一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其主要步驟包括：1、家蠶飼喂至3齡起蠶，單體放置；2、用涂抹微孢子蟲病原液的桑葉圓片接種家蠶；3、進(jìn)行分組分區(qū)；4、12天后進(jìn)行磨蠶鏡檢；5、統(tǒng)計(jì)感染率，篩選抗性種質(zhì)。該家蠶微粒子病抗性評(píng)價(jià)方法旨在解決現(xiàn)有方法存在的個(gè)體間病原攝取量差異較大、篩查結(jié)果數(shù)據(jù)存在誤差的問題，為家蠶抗性育種提供一種穩(wěn)定可靠的家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法。
【專利說明】一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于蠶業(yè)養(yǎng)殖育種領(lǐng)域，具體涉及一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法。

【背景技術(shù)】
[0002]家蠶微粒子病是由家蠶微粒子原蟲(Nosema bombycis)引起的一種傳染性蠶病。家蠶微孢子蟲不僅可以通過食下感染家蠶，還能夠通過胚種從母代感染到子代，進(jìn)而入侵家蠶各組織，最終導(dǎo)致家蠶死亡。由于迄今為止尚無有效的治療方法，該病一旦發(fā)生則對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)尤其是蠶種生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。培育抗病品種可能成為解決家蠶微粒子疫病的最為有效的途徑。
[0003]隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，分子標(biāo)記和轉(zhuǎn)基因技術(shù)在抗病品種選育得到廣泛應(yīng)用，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)、誘變或雜交創(chuàng)新育種材料是提高抗性品種選育的快速有效手段。
[0004]開展蠶微粒子病抗性品種選育，首先需要設(shè)計(jì)一種可靠穩(wěn)定的篩查方法，確保調(diào)查數(shù)據(jù)的真實(shí)性、結(jié)果可重復(fù)。目前育種單位普遍采用將各個(gè)品種家蠶分開進(jìn)行群體人工感染來檢測其對(duì)于蠶微粒子病的抗性，然而該方法存在著一定的不足，主要在于群體中每個(gè)個(gè)體的病原吸收量與其桑葉的攝取量存在相關(guān)性，而個(gè)體間的桑葉攝取量存在差異，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)存在較大誤差，同時(shí)群體飼養(yǎng)容易造成個(gè)體間蠶微粒子的交叉感染，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，而且該方法選用的試驗(yàn)用蠶并沒有限定其蠶齡期，蠶齡期大的培育時(shí)間長，導(dǎo)致篩查周期較長，不利于快速育種篩查。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，以解決現(xiàn)有的家蠶微粒子抗性篩查方法存在的個(gè)體間病原攝取量差異較大、育種結(jié)果數(shù)據(jù)存在誤差的問題，提供了一種嚴(yán)格控制單體病原攝入量的家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，該方法能夠明顯減小同一品種家蠶單體間的相互影響，使得篩查結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，縮短抗蠶微粒子病蠶種育種篩查所用周期。
[0006]一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其主要步驟包括:
步驟一:以家蠶品種“大造”作為對(duì)照，選取幾種試驗(yàn)用蠶，飼養(yǎng)至3齡起蠶，選取大小均一的起蠶放入28孔昆蟲飼育盒中，每頭蠶單孔放置；
步驟二:用切桑工具準(zhǔn)備直徑為1.0 cm的桑葉圓片，使用移液槍吸取3-7 μ I家蠶微孢子蟲病原液涂抹于桑葉表面，所述家蠶微孢子蟲病原液的濃度為15-1O7個(gè)/mL,晾干后放入飼育盒，每頭一片；
步驟三:4h之后，選擇吃完桑葉的蠶作為進(jìn)一步試驗(yàn)用蠶，每個(gè)品系分3組，每組分3個(gè)重復(fù)區(qū)，每區(qū)50頭，繼續(xù)進(jìn)行單體飼養(yǎng)；
步驟四:12天后，進(jìn)行磨蠶鏡檢，調(diào)查每個(gè)品系的感染頭數(shù)；
步驟五:記錄各組感染率,通過家蠶的感染率了解各種質(zhì)對(duì)于家蠶微粒子病的抗性，以此篩選出抗性優(yōu)良的種質(zhì)。
[0007]作為一種優(yōu)選方式，步驟一中，選用3齡眠起后8_12h的起蠶。
[0008]作為一種優(yōu)選方式，步驟二中，選擇桑葉切片時(shí)盡量遠(yuǎn)離主葉脈，葉面無缺口和孔洞。
[0009]作為一種優(yōu)選方式，步驟二中，將蠶微粒子病原液涂抹于桑葉上時(shí)，應(yīng)將3-7 μ I蠶微粒子病原液用移液槍滴于桑葉的背面，并用玻璃棒涂抹開來。
[0010]作為一種優(yōu)選方式，步驟四中，試驗(yàn)用蠶若在12天內(nèi)(進(jìn)行磨蠶鏡檢前)發(fā)生死亡，通過鏡檢確定其致病菌。
[0011]本家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法通過將每個(gè)品種的家蠶進(jìn)行單體飼養(yǎng)，其具體操作方法為嚴(yán)格控制每頭試驗(yàn)用蠶的蠶微粒子感染桑葉的食用量，保證各個(gè)蠶齡期試驗(yàn)用蠶的初始蠶微粒子病原的攝入量一致，避免出現(xiàn)個(gè)體間因食桑量差距所產(chǎn)生的育種結(jié)果的誤差，同時(shí)將每頭試驗(yàn)用蠶進(jìn)行單體飼養(yǎng)，防止試驗(yàn)用蠶之間長時(shí)間接觸發(fā)生交叉感染的概率，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，以更加有效的方式在不同品種的家蠶中挑選出對(duì)蠶微粒子病抗性較高的蠶種，提高育種的可重復(fù)性和可信度。
[0012]本篩查方法根據(jù)3齡蠶的食量對(duì)其蠶微粒子感染桑葉的食用量也進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整，以蠶能夠在4h內(nèi)吃完為準(zhǔn)。選用3齡蠶作為本方法的實(shí)驗(yàn)用蠶，主要是因?yàn)樵撔Q齡期的家蠶已經(jīng)具備一定體型，易于操作，且培養(yǎng)時(shí)間較短，可以縮短篩查周期。2齡蠶體型較小，會(huì)加大操作難度，進(jìn)行病原感染桑葉的攝入時(shí)可不好控制桑葉量，而選用4、5齡蠶的話則會(huì)延長實(shí)驗(yàn)用蠶的飼養(yǎng)時(shí)間，從而延長了家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查所需的周期，所以3齡蠶為本篩查方法的最佳操作蠶齡期。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0014]圖1為實(shí)施例1的感染率及其數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差結(jié)果圖；
圖2為實(shí)施例2的感染率及其數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明公開了一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，該方法能夠明顯減小同一品種家蠶單體間的相互影響，使得育種結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，縮短抗蠶微粒子病蠶種育種抗性篩查所用周期。
[0016]下面將對(duì)本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0017]實(shí)施例1:
本實(shí)施例的具體步驟為:
步驟一:選取高白、防1、研7幾種試驗(yàn)用蠶,飼養(yǎng)至3齡起蠶,選取大小均一的起蠶放Λ 28孔昆蟲飼育盒中，每頭蠶單孔放置；
步驟二:用切桑工具準(zhǔn)備直徑為1.0 cm的桑葉圓片，使用移液槍吸取3-7 μ I家蠶微孢子蟲病原液涂抹于桑葉表面，所述家蠶微孢子蟲病原液的濃度為16個(gè)/mL,晾干后放入飼育盒，每頭一片；
步驟三:4h之后，選擇吃完桑葉的蠶作為進(jìn)一步試驗(yàn)用蠶，每個(gè)品系分3組，每組分3個(gè)重復(fù)區(qū)，每區(qū)50頭，繼續(xù)進(jìn)行單體飼養(yǎng)；
步驟四:12天后，進(jìn)行磨蠶鏡檢，調(diào)查每個(gè)品系的感染頭數(shù)；
步驟五:記錄各組感染率,通過家蠶的感染率了解各種質(zhì)對(duì)于家蠶微粒子病的抗性，以此篩選出抗性優(yōu)良的種質(zhì)。
[0018]實(shí)施例2:
本實(shí)施例的具體步驟為:
步驟一:選取高白、防1、研7幾種試驗(yàn)用蠶，飼養(yǎng)至3齡起蠶，選取大小均一的起蠶根據(jù)不同品系放入不同昆蟲飼育盒中，進(jìn)行群體飼養(yǎng)；
步驟二:用切桑工具準(zhǔn)備直徑為1.0 cm的桑葉圓片，使用移液槍吸取3-7 μ I家蠶微孢子蟲病原液涂抹于桑葉表面，所述家蠶微孢子蟲病原液的濃度為16個(gè)/mL，晾干后以每頭一片的量放入飼育盒；
步驟三:4h之后，將每個(gè)品系分3組，每組分3個(gè)重復(fù)區(qū)，每區(qū)50頭，每50頭進(jìn)行群體飼養(yǎng);
步驟四:12天后，進(jìn)行磨蠶鏡檢，調(diào)查每個(gè)品系的感染頭數(shù)；
步驟五:記錄各組感染率,通過家蠶的感染率了解各種質(zhì)對(duì)于家蠶微粒子病的抗性，以此篩選出抗性優(yōu)良的種質(zhì)。
[0019]實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
[0020]通過將圖1與圖2進(jìn)行對(duì)比可以看出，進(jìn)行群體飼養(yǎng)的篩查方式(實(shí)施例2)在感染率上普遍低于單體飼養(yǎng)(實(shí)施例1)，而且群體飼養(yǎng)的感染率在標(biāo)準(zhǔn)差方面也明顯要大于單體飼養(yǎng)的感染率，證明進(jìn)行群體飼養(yǎng)會(huì)影響到某些個(gè)體蠶微粒子病原的攝入量，導(dǎo)致病原攝入量不均勻，各區(qū)數(shù)據(jù)浮動(dòng)區(qū)間較大，數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性不高，而采用本發(fā)明公開的抗蠶微粒子病蠶種的選育方法可以降低各區(qū)間感染率的標(biāo)準(zhǔn)差，更好的區(qū)分不同種類家蠶對(duì)于蠶微粒子病的抗性，為篩選出高蠶微粒子抗性的家蠶品種提供了更加準(zhǔn)確可靠地實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0021]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其特征在于，其主要步驟包括: 步驟一:以家蠶品種“大造”作為對(duì)照，選取幾種試驗(yàn)用蠶，飼養(yǎng)至3齡起蠶，選取大小均一的起蠶放入28孔昆蟲飼育盒中，每頭蠶單孔放置； 步驟二:用切桑工具準(zhǔn)備直徑為1.0挪的桑葉圓片，使用移液槍吸取3-7^ 1家蠶微孢子蟲病原液涂抹于桑葉表面，所述家蠶微孢子蟲病原液的濃度為105-107個(gè)/1111，晾干后放入飼育盒，每頭一片； 步驟三:處之后，選擇吃完桑葉的蠶作為進(jìn)一步試驗(yàn)用蠶，每個(gè)品系分3組，每組分3個(gè)重復(fù)區(qū)，每區(qū)50頭，繼續(xù)進(jìn)行單體飼養(yǎng)； 步驟四:12天后，進(jìn)行磨蠶鏡檢，調(diào)查每個(gè)品系的感染頭數(shù)； 步驟五:記錄各組感染率，通過家蠶的感染率了解各種質(zhì)對(duì)于家蠶微粒子病的抗性，以此篩選出抗性優(yōu)良的種質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其特征在于，步驟一中，選用3齡眠起后8-1211的起蠶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其特征在于，步驟二中，選擇桑葉切片時(shí)盡量遠(yuǎn)離主葉脈，葉面無缺口和孔洞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其特征在于，步驟二中，將家蠶微孢子蟲病原液涂抹于桑葉上時(shí)，應(yīng)將3-7 9 1病原液用移液槍滴于桑葉的背面，并用玻璃棒涂抹開來。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種家蠶微粒子病抗性種質(zhì)的快速篩查方法，其特征在于，步驟四中，若試驗(yàn)用蠶在12天內(nèi)(進(jìn)行磨蠶鏡檢前)發(fā)生死亡，通過鏡檢確定其致病菌。
【文檔編號(hào)】C12R1/90GK104404125SQ201410795167
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】楊瓊, 邢東旭, 李麗, 羅國慶, 肖陽, 李慶榮, 葉明強(qiáng) 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所