本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高河豚體內(nèi)河豚毒素含量的養(yǎng)殖飼料。

背景技術(shù)：

河豚魚(yú)營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，有長(zhǎng)江第一鮮之稱，河豚魚(yú)的食用在中國(guó)、日本等亞洲國(guó)家有著悠久的歷史，并逐漸形成特有的河豚飲食文化，河豚除了肉質(zhì)鮮美為人所愛(ài)之外，其體內(nèi)含有的河豚毒素也為眾人所知，河鲀毒素是氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一，主要集中在卵巢、肝臟、血液中，其次是眼睛、鰓和皮膚中，河豚的卵巢和肝臟為河豚內(nèi)臟中第二大劇毒臟器，河豚毒素具有鎮(zhèn)痛、降壓、抗心律失常、局部麻醉、戒毒及抑制腫瘤的功效，而且能特異性阻滯鈉離子通道，在生理學(xué)研究中，已經(jīng)成為機(jī)制研究的工具藥，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和醫(yī)療價(jià)值。

目前人工養(yǎng)殖河豚大多供于食用，河豚飼料一般是從提高河豚可食用部分品質(zhì)、河豚養(yǎng)殖成活率、降低河豚體內(nèi)毒素積累方面入手。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種提高河豚體內(nèi)河豚毒素含量的養(yǎng)殖飼料，以提高河豚體內(nèi)河豚毒素積累為目的，得到的河豚中河豚毒素含量較高，及其適用醫(yī)學(xué)、提取、試驗(yàn)、制藥領(lǐng)域使用。

本發(fā)明一種提高河豚體內(nèi)河豚毒素含量的養(yǎng)殖飼料，該河豚養(yǎng)殖飼料在制作時(shí)，

向質(zhì)量濃度為3-5%鹽水中加入鹽水重量0.031-0.033倍的硫胺、0.005-0.008倍的過(guò)磷酸鈣、0.023-0.025倍的啤酒酵母、1-2倍的麥芽糖混合均勻，調(diào)節(jié)PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.8-2%，接種新鮮活化后的小球藻藻種，接種量為30-40%，在溫度為20-23℃、光強(qiáng)度為8000-9000LX的環(huán)境下，培養(yǎng)30-35天，獲取小球藻；

將小球藻冷凍干燥至含水量低于8%，與魚(yú)粉、紅血蟲(chóng)、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養(yǎng)殖飼料。

該河豚飼料用于提高河豚體內(nèi)河豚毒素的積累量。

鲀毒素是寄生的產(chǎn)毒菌（海洋中的弧菌），在生長(zhǎng)過(guò)程中所分泌并積累的一種毒素，其寄生在小球藻和小海螺上，由于河鲀?cè)谏L(zhǎng)過(guò)程中攝食大量帶巨毒的小球藻和小海螺，這些毒素經(jīng)食物鏈作用傳遞到河鲀體內(nèi)。

本發(fā)明河豚飼料在制作時(shí)，依舊在小球藻培育過(guò)程中接種溶藻弧菌使溶藻弧菌寄生在小球藻上實(shí)現(xiàn)分泌和積累毒素，在常規(guī)小球藻培養(yǎng)液中，加入啤酒酵母和麥芽糖，能夠顯著提高溶藻弧菌的活性，從而提高溶藻弧菌總分泌和毒素積累量，得到的小球藻添加于魚(yú)粉、紅血蟲(chóng)、豆粕中作為河豚養(yǎng)殖飼料，能夠顯著提高河豚體內(nèi)河豚毒素的含量，提高河豚醫(yī)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，

實(shí)施例1、

向質(zhì)量濃度為3%鹽水中加入鹽水重量0.031倍的硫胺、0.005倍的過(guò)磷酸鈣、0.023倍的啤酒酵母、1倍的麥芽糖混合均勻，調(diào)節(jié)PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.8%，接種新鮮活化后的小球藻藻種，接種量為30%，在溫度為20℃、光強(qiáng)度為8000LX的環(huán)境下，培養(yǎng)30天，獲取小球藻；

將小球藻冷凍干燥至含水量低于8%，與魚(yú)粉、紅血蟲(chóng)、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養(yǎng)殖飼料。

將得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，

取隨機(jī)撈取養(yǎng)殖塘內(nèi)河豚，每畝撈取80只，每只取河豚魚(yú)肝組織，剪碎并研磨成糊狀，精確稱取5g于離心管內(nèi)，加15mL1%的乙酸，于沸水浴中加熱并不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫后，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘?jiān)^續(xù)用8mL的0.1%乙酸反復(fù)攪拌后于沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合并，加入等體積乙醚反復(fù)洗脫2次，后經(jīng)減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置于25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用于檢測(cè)，此時(shí)提取液1mL相當(dāng)于0.2g樣品。

用ELISA法檢測(cè)河豚魚(yú)肝組織樣品中河豚毒素的含量：

當(dāng)樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時(shí)，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標(biāo)板上測(cè)得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數(shù)。

檢測(cè)得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：48.66（μg/g）。

對(duì)照組在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，檢測(cè)河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.53（μg/g）。

實(shí)施例2、

向質(zhì)量濃度為4%鹽水中加入鹽水重量0.032倍的硫胺、0.0065倍的過(guò)磷酸鈣、0.024倍的啤酒酵母、1.5倍的麥芽糖混合均勻，調(diào)節(jié)PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.9%，接種新鮮活化后的小球藻藻種，接種量為35%，在溫度為22℃、光強(qiáng)度為8500LX的環(huán)境下，培養(yǎng)32天，獲取小球藻；

將小球藻冷凍干燥至含水量低于8%，與魚(yú)粉、紅血蟲(chóng)、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養(yǎng)殖飼料。

將得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，

處理結(jié)束后，取隨機(jī)撈取塘內(nèi)河豚，每畝撈取80只，每只取河豚魚(yú)肝組織，剪碎并研磨成糊狀，精確稱取5g于離心管內(nèi)，加15mL1%的乙酸，于沸水浴中加熱并不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫后，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘?jiān)^續(xù)用8mL的0.1%乙酸反復(fù)攪拌后于沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合并，加入等體積乙醚反復(fù)洗脫2次，后經(jīng)減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置于25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用于檢測(cè)，此時(shí)提取液1mL相當(dāng)于0.2g樣品。

用ELISA法檢測(cè)河豚魚(yú)肝組織樣品中河豚毒素的含量：

當(dāng)樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時(shí)，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標(biāo)板上測(cè)得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數(shù)。

檢測(cè)得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：54.35μg/g）。

對(duì)照組在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，檢測(cè)河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.538（μg/g）。

實(shí)施例3、

向質(zhì)量濃度為5%鹽水中加入鹽水重量0.033倍的硫胺、0.008倍的過(guò)磷酸鈣、0.025倍的啤酒酵母、2倍的麥芽糖混合均勻，調(diào)節(jié)PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為2%，接種新鮮活化后的小球藻藻種，接種量為40%，在溫度為23℃、光強(qiáng)度為9000LX的環(huán)境下，培養(yǎng)35天，獲取小球藻；

將小球藻冷凍干燥至含水量低于8%，與魚(yú)粉、紅血蟲(chóng)、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養(yǎng)殖飼料。

將得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，

處理結(jié)束后，取隨機(jī)撈取塘內(nèi)河豚，每畝撈取80只，每只取河豚魚(yú)肝組織，剪碎并研磨成糊狀，精確稱取5g于離心管內(nèi)，加15mL1%的乙酸，于沸水浴中加熱并不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫后，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘?jiān)^續(xù)用8mL的0.1%乙酸反復(fù)攪拌后于沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合并，加入等體積乙醚反復(fù)洗脫2次，后經(jīng)減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置于25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用于檢測(cè)，此時(shí)提取液1mL相當(dāng)于0.2g樣品。

用ELISA法檢測(cè)河豚魚(yú)肝組織樣品中河豚毒素的含量：

當(dāng)樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時(shí)，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標(biāo)板上測(cè)得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數(shù)。

檢測(cè)得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：58.02μg/g）。

對(duì)照組在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養(yǎng)殖飼料作為河豚日常飼料飼喂河豚，連續(xù)飼喂1個(gè)月，檢測(cè)河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.54（μg/g）。