來自山岡單胞菌的低溫蛋白酶及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了來自山岡單胞菌的蛋白酶及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蛋白酶，是如下a)或b)的蛋白質(zhì)：a)氨基酸序列是序列表中SEQ?ID?No.2的蛋白質(zhì)；b)將序列表中SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質(zhì)。該蛋白酶具有較高的酶活性，最適作用pH為7，最適溫度30℃，在10℃時仍保持70％以上酶活力，該蛋白酶為中性低溫金屬蛋白酶。
【專利說明】來自山岡單胞菌的低溫蛋白酶及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中的一種來自山R單胞菌的蛋白酶及其相關(guān)生物材料
與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白酶是一類催化肽鏈中肽鍵水解的酶，已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、洗滌、紡織、制革、發(fā)酵和廢物處理等領(lǐng)域，其銷售份額約占全球用酶的60%，是世界三大工業(yè)用酶之一。
[0003]近年來，隨著基因工程、發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展，蛋白酶工業(yè)得到了飛速的發(fā)展，在世界生產(chǎn)蛋白酶工業(yè)中約有2/3是依賴微生物發(fā)酵生產(chǎn)的，其中利用最多的是芽孢桿菌屬(Bacillus)的細菌。但是，工業(yè)化生產(chǎn)的蛋白酶大多為中溫酶，其菌株的生長溫度為30°C以上，蛋白酶的最適溫度為45~50°C (倪永清，顧燕玲，史學(xué)偉，鄭曉吉，韓亮，周紅，程國棟.天山一號冰川底部沉積層產(chǎn)蛋白酶耐低溫菌株的篩選及其系統(tǒng)發(fā)育[J].微生物學(xué)報，2013，53(2): 164 - 172)，極大地限制了蛋白酶在低溫領(lǐng)域的應(yīng)用。低溫蛋白酶在低溫高效催化、節(jié)省能源、熱不穩(wěn)定等方面有著中溫蛋白酶無法比擬的優(yōu)越性，因此，目前國內(nèi)外學(xué)者已將研究的熱點轉(zhuǎn)向?qū)ふ液烷_發(fā)新型微生物低溫蛋白酶資源，以滿足日新月異的工業(yè)發(fā)展和應(yīng)用的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的一個目的是提供一種低溫蛋白酶，該低溫蛋白酶最適溫度為30°C，在30°C~40°C范圍內(nèi)酶活力較高，400C以上酶活力急驟下降，而在10°C時仍保持在70%以上。
[0005]本發(fā)明所提供的低溫蛋白酶，其名稱為Capix)，來源于草甸山崗單胞菌(Collimonas pratensis) JZB120004,是如下 a)或 b)的蛋白質(zhì):
[0006]a)氨基酸序列是序列表中SEQ ID N0.2的蛋白質(zhì)；
[0007]b)將序列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質(zhì)。
[0008]為了使上述(a)中的蛋白質(zhì)便于純化，可在由序列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。
[0009]表1標簽的序列
[0010]
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白質(zhì)，是如下a)或b)的蛋白質(zhì): a)氨基酸序列是序列表中SEQID N0.2的蛋白質(zhì)； b)將序列表中SEQID N0.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的核酸分子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸分子，其特征在于:所述核酸分子為如下I)或2)或3)所不的基因: 1)其編碼序列是序列表中SEQID N0.1的第228-1319位核苷酸的cDNA分子或DNA分子; 2)核酸序列是序列表中SEQID N0.1的cDNA分子或DNA分子； 3)與I)限定的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的cDNA分子或DNA分子。
4.下述Bl)-B12)中的任一種生物材料: BI)編碼權(quán)利要 求1所述蛋白質(zhì)的核酸分子； B2)含有BI)所述核酸分子的表達盒； B3)含有BI)所述核酸分子的重組載體； B4)含有B2)所述表達盒的重組載體； B5)含有BI)所述核酸分子的重組微生物； B6)含有B2)所述表達盒的重組微生物； B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物； B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物； B9)含有BI)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因動物或植物細胞系； B10)含有B2)所述表達盒的轉(zhuǎn)基因動物或植物細胞系； Bll)含有B3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物或植物細胞系； B12)含有B4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物或植物細胞系。
5.制備權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的方法，包括將權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)的編碼基因在生物細胞中進行表達得到權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的步驟；所述生物細胞為微生物細胞、植物細胞或非人動物細胞。
6.制備表達權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的重組微生物的方法，包括將權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)的編碼基因?qū)胧荏w微生物細胞，得到表達權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的重組微生物的步驟。
7.權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)在作為蛋白酶的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求2或3所述的核酸分子或權(quán)利要求4所述的生物材料在制備蛋白酶中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N1/21GK104004737SQ201410222826
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】劉偉成, 張殿朋, 吳慧玲, 盧彩鴿, 劉德文, 劉霆, 董丹, 李潔瓊 申請人:北京市農(nóng)林科學(xué)院