專利名稱：一種檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)氮亞硝胺的方法。特別是涉及一種檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法。
背景技術(shù)：
氮亞硝胺化合物是潛在的致癌物質(zhì)，而煙草中存在著致癌的煙草特有氮亞硝胺，已是不爭(zhēng)的事實(shí)。盡管在生理?xiàng)l件下氮亞硝胺通常是穩(wěn)定的，但其通過體內(nèi)代謝活化卻具有強(qiáng)烈的致癌作用。為了降低煙草特有氮亞硝胺對(duì)消費(fèi)者造成的傷害，控制煙草制品中的氮亞硝胺含量，將成為衡量煙草制品的一項(xiàng)重要指標(biāo)。為此，20世紀(jì)90年代以來，國內(nèi)外都對(duì)煙草中氮亞硝胺的檢測(cè)展開了相應(yīng)的研究。如“Improved Methodology for thequantitative assessment of Tobacco-Specific N-Nitrosaminesin Tobacco by Supercritical Fluid Extraction”(J AgricFood chem.，1995，43916-922)介紹了一種用添加10％甲醇的硅膠柱超臨界流體萃取煙草中氮亞硝胺的方法，萃取液過用正己烷處理的硅膠柱。先用正己烷和二氯甲烷淋洗，再用含有2％的甲醇二氯甲烷洗脫氮亞硝胺，濃縮后再經(jīng)GC-TEA分析檢測(cè)。GC的分析條件如下色譜柱DB-5，進(jìn)樣量2μl，進(jìn)樣溫度220℃，程序升溫初溫40℃，保持5分鐘；升溫每分鐘30℃至140℃保持10分鐘；升溫每分鐘1℃至145℃保持5分鐘；升溫每分鐘20℃至180℃保持10分鐘。由于該法純粹采用硅膠柱，會(huì)使許多酸性物質(zhì)隨同氮亞硝胺同時(shí)洗脫，影響純化效果。又如“Analysis of tobacco-Specific Nitrosamines in Tobacco andtobacco Smoke”(NITROSAMINES AND RELATED n-NITROSOCOMPOUNDS，1994，369-371)介紹了一種分析煙草和煙氣中氮亞硝胺的方法，首先，用含有20mM維生素C的檸檬酸緩沖液pH4.5提取5-10克煙草，再以NpePicA作為內(nèi)標(biāo)，用二氯甲烷萃取煙草提取液，然后，部分二氯甲烷過65克氧化鋁層析柱，用250ml二氯甲烷洗脫得VNA組分，最后，用250ml二氯甲烷∶丙酮＝4∶1的淋洗液，得氮亞硝胺組分，用于GC-TEA分析。該方法由于采用純粹的氧化鋁柱，因此，難以完全洗脫氮亞硝胺，影響回收率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是為了解決純化效果不佳、回收率低等問題，提供一種可提高純化效果和回收率，且操作簡(jiǎn)便的檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的A、在清潔、干燥的層析柱內(nèi)依次加入經(jīng)活化的氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉；B、將濃縮的煙氣萃取樣品加入層析柱，用二氯甲烷淋洗；C、采用2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗層析柱，收集全部洗脫液、濃縮；D、采用GC-TEA進(jìn)行分析，GC的分析條件為進(jìn)樣口溫度225℃，進(jìn)樣量為1～2μl，載氣采用恒流速氦氣，初始溫度設(shè)定為50℃，程序升溫，直至達(dá)到260℃后，再保持10分鐘；TEA的分析條件為氧氣流速10～20ml/min，爐溫400℃～600℃，氣相接口200℃～300℃；E、根據(jù)積分儀得到的峰面積比進(jìn)行定量分析，得到檢測(cè)結(jié)果。
本發(fā)明的有益效果為由于在層析柱中依次加入了經(jīng)活化的氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉，有效提高了純化效果和回收率。這是因?yàn)楣枘z可以吸附一些非目標(biāo)物質(zhì)，排除其對(duì)GC分離的干擾，還可延長毛細(xì)管色譜柱的使用壽命。而堿性的氧化鋁則可吸附酸性物質(zhì)，達(dá)到純化的目的。特別是將氧化鋁層析和硅膠層析合二為一，減少了操作步驟，提高了回收率。本方法設(shè)定的GC-TEA分析條件，能夠有效分離NNN、NAT、NAB、NNK四種檢測(cè)對(duì)象，特別適用于煙氣中煙草特有氮亞硝胺的精確定量
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一先將采集了20支9mg555卷煙煙氣的濾片加入內(nèi)標(biāo)進(jìn)行樣品萃取，經(jīng)濃縮至5ml后備用。在清潔、干燥的層析柱內(nèi)依次加入經(jīng)活化的氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉，并將濃縮的萃取樣品加入層析柱。用二氯甲烷多次洗滌盛放濃縮樣品的容器，洗滌液加入層析柱，再用適量的二氯甲烷進(jìn)行淋洗。然后，采用濃度為2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液，淋洗層析柱，收集全部洗脫液，將其濃縮至1ml，供GC-TEA分析。分析的GC條件可設(shè)定為進(jìn)樣口溫度225℃，進(jìn)樣量1～2μl，載氣采用恒流速氦氣，初始溫度50℃，程序升溫，直至達(dá)到260℃后，再保持10分鐘。使得煙草特有氮亞硝胺中四種主要的物質(zhì)NNN、NNK、NAB和NAT與內(nèi)標(biāo)有效分離，再通過TEA熱能分析儀檢測(cè)及定量各組分中的亞硝基含量。TEA的分析條件可設(shè)定為氧氣流速10～20ml/min，爐溫400℃～600℃，氣相接口200℃～300℃。然后，根據(jù)積分儀得到的峰面積比進(jìn)行定量分析，得到檢測(cè)結(jié)果。由色譜圖分析可知，信噪比較高，樣品雜質(zhì)很少，基本無干擾峰，樣品純化良好。目標(biāo)峰在譜圖上的位置分布均勻，內(nèi)標(biāo)峰與樣品峰大小相近，分離度良好，峰形均對(duì)稱尖銳。譜圖峰形明顯優(yōu)于公開文獻(xiàn)所報(bào)道的相關(guān)色譜圖。此外，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性良好。
實(shí)施例二以內(nèi)標(biāo)和NNN、NAB、NAT和NNK混合標(biāo)樣為測(cè)試對(duì)象，進(jìn)行5組對(duì)照實(shí)驗(yàn)，采用的層析方法同上。層析柱內(nèi)氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉的用量分別為10～30g，3～10g，3～10g，活化溫度110℃，活化時(shí)間2小時(shí)。GC的分析條件為進(jìn)樣口溫度225℃，進(jìn)樣量1μl，不分流。氦氣的恒流速1/min，色譜柱可采用HP-5MS，也可采用DB-5或ULTRA-2毛細(xì)柱，柱前加1m保護(hù)柱。初始溫度設(shè)定為50℃，保持2分鐘，然后每分鐘升溫5℃～10℃，直至160℃～200℃，再保持5～10分鐘，繼續(xù)以每分鐘升溫5℃～10℃的速率至230℃，最后，每分鐘升溫30℃，直至達(dá)到260℃后，再保持10分鐘。TEA的分析條件可設(shè)定為氧氣流速10～20ml/min，爐溫400℃～600℃，氣相接口200℃～300℃。經(jīng)檢測(cè)，其重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度都較為理想，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)煙氣中煙草特有氮亞硝胺的精確定量。峰面積比與標(biāo)樣的回歸系數(shù)優(yōu)于0.999。在3倍噪聲條件下，NNN、NAB和NAT檢測(cè)下限優(yōu)于10pg，NNK檢測(cè)下限優(yōu)于50pg。5組NNN、NNK、NAB和NAT含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)分別為5.93、4.73、5.26、5.18；而其相應(yīng)的回收率則分別是96.8％、96.5％、95.5％和93.2％。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法，其特征在于A、在清潔、干燥的層析柱內(nèi)依次加入經(jīng)活化的氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉；B、將濃縮的煙氣萃取樣品加入層析柱，用二氯甲烷淋洗；C、采用2％～5％的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗層析柱，收集全部洗脫液、濃縮；D、采用GC-TEA進(jìn)行分析，GC的分析條件為進(jìn)樣口溫度225℃，進(jìn)樣量為1～2μl，載氣采用恒流速氦氣，初始溫度設(shè)定為50℃，程序升溫，直至達(dá)到260℃后，再保持10分鐘；TEA的分析條件為氧氣流速10～20ml/min，爐溫400℃～600℃，氣相接口200℃～300℃；E、根據(jù)積分儀得到的峰面積比進(jìn)行定量分析，得到檢測(cè)結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法，其特征在于氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉的用量分別為10～30g，3～10g，3～10g，活化溫度為110℃，活化時(shí)間2小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法，其特征在于GC的分析條件為氦氣的恒流速1～2.5ml/min，初始溫度設(shè)定為50℃后，保持2分鐘，然后每分鐘升溫5℃～10℃，直至160℃～200℃，再保持5～10分鐘，繼續(xù)以每分鐘升溫5℃～10℃的速率至230℃，最后，每分鐘升溫30℃，直至達(dá)到260℃后，再保持10分鐘。
全文摘要
本發(fā)明揭示了一種檢測(cè)煙草特有氮亞硝胺的方法。首先在清潔、干燥的層析柱內(nèi)依次加入經(jīng)活化的氧化鋁、硅膠和無水硫酸鈉,然后,將濃縮的萃取樣品加入層析柱,用二氯甲烷淋洗。再采用2%～5%的甲醇/二氯甲烷溶液淋洗層析柱,收集全部洗脫液、濃縮。最后,采用GC－TEA進(jìn)行分析,根據(jù)積分儀得到的峰面積比進(jìn)行定量分析,得到檢測(cè)結(jié)果。GC分析的條件可設(shè)定為:進(jìn)樣口溫度225℃,進(jìn)樣量為1～2μl,載氣采用恒流速氦氣,初始溫度設(shè)定為50℃,程序升溫,直至達(dá)到260℃后,再保持10分鐘。TEA的分析條件為:氧氣流速10～20ml/min,爐溫400℃～600℃,氣相接口200℃～300℃。
文檔編號(hào)A24B15/00GK1356069SQ0113927
公開日2002年7月3日 申請(qǐng)日期2001年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月28日
發(fā)明者金永明, 張怡春 申請(qǐng)人:上海煙草(集團(tuán))公司