一種kf鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20.6g/L肉浸液肉湯、5.0g/L酵母粉、2g/L乳糖、10.0g/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0.27g/L疊氮鈉、0.015g/L溴甲酚紫、13.0g/L瓊脂，pH值為7.0-7.4。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、月示蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說(shuō)明】一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 微生物培養(yǎng)（microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病 毒、細(xì)菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習(xí)性 來(lái)配制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關(guān)鍵在于無(wú)菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能 徹底滅菌、培養(yǎng)的過(guò)程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003] 腸球菌（Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分，通常 在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無(wú)害的共棲 菌，但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽(yáng)性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的 重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織 感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004] 溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，需補(bǔ) 充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素 B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。最適生長(zhǎng)溫度為 37°C，在20-42°C能生長(zhǎng)，最適pH為7. 4-7. 6。在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀或顆粒 狀沉淀生長(zhǎng)。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0. 5-0. 75mm的細(xì) 小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005] 糞腸球菌，根據(jù)最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原，根據(jù)蘭 氏（Lancefield)血清學(xué)分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸 球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌（S. faecalis)、屎鏈球菌（S. faecium)和堅(jiān)忍鏈 球菌（S. durans),后者有牛鏈球菌（S. bovis)和馬腸鏈球菌（S. equinus)。
[0006] 其營(yíng)養(yǎng)要求低，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上也可生長(zhǎng)。能在10°C或45°CpH9. 6或含6. 5% NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，并能耐65°C 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇，不發(fā) 酵阿拉伯糖。在簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不需葉酸。DNA-DNA雜交結(jié)果顯示，腸球菌與鏈球菌屬 同源程度低，故有學(xué)者建議另立腸球菌屬，與人類有關(guān)者為糞腸球菌（E.faecalis)和屎腸 球菌（E. faecium) 〇
[0007] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培 養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在 均改制成粉末。
[0008] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無(wú)機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對(duì)不 同的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽類、維生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑等諸類營(yíng)養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對(duì)培養(yǎng)基 的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0012] 一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液肉湯、5. Og/L 酵母粉、2g/L乳糖、10. Og/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0. 27g/L疊氮鈉、 0· 015g/L 溴甲酚紫、13. Og/L 瓊脂，pH 值為 7. 0-7. 4。
[0013] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、月示蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0014] 本發(fā)明還公開了一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于鏈球菌的選擇性分離及 計(jì)數(shù)。
[0015] 月示胨和酵母粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；麥芽糖和乳糖為可發(fā)酵糖類；氯 化鈉維持均衡的滲透壓；疊氮化鈉可抑制革蘭氏陰性菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；溴甲酚 紫為指示劑染料。
[0016] 稱取本品69. 4g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121 °C高壓滅菌15分鐘，冷卻至 50-60°C時(shí)，加入無(wú)菌1% TTC溶液10ml，混勻，傾入無(wú)菌平皿，備用。
[0017] 本發(fā)明的有益效果：
[0018] 1、培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；
[0019] 2、菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；
[0020] 3、便于觀察，分析。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 實(shí)施例1 :
[0022] -種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液肉湯、5. 0g/L 酵母粉、2g/L乳糖、10. 0g/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0. 27g/L疊氮鈉、 0· 015g/L 溴甲酚紫、13. 0g/L 瓊脂，pH 值為 7. 0-7. 4。
[0023] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉 5. 0g、月示蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0024] 稱取本品69. 4g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121 °C高壓滅菌15分鐘，冷卻至 50-60°C時(shí)，加入無(wú)菌1% TTC溶液10ml，混勻，傾入無(wú)菌平皿，備用。
[0025] 在 36 ± 0· 5 °C 下培養(yǎng) 48h
[0026]

【權(quán)利要求】
1. 一種KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括20. 6g/L肉浸液肉 湯、5. Og/L酵母粉、2g/L乳糖、10. Og/L甘油磷酸鈉、2g/L磷酸氫二鉀、22g/L麥芽糖、0. 27g/ L疊氮鈉、0· 015g/L溴甲酚紫、13. Og/L瓊脂，pH值為7. 0-7. 4。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述的肉浸液肉湯為每升 肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、月示蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于鏈球菌的 選擇性分離及計(jì)數(shù)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/06GK104195216SQ201410458732
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月9日
【發(fā)明者】王明剛, 王雪梅 申請(qǐng)人:青島潤(rùn)鑫偉業(yè)科貿(mào)有限公司