一種icsi操作皿制作方法
【專利摘要】一種ICSI操作皿制作方法，步驟和條件如下：用吸管吸取PVP溶液，在ICSI皿上方做兩個10μl圓形微滴正下方做長寬各為2.5 cm、0.5cm的條形PVP微滴；吸取含有精子精子的培養(yǎng)基0.1ml左右，在PVP條形微滴一側做長寬各為2.0cm、0.5cm左右的條形微滴；吸取緩沖培養(yǎng)基在PVP條形微滴另一側做3-5個10μl圓形微滴內(nèi)放入卵子；吸取緩沖培養(yǎng)基在PVP條形微滴正下方做1個10μl圓形微滴；用顯微穿刺針從含有精子的培養(yǎng)基條形微滴內(nèi)吸取1個精子，放入PVP條形微滴內(nèi)，制動精子；用顯微固定針固定住卵子，使其極體處于6點或12點位置；帶有精子的顯微穿刺針從3點位置將精子注射至卵子內(nèi)。
【專利說明】一種1031操作皿制作方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種能在短時間內(nèi)找并吸取精子的方法，具體涉及一種1(^1操作皿的制作方法。

【背景技術】
[0002]單精子卵胞漿內(nèi)注射技術(1(:31)使得無數(shù)嚴重少精癥、梗阻性無精癥患者擁有了自己的后代，1081操作過程必須在1(:31操作皿上完成，傳統(tǒng)1(^31操作皿由1(:31皿、?V？圓形微滴、？卩？條形微滴和緩沖培養(yǎng)基微滴組成，過程是將含有精子的培養(yǎng)基吸取1.09 1左右加到條形微滴中制動后，完成1(^31操作，但是遇到一些洗滌后精子密度極少的情況，使用此方法很難在短時間內(nèi)找到精子，使1(^1操作時間大大延長，卵子長時間暴露在培養(yǎng)箱外部，不能保持恒定的溫度、濕度和￠:02濃度，難免會損傷卵子的超微結構，影響其受精和發(fā)育潛能，如果加入培養(yǎng)基的量過大，則精子總數(shù)增加，相對容易找到精子，但是會導致精子在？7？溶液中處于漂浮狀態(tài)，穿刺針很難抓取和制動精子，同樣會延長1(^31操作時間，而且培養(yǎng)基中的一些精子雜質會污染溶液。
[0003]一些IV？實驗室建議嚴重少精子癥和梗阻性無精子患者多次取精后冷凍保存以增加精子總量，此方法弊端為:多次凍存精子會增加治療成本，目前密度很低的精子其冷凍后復蘇效果不理想，而且冷凍液對精子是否有損傷、冷凍過程中液氮是否會對精子產(chǎn)生污染、使用復蘇的精子其安全性如何目前仍無定論。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決已有1(:31操作皿存在的技術問題，本發(fā)明提供一種新的1(^31操作皿制作方法。
[0005]本發(fā)明的原理為:本方法做的精子培養(yǎng)基條形微滴為0.左右，由于量大，培養(yǎng)基內(nèi)的精子總數(shù)為傳統(tǒng)方法的100倍左右，其傳統(tǒng)方法量為1.09 1左右，培養(yǎng)基內(nèi)質量好的精子會向條形微滴邊緣移動，由于精子總量增加，發(fā)現(xiàn)并抓取精子時間大大縮短。
[0006]本發(fā)明提供的一種操作皿制作方法，步驟和條件如下:
步驟一:用吸管吸取溶液，在1(:31皿上方做兩個10 ^ 1圓形微滴；
步驟二:微滴正下方做長寬各為2.5 0111,0.50111的條形？乂？微滴；
步驟三:吸取含有精子沉淀的培養(yǎng)基0.09-0.201，在？V？條形微滴一側做長為
1.8-2.20111,寬為 0.4-0.60111 的條形微滴；
步驟四:吸取緩沖培養(yǎng)基在？乂？條形微滴另一側做3-5個10 9 1圓形微滴，微滴內(nèi)放入卵子；
步驟五:吸取緩沖培養(yǎng)基在？乂？條形微滴正下方做1個10 9 1圓形微滴，即洗針；步驟六:用顯微穿刺針從含有精子的培養(yǎng)基條形微滴內(nèi)吸取1個精子，放入條形微滴內(nèi)，制動精子；
步驟七:用顯微固定針固定住卵子，使其極體處于6點或12點位置； 步驟八:帶有精子的顯微穿刺針從3點位置將精子注射至卵子內(nèi)，即完成1(^31操作皿制作。
[0007]采用上述技術方案的有益效果是:
本發(fā)明提供的一種新的單精子卵胞漿內(nèi)注射操作皿制作方法，是一種簡單、實用的制作方法，適用于嚴重少精癥、附辜取精和辜丸取精等特殊精液的1031操作。能在短時間找到并內(nèi)吸取質量較好的精子完成1(^1操作，減少卵子在培養(yǎng)箱外暴漏時間。最大限度的減少溫度、濕度和(1)2濃度的變化對卵子紡錘體等超微結構的損傷。
[0008]本發(fā)明最大限度的利用每一條精子，特別適合精子數(shù)量極少的情況。
[0009]本發(fā)明的方法適用于嚴重少精癥、附睪取精和睪丸取精等1(^1的操作，大大縮短精子抓取和制動時間。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為本發(fā)明1(:31操作皿制作方法的1(^31操作皿示意圖。
[0011]圖中:1-1(:31皿、2-緩沖培養(yǎng)基圓滴、3-？7？溶液條形滴、4-精子沉淀條形微滴、5~？\？溶液圓滴。

【具體實施方式】
[0012]下面對本發(fā)明作進一步詳細說明:
一種1(:31操作皿制作方法，步驟和條件如下:
步驟一:用吸管吸取溶液，在1(:31皿上方做兩個10 ^ 1圓形微滴；
步驟二:微滴正下方做長寬各為2.5 0111,0.50111的條形？乂？微滴；
步驟三:吸取含有精子精子的培養(yǎng)基0.09-0.201，在？V？條形微滴一側做長為
1.8-2.20111,寬為0.4-0.60111的條形微滴；將所有精子沉淀都做成條形微滴0.09-0.201，這樣就不浪費每一條精子；
步驟四:吸取緩沖培養(yǎng)基在？乂？條形微滴另一側做3-5個10 9 1圓形微滴，微滴內(nèi)放入卵子；
步驟五:吸取緩沖培養(yǎng)基在？乂？條形微滴正下方做1個10 9 1圓形微滴，即洗針；步驟六:用顯微穿刺針從含有精子的培養(yǎng)基條形微滴內(nèi)吸取1個精子，放入條形微滴內(nèi)，制動精子；
步驟七:用顯微固定針固定住卵子，使其極體處于6點或12點位置；
步驟八:帶有精子的顯微穿刺針從3點位置將精子注射至卵子內(nèi)，即完成1(^31操作皿制作。
[0013]本發(fā)明所述皿由美國80 ？310011公司生產(chǎn)，貨號:353001。
[0014]本發(fā)明所述操作滴使用美國如1皿’ 8緩沖培養(yǎng)液，貨號#1-1023。
[0015]本發(fā)明所述含有精子的培養(yǎng)基，就是洗滌后的精子沉淀。
[0016]本發(fā)明所述7%？乂？溶液為美國3八⑶16(118公司生產(chǎn)，貨號:仙1-4005-八。
[0017]本發(fā)明所述顯微穿刺針為美國公司生產(chǎn)，貨號:30206尺。
[0018]本發(fā)明所述顯微固定針為美國公司生產(chǎn)，貨號:303100。實施例
[0019]2013年5月-2014年9月間，共對嚴重少精、附睪取精和睪丸取精的28名患者其配偶的316枚成熟卵子行1(^31操作，使用傳統(tǒng)1(^31操作皿進行1(:31操作的卵子173枚，平均操作時間為217^7.0秒，使用新1(:31操作皿卵子143枚，平均操作時間122^9.0秒，兩組間有顯著差異，所有操作均為同一技術人員完成。
【權利要求】
1.一種ICSI操作皿制作方法，其特征在于:步驟和條件如下: 步驟一:用吸管吸取PVP溶液，在ICSI皿上方做兩個10 μ I圓形微滴； 步驟二:微滴正下方做長寬各為2.5 Cm、0.5cm的條形PVP微滴； 步驟三:吸取含有精子精子的培養(yǎng)基0.09-0.2ml，在PVP條形微滴一側做長為1.8-2.2cm，寬為0.4-0.6cm的條形微滴； 步驟四:吸取緩沖培養(yǎng)基在PVP條形微滴另一側做3-5個10 μ I圓形微滴，微滴內(nèi)放入卵子； 步驟五:吸取緩沖培養(yǎng)基在PVP條形微滴正下方做I個10 μ I圓形微滴，即洗針；步驟六:用顯微穿刺針從含有精子的培養(yǎng)基條形微滴內(nèi)吸取I個精子，放入PVP條形微滴內(nèi)，制動精子； 步驟七:用顯微固定針固定住卵子，使其極體處于6點或12點位置； 步驟八:帶有精子的顯微穿刺針從3點位置將精子注射至卵子內(nèi)，即完成ICSI操作皿制作。
【文檔編號】C12N5/073GK104480063SQ201410749890
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月10日 優(yōu)先權日:2014年12月10日
【發(fā)明者】葛斌, 楊智敏, 刁英 申請人:遵義醫(yī)學院