本發(fā)明屬于飼料配方設(shè)計(jì)與飼料加工工藝領(lǐng)域，具體地涉及一種仔豬無抗生素的飼料，并涉及該飼料的制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著飼料特別是配合飼料的產(chǎn)生，使規(guī)模化、現(xiàn)代化的生豬養(yǎng)殖成為可能，而在飼料中添加一些飼料添加劑，比如添加生豬生長所需的微量元素等，對(duì)生豬的生長發(fā)育起到積極的作用，可以使生豬的日增重提高，縮短生豬的出欄時(shí)間，降低生豬的飼養(yǎng)成本，取得較好的經(jīng)濟(jì)效益，從而帶來了生豬飼養(yǎng)業(yè)的快速發(fā)展壯大，也使人們?nèi)粘Ｉ钪械娜馐称房梢缘玫接辛Φ谋Ｕ稀Ｈ欢?，在生豬飼養(yǎng)過程中，為了使生豬能夠通過食物獲得一定的抗病能力，往往需要在飼料中添加抗生素類添加劑，這些成分的添加雖然提高了豬肉總產(chǎn)量，然而抗生素對(duì)動(dòng)物生長及其產(chǎn)品質(zhì)量的副作用主要包括：使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性、造成畜禽機(jī)體的免疫力下降、引起畜禽內(nèi)源性感染和二重感染、導(dǎo)致肉蛋奶品質(zhì)下降、會(huì)在畜產(chǎn)品和環(huán)境中造成殘留等，直接威脅到人類健康與安全。解決豬健康問題必須依靠綜合措施，在繼續(xù)加強(qiáng)和規(guī)范豬病防治的疫苗和藥物管理的同時(shí)，尋求新思路，研究和應(yīng)用新理論、新技術(shù)、新產(chǎn)品十分重要和必要?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究表明，營養(yǎng)是決定健康的關(guān)鍵因素。營養(yǎng)是一切生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，既影響動(dòng)物生產(chǎn)潛力和效率，也決定了動(dòng)物健康狀況。公開號(hào):103750073A的中國發(fā)明《一種增強(qiáng)生豬免疫力提高豬肉品質(zhì)的豬飼料及其制備方法》公開了一種增強(qiáng)生豬免疫力提高豬肉品質(zhì)的豬飼料及其制備方法，其主要是由玉米、豆粕、麩皮、大青葉、益母草、苦瓜、豬籠草等按一定重量配比制備而成，本發(fā)明具有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)及清熱解毒，滋腎潤肺的健體功能，按量搭配飼養(yǎng)不僅可增強(qiáng)生豬免疫力，而且還提高了豬肉的品質(zhì)及營養(yǎng)價(jià)值。公開號(hào):103404730A的中國發(fā)明《一種含絲蘭提取物的仔豬飼料配方》公開了一種含絲蘭提取物的仔豬飼料配方；主要由下述重量份的物料混合而成：玉米粉35～65份、高粱粉15～30份、豆粕15～30份、酒糟10～20份、小麥次粉10～20、麥麩5～15份、絲蘭提取物5～20份、食鹽1～8份；該發(fā)明用于仔豬飼養(yǎng)，可增強(qiáng)仔豬免疫力，提高其生長速度。但其配方不夠科學(xué)合理，不能滿足仔豬的營養(yǎng)需求,且該發(fā)明中添加了土霉素。公開號(hào):104945484A的中國發(fā)明《一種抗菌肽及其制備方法與應(yīng)用》公開了一種人工設(shè)計(jì)合成的活性抗菌多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，其分子量為1483.88Da，等電點(diǎn)為10.30。該抗菌肽在仔豬飼料中應(yīng)用，主要用于抑菌、提高斷奶仔豬日增重和采食量、降低料重比、降低斷奶仔豬腹瀉率，以及改善斷奶仔豬腸道功能。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的抗菌肽具有分子量小、人工合成方便、殺菌作用強(qiáng)、細(xì)胞毒性低等優(yōu)點(diǎn)，在仔豬飼料中應(yīng)用能夠顯著改善仔豬腸道健康、提高仔豬的生長性能。公開號(hào):105325695A的中國發(fā)明《一種抗腹瀉中草藥發(fā)酵型乳仔豬飼料的制備方法》公開了一種抗腹瀉中草藥發(fā)酵型乳仔豬飼料的制備方法，屬于飼料和微生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明按比例將山楂、黃芪、陳皮、黨參、車前草、烏梅、金銀花、玉米粉、豆粕與水混合水調(diào)漿制成發(fā)酵培養(yǎng)基，升溫浸泡、滅菌，并降溫到38-40℃時(shí)接入產(chǎn)酶地衣芽孢桿菌、產(chǎn)酶黑曲霉和凝結(jié)乳酸芽孢桿菌，發(fā)酵24-108h后，干燥制成抗腹瀉中草藥發(fā)酵型乳仔豬飼料。該飼料富含抗腹瀉中草藥、小肽和乳酸，具有營養(yǎng)高、易消化、適口性好、抗?fàn)I養(yǎng)因子含量低、促生長性能好等特點(diǎn)。該發(fā)明主要通過發(fā)酵特定組合的中藥來抗仔豬腹瀉，存在起效快，成本較高的缺點(diǎn)。公開號(hào):103719585A的中國發(fā)明《一種仔豬飼料》公開了一種仔豬飼料，主要由下列重量份的原料制成：玉米粉10-18份、豆粕8-15份、魚粉5-10份、貝殼粉1-8份、麩皮10-20份、糖精鈉0.5-2份、類乳劑1-10份、微生物制劑1-5份、微量元素0.1-1份、食鹽0.1-1份。飼料中的魚粉可以滿足仔豬對(duì)動(dòng)物性蛋白的營養(yǎng)需求，貝殼粉可以為仔豬提供充足的鈣源。酵母粉、枯草芽孢桿菌粉和低殼聚糖配合使用，可以調(diào)節(jié)仔豬腸體內(nèi)益生菌菌群，增強(qiáng)仔豬的自身免疫力，減少疾病害的發(fā)生；糖精鈉為仔豬飼料提供充足的甜味，和提供乳味的類乳劑配合使用，為仔豬提供類似母乳的味道，誘導(dǎo)仔豬進(jìn)食。該發(fā)明配方過于簡單，組成不夠合理，營養(yǎng)不均衡，不能滿足仔豬的營養(yǎng)需求。公開號(hào):101999560A的中國發(fā)明《一種低系酸力乳仔豬飼料及其制備方法》公開了一種低系酸力乳仔豬飼料的配制與生產(chǎn)方法，采用玉米、豆粕、發(fā)酵豆粕、乳清粉、維生素和微量元素等作為原料，通過膨化、粉碎后低溫制粒等特殊加工方式制成；本發(fā)明改變了常規(guī)乳仔豬飼料高系酸力的缺點(diǎn)，降低了乳仔豬的低消化率的情況，提高飼料適口性，改善乳仔豬腸道健康，提高乳仔豬生產(chǎn)成績。該發(fā)明成分復(fù)雜，制備不易，營養(yǎng)不均衡，不利于推廣應(yīng)用。上述專利文獻(xiàn)中所述飼料均有不同的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)，而本發(fā)明根據(jù)仔豬無抗日糧營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)、采用抗菌肽等措施替代抗生素，具有氨基酸吸收利用率高，適口性好的優(yōu)點(diǎn)；通過添加益生菌等，確保仔豬腸道健康，增強(qiáng)抗病力，為早出欄、不用藥、提供安全肉品奠定前期基礎(chǔ)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明以仔豬為研究對(duì)象，設(shè)計(jì)抗病營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，通過添加抗菌肽、絲蘭提取物、益生菌等方面來設(shè)計(jì)日糧配方，確保仔豬腸道健康，增強(qiáng)抗病力。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種仔豬無抗生素飼料，由以下重量份數(shù)的原料制成：玉米50-60份，蒸汽魚粉2-4份，豆粕10-16份，膨化大豆1-5份，面粉3-5份，乳清粉3-6，椰子油0.5-1，大豆油0.5-1，抗菌肽0.02-0.03，益生菌1-3，絲蘭提取物0.012份，石粉0.3-0.7份，食鹽0.3-0.5份，磷酸氫鈣0.8-1.2份，氨基酸0.3-0.8份，復(fù)合酶0.03-0.05份，復(fù)合維生素0.3-0.4份，復(fù)合微量元素0.2-0.6份；進(jìn)一步的，所述復(fù)合酶組成為：纖維素酶1，蛋白酶2，α-淀粉酶2；進(jìn)一步的，所述復(fù)合維生素組成為：維生素D2.5-6份、生物素0.8-1.2份、葉酸1-2份；進(jìn)一步的，所述復(fù)合微量元素組成為：酵母硒1-2份、氧化鋅1-2份。所述仔豬無抗生素飼料：凈能2450Kcal/kg，蛋白質(zhì)含量18％。所述仔豬無抗生素飼料：抗病條件下的理想氨基酸比例Lys:(Met+Cys):Thr:Trp:Arg:Val＝100:65:77:22:108:90。所述絲蘭提取物由北京華辰興業(yè)科技有限公司提供。所述仔豬無抗生素飼料于：使用階段為斷奶兩周后——15kg的仔豬。所述益生菌較佳的為保藏編號(hào)CGMCCNo.12789的釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，；較佳的，所述酵母菌由如下方法培養(yǎng)制備：(1)搖瓶培養(yǎng)取tlj2016斜面菌種一環(huán)，接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h得種子液；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；(2)5L發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子液按10％質(zhì)量百分比接種量，接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃,通氣量6L/min,罐壓0.03MPa，500rpm,恒pH6.0條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵至30h時(shí)，一次性添加終濃度為25mmol/L的L-半胱氨酸，總發(fā)酵時(shí)間為50h；發(fā)酵完畢，調(diào)節(jié)pH至6.5，噴霧干燥得酵母菌粉劑；發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0。本發(fā)明同時(shí)提供一種仔豬無抗生素飼料的制備方法，包括如下步驟：按配方，將玉米和豆粕先混合，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，粉碎篩片孔徑1.0mm，然后調(diào)質(zhì)1min，在0.272-0.275Mpa蒸汽壓力與80度條件下對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行熟化，再將熟化后原料與其他原料混合，于65度條件下制粒。有益效果：從仔豬無抗日糧營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)、采用抗菌肽等措施替代抗生素，通過添加益生菌等方面綜合解決以上問題，日增重提高6.17％，日均采食量提高5.38％，腹瀉率降低8.72％。仔豬腸道健康狀態(tài)好，抗病力強(qiáng)，為早出欄、不用藥、提供安全肉品奠定前期基礎(chǔ)。本發(fā)明采用的是無抗配合飼料，玉米進(jìn)行脫皮處理，使用膨化大豆、既保留了谷物的原始香味，又提高了其中的營養(yǎng)物質(zhì)的消化率；沒有添加抗生素，因此，本發(fā)明對(duì)于豬只健康、豬肉安全、回歸自然、綠色消費(fèi)具有重要意義。特別是添加高產(chǎn)谷胱苷肽的保藏菌種tlj2016，谷胱苷肽作為體內(nèi)重要的抗氧化劑和自由基清除劑，如與自由基、重金屬等結(jié)合，從而把機(jī)體內(nèi)有害的毒物轉(zhuǎn)化為無害的物質(zhì)，排泄出體外，對(duì)改善乳豬的身體機(jī)能很有益處；生物素和葉酸促進(jìn)IFN-γ合成，緩解PCV2對(duì)豬淋巴組織的破壞，促進(jìn)免疫應(yīng)答反應(yīng)和PCV2抗體生成，發(fā)病率降低10％。維生素D通過促進(jìn)仔豬輪狀病毒(RV)抗體和腸道黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)生成，調(diào)節(jié)RIG-1信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)，降低RV攻擊下仔豬腸道黏膜炎癥反應(yīng)，顯著降低腹瀉率。色氨酸可促進(jìn)生長豬IGF-1分泌及特異性抗體合成，緩解因接種PRRSV和PRV弱毒苗引起的生長抑制。蘇氨酸通過增強(qiáng)淋巴細(xì)胞功能、促進(jìn)特異和非特異性抗體產(chǎn)生、下調(diào)TLR表達(dá)、減少炎性因子產(chǎn)生以及促進(jìn)蛋白質(zhì)合成等途徑緩解PRV對(duì)仔豬的損傷。精氨酸可下調(diào)仔豬TLR4和TLR5及其信號(hào)途徑關(guān)鍵分子表達(dá)，緩解沙門氏桿菌對(duì)免疫系統(tǒng)的激活。在氧化應(yīng)激狀況下，仔豬硒的代謝和需要量發(fā)生變化，0.2mol/kg的硒添加量不能滿足抗體抗氧化的需要；硒抗氧化應(yīng)激的機(jī)制可能與影響三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)的分泌、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β(1L-1β)和白細(xì)胞介素-6(1L-6)的生成以及NF-kB活性有關(guān)。硒源和硒水平對(duì)仔豬生長性能及免疫功能具有調(diào)節(jié)效應(yīng)，從而確定仔豬獲得最佳免疫保護(hù)效應(yīng)的硒源和硒水平。對(duì)鋅的研究發(fā)現(xiàn)，NRC(1998)推薦的仔豬鋅需要量足以滿足正常條件下仔豬生長和適宜免疫力的需要，但在免疫應(yīng)激條件下需要大大提高鋅的添加量。抗菌肽是廣泛存在于細(xì)菌、植物、兩棲動(dòng)物、軟體動(dòng)物、魚類、鳥類和哺乳動(dòng)物體內(nèi)的一類小分子多肽。絲蘭提取物成分中能夠消除表面張力，改善腸道pH，提高小腸黏膜細(xì)胞通透性，可以提高對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的乳化能力，尤其是脂肪和脂溶性物質(zhì)的吸收率，從而提高飼料利用率和畜禽生產(chǎn)性能。益生菌不僅能通過改善腸道微生態(tài)平衡促進(jìn)機(jī)體健康，而且能夠減少養(yǎng)殖環(huán)境及糞便中氨氣、硫化氫、有機(jī)磷等有害物質(zhì)的含量，減少畜牧業(yè)對(duì)環(huán)境造成的污染，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，具有明顯的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。具體實(shí)施方式所述釀酒酵母菌株具體為釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，該菌株已于2016年7月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。所述釀酒酵母tlj2016的最適生長pH為6.0-6.5，最適生長溫度為28-35℃；所述釀酒酵母tlj2016是從一株寧夏果園中分離得到的釀酒酵母出發(fā)菌株經(jīng)以下步驟得到：原始出發(fā)菌種→試管活化→硫酸二乙酯(DES)誘變→高滲平板篩選→亞硝基胍(NTG)誘變篩選→高滲平板初篩→搖瓶篩選→發(fā)酵復(fù)篩(產(chǎn)谷胱苷肽GSH能力)→傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)。經(jīng)過誘變后獲得的菌株tlj2016，其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面在高濃度葡萄糖培養(yǎng)下能夠提高細(xì)胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高將有利于GSH在胞內(nèi)大量合成，從而提高菌株大規(guī)模生產(chǎn)GSH的能力。本發(fā)明所采用的釀酒酵母對(duì)葡萄糖的耐受能力達(dá)到300g/L，利于其在高濃度葡萄糖條件下生產(chǎn)GSH；在5L發(fā)酵罐中發(fā)酵生產(chǎn)GSH終濃度達(dá)到3308mg/L；耐受L-半胱氨酸的能力遠(yuǎn)高于出發(fā)菌株，在5mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能緩慢生長，在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成；耐鹽能力達(dá)到18％，有利于擴(kuò)展其應(yīng)用領(lǐng)域。1.DES誘變選育1)在超凈臺(tái)上取試管斜面上的出發(fā)菌株1一環(huán)，接入裝有50mL麥芽汁培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培養(yǎng)10h左右，使菌體處于對(duì)數(shù)生長前期。2)取5mL菌液，5000rpm離心10min收集菌體，用生理鹽水洗滌2次。3)用pH7.0磷酸緩沖液稀釋成107個(gè)/mL菌懸液。4)取32mLpH7.0的磷酸鉀緩沖液、8mL菌懸液、0.4mLDES在預(yù)先放入轉(zhuǎn)子的150mL三角瓶中充分混合，使DES最終濃度為1％(v/v)。5)在30℃搖床中150rpm反應(yīng)30min，取1mL混合液，加入0.5mL25％Na2S2O3溶液中止反應(yīng)。6)稀釋涂布于含150g/LKCl的麥芽汁培養(yǎng)基平皿中，在30℃培養(yǎng)2-3天后挑取菌落最大的菌株1。2.亞硝基胍誘變1)在超凈臺(tái)上取試管斜面上的釀酒酵母菌菌株1一環(huán)，接入裝有50mL麥芽汁培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培養(yǎng)10h左右，使菌體處于對(duì)數(shù)生長前期。2)取5mL菌液5000rpm離心10min收集菌體，用生理鹽水洗滌2次。3)用pH6.0磷酸緩沖液稀釋成107個(gè)/mL菌懸液。4)取10mL菌懸液轉(zhuǎn)移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成終濃度為10mg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。5)在30℃下200rpm振蕩反應(yīng)30min，5000rpm離心10min收集菌體，用無菌生理鹽水洗滌數(shù)次，中止反應(yīng)。6)適當(dāng)稀釋涂布，取最后稀釋度的菌液0.2mL，涂布于含200g/LKCl的麥芽汁培養(yǎng)基平皿中。在30℃培養(yǎng)2-3天后挑取菌落20支。3.搖瓶初篩1)在超凈臺(tái)上分別取上述20支釀酒酵母菌各一環(huán)，分別接入裝有50mL麥芽汁培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培養(yǎng)12h左右，使菌體處于對(duì)數(shù)生長中期。2)取5mL菌液，接入裝有50mL高滲麥芽汁培養(yǎng)基(葡萄糖濃度為300g/L)中的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培養(yǎng)3-4天，每天檢測(cè)葡萄糖濃度和乙醇濃度變化。發(fā)酵結(jié)束后，比較20株菌種的葡萄糖和乙醇消耗速率、最終殘?zhí)菨舛群鸵掖紳舛?、葡萄糖?duì)乙醇的轉(zhuǎn)化率以及雜酸含量。3)選擇葡萄糖消耗速率快、最終殘?zhí)菨舛鹊秃鸵掖紳舛雀叩?株菌命名為Y-1，Y-2，Y-3，Y-4，Y-5。4.發(fā)酵復(fù)篩將步驟3中所得的5株菌Y-1，Y-2，Y-3，Y-4，Y-5以及出發(fā)菌株，分別按照10％質(zhì)量分?jǐn)?shù)接種量，在裝有30mL液體培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h，取發(fā)酵液測(cè)定GSH濃度；液體培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1；GSH測(cè)定方法：發(fā)酵液離心洗滌后得新鮮酵母，30℃下，40％乙醇處理3h，離心取上清液做GSH測(cè)定樣品；采用四氧嘧啶法進(jìn)行GSH測(cè)定：其原理為GSH上的-SH與四氧嘧啶反應(yīng)，生成的物質(zhì)在305nm處有吸收峰，且與谷胱甘肽濃度成線性關(guān)系，故可用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量測(cè)定GSH含量。表1：GSH檢測(cè)結(jié)果菌株出發(fā)菌株Y-1Y-2Y-3Y-4Y-5GSH濃度(mg/L)127.9195.7172.3263.2216.5185.2由表1結(jié)果可知，菌株Y-3具有最高的GSH發(fā)酵能力，因此確定Y-3為最終的生產(chǎn)菌株，并將其命名為tlj2016。5.遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)將tlj2016菌在斜面上連續(xù)十次傳代，并用搖瓶復(fù)篩的方法檢測(cè)每次傳代后的發(fā)酵情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在斜面上連續(xù)十次傳代，該菌種性狀沒有明顯變化，各項(xiàng)性能指標(biāo)都正常，說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強(qiáng)。釀酒酵母tlj2016高糖條件下發(fā)酵產(chǎn)GSH能力實(shí)驗(yàn)(1)搖瓶培養(yǎng)取tlj2016斜面菌種一環(huán)，接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h得種子液；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；(2)5L發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子液按10％質(zhì)量分?jǐn)?shù)接種量，接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃,通氣量6L/min,罐壓0.03MPa，500rpm,恒pH6.0條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵至30h時(shí)，一次性添加終濃度為25mmol/L的L-半胱氨酸，總發(fā)酵時(shí)間為50h；發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0；發(fā)酵結(jié)束后，測(cè)定發(fā)酵液中GSH的含量為3308mg/L。釀酒酵母tlj2016L-半胱氨酸耐受力實(shí)驗(yàn)將出發(fā)菌株以及tlj2016斜面菌種各一環(huán)，分別接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)至12h時(shí)，向搖瓶中加入不同終濃度的L-半胱氨酸，再培養(yǎng)10h，測(cè)定細(xì)胞干重，結(jié)果表2、3；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；表2：出發(fā)菌株L-半胱氨酸耐受力表3tlj2016L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸濃度mmol/L0510152040tlj2016干重g/L25.728.523.621.220.618.7GSH濃度(mg/L)73.298.3113.5121.7127.5135.8從表2的結(jié)果可以看出，對(duì)于出發(fā)菌株，培養(yǎng)基中添加L-半胱氨酸，細(xì)胞停止生長，并且開始自溶，導(dǎo)致GSH增長率隨著L-半胱氨酸濃度的升高而降低；從表3的結(jié)果可以看出，低濃度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能夠緩慢生長，隨著L-半胱氨酸濃度的提高，tlj2016菌株的細(xì)胞干重緩慢下降，而GSH濃度持續(xù)增長，這一結(jié)果將有利于GSH生產(chǎn)過程中通過添加前體氨基酸-L-半胱氨酸促進(jìn)GSH的生產(chǎn)。釀酒酵母tlj2016耐鹽能力實(shí)驗(yàn)取tlj2016菌液1mL接種菌種于含有不同NaCl濃度的(含量梯度為0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mLYPD液體培養(yǎng)基(pH＝6.5)，置于30℃下分別培養(yǎng)24h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。各取1ml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋液于YPD固體平板中涂布，于30℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)36小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄計(jì)算平板上的菌數(shù)個(gè)數(shù)。結(jié)果見表4，可知該菌的耐鹽濃度為18％，說明tlj2016不僅可以在常規(guī)環(huán)境中生存，在高鹽條件下依然具有活力，可應(yīng)用于醬油、腌制品等高鹽食品加工過程中耗糖產(chǎn)谷胱甘肽。表4耐鹽能力檢測(cè)(×107cfu/ml)實(shí)施例1一種仔豬無抗生素飼料，由以下重量份數(shù)的原料制成：玉米55份，蒸汽魚粉3份，豆粕13份，膨化大豆3份，面粉4份，乳清粉4，椰子油0.5，大豆油1，抗菌肽0.02，益生菌2份，絲蘭提取物0.012份，石粉0.5份，食鹽0.4份，磷酸氫鈣1.0份，氨基酸0.6份，復(fù)合酶0.04份，復(fù)合維生素0.35份，復(fù)合微量元素0.4份；所述仔豬無抗生素飼料：凈能2450Kcal/kg，蛋白質(zhì)含量18％。所述仔豬無抗生素飼料：抗病條件下的理想氨基酸比例Lys:(Met+Cys):Thr:Trp:Arg:Val＝100:65:77:22:108:90。所述復(fù)合酶組成為：纖維素酶1，蛋白酶2，α-淀粉酶2；所述復(fù)合維生素組成為：維生素D4份、生物素1份、葉酸1份；所述復(fù)合微量元素組成為：酵母硒2份、氧化鋅1份。所述絲蘭提取物由北京華辰興業(yè)科技有限公司提供。所述仔豬無抗生素飼料于：使用階段為斷奶兩周后——15kg的仔豬。所述益生菌為酵母菌；所述酵母菌為保藏菌種釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789；所述酵母菌由如下方法培養(yǎng)制備：(1)搖瓶培養(yǎng)取tlj2016斜面菌種一環(huán)，接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h得種子液；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；(2)5L發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子液按10％接種量，接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃,通氣量6L/min,罐壓0.03MPa，500rpm,恒pH6.0條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵至30h時(shí)，一次性添加終濃度為25mmol/L的L-半胱氨酸，總發(fā)酵時(shí)間為50h；發(fā)酵完畢，調(diào)節(jié)pH至6.5，噴霧干燥得酵母菌粉劑；發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0。本發(fā)明同時(shí)提供一種仔豬無抗生素飼料的制備方法，包括如下步驟：按配方，將玉米和豆粕先混合，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，粉碎篩片孔徑1.0mm，然后調(diào)質(zhì)1min，在0.272-0.275Mpa蒸汽壓力與80度條件下對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行熟化，再將熟化后原料與其他原料混合，于65度條件下制粒。實(shí)施例2一種仔豬無抗生素飼料，由以下重量份數(shù)的原料制成：玉米50份，蒸汽魚粉4份，豆粕16份，膨化大豆1份，面粉5份，乳清粉3，椰子油1，大豆油0.5，抗菌肽0.03，益生菌1，絲蘭提取物0.012份，石粉0.7份，食鹽0.3份，磷酸氫鈣0.8份，氨基酸0.3份，復(fù)合酶0.05份，復(fù)合維生素0.4份，復(fù)合微量元素0.2份；所述仔豬無抗生素飼料：凈能2450Kcal/kg，蛋白質(zhì)含量18％。所述仔豬無抗生素飼料：抗病條件下的理想氨基酸比例Lys:(Met+Cys):Thr:Trp:Arg:Val＝100:65:77:22:108:90。所述復(fù)合酶組成為：纖維素酶1，蛋白酶2，α-淀粉酶2；所述復(fù)合維生素組成為：維生素D6份、生物素0.8份、葉酸1份；所述復(fù)合微量元素組成為酵母硒1份、氧化鋅2份。所述絲蘭提取物由北京華辰興業(yè)科技有限公司提供。所述仔豬無抗生素飼料于：使用階段為斷奶兩周后——15kg的仔豬。所述益生菌為保藏菌種釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789；所述酵母菌由本領(lǐng)域常規(guī)方法培養(yǎng)制備。實(shí)施例3一種仔豬無抗生素飼料，由以下重量份數(shù)的原料制成：玉米60份，蒸汽魚粉2份，豆粕10份，膨化大豆5份，面粉5份，乳清粉6，椰子油0.5，大豆油0.5，抗菌肽0.03，益生菌3，絲蘭提取物0.012份，石粉0.3份，食鹽0.5份，磷酸氫鈣1.2份，氨基酸0.8份，復(fù)合酶0.03份，復(fù)合維生素0.4份，復(fù)合微量元素0.6份；所述仔豬無抗生素飼料：凈能2450Kcal/kg，蛋白質(zhì)含量18％。所述仔豬無抗生素飼料：抗病條件下的理想氨基酸比例Lys:(Met+Cys):Thr:Trp:Arg:Val＝100:65:77:22:108:90。所述復(fù)合維生素組成為：維生素D2.5份、生物素1.2份、葉酸2份；所述復(fù)合微量元素組成為：酵母硒2份、氧化鋅1份。所述絲蘭提取物由北京華辰興業(yè)科技有限公司提供。所述仔豬無抗生素飼料于：使用階段為斷奶兩周后——15kg的仔豬。所述益生菌為保藏菌種釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789；實(shí)施例4試驗(yàn)例：采用實(shí)施例1-3制備的仔豬無抗生素飼料與市售同類飼料做以下驗(yàn)證1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)時(shí)間2016年9月-11月完成。1.2試驗(yàn)地點(diǎn)動(dòng)物試驗(yàn)分別在遼寧省凌源禾豐種豬場(chǎng)和遼寧省鳳城種豬場(chǎng)實(shí)施。1.3試驗(yàn)日糧試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組和試驗(yàn)組共4個(gè)處理，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)組日糧配方為本發(fā)明，對(duì)照組為市售常見仔豬配合飼料。2結(jié)果與分析2.1凌源禾豐種豬場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照組實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3初始體重(kg)10.5210.5210.5210.52日增重(g)400435438442日均采食量(g)647690685695料重比1.621.591.561.57腹瀉率(％)1.751.591.501.55結(jié)果表明：試驗(yàn)組日增重提高9.58％，日均采食量提高6.65％，腹瀉率降低11.62％。2.2鳳城種豬場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照組實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3初始體重(kg)10.8110.8110.8110.81日增重(g)405430433428日均采食量(g)650685690685料重比1.601.591.591.60腹瀉率(％)1.951.781.751.76結(jié)果表明：試驗(yàn)組日增重提高6.26％，日均采食量提高5.64％，腹瀉率降低9.57％。當(dāng)前第1頁1 2 3