本發(fā)明屬于動物保健用品,具體就是一種雛雞使用的含益生菌的雛雞保健劑。
背景技術:
::益生菌(probiotics)是一種可通過改變腸道菌群平衡而對動物施加有利影響的活微生物飼料添加劑,其產品稱為微生態(tài)制劑,是根據微生態(tài)學基本原理研制,用于調節(jié)機體的微生態(tài)環(huán)境。益生菌的作用特點是形成生物保護膜防止致病菌入侵;產生乳酸或醋酸、過氧化氫、細菌素和類似抗菌素的物質,并以此來抑制病原菌的生長;調整宿主免疫反應;改善消化道細菌代謝并降低糞中有害酶的活性;減少細菌易位的發(fā)生率等,因此益生菌具有加強腸道微生物區(qū)系的屏障功能或增進非特異性免疫功能,調節(jié)特異性免疫功能,增強抗病力和體質,防止病菌感染,提高飼料利用率和動物生長率的功能。目前,益生菌已廣泛應用于嬰兒奶粉、兒童食品、果汁飲料和谷類等食品中,醫(yī)藥以及畜牧水產業(yè),創(chuàng)造了巨大的價值;而針對禽類生長特點選取哪些種類益生菌、它們的比例,以及制備與包被技術成為研究熱點。技術實現要素:本發(fā)明的目的是根據雛雞的生長發(fā)育特點,提供一種配比合科學、維持和促進雛雞消化道內穩(wěn)態(tài),利于雛雞的生長發(fā)育、提高的雛雞的免疫能力的含益生菌的雛雞保健劑及生產方法。本發(fā)明的技術方案是以下述方式實現的:一種含益生菌的雛雞保健劑:由以下益生菌組份和重量百分數量組成:乳桿菌類:嗜酸乳桿菌lh1f25~35干酪乳桿菌lc2w15~25、纖維二糖乳桿菌fhhmb12610~20;芽孢桿菌類:蠟樣芽孢桿菌xhj-2-610~20、地衣芽孢桿菌d15~15;酵母菌類:產朊假絲酵母bkm-y745~15;活菌數≥80億/克。此菌種組合及數量配比為根據雛雞消化道內環(huán)境特點,為維持和促進消化道內穩(wěn)態(tài),經過實驗室實驗、中試及萬只雞田間實驗獲得,效果較理想。本發(fā)明人發(fā)現,如隨意改變菌種或配比會給雞生產產生嚴重的后果,如提高芽孢桿菌數量至40%,1日齡雛雞連續(xù)服用3天就會導致腹瀉,臨床表現為下痢,抗生素治療效果不佳,其原因主要是雛雞腸道芽孢桿菌過高會引起菌群紊亂,消化能力降低,從而引起腹瀉;如降低嗜酸乳桿菌lh1f的含量至10%,則益生菌制劑的效果明顯降低,不能為雛雞尤其是小雞階段提供優(yōu)勢菌群,不能起到促生長和預防疾病的作用。上述雛雞使用的含益生菌的雛雞保健劑的生產方法,包括以下步驟:a、分別取嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、纖維二糖乳桿菌、蠟樣芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌及酵母菌種子;b、分別將上述益生菌種子活化;冷凍益生菌種子活化培養(yǎng)參數:乳桿菌類選用mrs肉湯培養(yǎng)基100ml,ph值調至6.0,37℃厭氧培養(yǎng)乳酸菌16~20小時,芽孢桿菌選用myp肉湯培養(yǎng)基100ml,ph值調至7.0~7.2,37℃厭氧培養(yǎng)芽孢桿菌16~20小時,酵母菌選用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基100ml,37℃培養(yǎng)酵母菌16~20小時。c、將活化的益生菌種子培養(yǎng);將活化的益生菌進行種子培養(yǎng),種子培養(yǎng)參數:乳酸菌選用mrs肉湯培養(yǎng)基1l,ph值調至6.0,37℃厭氧培養(yǎng)乳酸菌16~20小時,芽孢桿菌選用myp肉湯培養(yǎng)基1l,ph值調至7.0~7.2,37℃厭氧培養(yǎng)芽孢桿菌16~20小時,酵母菌選用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基1l,37℃培養(yǎng)酵母菌16~20小時。d、分別進行100升體系培養(yǎng);二級液體擴大培養(yǎng)后,將芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌分別再進行100升體系培養(yǎng),培養(yǎng)參數:乳酸菌選用mrs肉湯培養(yǎng)基100l,ph值調至6.0,37℃厭氧培養(yǎng)乳酸菌12~16小時,芽孢桿菌選用myp肉湯培養(yǎng)基1l,ph值調至7.0~7.2,37℃厭氧培養(yǎng)芽孢桿菌12~16小時,酵母菌選用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基1l,37℃培養(yǎng)酵母菌20小時12~16小時。e、將培養(yǎng)好的益生菌混合;100升體系擴大培養(yǎng)后,將芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌按以下百分比配比混合:乳酸菌65%,芽孢桿菌25%,酵母菌10%;具體為乳酸菌包括嗜酸乳桿菌30%、干酪乳桿菌20%、纖維二糖乳桿菌15%,芽孢桿菌包括蠟樣芽孢桿菌15%、地衣芽孢桿菌10%。f、將d步驟中按百分比配制的混合益生菌包被;將1.5%海藻酸鈉水溶液與混合益生菌液按體積比為1:5的均勻混合得海藻酸鈉菌液混合液:用玻璃注射器將海藻酸鈉菌液混合液注射入1.5%cacl2溶液中,形成海藻酸鈣微球,去掉上清液,分別用0.1%2-環(huán)已胺基乙磺酸,1.1%cacl2溶液洗滌去除未包被的細菌,去掉上清液,剩余混合物再與0.1%殼聚糖溶液按1:5體積比比例充分混合,形成的微囊再次用0.1%2-環(huán)已胺基乙磺酸,1.1%cacl2,0.85%nacl溶液洗滌再次去除未包被的細菌。g、將包被好的益生菌干燥。將包被好的益生菌干燥是指:噴霧干燥,控制進風溫度為140-160℃,排風溫度65-70℃,得到益生菌微囊。通過上述方法制得的益生菌微囊制劑是粉劑。由于包被過程,含有微量殼聚糖,活菌數≥80億/克。本發(fā)明的積極效果是:本發(fā)明制得的益生菌微囊制劑,含有芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌及殼聚糖,各組分按比例配合,好氧型和厭氧型并存,性質穩(wěn)定,功能廣泛。具有如下優(yōu)點:1、酵母菌制造厭氧環(huán)境:酵母菌作為好氧菌,在進入動物腸道后消耗氧氣,制造厭氧環(huán)境,促進厭氧微生物(腸道有益微生物)生長發(fā)育,抑制好氧微生物(大腸桿菌等有害菌);提供優(yōu)勢微生物營養(yǎng):本發(fā)明提供的禽用益生菌制劑含有豐富的有益細菌如芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌,以及細菌的有益代謝產物如b族維生素、生物小肽、未知促長因子、殼聚糖、多糖、酵母細胞壁等營養(yǎng)。這些有益物質和活菌能夠提高雛雞存活率,促進免疫系統(tǒng)發(fā)育和成熟,促進腸道有益菌群的定植和繁殖、從而加快機體生理代謝、促進生長、增強抗病能力、提高飼料利用率和雞的生產性能。純天然發(fā)酵而成,無毒無殘留,對環(huán)境無不良影響,可作為動物保健類制劑,促生長和預防疾病。2、本發(fā)明提供的復合益生菌可促進雞對飼料的消化吸收,改善雞的糞便排泄,減少有害氣體對動物和環(huán)境的毒害。3、使用方法簡便易行:直接投喂到料槽供動物食用或添加到全價料中混合均勻使用。4、本品經包被和干燥處理,耐胃酸和腸液能力強,有效提高了進入腸道定植的活菌數量,保存期較長,常溫在一年以上。具體實施方式:下面結實施例對本發(fā)明作進一步說明:實施一1、取益生菌種子:嗜酸乳桿菌,干酪乳桿菌,纖維二糖乳桿菌,蠟樣芽孢桿菌,地衣芽孢桿菌,酵母菌。2、生產工藝a益生菌種子活化b一級益生菌種子培養(yǎng)c二級益生菌種子培養(yǎng)d100升體系培養(yǎng)e包被f品質檢驗g干燥3、培養(yǎng)方法將保存的各菌種先進行一級液體擴大培養(yǎng)及二級液體擴大培養(yǎng)后,將芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌分別再進行100升體系培養(yǎng)乳酸菌選用mrs肉湯培養(yǎng)基,芽孢桿菌選用myp肉湯培養(yǎng)基,酵母菌選用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基;100升體系擴大培養(yǎng)后,將芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌按以下重量百分比配比混合:乳酸菌65%,芽孢桿菌25%,酵母菌10%。具體各菌百分數量嗜酸乳桿菌30、干酪乳桿菌20、纖維二糖乳桿菌15、蠟樣芽孢桿菌15、地衣芽孢桿菌10及酵母菌10。mrs肉湯增菌培養(yǎng)(1000ml體系):蛋白胨10克,酵母浸膏5克,牛肉膏10克,葡萄糖20克,醋酸鈉5克,磷酸氫二鉀2克,枸櫞酸三氨2克,硫酸錳0.5克,硫酸鎂0.2克,加雙蒸水溶解至1000ml,ph值調至6.0,37℃厭氧培養(yǎng)乳酸菌18小時。myp肉湯增菌培養(yǎng)(1000ml體系):蛋白胨10克,牛肉膏1克,氯化鈉10克,d-甘露醇10克,酚紅0.025克,卵黃液(20%)100ml,多粘菌素100000iu,加雙蒸水溶解至1000ml,ph值調至7.0~7.2,37℃厭氧培養(yǎng)芽孢桿菌20小時。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)(1000ml體系):去皮馬鈴薯200克,葡萄糖20克,蒸餾水1000ml。先將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水1000ml,煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣,保留馬鈴薯濾液,加入葡萄糖,溶解后,加水定容至1000ml。37℃培養(yǎng)酵母菌20小時。4、包被技術:將1.5%海藻酸鈉與培養(yǎng)好的菌液按1:5體積比均勻混合,用帶4號針頭玻璃注射器將海藻酸鈉菌液混合液注射入1.5%cacl2溶液中,形成海藻酸鈣微球,去掉上清液,分別用0.1%2-環(huán)已胺基乙磺酸、1.1%cacl2()溶液洗滌去除未包被的細菌,去掉上清液。再與0.1%殼聚糖溶液充分混合,形成的微囊再次用0.1%2-環(huán)已胺基乙磺酸,1.1%cacl2,0.85%nacl溶液洗滌去除未包被的細菌,去掉上清液。5、干燥采用噴霧干燥,控制進風溫度為140-160℃,排風溫度65-70℃,得到益生菌微囊。通過上述方法制得的益生菌微囊制劑是粉劑。由于包被過程,含有微量殼聚糖。通過上述方法制備的復合益生菌制劑活菌數≥80億/克。本發(fā)明制得的含益生菌的雛雞保健劑在實際雛雞應用后,血液中t、b細胞數量,igg、igm、iga含量;胸腺、法氏囊和脾臟t細胞,igg、igm、iga抗體生成細胞數量均較未飼喂益生菌的對照雛雞不同程度增加,其中血清igm、iga含量和免疫器官igm、iga抗體生成細胞數量于飼喂后7天達到高峰,血清igg含量和免疫器官igg抗體生成細胞數量于飼喂后10天達到高峰見表1-表10。表明雛雞飼喂益生菌后,其外周血液和免疫器官體液免疫和細胞免疫均增強。表1雛雞應用益生菌后外周血液b細胞數量變化table1changeofnumberofbcellsinperipheralbloodofprobioticalchicks(%)注:字母不同者表示差異顯著,大寫字母代表p<0.01,小寫字母代表p<0.05,無標記或字母相同者表示不顯著p>0.05。表2雛雞應用益生菌后血清igg、igm、iga含量的變化table2changeofthecontentofigsinserumofprobioticalchicks(單位unit:492nmod)表3雛雞應用益生菌后外周血液t細胞數量變化table3changeofnumberoftcellsinperipheralbloodofprobioticalchicks(%)雛雞應用益生菌后4~10天,其外周血液b細胞數量較相應對照雛雞明顯增加(p<0.05或p<0.01)(表1)。雛雞應用益生菌后,其血液igg、igm、iga含量均不同程度高于對照雛雞,其中益生菌組igg含量較對照雛雞于7~18天差異明顯(p<0.05或p<0.01);igm、iga含量于4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01)(表2)。雛雞應用益生菌后,其血液t細胞數量均不同程度高于對照雛雞,于4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01)(表3)。表4雛雞應用益生菌后法氏囊igg、igm、iga生成細胞數量變化table4changeofnumberofigscellsinbursaoffabriciusofprobioticalchicks(單位unit:103/mm2)表5雛雞應用益生菌后脾臟紅髓igg、igm、iga抗體生成細胞數量變化table5changeofnumberofigg、igm、igaantibody-producingcellsinredpulpofspleenofprobioticalchicks(單位unit:103/mm2)雛雞應用益生菌后,其法氏囊淋巴濾泡皮質和髓質igg、igm、iga抗體生成細胞數量均不同程度高于對照雛雞,其中igg于7~18天差異明顯(p<0.05或p<0.01),igm于4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01),皮質和髓質iga分別于7~10和7天差異明顯(p<0.05或p<0.01)(表4)。雛雞應用益生菌后,其脾臟紅髓igg、igm、iga抗體生成細胞數量均不同程度高于對照雛雞,其中益生菌ⅰ組igg抗體生成細胞數量較對照組于7~18天差異明顯(p<0.05或p<0.01);igm、iga抗體生成細胞數量于4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01);益生菌ⅱ組igg抗體生成細胞數量于第10天較對照組差異顯著(p<0.05),igm、iga抗體生成細胞數量于第7天較對照雛雞明顯增加(p<0.05)(表5)。表6雛雞應用益生菌后脾臟動脈周圍鞘igg、igm、iga抗體生成細胞數量變化table6changeofnumberofigsproducingcellsinplsofspleenofprobioticalchicks(單位unit:103/mm2)注pls:為periarteriallymphaticsheath的縮寫,表示動脈周圍淋巴鞘表7雛雞應用益生菌后脾臟淋巴小結igg、igm、iga生成細胞數量變化table7changeofthenumberofigsproducingcellsinlympoidnoduleofspleenofprobioticalchicks(單位unit:103/mm2)雛雞應用益生菌后,其脾臟動脈周圍鞘igg、igm、iga抗體生成細胞數量均不同程度高于對照雛雞(表6)。雛雞應用益生菌后,其脾臟淋巴小結igg、igm、iga抗體生成細胞數量均不同程度高于對照雛雞(表7)。表8雛雞應用益生菌后胸腺t細胞百分數變化table8changeofpercentageoftcellsinthymusofprobioticalchicks(%)表9雛雞應用益生菌后胸腺t細胞數量變化table9changeofnumberoftcellsinthymusoftheprobioticalchicks(單位unit:103/mm2)雛雞應用益生菌后18天內,其胸腺t細胞百分數均不同程度高于對照雛雞,其中4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01)(表8)。雛雞應用益生菌后,其胸腺皮質和髓質t細胞數量均不同程度高于對照雛雞,于4~10天差異明顯(p<0.05或p<0.01)表9表明益生菌促進雛雞中樞免疫器官t淋巴細胞的發(fā)育,說明益生菌有調節(jié)免疫功能的作用。當前第1頁12當前第1頁12