專利名稱：一種煙用生物香料及其制備方法與它的用途的制作方法
一種煙用生物香料及其制備方法與它的用途
技術領域：
本發(fā)明涉及香煙技術領域。更具體地，本發(fā)明涉及一種煙用生物香料，還涉及所述煙用生物香料的制備方法，還涉及所述煙用生物香料的用途。
背景技術：
低次煙葉青雜氣較重，香氣和口感較差，同時煙葉本身存在蛋白質(zhì)含量較高的因素，對煙氣影響較大，制約了其可利用性。用蛋白質(zhì)酶處理可以起到明顯作用，但是成本較高。而利用煙葉上的微生物對蛋白質(zhì)進行作用，對煙葉香氣品質(zhì)的改善，以及煙葉的陳化過程，有著雙重優(yōu)勢。前人指出煙葉發(fā)酵最初是微生物的活動引起的，在煙葉醇化過程中，煙葉中微生物主要以煙葉中有機成分作為主要營養(yǎng)物質(zhì)，將淀粉類，蛋白質(zhì)類，木質(zhì)素類各自分解為醇類、酯類及其他芳香物質(zhì)，氨基酸等，各種糖類以及低分子量物質(zhì)。在此基礎上，再經(jīng)過美拉德反應，使得煙葉香氣品質(zhì)得到改善。我國科技工作者利用微生物技術制備煙用香料進行了大量研究工作，取得良好效果。CN 97101106公開了一種制取煙用香料的方法。該方法包括以煙草物料為原料，原料粉碎后，加水或加水蒸煮滅菌，接入發(fā)酵菌種，在溫度20-70°C下發(fā)酵2小時-30天形成發(fā)酵醪，然后加入溶劑萃取發(fā)酵醪，再經(jīng)分離提純得到產(chǎn)品。該產(chǎn)品較一般煙草浸膏、精油等香料醇和，修飾卷煙香氣作用明顯，并具有獨特的香氣特征。CN200610011011公開了一種煙用香料及其制備方法。使用桔梗、貝母、沙參、甘草、茯苓、黨參為原料，粉碎或直接加水滅菌， 接入發(fā)酵菌種，形成發(fā)酵醪；用水溶性溶劑萃取發(fā)酵醪，然后將萃取液濃縮即得膏狀煙用香料成品。CN 200810046834公開了一種采用微生物發(fā)酵咖啡制備煙用香料的方法，該方法包括煙葉復合培養(yǎng)基的制備、產(chǎn)香微生物的篩選、用篩選的白肋煙葉表面優(yōu)勢菌對咖啡進行液體發(fā)酵或固體發(fā)酵，得到發(fā)酵咖啡煙用香料。CN 201010143875公開一種發(fā)酵型煙用葡萄枸杞香料及其制備方法。它是將葡萄汁和枸杞提取物混合后加入葡萄糖制得培養(yǎng)基，將釀酒酵母HHL-I的培養(yǎng)物制得培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)基置入培養(yǎng)液中進行發(fā)酵制備而成。但是，這些技術還存在許多缺陷，例如制得產(chǎn)品的香氣質(zhì)量與煙氣之間的補償程度，另外煙草本身雜氣可能依然存在。因此，本發(fā)明人在總結現(xiàn)有技術的基礎上，經(jīng)過大量試驗研究完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容[要解決的技術問題]本發(fā)明的目的是提供一種煙用生物香料。本發(fā)明的另一個目的是提供所述煙用生物香料的制備方法。本發(fā)明的另一個目的是提供所述煙用生物香料的用途。[技術方案]本發(fā)明是通過下述技術方案實現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種煙用生物香料的制備方法。該方法煙用生物香料制備的步驟如下A、制備米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液將l_3g胰蛋白胨、0. 5-1. 5g酵母提取物、l_3g氯化鈉和0. 1-0. 3g氯化鈣溶于160_240ml水中得到一種溶液，然后用1-3N氫氧化鈉水溶液將其溶液調(diào)節(jié)至pH7.0，得到米曲霉CICC 40186菌種基
本培養(yǎng)液。本發(fā)明使用的米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186菌種是中國微生物菌種總目錄工業(yè)微生物菌種中收錄的菌種。胰蛋白胨是一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而得到的淺黃色粉末。它含有豐富的氮源、氨基酸等，可用于配制各種微生物培養(yǎng)基。酵母提取物是酵母經(jīng)破壁后將其中蛋白質(zhì)、核酸、維生素等抽提，再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的物質(zhì)。其中氨基酸含量30%以上，總蛋白50%以上，核苷酸10%以上，主要應用于食品、調(diào)味品、化妝品等領域。胰蛋白胨、酵母提取物都是目前市場上銷售的產(chǎn)品。然后，將米曲霉CICC 40186菌種按照以其基本培養(yǎng)液體積計接種量接入在米曲霉CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液中，在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120-180rpm的條件下培養(yǎng)24 48h，得到所述的米曲霉CICC 40186種子培養(yǎng)液。優(yōu)選地，米曲霉CICC 40186菌種的接種量是按照以其基本培養(yǎng)液體積計2_3%。米曲霉CICC 40186菌種在米曲霉CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液中在溫度與轉(zhuǎn)速140-160rpm的條件下培養(yǎng)30 40h。B、將10-20g低次煙末、0. 5-1. 5g葡萄糖和0. 01-0. 04g氯化鈣溶于160_240ml水中，自然PH，得到一種煙末培養(yǎng)液；再按照以其煙末培養(yǎng)液體積計1-4%接種量接入米曲霉 CICC 40186種子培養(yǎng)液；在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120_180rpm的條件下培養(yǎng) 24 48h ；從其培養(yǎng)物中分離煙末，該煙末用去離子水洗滌，再在微波功率900-1200W的條件下進行微波滅菌l-5min ；同時，其培養(yǎng)物在4500-5500rpm的條件下離心分離其菌體，得到的澄清菌液再加到滅菌的煙末中，得到一種經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液。優(yōu)選地，米曲霉CICC 40186菌種的接種量是按照以其煙末培養(yǎng)液體積計2_3%。米曲霉CICC 40186菌種在煙末培養(yǎng)液中在溫度與轉(zhuǎn)速140_160rpm的條件下培養(yǎng)30 40h。所述煙末洗滌后再在微波功率IOOOw的條件下進行微波滅菌2-^iin。所述培養(yǎng)物在4800_5200rpm的條件下離心分離2_%iin。恒溫搖床是一種有不銹鋼萬用夾具、數(shù)顯控溫、無級調(diào)速和良好熱循環(huán)功能的生化實驗設備，是一種多用途的生化反應器，適用于生物、生化、細胞、菌種等各種液態(tài)、固態(tài)振蕩培養(yǎng)。本發(fā)明使用的恒溫搖床是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如金壇市華城創(chuàng)威實驗儀器廠、常州菲普實驗儀器廠生產(chǎn)的產(chǎn)品。本發(fā)明使用的微波設備與離心設備都是目前市場上廣泛銷售的產(chǎn)品。C、制備東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液將濃度8_12%豆芽汁培養(yǎng)基和IOg葡萄糖溶于160-240ml水中，自然pH，得到一種東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液。本發(fā)明使用的東方伊薩酵母菌CICC 31431是中國微生物菌種總目錄工業(yè)微生物菌種中收錄的菌種。所述的豆芽汁培養(yǎng)基是使用黃豆芽、葡萄糖、瓊脂制成的，將200g黃豆芽洗凈放入IOOOmL水中煮沸20-30分鐘，過濾得到豆芽汁，補充至IOOOmL,再取豆芽汁10mL、磷酸氫二銨lg、KCl 0. 2g、MgS04. 7H200. 2g和瓊脂20g，將這些成分加入到蒸餾水中，加熱使它們完全溶解，然后分裝于三角瓶中，用0. 04%的溴甲酚紫酒精溶液作為指示劑，調(diào)節(jié)pH至6. 2 6.4，再在溫度1211下滅菌201^11，得到所述的豆芽汁培養(yǎng)基。它是人們普遍使用的酵母菌發(fā)酵培養(yǎng)基。然后，在東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液中按照以其基本培養(yǎng)液體積計1-4%接種量接入東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種，在恒溫搖床中在溫度25_30°C與轉(zhuǎn)速120-180rpm的條件下培養(yǎng)M 48h，得到所述的東方伊薩酵母菌CICC 31431種子培養(yǎng)液。優(yōu)選地，東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種的接種量是以其基本培養(yǎng)液體積計 2-3%。東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種在其基本培養(yǎng)基中在溫度與轉(zhuǎn)速 140-160rpm的條件下培養(yǎng)30 40h。D、往160_240ml在步驟C得到的經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液中添加0. 5-1. 5g葡萄糖，混勻后再按照以其培養(yǎng)液體積計1-4%接種量往其中接入東方伊薩酵母菌CICC 31431種子培養(yǎng)液，在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120_180rpm的條件下培養(yǎng)144 168h，得到的培養(yǎng)發(fā)酵液在攪拌回流裝置加熱鍋溫度60-80°C與旋轉(zhuǎn)速度 150-200轉(zhuǎn)/分的條件下進行蒸發(fā)40-60min，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀流體加熱鍋溫度60-80°C與旋轉(zhuǎn)速度80-100轉(zhuǎn)/分的條件下進行蒸發(fā)30-40min，待最終蒸餾物體積達到10_15ml時即得到所述的煙用生物香料。優(yōu)選地，在160_M0ml經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液中添加 0. 8-1. 2g葡萄糖。優(yōu)選地，東方伊薩酵母菌CICC 31431種子培養(yǎng)液的接種量是以經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液體積計2-3%。東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種在其基本培養(yǎng)基中在溫度與轉(zhuǎn)速 140-160rpm的條件下培養(yǎng)150 160h。本發(fā)明使用的攪拌回流裝置是本技術領域的技術人員熟知的設備。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的基本原理是減壓蒸餾，蒸餾燒瓶是一個帶有標準磨口接口的梨形或圓底燒瓶，通過蛇形回流冷凝管與減壓泵相連，回流冷凝管另一開口與帶有磨口的接收燒瓶相連，用于接收被蒸發(fā)的有機溶劑。本發(fā)明使用的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀是目前市場上銷售的產(chǎn)品， 例如西安安泰儀器科技有限公司、北京瑞成偉業(yè)儀器設備有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。本發(fā)明還涉及采用上述方法得到的煙用生物香料在煙草制品中的用途。在該煙草制品中該煙用生物香料的含量是以該煙草制品總重量計0. 05-0. 15%。根據(jù)中華人民共和國煙草專賣法的規(guī)定，所述的煙草制品是卷煙、雪茄煙、煙絲或復烤煙葉。
可以依照常規(guī)加香工藝程序噴灑在煙絲或涂布在煙草薄片上，然后在恒溫恒濕箱中平衡48小時，再打煙或切絲打煙制成煙支，最后進行感官評吸鑒定。所述的感官評吸鑒定方法是由本公司即華寶香精香料公司的五位煙用調(diào)香師組成評定小組，采用暗評方法，按照本公司建立的香氣質(zhì)、量、諧調(diào)、雜氣、刺激、勁頭和余味六項指標等級標準進行質(zhì)量評定，以便比較現(xiàn)有香精與本發(fā)明煙用生物香料對煙草制品品質(zhì)的影響。[有益效果]采用本發(fā)明方法得到的煙用生物香料，按照以該煙草制品總重量計0. 05-0. 15% 添加到煙草制品中，能使煙氣細柔，香氣質(zhì)良好，香氣細膩柔和，透發(fā)厚實，帶有特殊的焦甜香和酒香，使卷煙雜氣感明顯減輕，因此，本發(fā)明的煙用生物香料具有明顯的應用價值，可以明顯降低煙葉蛋白質(zhì)處理成本，提高煙草提取物和低次煙末的利用率和應用價值。

圖1為本發(fā)明的方法流程示意圖。
具體實施方式實施例1 本發(fā)明煙用生物香料的制備該實施例煙用生物香料制備步驟如下A、制備米曲霉CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液將2g胰蛋白胨、l.Og酵母提取物、2g 氯化鈉和0. 2g氯化鈣溶于200ml水中得到一種溶液，然后用2N氫氧化鈉水溶液將其溶液調(diào)節(jié)至PH7. 0，得到米曲霉CICC40186菌種基本培養(yǎng)液；然后將米曲霉CICC 40186菌種按照以其基本培養(yǎng)液體積計2%接種量接入在米曲霉 CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液中，在恒溫搖床中在溫度與轉(zhuǎn)速150rpm的條件下培養(yǎng) Mh，得到所述的米曲霉CICC 40186種子培養(yǎng)液；B、將15g低次煙末、l.Og葡萄糖和0.02g氯化鈣溶于200ml水中，自然pH，得到一種煙末培養(yǎng)液；再按照以其煙末培養(yǎng)液體積計2%接種量接入米曲霉CICC 40186種子培養(yǎng)液；在恒溫搖床中在溫度與轉(zhuǎn)速150rpm的條件下培養(yǎng)24h ；從其培養(yǎng)物中分離煙末，該煙末用去離子水洗滌，再在微波功率900w的條件下進行微波滅菌細^!；同時，其培養(yǎng)物在5000rpm的條件下離心分離其菌體，得到的澄清菌液再加到滅菌的煙末中，得到一種經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液；C、制備東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液將濃度10%豆芽汁培養(yǎng)基和IOg葡萄糖溶于200ml水中，自然pH，得到一種東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培
養(yǎng)液；然后，在東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液中按照以其基本培養(yǎng)液體積計2%接種量接入東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種，在恒溫搖床中在溫度與轉(zhuǎn)速 150rpm的條件下培養(yǎng)Mh，得到所述的東方伊薩酵母菌CICC 31431種子培養(yǎng)液；D、往200ml在步驟C得到的經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液中添加l.Og葡萄糖，混勻后再按照以其培養(yǎng)液體積計2%接種量往其中接入東方伊薩酵母菌 CICC 31431種子培養(yǎng)液，在恒溫搖床中在溫度與轉(zhuǎn)速150rpm的條件下培養(yǎng)144h，得到的培養(yǎng)發(fā)酵液在攪拌回流裝置加熱鍋溫度70°C與旋轉(zhuǎn)速度160轉(zhuǎn)/分的條件下進行蒸發(fā)60min，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀流體加熱鍋溫度70°C與旋轉(zhuǎn)速度90轉(zhuǎn)/分的條件下進行蒸發(fā) 40min，待最終蒸餾物體積達到IOml時即得到所述的煙用生物香料。采用本說明書描述的方法進行感官評吸鑒定，其結果列于表1。表1 使用本發(fā)明煙用生物香料的感官評吸效果
權利要求
1.一種煙用生物香料的制備方法，其特征在于該方法的步驟如下A、制備米曲霉(Aspergillusoryzae)CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液將l_3g胰蛋白胨、 0. 5-1. 5g酵母提取物、l_3g氯化鈉和0. 1-0. 3g氯化鈣溶于160_240ml水中得到一種溶液， 然后用1-3N氫氧化鈉水溶液將其溶液調(diào)節(jié)至pH7. 0，得到米曲霉CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液；然后將米曲霉CICC 40186菌種按照以其基本培養(yǎng)液體積計1-4%接種量接入在米曲霉 CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液中，在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120_180rpm的條件下培養(yǎng)M 48h，得到所述的米曲霉CICC 40186種子培養(yǎng)液；B、將10-20g低次煙末、0.5-1. 5g葡萄糖和0. 01-0. 04g氯化鈣溶于160-240ml水中， 得到一種煙末培養(yǎng)液；再按照以煙末培養(yǎng)液體積計1-4%接種量接入步驟A得到的米曲霉 CICC 40186種子培養(yǎng)液；在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120_180rpm的條件下培養(yǎng) 24 48h ；然后，從培養(yǎng)物中分離煙末，該煙末用去離子水洗滌，再在微波功率900-1200W的條件下進行微波滅菌l-5min ；同時，余下的培養(yǎng)物在4500-5500rpm的條件下離心分離其菌體，得到的澄清菌液再加到經(jīng)過滅菌的煙末中，得到一種經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液；C、制備東方伊薩酵母菌CICC31431菌種基本培養(yǎng)液將質(zhì)量濃度8-12%豆芽汁培養(yǎng)基和IOg葡萄糖溶于160-240ml水中，得到東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液；然后，在東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種基本培養(yǎng)液中按照以該基本培養(yǎng)液體積計 1-4%接種量接入東方伊薩酵母菌CICC 31431菌種，在恒溫搖床中在溫度25_30°C與轉(zhuǎn)速 120-180rpm的條件下培養(yǎng)M 48h，得到所述的東方伊薩酵母菌CICC 31431種子培養(yǎng)液；D、往步驟B得到的經(jīng)米曲霉CICC40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液中添加0. 5-1. 5g 葡萄糖，混勻后再按照以該培養(yǎng)液體積計1-4%接種量接入步驟C得到的東方伊薩酵母菌 CICC 31431種子培養(yǎng)液，在恒溫搖床中在溫度25-30°C與轉(zhuǎn)速120_180rpm的條件下培養(yǎng) 144 16 ，得到的培養(yǎng)發(fā)酵液在攪拌回流裝置加熱鍋溫度60-80°C與旋轉(zhuǎn)速度150-200轉(zhuǎn) /分的條件下進行蒸發(fā)40-60min，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀流體加熱鍋溫度60-80°C與旋轉(zhuǎn)速度 80-100轉(zhuǎn)/分的條件下進行蒸發(fā)30-40min，待最終蒸餾物體積達到10_15ml時得到所述的煙用生物香料。
2.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟A中，米曲霉CICC40186菌種的接種量是按照以基本培養(yǎng)液體積計2-3%。
3.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟A中，米曲霉CICC40186菌種在米曲霉CICC 40186菌種基本培養(yǎng)液中在溫度與轉(zhuǎn)速140_160rpm的條件下培養(yǎng) 30 40h。
4.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟B中，米曲霉CICC40186菌種的接種量是按照以所述煙末培養(yǎng)液體積計2-3%。
5.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟B中，米曲霉CICC40186菌種在煙末培養(yǎng)液中在溫度與轉(zhuǎn)速140-160rpm的條件下培養(yǎng)30 40h。
6.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟C中東方伊薩酵母菌CICC31431 菌種的接種量是以所述基本培養(yǎng)液體積計2-3%。
7.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟C中，東方伊薩酵母菌CICC31431菌種在其基本培養(yǎng)基中在溫度與轉(zhuǎn)速140-160rpm的條件下培養(yǎng)30 40h。
8.根據(jù)權利要求1中所述的方法，其特征在于在步驟D中，在160-M0ml經(jīng)米曲霉CICC 40186菌種處理的無菌體培養(yǎng)液中添加0. 8-1. 2g葡萄糖。
9.根據(jù)權利要求1-8中任一項權利要求所述方法得到的煙用生物香料在煙草制品中的用途，其特征在于在該煙草制品中該煙用生物香料的含量是以該煙草制品總重量計 0. 05-0. 15%。
10.根據(jù)權利要求9所述的用途，其特征在于所述的煙草制品是卷煙、雪茄煙、煙絲或復烤煙葉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種煙用生物香料及其制備方法與它的用途。該方法包括米曲霉種子培養(yǎng)液制備、經(jīng)米曲霉菌種處理的無菌體培養(yǎng)液制備、東方伊薩酵母菌種子培養(yǎng)液制備與發(fā)酵液蒸發(fā)濃縮得到所述的煙用生物香料，這種煙用生物香料能使煙氣細柔，香氣質(zhì)良好，香氣細膩柔和，透發(fā)厚實，帶有特殊的焦甜香和酒香，使卷煙雜氣感明顯減輕，因此，具有明顯的應用價值，明顯降低煙葉蛋白質(zhì)處理成本，提高煙草提取物和低次煙末的利用率和應用價值。
文檔編號A24D1/18GK102488317SQ201110436958
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月23日 優(yōu)先權日2011年12月23日
發(fā)明者張建棟, 樊偉 申請人:華寶食用香精香料(上海)有限公司