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一株變色曲霉及其在制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):468603閱讀:209來(lái)源:國(guó)知局
一株變色曲霉及其在制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一株變色曲霉及其在制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素中的應(yīng)用。變色曲霉(Aspergillus?versicolor)W1,它的保藏編號(hào)為CGMCC?NO.8571。本發(fā)明還保護(hù)變色曲霉W1在制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和/或鬼臼毒素中的應(yīng)用。本發(fā)明還保護(hù)一種制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和/或鬼臼毒素的方法,包括如下步驟:發(fā)酵培養(yǎng)變色曲霉W1,得到鬼臼毒素單葡萄糖苷和/或鬼臼毒素。本發(fā)明公開(kāi)了一株變色曲霉,發(fā)酵培養(yǎng)后可以得到鬼臼毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素,操作簡(jiǎn)單、成本低廉、生產(chǎn)周期短,具有工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的應(yīng)用潛力。本發(fā)明為鬼臼毒素類(lèi)物質(zhì)的資源開(kāi)發(fā)提供了新途徑,對(duì)保護(hù)植物生態(tài)多樣性具有重要意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一株變色曲霉及其在制備鬼臼毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株變色曲霉及其在制備鬼白毒素單葡萄糖苷和鬼白毒素中的應(yīng)用?!颈尘凹夹g(shù)】
[0002]鬼臼毒素(podophyllotoxin)及其衍生物鬼臼毒素單糖苷(podophyllotoxiW -O- β -D-glucopyranoside)具有廣泛的生物學(xué)活性,尤其是其抗腫瘤活性。鬼白類(lèi)植物提取物作為天然藥物在1820年就被收錄在美國(guó)藥典中,而其中主要的活性成分就是鬼白毒素。目前廣泛運(yùn)用于臨床的廣譜抗腫瘤藥物,依托泊式(etoposide),替尼泊式(teniposide),依托泊苷磷酸酯(etoposide phosphate)均是鬼白毒素糖苷類(lèi)衍生物。
[0003]鬼臼毒素是從盾葉鬼臼樹(shù)脂中分離得到的一種木脂素。目前,鬼臼毒素主要還是來(lái)源于野生鬼臼類(lèi)植物,如美洲八角蓮(Podophyllum peltatum L)、桃兒七(Sinopodophyllum emodi)、山荷葉(Diphylleia grayi)等。
[0004]由于鬼臼毒素類(lèi)藥物的良好抗腫瘤活性,對(duì)鬼臼毒素的需求也日益增加,其資源問(wèn)題也就日益突出,鬼白類(lèi)植物普遍存在生長(zhǎng)緩慢、對(duì)環(huán)境要求苛刻、分布零散、野生資源有限、鬼白毒素含量低等問(wèn)題。所以,靠采挖野生植物來(lái)提取鬼白毒素?zé)o法滿足生產(chǎn)的需求,并且對(duì)生物多樣性和生態(tài)環(huán)境造成了極大破壞。因此,解決鬼白毒素來(lái)源的問(wèn)題具有重要意義。
[0005]國(guó)內(nèi)外對(duì)鬼白毒素的來(lái)源進(jìn)行了大量研究,然而,始終沒(méi)有找到合適的途徑來(lái)替代野生鬼白植物的采挖。全合成 和半合成的方法可以成功得到鬼白毒素類(lèi)藥物,但是全合成經(jīng)歷的步驟太多,得到的鬼白毒素各類(lèi)異構(gòu)物太多,所以很不經(jīng)濟(jì),而半合成本省就需要天然的鬼臼毒素作為原料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一株變色曲霉及其在制備鬼白毒素單葡萄糖苷和鬼白毒素中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明提供的變色曲霉(Aspergillus versicolor) Wl,簡(jiǎn)稱變色曲霉Wl,已于2013年12月13日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCCJi址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào),中國(guó)科學(xué)院微生物研究所),保藏登記號(hào)為CGMCCN0.8571。
[0008]本發(fā)明還保護(hù)變色曲霉Wl在制備鬼白毒素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明還保護(hù)一種制備鬼白毒素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素的方法,包括如下步驟:發(fā)酵培養(yǎng)變色曲霉W1,得到鬼白毒素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素。
[0010]所述發(fā)酵培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基具體可為馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基。
[0011]所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件具體可為:26-30°C、100-150rpm振蕩培養(yǎng)5-9天。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件更加具體可為:28°C、120rpm振蕩培養(yǎng)7天。[0012]所述方法中還可包括如下步驟:從完成所述發(fā)酵的體系中分離菌絲體,超聲破碎并用有機(jī)溶劑進(jìn)行浸提。所述有機(jī)溶劑具體可為甲醇。所述超聲破碎的參數(shù)具體可為:功率150W,工作20s停10s,循環(huán)3-4次。
[0013]本發(fā)明公開(kāi)了一株變色曲霉,發(fā)酵培養(yǎng)后可以得到鬼白毒素單葡萄糖苷和鬼臼毒素,操作簡(jiǎn)單、成本低廉、生產(chǎn)周期短,具有工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的應(yīng)用潛力。本發(fā)明為鬼白毒素類(lèi)物質(zhì)的資源開(kāi)發(fā)提供了新途徑,對(duì)保護(hù)植物生態(tài)多樣性具有重要意義。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1為鬼白毒素單葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品和鬼白毒素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。
[0015]圖2為粗提物的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明,但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法,如無(wú)特殊說(shuō)明,均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料,如無(wú)特殊說(shuō)明,均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn),均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果取平均值。實(shí)施例中用抽濾器分離時(shí)采用杭州特種紙業(yè)有限公司的定性濾紙(中速:102)。
[0017]鬼臼毒素單葡萄糖苷(鬼臼毒素7’ -O-葡萄糖苷)標(biāo)準(zhǔn)品和鬼臼毒素標(biāo)準(zhǔn)品:Changqi ZHAO,Akito NAGATSU,Keiichiro HATANO, Naohiro SHIRAI, SetsukoKATOj and Yukio OGIHARA, New Lignan Glycosides from Chinese Medicinal Plant:Sinopodophillum emodi, Chem.Pharm.Bull.51 (3):255-261 (2003)。
[0018]鬼曰毒素單葡萄糖苷(4-demethyl-picropodophyllotoxin7; -O-β -D-glucopyranoside)的結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.變色曲霉(Aspergillusversicolor) W1,它的保藏編號(hào)為 CGMCC N0.8571。
2.權(quán)利要求1所述變色曲霉在制備鬼白毒素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素中的應(yīng)用。
3.一種制備鬼白毒 素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素的方法,包括如下步驟:發(fā)酵培養(yǎng)權(quán)利要求I所述變色曲霉,得到鬼白毒素單葡萄糖苷和/或鬼白毒素。
【文檔編號(hào)】C12R1/66GK103820330SQ201410022718
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月17日
【發(fā)明者】趙長(zhǎng)琦, 梁子臻, 王珂, 賈栗 申請(qǐng)人:北京師范大學(xué)
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