合物的3-元雜烷基環(huán)與式(VII)親核試劑一起在20-100℃，優(yōu)選在20-50℃的溫度下，可有可無地在適宜的溶劑，例如N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亞砜或四氫呋喃中反應(yīng)。
式(VI)化合物可按照下列合成方案制備合成方案I)、對于其中A為O并且X不為碳的式(VI)化合物 (VIB)轉(zhuǎn)化為(VI)也可以通過在DMF中，在堿存在下與Br-(CH2)n-CHO或相當?shù)孽シ磻?yīng)，然后在適宜的惰性溶劑如THF中與硫反應(yīng)得到(Me2SOCH2)進行(參見合成方案V)。合成方案II)、對于其中A為NH并且X不為碳的式(VI)化合物 (關(guān)于PhINTs，例如參見Tet.Let.，1997，38(39)，6897-6900；式(VIC)化合物也可以在類似于下文合成方案IV的條件下氧化為環(huán)氧化物)；合成方案III)、對于其中A為S并且X不為碳的式(VI)化合物 (例如，參見Synlett，1994，267-268)；合成方案IV)、對于其中X為碳的式(VI)化合物 其中R3與它所連接的-COO-一起形成酯，例如甲酯或乙酯。合成方案V)、對于其中X為CH2，O，NH或S；Y1為OH；Y2為H；n為1，2或3并且m為1的式(VI)化合物 (VIJ)與(IV)反應(yīng)(以合成方案I的方式)得到(VI)。
也可以使用相當?shù)孽?VIH)。也參見Russ.Chem.Rev.47，975-990，1978。
式(VIH)，(VII)和(VIA)和(VIE)可以通過商業(yè)渠道獲得或者通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法d)、式(VIII)和(IX)醇(或酚)可以在標準Mitsunobu條件下一起反應(yīng)。例如在偶氮二羧酸二乙酯和三苯基膦存在下，在適宜的溶劑如二氯甲烷，甲苯或四氫呋喃中，在0-80℃，優(yōu)選在20-60℃的溫度范圍。或者式(VIII)醇可以用其中末端羥基被適宜的離去基團取代的適宜的式(IX)化合物烷基化。
式(VIII)醇可按照上述合成方案I)中合成中間體(VIB)(其中X為氧)的方法制備。
式(IX)醇可通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。
在類似于方法d)的方法中，其中X為-S-的化合物可通過將其中羥基為-SH的式(VIII)化合物與其中羥基為離去基團如甲磺酸根或甲苯磺酸根的式(IX)化合物反應(yīng)制備。方法e)、其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1為OH；Y2為H并且m為2或3的式(X)化合物與式(VII)親核試劑一起在20-100℃，優(yōu)選20-50℃的溫度下，可有可無地在適宜的溶劑，例如N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亞砜或四氫呋喃中，并且可有可無地在適宜的堿如碳酸鉀存在下反應(yīng)。
式(X)化合物可按照下列合成方案制備(m為2或3) 在最后步驟中步驟1)和2)的順序可以顛倒。步驟2)中適宜的堿為三乙胺。
式(XA)和(VII)化合物可以通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。例如，其中X為-NH-，-O-或-S-的式(XA)化合物可通過將式(VIA)化合物在該反應(yīng)標準條件下與適宜的鹵代醛或相當?shù)孽シ磻?yīng)制備。方法f)、式(XI)化合物和式(VII)親核試劑如方法e)所述一起反應(yīng)。
式(XI)化合物可按照本方法制備上述式(X)化合物最終步驟中步驟2)類似的方法制備。必需的伯醇起始物質(zhì)可通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法g)、式(XII)和(XIII)化合物在惰性溶劑如DMF中，在堿如碳酸鉀存在下反應(yīng)。
式(XII)化合物具有與本文所描述的式(VIB)化合物相同的通式并且如那些化合物所述(參見合成方案I)制備。式(XIII)化合物可通過商業(yè)渠道和或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法h)、對于其中Z為SH的式(I)化合物，在相應(yīng)化合物中硫代乙酸根的轉(zhuǎn)化如本文式(IJ)轉(zhuǎn)化為(IK)化合物時所描述的那樣進行。
適宜的包含硫代乙酸根的起始物質(zhì)如本文式(IG)轉(zhuǎn)化為(IJ)化合物時所描述的那樣，用相應(yīng)的包含離去基團如甲磺酸根和甲苯磺酸根的化合物(在標準條件下，從相應(yīng)的羥基化合物制備)和硫代乙酸制備。
式(I)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I)化合物的實例為轉(zhuǎn)化i)、式(Ia)或(Ia’)的一個側(cè)鏈轉(zhuǎn)化為式(Ia)或(Ia’)的另一個側(cè)鏈，例如轉(zhuǎn)化I)、對于式(I)化合物，其中Y1為H并且Y1為NH2(如下文所述，使用氨)，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，-NHC1-4烷基，-N[C1-4烷基]2，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，嗎啉代或硫嗎啉基； 或轉(zhuǎn)化II)、對于式(I)化合物，其中Y2為H并且Y1為S 轉(zhuǎn)化III)、對于式(I)化合物，其中Y1為H并且Y2為H 轉(zhuǎn)化ii)、使用標準方法，一個RX轉(zhuǎn)化為另一個RX，例如作為羥基的RX轉(zhuǎn)化為C1-3烷氧基。
技術(shù)人員可以領(lǐng)會，上述方法c)和d)中所描述的側(cè)鏈(Ia)或(Ia’)的處理也可以在中間體上進行，例如制備式(II)，(IIA)，(IIB)或(V)中間體。例如 4，6-嘧啶方法因此，本發(fā)明另一特征是本發(fā)明提供下列制備式(I’)化合物的方法，該方法包括方法a’)將式(II’)嘧啶 其中L為如下定義的可替換基團，與式(III’)化合物反應(yīng) 方法b’)將式(IV’)嘧啶 其中L為如下定義的可替換基團，與式(V’)化合物反應(yīng) 方法c’)、對于其中n為1，2或3，m＝1，Y2為H并且Y1為OH，NH2或SH的式(I’)化合物，將式(VI’)3-元雜烷基環(huán) 其中A為O，S或NH；與式(VII’)親核試劑反應(yīng)Z-D(VII′)其中D為H或適宜的反荷離子；方法d’)對于其中X為氧的式(I’)化合物，通過將式(VIII’)醇 與式(IX’)醇反應(yīng) 方法e’)、對于其中X為-CH2，-O-，-NH-或-S-；Y1為OH；Y2為H并且m為2或3的式(I’)化合物，將式(X’)化合物 其中LgO為如下定義的離去基團；與式(VII’)化合物親核體反應(yīng)；方法f’)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1為H；Y2為H；n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I’)化合物，將式(X’)化合物 其中LgO為如下定義的離去基團；與式(VII’)化合物親核體反應(yīng)。方法g’)、對于其中X為-O-，-NH-或-S-；Y1為H；Y2為H；n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I’)化合物，將式(XII’)化合物 與式(XIII’)化合物反應(yīng) 其中L為如下定義的可替換基團；方法h’)、對于其中Z為HS-的式(I’)化合物，將相應(yīng)化合物中的硫代乙酸根基進行轉(zhuǎn)化；并且如果需要i)、將式(I’)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I’)化合物；ii)、除掉任何保護基；iii)、形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
除非另外說明，在該4，6-嘧啶方法部分的變量(如L和D)如上2，4-嘧啶方法部分所述。
上述4，6-嘧啶方法的特定反應(yīng)條件如下方法a’)、式(II’)嘧啶和式(III’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法a)所述一起反應(yīng)。
式(II’)嘧啶可以按照下列方案制備 式(III’)化合物可通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法b’)、式(IV’)嘧啶和式(V’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法b)所述一起反應(yīng)。
式(IV’)嘧啶可以按照下列合成方案制備 其中L為如上定義的可替換基團。
式(V’)化合物可通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法c’)、式(VI’)3元雜環(huán)和式(VII’)親核試劑可以如上2，4-嘧啶方法c)所述一起反應(yīng)。
式(VI’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法部分所述，按照合成方案I)-IV)類似的方法制備(但是用4，6-嘧啶化合物代替上述合成方案中的2，4-嘧啶化合物)。
式(VII’)化合物和必需的中間體可通過商業(yè)渠道獲得或通過本領(lǐng)域已知的方法(通過上述2，4-嘧啶方法部分c)類似的方法)制備。方法d’)、式(VIII’)和式(IX’)醇可在上述2，4-嘧啶方法d)所述標準Mitsunobu條件下一起反應(yīng)。
式(VIII’)醇可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述類似的方法制備。
式(IX’)醇可通過商業(yè)渠道和或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法e’)、式(X’)和式(VII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法e)所述標準條件下一起反應(yīng)。
式(X’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述類似的方法制備。
式(VII’)化合物可通過商業(yè)渠道和或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法f’)、式(XI’)和式(VII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法f)所述標準條件下一起反應(yīng)。
式(XI’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述類似的方法制備。方法g’)、式(XII’)和式(XIII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法g)所述標準條件下一起反應(yīng)。
式(XII’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述類似的方法制備。
式(XIII’)化合物可通過商業(yè)渠道和或通過本領(lǐng)域已知的方法制備。方法h’)、硫代乙酸根的轉(zhuǎn)化為可在上述2，4-嘧啶方法h)所述標準條件下進行。
式(I’)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I’)化合物的實例與上述式(I)2，4-嘧啶的轉(zhuǎn)化I)-轉(zhuǎn)化III)類似，例如，一個式(Ia)或(Ia’)側(cè)鏈轉(zhuǎn)化為另一個式(Ia)或(Ia’)側(cè)鏈(但是用4，6-嘧啶化合物代替上述轉(zhuǎn)化中的2，4-嘧定)。
如上式(I)2，4-嘧啶的轉(zhuǎn)化所述，技術(shù)人員可以領(lǐng)會，所述側(cè)鏈(Ia)或(Ia’)的處理也可以在中間體上進行(通過上述2，4-嘧啶方法部分d)所描述的類似的方法)。
可以領(lǐng)會，本發(fā)明化合物中，某些環(huán)上取代基可以在上述方法之前或緊跟在該方法之后通過標準芳族取代反應(yīng)引入或通過常規(guī)官能團修飾產(chǎn)生，并且這些都包括在本發(fā)明方法之中。所述反應(yīng)和修飾包括，例如通過芳族取代反應(yīng)，還原取代基，烷基化取代基和氧化取代基方法引入取代基。所述方法的試劑和反應(yīng)條件是化學制劑領(lǐng)域公知的。芳族取代反應(yīng)的特定實例包括，用濃硝酸引入硝基，在Friedel Crafts條件下，用例如酰鹵和Lewis酸(如三氯化鋁)引入?；辉贔riedelCrafts條件下，用烷基鹵和Lewis酸(如三氯化鋁)引入烷基；和引入鹵原子。修飾的特定實例包括，例如通過用鎳催化劑催化氫化，或在鹽酸存在下，在加熱下用鐵處理，將硝基還原為氨基；將烷硫基氧化為烷基亞磺酰基或烷基磺?；?br> 也可以領(lǐng)會，在本文所述的某些反應(yīng)中，可能必需或要求保護化合物中任何敏感的基團。必需或要求保護的例子和適宜的保護方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。依據(jù)標準慣例，可使用常規(guī)保護基(例如參見T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wileyand Sons，1991)。因此，如果反應(yīng)物包含基團如氨基，羧基或羥基，那么在本文所述某些反應(yīng)中要求保護該基團。
適宜的氨基或烷基氨基的保護基為?；?，例如烷?；缫阴；?，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基，乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如芐氧基羰基，或芳香烴酰基，例如苯甲?；Ｉ鲜霰Ｗo基的脫保護條件必須隨保護基的選擇改變。因此，例如，烷?；蛲檠趸驶蚍枷銦N酰基可通過用適宜的堿，如堿金屬氫氧化物，例如鋰或鈉的氫氧化物水解除掉?；蛘撸；缡宥⊙趸驶赏ㄟ^用適宜的酸如鹽酸，硫酸或磷酸或三氟乙酸處理除掉并且芳基甲氧基羰基如芐氧基羰基可通過用催化劑如披鈀炭氫化，或通過用Lewis酸，例如三(三氟乙酸)硼處理除掉。適宜的其他伯氨基保護基為，例如可通過用烷基胺，例如二甲基氨基苯胺或用肼處理除掉的鄰苯二甲?；?。
適宜的羥基的保護基為酰基，例如烷?；缫阴；?，芳香烴酰基，例如苯甲?；?，或芳基甲基，例如芐基。上述保護基的脫保護條件必須隨保護基的選擇改變。因此，例如，酰基如烷?；蚍枷銦N酰基可通過用適宜的堿，如堿金屬氫氧化物，例如鋰或鈉的氫氧化物水解除掉?；蛘撸蓟谆缙S基可通過用催化劑如披鈀炭氫化除掉。
適宜的羧基的保護基為酯化基團，例如可通過用堿如氫氧化鈉水解除掉的甲基或乙基，或者例如可通過用酸如有機酸如三氟乙酸處理除掉的叔丁基，或者例如可通過用催化劑如披鈀炭氫化除掉的芐基。
保護基可用化學制劑領(lǐng)域公知的常規(guī)技術(shù)，在合成的任何步驟除掉。
本文所定義的很多中間體是新的，例如那些通式II和IV化合物，并且這些中間體作為本發(fā)明的另一方面提供。測定方法如上文所述，本發(fā)明定義的嘧啶衍生物具有抗細胞增殖的活性如抗癌活性，相信這種活性是由化合物的CDK和/或FAK抑制活性產(chǎn)生的。這些特性如可使用下文所述的方法來評價CDK4抑制作用的測定使用下列縮寫HEPES是N-(2-羥乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)DTT是二硫蘇糖醇PMSF是苯基甲基磺酰氟在體外激酶測定方法中試驗化合物，所述方法在96孔格中進行，使用閃爍親近測定法(SPA-從Amersham處獲得)來測量[γ-33-P]-腺苷三磷酸鹽與試驗底物(GST-成視網(wǎng)膜細胞瘤)的結(jié)合情況。在各孔中，放置被試驗的化合物(在DMSO和水中稀釋到合適的濃度)并在對照孔中或者加入作為抑制劑對照的p16或者加入作為陽性對照的DMSO。
于各個孔中加入在25μl培養(yǎng)緩沖液中稀釋的大約0.5μlCDK4/細胞周期蛋白D1部分純化的酶(其量依賴于酶的活性)，然后加入20μlGST-Rb/ATP/ATP33混合物(含有0.5μg GST-Rb和0.2μM ATP和0.14μCi[γ-33-P]-腺苷三磷酸鹽)，并將所得混合物輕輕振搖，然后在室溫下培養(yǎng)60分鐘。
此后，在各孔中加入150μl的終止溶液，含有0.8mg/孔的蛋白質(zhì)A-PVT SPA珠(Amersham)、20pM/孔的抗谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶，Rabbit IgG(由分子探針獲得)、61mM EDTA和50mM含有0.05％疊氮化鈉的HEPES pH7.5。
用Topseal-S板密封劑將板密封，放置2小時然后以2500rpm，1124xg的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5分鐘。將板在Topcount上以30秒/孔進行讀數(shù)。
使用培養(yǎng)緩沖液稀釋酶和底物混合物，底物混合物含有50mM HEPESpH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100μM釩酸鈉、100μM NaF、10mM甘油磷酸鈉、BSA(最終1mg/ml)。
作為對照，在p16位置可使用另一種已知的CDK4抑制劑。試驗底物在該測定中，僅使用部分成視網(wǎng)膜細胞瘤(Science 1987 Mar13；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)，與GST標記物融合。將視網(wǎng)膜細胞瘤氨基酸379-928(從視網(wǎng)膜細胞瘤質(zhì)粒ATCCpLRbRNL獲得)進行體外擴增，并將該序列克隆到pGEX2T融合載體中(SmithD.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；它含有誘導表達的tac啟動子、在任何大腸桿菌宿主中使用的內(nèi)部lac Iq基因和凝血酶卵裂編碼區(qū)-從PharmaciaBiotech處獲得)，該載體用于擴增氨基酸792-928。該序列被反復克隆到pGEX2T中。
使用標準的誘導表達技術(shù)，在大腸桿菌(BL21(DE3)pLysS細胞)中表達如上獲得的視網(wǎng)膜細胞瘤792-928序列，并如下進行純化。
將大腸桿菌糊重新懸浮在10ml/g的NETN緩沖液(50mM TrispH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑蛋白酶肽和1μg/ml抑胃酶肽)中并超聲處理2×45秒/100ml組織勻漿。離心后，將上清液裝載到10ml谷胱甘肽瓊脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)上，并用TETN緩沖液洗滌。用激酶緩沖液(50mM HEPES pH7.5、10mM MgCl2、1mM DTT、1mM PMSF、1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑蛋白酶肽和1μg/ml抑胃酶肽)洗滌后，用50mM還原的谷胱甘肽(在激酶緩沖液中)洗脫該蛋白質(zhì)。收集含有GST-Rb(792-927)的餾分并與激酶緩沖液滲析過夜。最終產(chǎn)品使用8-16％Tris-Glycine凝膠(Novex，San Diego，USA)通過十二烷基硫酸鈉(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠)來分析。CDK4和細胞周期蛋白D1如下用MCF-7細胞系(由ATCC號HTB22，乳腺腺癌系獲得)通過RNA來克隆CDK4和細胞周期蛋白D1。由MCF-7細胞制備RNA，然后使用低聚dT引物進行逆轉(zhuǎn)錄。使用PCR擴增各個基因的完整編碼序列[CDK4氨基酸1-303；參見Cell 1992，10，16；71(2)323-334；MatsushimeH.，Ewen M.E.，Stron D.K.，Kato J.Y.，Hahks S.K.，Roussel M.F.，Sherr C.J.和細胞周期蛋白D1氨基酸1-296；參見Cold Spring Harb.Symp.Quant.Biol.，1991；5693-97；Arnold A.，Motokura T.，BloomT.，Kronenburg，Ruderman J.，Juppner H.，Kim H.G.]。
測序后，使用標準技術(shù)將PCR產(chǎn)物克隆到昆蟲表達載體pVL1393(由Invitrogen 1995目錄號V1392-20獲得)中。然后將PCR產(chǎn)物雙重表達[使用標準的病毒Baculogold共同感染技術(shù)]到昆蟲SF21細胞體系(由Fall Army Worm(可購得)的卵巢組織衍生的SpodopteraFrugiperda細胞)之中。
下列實施例詳細描述在SF21細胞(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic)中生產(chǎn)周期蛋白D1 & CDK4，該細胞具有細胞周期蛋白D1和CDK4各個病毒的雙重感染的MOI3。生產(chǎn)細胞周期蛋白D1/CDK4的實例SF21細胞在滾瓶中培養(yǎng)生長到2.33×106個細胞/ml，然后以0.2×10E6個細胞/ml接種10×500ml滾瓶。在滾軸設(shè)備上以28℃培養(yǎng)滾瓶。
3天(72小時)后，記錄細胞數(shù)，并發(fā)現(xiàn)2瓶的平均值是1.86×10E6個細胞/ml(99％可生存)。然后用雙重病毒以每個病毒一個MOI3的量感染培養(yǎng)物。
10×500ml用JS303細胞周期蛋白D1病毒滴度-9×10E7pfu/ml、JS304 CDK4病毒滴度-1×10E8 pfu/ml感染。細胞周期蛋白1.86×10E6×500×3/0.9×108＝31ml病毒/500ml瓶。CDK41.86×10E6×500×3/1×108＝28ml病毒/500ml瓶。
在加入培養(yǎng)物中之前，將病毒混合，并將培養(yǎng)物放回28℃的滾軸設(shè)備上。
3天(72小時)后，收獲感染過的5升培養(yǎng)物。收獲時細胞總數(shù)是1.58×10E6個細胞/ml(99％可生存)。該細胞于4℃下在HeraeusOmnifuge2.0RS上以250ml的量和2500rpm的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)30分鐘。丟棄上清液。將20小丸4×10E8個細胞/丸在LN2中猛烈冷凍并在-80℃的CCRF冷室中儲存。然后通過在溶胞緩沖液(50mM HEPES pH7.5、10mMMgCl2、1mM DTT、10mM甘油磷酸鹽、0.1mM PMSF、0.1mM氟化鈉、0.1mM正釩酸鈉、5μg/ml抑蛋白酶肽、5μg/ml亮抑酶肽和20％w/v蔗糖)中重新懸浮并加入冰冷卻的的去離子水來使SF21細胞低滲溶解。離心后，將上清液裝載到Poros HQ/M 1.4/100陰離子交換柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。用375mM NaCl(在溶胞緩沖液中)同時洗脫CDK4和細胞周期蛋白D1，并通過蛋白印跡使用合適的抗-CDK4和抗-細胞周期蛋白抗體(從Santa Cruz Biotechnology，California，US處獲得)檢測成分的存在。P16對照(天然366704-707；1993；Serrano M.Hannon GJ，Beach D)P16(CDK4/細胞周期蛋白D1的天然抑制劑)由HeLa cDNA(由ATCCCCL2，人子宮頸上皮癌；Cancer Res.12264，1952獲得的Hela細胞)，克隆到具有5’His末端的pTB375NBSE上并使用標準技術(shù)轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)pLysS細胞(從Promega處獲得；參見Studier F.W.和MoffatB，A.，J.Mol.Biol.，189，113，1986)上。將1升培養(yǎng)物生長到合適的OD，然后用IPTG誘導以過夜表達p16。通過在50mM磷酸鈉、0.5mM氯化鈉、PMSF、0.5μg/ml亮抑酶肽和0.5μg/ml抑蛋白酶肽中超聲來使細胞溶解。旋轉(zhuǎn)混合物，上清液加到鎳螯合珠中并混合1.5小時。在磷酸鈉、NaCl pH6.0中洗滌所得珠并在磷酸鈉、NaCl pH7.4中用200mM咪唑洗脫p16產(chǎn)物。
如下由pTB375NBPE構(gòu)建pTB NBSEpTB375用于產(chǎn)生pTB375的本底載體是pZEN0042(參見英國專利2253852)并且含有來自質(zhì)粒RP4的tetA/tetR可誘導四環(huán)素耐受的序列和來自pAT153衍生本底中質(zhì)粒pKS492的cer穩(wěn)定性序列。通過加入由T7基因10啟動子、多克隆位點和T7基因10末端序列組成的表達盒來產(chǎn)生pTB375。另外，表達盒的上游包括設(shè)計用于減少本底載體轉(zhuǎn)錄連讀的終止子序列。pTB375NBPE除去存在于pTB375中的單一EcoRI限定位點。將含有限定酶NdeI、BamHI、PstI和EcoRI識別序列的新的多克隆位點引入存在于pTB375中的NdeI和BamHI位點破壞的原BamHI位點之間的pTB375中。pTB375NBSE將含有限定酶NdeI、BamHI、SmaI和EcoRI識別序列的新的多克隆位點引入NdeI和EcoRI位點之間的pTB375NBPE中。含有限定位點的低聚核苷酸也含有6組氨酸密碼子，當起動密碼子(ATG)存在于NdeI位點中時，組氨酸密碼子位于相同讀碼的NdeI和BamHI位點之間。
通過上述類似方法，可設(shè)計用于評價CDK2和CDK6抑制作用的測定方法。CDK2(EMBL登記號X62071)可與細胞周期蛋白A或細胞周期蛋白E(參見EMBL登記號M73812)一起使用，并且在PCT國際公開號WO99/21845有關(guān)生物化學和生物學評價部分中進一步詳細描述了這些測定方法，該文獻引入本文供參考。
如果使用具有細胞周期蛋白E的CDK2，可如下完成部分共純化將SF21細胞重新懸浮在溶胞緩沖液(50mM tris pH8.2，10mM MgCl2，1mMDTT，10mM甘油磷酸酯，0.1mM正釩酸鈉，0.1mM NaF，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽和1μg/ml抑蛋白酶肽)中并且在10ml Dounce勻化器中勻化2分鐘。離心后，將上清液裝載到Poros HQ/M 1.4/100陰離子交換柱(PEBiosystems，Hertford，UK)上。CDK2和細胞周期蛋白E在0-1M NaCl梯度(在溶胞緩沖液負型蛋白酶抑制劑中進行)的開始到20倍柱體積被共同洗脫下來。使用抗CDK2和抗細胞周期蛋白E抗體(Santa CruzBiotechnology，California，US)通過蛋白質(zhì)印跡來檢測共同洗脫情況。FAK3激酶抑制作用的測定該測定用來確定試驗化合物抑制人粘著斑激酶(FAK)酪氨酸激酶活性的能力。
DNA編碼的FAK通過總基因合成(Edwards M，IntrnationalBiotechnology Lab 5(3)，19-25，1987)或通過克隆來獲得。然后將其表達在合適的表達體系中以獲得具有酪氨酸激酶活性的多肽。例如，發(fā)現(xiàn)在昆蟲細胞中重組蛋白質(zhì)的表達所獲得的FAK顯示內(nèi)在的酪氨酸激酶活性。
修飾FAK(Andre等人描述的全長人cDNA(Biochemical andBiophysical Research Communications，1993，190(1)140-147；EMBL/GenBank Accession Number L05186))以便在翻譯時所得蛋白質(zhì)在N端起始蛋氨酸之前具有6組氨酸靶。使用類似的N端6組氨酸靶來將活性FAK蛋白質(zhì)預先表達在桿狀病毒體系中(Protein ExpressionAnd Purification，1996，712-18)。人FAK cDNA被克隆到桿狀病毒置換性載體pFastbacl(Life Technologies)，并且重組構(gòu)件被共同轉(zhuǎn)染到具有病毒DNA的昆蟲細胞(例如，草地夜蛾21(Sf21))中來制備重組桿狀病毒(在標準課本中可發(fā)現(xiàn)重組DNA分子聚集和重組桿狀病毒的制備和使用方法的詳細描述，例如Sambrook等人，1989，Molecularcloning-A Laboratory Manual，2ndedition，Cold Spring HarbourLaboratory Press和O’Reilly等人，1992，Baculovirus ExpressionVectors-A Laboratory Manual，W.H.Freeman and Co，紐約。在Anderson等人，1995，F(xiàn)OCUS(Life Technologies Bulletin Magazine)，17，p53中對pFastbac(‘Bac to Bac’)系統(tǒng)的使用進行了具體描述)。
為了表達生物活性人FAK蛋白，用蝕斑純化的FAK重組病毒以3的感染復數(shù)感染Sf21細胞并在48小時后收獲。用冰冷卻的磷酸鹽緩沖的生理鹽水(PBS)(10mM磷酸鈉pH7.4、138mM氯化鈉、2.7mM氯化鉀)洗滌收獲的細胞，然后以每1千萬個細胞250μl溶胞緩沖液重新懸浮在冰冷卻的溶胞緩沖液(50mM HEPES pH7.5、10mM MgCl2、1mMDTT、0.1mM氟化鈉、0.1mM正釩酸鈉、10mM甘油磷酸鹽、1mM苯甲基磺?；?PMSF)、5μg/ml抑蛋白酶肽、5μg/ml亮抑酶肽，1％吐溫；PMSF在用前才加入新鮮制備的100mM甲醇溶液)。將懸浮液在冰上保溫15分鐘并在4℃溫度下以13000rpm的轉(zhuǎn)速離心。取出上清液(酶儲備液)并將制備的等份試樣在液氮中速凍并儲存在-70℃溫度下。對于典型的一批來說，儲備液以1∶250用酶稀釋液((100mM HEPES pH7.4、0.2mM DTT、200μM正釩酸鈉、0.1％Triton X-100)并且50ml新鮮稀釋的酶用于每個測定孔(參見下文FAK3試驗方法)。FAK3體外酶測定試驗方法由含有酪氨酸的隨機共聚物，例如聚(Glu，Ala，Tyr)6∶3∶1(SigmaP3899)制備儲備底物溶液，以1mg/ml在PBS中的儲備液在-20℃溫度下儲存并以1∶500的比例用PBS稀釋用于板的涂敷。
在測定前一天，將100μl稀釋的底物溶液分配到測定板的所有孔(Maxisorp 96孔免疫板Life technologies，Cat.439454A)，用密封板密封并在4℃溫度下放置過夜。
在測定這一天，將底物溶液棄去并用200μl PBST(含有0.05％v/v吐溫20的PBS)和200μl 50mM Hepes pH7.4各洗滌一次。
試驗化合物被制成10mM或30mM的DMSO儲備液，在玻璃杯中用蒸餾水進一步稀釋到10倍于最終測定濃度。將10μl稀釋的化合物被轉(zhuǎn)移到洗滌過的測定板的孔中?！盁o化合物”對照孔含有10μl代替化合物的蒸餾水。
將40微升含有6.25μM腺苷-5’-三磷酸(ATP)的25mM氯化錳加到所有試驗孔。在每個孔中加入50μl新鮮稀釋的酶來開始反應(yīng)并且將該板在23℃溫度下保溫90分鐘。通過加入100μl含有20mM EDTA的PBS來終止反應(yīng)。棄去液體并用PBST將孔洗滌兩次。
將100微升以1∶1500用含有0.5％w/v牛血清白蛋白(BSA)稀釋的小鼠HRP連接的抗磷酸酪氨酸抗體(Santa Cruz，Product SC 7020-HRP)加到各孔中并將該板在室溫下保溫1小時，然后棄去液體并用200μPBST將孔洗滌兩次。將100微升新鮮制備的2，2’-連氮基-二(3-乙基苯噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)溶液加到各孔中，所述溶液是使用50mgATBS片(Boehringer 1204 521)在50ml新鮮制備的50mM磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液pH5.0+0.03％過硼酸鈉(每100ml蒸餾水用1ml磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液和過硼酸鈉(PCSB)膠囊(Sigma P4922)制備的)。然后將板在室溫下保溫20-60分鐘直到使用讀板分光光度計在405nm處測量的“無化合物”對照孔吸收值約為1.0。
使用Origin軟件由讀出的吸收值繪制量效曲線。按Origin軟件的定義，使用抑制濃度50(IC50)排列化合物的效力。
盡管式(I)或(I’)化合物的藥理學特性隨結(jié)構(gòu)式變化，但上述測定中式(I)或(I’)化合物所具有的活性通?？杀砻鱅C50濃度或劑量在250μM-1nM范圍中。
在上述體外測定試驗中，測得的實施例5的CDK4抑制活性IC50＝0.02μM。在上述體外測定試驗中，測得的實施例3的CDK4抑制活性IC50＝0.553μM。
本發(fā)明化合物的體內(nèi)活性可通過標準技術(shù)來評價，例如可測量對細胞生長的抑制作用和評價細胞毒性。例如，可在下來文獻中發(fā)現(xiàn)更詳細的描述
a)粘著斑激酶表達的減少誘導腫瘤細胞程序性死亡。Xu L-h等人，Cell Growth & Differentition(1996)7，p413-418；b)粘著斑激酶的COOH-末端區(qū)域誘導人腫瘤細胞粘著喪失和細胞死亡。Xu L-h等人，Cell Growth & Differentition(1998)9，p999-1005；c)pp125-FAK在培養(yǎng)的成纖維細胞中的抑制作用導致細胞程序性死亡。Hungerford J.E等人，The Journal of Cell Biology(1996)135，p1383-1390；d)粘著斑激酶(FAK)信號傳遞在粘著斑中的抑制減少細胞的運動性和增殖。Gilmore A.P和Romer L.H.，Molecular Biology of theCell(1996)7，p1209-1224。
用Sulforhodamine B(SRB)使細胞染色可測量對細胞生長的抑制作用，SRB是一種使蛋白質(zhì)染色的熒光染料并因此可估量孔中蛋白質(zhì)(即細胞)的量(參見Boyd，M.R.(1989)Status of the NCI preclinicalantitumour drug discovery screen，Prin.Prac Oncol 101-12)。因此，下文詳細描述細胞生長抑制作用的測量方法在合適介質(zhì)中的細胞以100μl的體積涂敷在96孔板中；介質(zhì)是用于MCF-7，SK-UT-1B和SK-UT-1的Dulbecco’s Modified Eagle介質(zhì)。允許細胞吸附過夜，然后以各種濃度加入抑制劑化合物，化合物以最大濃度存在于1％的DMSO(v/v)中。在加入化合物前，測定對照板的細胞值。細胞在37℃(5％CO2)溫度下培養(yǎng)3天。
三天結(jié)束后，以16％(v/v)的最終濃度，將TCA加到板中。然后，將板在4℃溫度下培養(yǎng)1小時，取出上清液并將板在自來水中洗滌。干燥后，在37℃溫度下，加入100μlSRB染料(0.4％SRB在1％乙酸中)30分鐘。除去過量的SRB并在1％乙酸中洗滌培養(yǎng)板。將結(jié)合蛋白質(zhì)的SRB溶解在10mM Tris pH7.5中并在室溫下振搖30分鐘。在540nm處讀出OD并由抑制濃度與吸收值的半對數(shù)點確定引起50％生長抑制的抑制劑濃度。使光密度減小到低于實驗開始時涂敷細胞所獲得的化合物的濃度給出毒性值。
SRB測定中本發(fā)明化合物的IC50值通常在1mM-1nM的范圍中。
本發(fā)明的另一方面是提供一種藥物組合物，它含有上文定義的式(I)或(I’)化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯和可藥用稀釋劑或載體。
組合物可以是適于口服的(例如片劑或膠囊)、非胃腸道注射的(包括靜脈、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注的滅菌溶液、懸浮液或乳劑)、局部給藥的(油膏或霜劑)或者直腸給藥的(栓劑)形式。
一般來說，上述組合物可使用常規(guī)賦形劑以常規(guī)方法來制備。
本發(fā)明嘧啶化合物通常以單位劑量和動物每平方米體表5-5000mg的范圍，即大約0.1-100mg/kg給予溫血動物，并因此通常提供治療有效的劑量。單位劑量形式如片劑或膠囊通?？珊腥?-250mg的活性組分。優(yōu)選地，采用1-50mg/kg范圍的每日劑量。然而，每日劑量需要隨被治療的主體、給藥的特定途徑和被治療疾病的嚴重性來變化。因此，最佳劑量可由治療任何特定病人的醫(yī)師來決定。
本發(fā)明的另一方面是將上文定義的式(I)或(I’)化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯用在治療人或動物體的方法中。
我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明定義的嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯是有效的的細胞循環(huán)抑制劑(抗細胞增殖劑)，相信其特性(不與理論結(jié)合)是由其CDK抑制劑特性產(chǎn)生的。本發(fā)明化合物也是有效的FAK抑制劑。因此，期望本發(fā)明化合物可用于治療單獨或部分由CDK和/或FAK酶介導的疾病或醫(yī)學病癥，即本發(fā)明化合物可用于在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生CDK抑制作用。所以，本發(fā)明化合物提供一種通過抑制CDK和/或FAK酶來治療惡性細胞的增殖和/或轉(zhuǎn)移的方法，即，本發(fā)明化合物可用于產(chǎn)生單獨或部分由CDK和/或FAK抑制介導的抗增殖/轉(zhuǎn)移作用。本發(fā)明化合物也可通過誘導細胞死亡(細胞程序性死亡)而用作FAK抑制劑。期望本發(fā)明的嘧啶衍生物具有廣譜的抗癌特性，因為CDK和/或FAK參與許多常見的人癌癥如白血病和乳房、肺、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢癌。因此，本發(fā)明的嘧啶衍生物期望具有對抗這些癌癥的抗癌活性。另外，本發(fā)明嘧啶衍生物期望具有對抗白血病、淋巴惡性和固體腫瘤如在組織肝、腎、前列腺和胰腺中的癌和肉瘤。特別是，本發(fā)明的這些化合物期望有利地減緩如結(jié)腸、乳房、前列腺、肺和皮膚的原發(fā)和復發(fā)固體腫瘤的生長。更具體來說，本發(fā)明的化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯期望抑制與CDK和/或FAK相關(guān)的，特別是其生長和傳播明顯依賴于CDK和/或FAK的，例如包括結(jié)腸、乳房、前列腺、肺、外陰和皮膚的某些腫瘤的那些原發(fā)和復發(fā)固體腫瘤的生長。
本發(fā)明的嘧啶衍生物還期望具有在各種各樣其他疾病狀態(tài)中的其他細胞增殖、轉(zhuǎn)移疾病包括白血病、纖維增殖和分化疾病、牛皮癬、類風濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性和慢性炎癥、骨疾病和視網(wǎng)膜血管增殖的眼疾病的活性。
因此，本發(fā)明提供上文定義的式(I)或(I’)化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯用作藥物；和上文定義的式(I)或(I’)化合物、或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯在制備用于在溫血動物如人中產(chǎn)生抗癌、細胞循環(huán)抑制(抗細胞增殖)作用和/或FAK抑制(抗細胞轉(zhuǎn)移和/或誘導細胞程序性死亡)作用的藥物中的用途。特別是，在S或G1-S階段通過抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，特別是CDK4和CDK6來產(chǎn)生細胞循環(huán)抑制作用。
本發(fā)明的另一特征是提供一種用于在需要這種治療的溫血動物中產(chǎn)生抗癌、細胞循環(huán)抑制(抗細胞增殖)作用和/或FAK抑制(抗細胞轉(zhuǎn)移和/或誘導細胞程序性死亡)作用的方法，它包括給予所述動物有效量的上文定義的嘧啶衍生物。特別是，在S或G1-S階段通過抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，特別是CDK4和CDK6來產(chǎn)生抑制作用。
如上所述，治療或預防特點細胞增殖疾病所需劑量的大小需要隨治療主體、給藥途徑和被治療疾病的嚴重性來變化。設(shè)想單位劑量在如1-100mg/kg，優(yōu)選1-50mg/kg的范圍中。
上文定義的CDK和/或FAK抑制劑可單獨作為治療方法使用，或者除本發(fā)明化合物外可包括一種或多種其他物質(zhì)和/或治療方法。這種聯(lián)合治療可通過同時、依次或分別給予治療的各個成分來完成。在醫(yī)學腫瘤學領(lǐng)域中，除上文定義的細胞循環(huán)抑制治療外，所述聯(lián)合治療的成分可包括外科手術(shù)、放療或化療。這種化療可包括三類主要的治療劑(i) 以上文定義的相同或不同機制作用的其他細胞循環(huán)抑制劑；(ii)細胞抑制劑如抗雌激素(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如anastrozole、letrazole、vorazole、依西美坦)、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、乙酸環(huán)丙孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如乙酸戈舍瑞林、luprolide)、睪酮5α-二氫還原酶抑制劑(例如非那雄胺)、抗侵入劑(例如金屬蛋白酶抑制劑如marimastat和尿激酶纖溶酶激活物受體功能抑制劑)和生長因子功能抑制劑(此生長因子如包括血小板衍生的生長因子和肝細胞生長因子，此抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和(iii)在醫(yī)學腫瘤學中使用的抗增殖/抗腫瘤藥物及其組合物，如抗代謝劑(例如葉酸拮抗物如甲氨蝶呤、氟嘧啶如5-尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷)；抗腫瘤抗體(例如anthracyclines如阿霉素、道諾霉素、表柔比星和伊達比星，絲裂霉素-C、放線菌素D、普卡霉素)；鉑衍生物(例如順鉑、碳鉑)；烷化劑(例如氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、自消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、nitrosoureas、塞替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿如長春新堿和taxoids如紫杉醇、taxotere)；拓撲異構(gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素如表鬼臼毒素吡喃葡糖苷和表鬼臼毒素噻吩糖苷、DNA嵌入劑(安吖啶)、topotecan)。
本發(fā)明這方面提供一種藥物產(chǎn)品，它含有上文定義的式(I)或(I’)嘧啶衍生物和上文定義的用于癌癥聯(lián)合治療的另一種抗腫瘤物質(zhì)。有用的是，也可以給予抗催吐藥，例如當使用上文定義的聯(lián)合治療時。
除了在治療藥物中使用外，式(I)或(I’)化合物及其可藥用鹽也可作為新的治療劑篩選的部分用作在實驗室于動物如貓、狗、兔子、猴子、大鼠和小鼠上體外和體內(nèi)評價細胞循環(huán)活性抑制作用的開發(fā)和標準化中的藥理學工具。
另外，本文也描述了藥物組合物、步驟、方法、用途和藥物制備特征、本發(fā)明化合物的另外的和優(yōu)選的實施方案。
現(xiàn)在，以下列非限定實施例的方式舉例說明本發(fā)明，其中合適時可以使用化學技術(shù)人員已知的標準技術(shù)和類似于這些實施例的技術(shù)，并且除非另有說明，否則其中(i)通過在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)來進行蒸發(fā)并經(jīng)過濾除去殘余固體如干燥劑后進行處理；(ii)在室溫和空氣中進行處理，室溫通常在18-25℃的范圍中(除非另有說明)，或者技術(shù)人員另外在惰性氣體如氬氣環(huán)境下進行操作；
(iii)在Merck Kieselgel二氧化硅(Art.9385)或在MerckLichroprep RP-18(Art.9303)反向二氧化硅(從E.Merck，Darmstadt，德國處獲得)上進行柱色譜層析(通過快速過程進行)和中壓液相色譜層析(MPLC)；使用Varian Mega Bond Elut藥筒(10g，順序編號1225-6034)(從Varian Sample Preparation Products，California，美國處獲得)進行結(jié)合洗脫色譜層析；(iv)僅僅為了說明而給出產(chǎn)量并不一定是最大可獲得的量；(v)式(I)最終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通常用核(一般為質(zhì)子)磁共振(NMR)和質(zhì)譜技術(shù)來確定；質(zhì)子磁共振化學位移值在氘化DMSO-d6(除非另有說明)于δ標(從四甲基硅烷開始的下移ppm)上使用Varian Gemini2000分光計(在300MHz的領(lǐng)域強度下運行)或Bruker AM250分光計(在250MHz的領(lǐng)域強度下運行)來測量；并且如下表示多重峰s，單峰；d，雙重峰；dd，兩個雙重峰；t，三重峰；tt，三個三重峰；q，四重峰；tq，三個四重峰；m，多重峰；br，寬帶峰；質(zhì)譜(MS)通過在VG平臺上電子噴射來進行；(vi)中間體通常不進行充分的確定并且純度通過薄層色譜層析(TLC)、HPLC、紅外(IR)、MS或NMR分析來評價；(vii)干燥溶液時，干燥劑是硫酸鎂；(viii)上下文中可使用下列縮寫DCM 二氯甲烷DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亞砜NMP N-甲基吡咯烷-2-酮
NMR2.19(s，6H)，2.21-2.3(m，1H)，2.3-2.4(m，1H)，3.1-3.25(m，2H)，3.8-4.1(m，5H)，5.75(m，1H)，6.2(m，2H)，6.8-6.9(m，3H)，7.0-7.1(m，1H)，7.15-7.25(m，1H)，7.5-7.6(m，2H)，8.05-8.1(m，1H)，8.3-8.4(m，1H)，8.95(s，1H)；MS(MH+)406.5.
NMR2.1(m，9H)，2.3(m，2H)，3.9(m，3H)，4.8(d，1H)，6.85(d，1H)，6.9(d，2H)，7.2(m，2H)，7.6(m，5H)，8.5(s，1H)，9.5(s，1H)；MS(MH+)418.
NMR(CDCl3)2.33(s，6H)，2.98(m，1H)，2.54(m，1H)，4.00(m，3 H)，7.00(d，2H)，8.20(d，2H)；MS(MH+)241.方法32-氯-4-(二氫吲哚-1-基)嘧啶將2，4-二氯嘧啶(596mg，4.0mmol)，二氫吲哚(0.45mg，4.0mol)和N，N-二異丙基乙胺(0.69ml，4.0mmol)的正丁醇(20ml)溶液在100℃下加熱18小時。加入二氧化硅(3g)并通過蒸發(fā)除掉揮發(fā)性物質(zhì)。殘渣通過柱色譜層析純化，用0-40％乙酸乙酯/異己烷洗脫，得到產(chǎn)物的無色固體(460mg，50％)。
NMR(CDCl3)3.2(t，2H)，4.0-4.1(t，2H)，6.5(d，1H)，7.0-7.1(m，1H)7.2-7.3(m，2H)，8.2(m，1H)，8.3-8.4(m，1H)；MS(MH+)232.7.方法4-7按照方法3所描述的類似的方法，從2，4-二氯嘧啶和適宜的取代二氫吲哚開始制備下列化合物
方法82-氯-4-(1，2，3，4-四氫喹啉-1-基)嘧啶按照方法3所描述的類似的方法，從2，4-二氯嘧啶和1，2，3，4-四氫喹啉開始得到產(chǎn)物。MS(MH+)246，248。方法9-10按照方法3所描述的類似的方法，從二氫吲哚和適宜的2，4-二氯-5-鹵代嘧啶(通過商業(yè)渠道獲得或如方法11所述獲得)開始制備下列化合物
方法112，4，5-三氯嘧啶將5-氯尿嘧啶(10.0g，68.5mmol)溶解在磷酰氯(60ml)中并加入五氯化磷(16.0g，77.0mmol)。將該混合物加熱回流16小時，放冷，然后在劇烈攪拌下緩慢地傾入水(200ml)中。將該混合物攪拌1.5小時，然后加入乙酸乙酯(250ml)。分離有機層并將水層用另一部分乙酸乙酯(250ml)提取。合并的提取液用飽和碳酸氫鈉(200ml)和飽和氯化鈉(200ml)洗滌，然后干燥。通過蒸發(fā)除掉揮發(fā)性物質(zhì)，殘渣通過柱色譜層析純化，用DCM洗脫，得到產(chǎn)物的黃色液體(6.37g，51％)。NMR(CDCl3)8.62(s，1H)；MS(MH+)182，184，186。方法125-溴-2-氯-4-(苯并咪唑-1-基)嘧啶在0℃下，將氫化鈉(60％油懸浮液；110mg，2.75mmol)加到苯并咪唑(295mg，2.5mmol)的DMF(6ml)溶液中。將該混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后滴加到冷(0℃)的5-溴-2，4-二氯嘧啶(712mg，3.14mmol)的DMF(6ml)溶液中。將該混合物在0℃下攪拌2小時，然后加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)。分離有機相并干燥，通過蒸發(fā)除掉揮發(fā)性物質(zhì)。殘渣通過柱色譜層析純化，用20％乙酸乙酯/DCM洗脫，得到產(chǎn)物的白色固體(500mg，52％)。NMR7.4(m，2H)，7.8()(m，2H)，8.8(s，1H)，9.3(s，1H)；MS(MH+)309，311。方法13-14按照方法12所描述的類似的方法，從吲哚和適宜的2，4-二氯-5-鹵代嘧啶(通過商業(yè)渠道獲得或如方法11所述獲得)開始制備下列化合物
1不必純化或定性即可使用。方法15-17按照方法3所描述的類似的方法，從4，6-二氯嘧啶和適宜的二氫吲哚開始并在125℃下反應(yīng)1小時制備下列化合物
實施例19下面舉例說明人類治療或預防疾病中應(yīng)用的、有代表性的包含式(I)或(I’)化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯(下文稱作化合物X)的藥物劑量形式
注意上述制劑可通過制藥領(lǐng)域公知的常規(guī)方法獲得。片劑(a)-(c)可以是過常規(guī)方法腸包衣的，例如提供鄰苯二甲酸醋酸纖維素包衣。
權(quán)利要求
1.一種式(I)或(I’)的嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯 其中Rx選自氫，鹵素，羥基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2個取代基取代的，所述取代基獨立地選自鹵素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羥基和三氟甲基]，C3-5鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基，或一個三氟甲基取代基取代的]，C3-5鏈炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不與-NH-鍵相連的一個有效碳原子上攜帶一個式(Ia)取代基，并且NO2(下文定義的)可以不攜帶或在任何有效碳原子上攜帶另一式(Ia)取代基 其中X是-CH2-，-O-，-NH-，-NRy-或-S-[其中Ry是C1-4烷基，未取代的或由一個選自鹵素，氨基，氰基，C1-4烷氧基或羥基的取代基取代的]；Y1是H，C1-4烷基或如Z的定義；Y2是H或C1-4烷基；Z是RaO-，RbRcN-，RdS-，ReRfNNRg-，連接雜芳基的氮或雜環(huán)的氮[其中所述雜環(huán)是未取代的或在環(huán)碳或環(huán)氮上由C1-4烷基或C1-4烷?；〈腯，其中Ra，Rb，Rc，Rd，Re，Rf和Rg獨立地選自氫，C1-4烷基，C2-4鏈烯基，C3-8環(huán)烷基，并且其中所述C1-4烷基C2-4鏈烯基是未取代的或由一個或多個苯基取代的；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季銨N-連接的5-，6-或7-元單環(huán)雜環(huán)部分，它包含一個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫的雜原子或者-NQ2是非季銨N-連接的8-，9-或10-元雙環(huán)雜環(huán)部分，它包含一個或兩個氮雜原子并且可有可無地包含另外一個或兩個選自氮，氧和硫的雜原子，其中如果所述雜環(huán)部分包含-NH-部分，那么氮可以是未取代的或由下列取代基取代的，所述取代基選自C1-6烷基，C1-6烷?；珻1-6烷基磺?；?，C1-6烷氧基羰基，芐基，苯甲?；虮交酋；?；并且Q1和-NQ2可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達4個取代基，所述取代基獨立地選自鹵素，羥基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4鏈烯基[未取代的或由高達3個鹵素取代基或一個三氟甲基取代基取代的]，C2-4鏈炔基，C1-5烷?；?，C1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羥基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲?；?C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，嗎啉-C1-3烷基，硫嗎啉-C1-3烷基，咪唑-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基，嗎啉基，硫嗎啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲?；?C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲?；?C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，鹵素-C1-4烷氧基，2-羥基乙氧基，C2-4烷酰基-C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，2-吡咯烷-1-基-乙氧基，2-哌啶子基-乙氧基，2-哌嗪-1-基-乙氧基，2-嗎啉-乙氧基，2-硫嗎啉-乙氧基，2-咪唑-1-基-乙氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亞磺酰基，C1-4烷基磺?；?，羥基-C2-4烷硫基，羥基-C2-4烷基亞磺?；u基-C2-4烷基磺?；寤?H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲?；?，N-[C1-4烷基]氨基甲?；?，N，N-二-[C1-4烷基]氨基甲?；被?，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷酰基氨基，氨磺酰，N-[C1-4烷基]氨磺酰，N，N-二-[C1-4烷基]氨磺酰，并且也獨立的是，如果適宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可有可無地和獨立地在任何有效碳原子上攜帶高達2個其他取代基，所述取代基獨立地選自C3-8環(huán)烷基，苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯硫基，苯基，萘基，苯甲?；?，苯氧基，苯并咪唑-2-基，和5-或6-元芳族雜環(huán)(通過環(huán)碳原子連接并且包含1-3個獨立地選自氧，硫和氮的雜原子)；其中所述萘基，苯基，苯甲?；窖趸?，5-或6-元芳族雜環(huán)取代基并且在所述苯基-C1-4烷基，苯硫基和苯基-C1-4烷氧基取代基中的苯基可有可無地攜帶一或兩個獨立地選自鹵素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
2.權(quán)利要求1的嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中Rx是氫、氟、氯、溴或甲基。
3.權(quán)利要求1或2的嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中-NQ2為二氫吲哚，哌嗪、嗎啉、二氫吲哚，1，2，3，4-四氫萘，苯并咪唑，或吲哚。
4.權(quán)利要求1到3的任一嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中式(Ia)取代基為3-二甲基氨基-2-羥基丙氧基。
5.權(quán)利要求1-4的任一嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中-NQ2不被取代或被鹵素、C1-5烷?；駽1-4烷基取代；并且如果-NQ2的雜環(huán)部分含有-NH-部分，那么氮原子不被取代或被C1-6烷氧基羰基取代。
6.權(quán)利要求1-5的任一嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，其中式(Ia)取代基與-NH-相對。
7.權(quán)利要求1-6的任一嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯是2-{4-[2-羥基-3-(N，N-二甲基氨基)丙氧基]苯氨基}-4-(2，3-二甲基二氫吲哚-1-基)嘧啶。
8.制備式(I)嘧啶衍生物的方法，該方法包括a)、將式(II)嘧啶 其中L為下文所定義的可替換基團；與式(III)化合物反應(yīng) b)、將式(IV)嘧啶 其中L為下文所定義的可替換基團；與式(V)化合物反應(yīng) c)、對于其中n為1，2或3，m＝1，Y2為H并且Y1為OH，NH2或SH的式(I)化合物來說，將包含式(VI)化合物的3-元雜烷基環(huán) 其中A為O，S或NH；與式(VII)親核試劑反應(yīng)Z-D(VII)其中D為H或適宜的反荷離子；d)、對于其中X為氧的式(I)化合物來說，將式(VIII)醇 與式(IX)醇反應(yīng) e)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1為OH，Y2為H并且m為2或3的式(I)化合物來說，將式(X)化合物 其中LgO為下文所定義的離去基團；與式(VII)親核試劑反應(yīng)；f)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1為H，Y2為H，n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I)化合物來說，將式(XI)化合物 其中LgO為下文所定義的離去基團；與式(VII)親核試劑反應(yīng)；g)、對于其中X為-O-，-NH-或-S-，Y1為H，Y2為H，n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I)化合物來說，將式(XII)化合物 與式(XIII)化合物反應(yīng)； 其中L為下文所定義的可替換基團；h)、對于其中Z為HS-的式(I)化合物來說，將相應(yīng)化合物中的硫代乙酸根基進行轉(zhuǎn)化；并且如果需要i). 將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I)化合物；ii). 除掉任何保護基；iii).形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
9.制備式(I’)嘧啶衍生物的方法，該方法包括a)、將式(II’)嘧啶 其中L為如下定義的可替換基團，與式(III’)化合物反應(yīng) b)、將式(IV’)嘧啶 其中L為如下定義的可替換基團，與式(V’)化合物反應(yīng) c)、對于其中n為1，2或3，m＝1，Y2為H并且Y1為OH，NH2或SH的式(I’)化合物，將式(VI’)3-元雜烷基環(huán) 其中A為O，S或NH；與式(VII’)親核試劑反應(yīng)Z-D(VII′)其中D為H或適宜的反荷離子；d)、對于其中X為氧的式(I’)化合物，通過將式(VIII’)醇 與式(IX’)醇反應(yīng) e)、對于其中X為-CH2，-O-，-NH-或-S-；Y1為OH；Y2為H并且m為2或3的式(I’)化合物，將式(X’)化合物 其中LgO為如下定義的離去基團；與式(VII’)化合物親核體反應(yīng)f)、對于其中X為-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1為H；Y2為H；n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I’)化合物，將式(XI’)的化合物 其中LgO為如下定義的離去基團；與式(VII’)的親核試劑反應(yīng)；g)、對于其中X為-O-，-NH-或-S-；Y1為H；Y2為H；n為1，2或3并且m為1，2或3的式(I’)化合物，將式(XII’)化合物 與式(XIII’)化合物反應(yīng) 其中L為如下定義的可替換基團；h)、對于其中Z為HS-的式(I’)化合物，將相應(yīng)化合物中的硫代乙酸根基進行轉(zhuǎn)化；并且如果需要i). 將式(I’)化合物轉(zhuǎn)化為另一式(I’)化合物；ii). 除掉任何保護基；iii).形成可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
10.在溫血動物中產(chǎn)生抗癌作用的方法，該方法包括給予所述動物有效量權(quán)利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。
11.權(quán)利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯在生產(chǎn)用于在溫血動物中產(chǎn)生抗癌作用的藥物中的應(yīng)用。
12.一種包含權(quán)利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯，和可藥用稀釋劑或載體的藥物組合物。
全文摘要
本說明書描述了一種用作抗癌劑的式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯,其中RX是本說明書所定義的取代基;Q
文檔編號A61K31/506GK1349528SQ0080706
公開日2002年5月15日 申請日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月6日
發(fā)明者G·A·布雷奧爾特, S·R·詹姆斯, J·E·佩斯 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司