核酸復合物及核酸多糖復合物的制作方法【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供一種即使在生物體內(nèi)也不會在DNA與RNA的連結(jié)部被分解的核酸復合物，作為該課題的解決手段，提供一種核酸復合物，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，其中，與單鏈DNA結(jié)合的核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端核苷酸的2'位的羥基被烷氧基或鹵素基團置換，和/或與單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核苷酸的3'位與和其相鄰的核糖核苷酸的5'位之間的磷酸二酯基被硫代磷酸酯基、二硫代磷酸二酯基及三硫代磷酸二酯基中的任一個置換?！緦＠f明】核酸復合物及核酸多糖復合物【
技術領域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種提高包含DNA與RNA的核酸復合物的血清中穩(wěn)定性的技術?！?br>背景技術：
】[0002]人類基因組的解讀，已經(jīng)在距離發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋結(jié)構的1953年之后的第50年、即2003年完成。目前，正在進行闡明各種蛋白質(zhì)的活性機理以及蛋白質(zhì)間的相互作用。并且最近逐漸了解到，不編碼蛋白質(zhì)的RNA控制著基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯。作為應用這樣的成果的方法之一，提出了使用具有生理活性的短人工核酸（核酸藥物）操控生物體功能的技術。[0003]小干擾RNA(smallinterferingRNA，即siRNA)是由21?23個喊基對構成的低分子雙鏈RNA。siRNA參與被稱為RNA干擾（RNAi)的現(xiàn)象（參照非專利文獻1)、序列特異性地阻遏信使RNA(mRNA)，抑制蛋白質(zhì)表達。通常認為，該現(xiàn)象是生物體作為應對病毒感染等的防御機制的一環(huán)節(jié)而逐漸進化形成的。由于僅基于基因序列信息就能夠設計出，因此不需要如此前的低分子藥物那樣的大規(guī)模篩選，此外，由于能夠特異性地阻遏特定基因，因此認為副作用小，預期將成為新一代治療藥。[0004]但是，作為天然型核酸的磷酸酯型RNA，在生物體內(nèi)由于核酸酶、與蛋白質(zhì)的非特異性吸附會在極短時間內(nèi)失活。因此，天然型核酸藥品在人類臨床研宄中并未帶來有意義的效果。為了解決天然型核酸這樣的在生物體環(huán)境內(nèi)和培養(yǎng)液中短時間內(nèi)失活的問題，提出了多種對天然型核酸進行化學修飾而成的化學修飾核酸。尤其已知的是：例如將核糖的2'-位的羥基用甲氧基（2'-0_甲基）（參照非專利文獻2)、氟（F)(參照非專利文獻3)、鎖式核酸（lockednucleicacid)(LNA)(參照非專利文獻4)進行化學修飾而得到的化學修飾核酸。此外，還報道了這樣的化學修飾使得siRNA與靶mRNA的結(jié)合親和性提高。[0005]將這樣的化學修飾核酸稱為核酸類似物。核酸類似物與天然型核酸相比成功地大幅度延長了失活時間。這是由于核酸酶無法識別核酸類似物。但是，產(chǎn)生了在生物體內(nèi)與蛋白質(zhì)發(fā)生非特異性吸附、無法預期的生理活性、引起重度肝損傷等由非天然所帶來的毒性問題。[0006]還提出了如下技術：將天然型核酸包封至具有生物體適合性的化合物中，保護核酸不被分解，并且改善膜透過性從而將核酸導入細胞內(nèi)。逆轉(zhuǎn)錄病毒（參照非專利文獻5)或腺病毒（參照非專利文獻6)等雖然已經(jīng)獲知作為基因載體在體外是極有前途的，但是這些天然來源的病毒的炎癥性、免疫原性、以及誘導突變及重組到細胞基因組中風險性也備受指摘，這些使其在體內(nèi)的使用受到限制。[0007]因此，提出了一種作為天然來源的基因載體的代替物的、不僅操作比病毒系統(tǒng)簡單而且能夠使DNA切實向細胞高效率集中的、人工材料作為非病毒載體的用途（參照非專利文獻7)。迄今為止，作為非病毒性的人工核酸載體，已經(jīng)開發(fā)出聚乙二醇修飾的多聚陽離子（參照非專利文獻8)、聚乙烯亞胺（參照非專利文獻9)、陽離子性聚合物的嵌段共聚物(參照非專利文獻10)、樹枝狀高分子（參照非專利文獻11)等。但是，這樣的陽離子性高分子的安全性尚未確認。為了具有陽離子性，氨基的存在是必不可少的，但是氨基的生理活性高，存在體內(nèi)毒性等風險。[0008]本發(fā)明人著眼于此前作為基因載體的β-1，3-葡聚糖，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了β-1，3-葡聚糖與核酸藥物（反義DNA、CpGDNA)形成新型的復合物的現(xiàn)象（參照專利文獻1、2,非專利文獻12、13、14)。[0009]我們發(fā)現(xiàn)，將天然以3螺旋存在的β-1，3-葡聚糖溶解于二甲基亞砜（DMSO)等非質(zhì)子性極性有機溶劑、或0.IN以上的堿溶液使其解離為單鏈后，加入單鏈的核酸，使溶劑變?yōu)樗蚧謴椭林行裕纱诵纬闪擞?分子核酸與2分子多糖構成的3螺旋復合物。我們認為，此時，3螺旋復合物中的多糖分子與核酸分子主要是通過氫鍵與疏水性相互作用而形成分子間結(jié)合的（參照非專利文獻15)。[0010]如上所述，已經(jīng)報道了與β-1，3-葡聚糖復合化的核酸為單鏈核酸，尤其聚脫氧腺嗓呤（polydA)、聚胞喃啶（polyC)與以西佐喃（sizofiran，SPG)為首的β-1，3-葡聚糖顯示出強親和性。[0011]對于以β-1，3-葡聚糖作為SiRNA的載體應用于RNAi也進行了研宄。但是，SiRNA為雙鏈核酸，因此不能直接與β-1，3-葡聚糖形成復合物。因此，為了與SPG等β-1，3-葡聚糖復合化，準備了對siRNA的正義鏈附加poly(dA)而成的DNA-RNA雜化核酸，使其與siRNA的反義鏈退火，從而制作了poly(dA)-siRNA。然后，利用poly(dA)部分與SPG進行復合化。[0012]現(xiàn)有技術文獻[0013]專利文獻[0014]專利文獻1:國際公開第01/34207號小冊子[0015]專利文獻2:國際公開第02/072152號小冊子[0016]非專利文獻[0017]非專利文獻I:siRNAs:applicationsinfunctionalgenomicsandpotentialastherapeutics(小干擾RNA用于基因治療的研究進展）.Y.Dorsett，T.Tuschl，Nat.Rev.DrugDiscovery(藥物的發(fā)現(xiàn)）3(2004)318-329.[0018]非專利文獻2:Evaluationof29-modifiedoligonucleotidescontaining29-deoxygapsasantisenseinhibitorsofgeneexpression(含有29-脫氧空隙的29-改性寡聚核苷酸作為基因表達的反義阻遏劑的評價）.B.Monia，E.Lesnick，C.Gonzalez,W.Lima,D.McGee,C.GuinossojA.Kawasaki,P.Cook,S.FreierjJ.Biol.Chem.(^物化學）268(1993)14514-14522.[0019]非專利文獻3:Potentgene-specificinhibitorypropertiesofmixed-backboneantisenseoligonucleotidescomprisedof2'-deoxy-2J-fluoro-D-arabinoseand2J-deoxyribosenucleotides(包括-脫氧-2'-氟代-D-阿拉伯糖和2'-脫氧核糖核苷酸的骨架混合的反義寡聚核苷酸的潛在基因特異性阻遏性研究）.C.N.Lok，E.Viazovkine，K.LMin，C.J.Wilds，M.J.Damha，M.A.Parniak，Biochemistry(生物化學）41(2002)3457-3467.[0020]非專利文獻4:2'-〇,4'-C-ethylene-bridgednucleicacids(ENA):highlynuclease-resistantandthermodynamicallystableoligonucleotidesforantisensedrug(2'-0,4'-C-乙稀橋聯(lián)的核酸（ENA):用作反義藥物的高耐核酸性和熱動力學穩(wěn)定寡聚核苷酸）·Κ·Morita，C.Hasegawa，Μ·Kaneko,S.Tsutsumi，J.Sone，Τ·Ishikawa，Τ·ImanishiandΜ·Koizumi，Med.Chem.Lett.(藥物化學通訊），12,73-76(2002)[0021]非專利文獻5:Humangenetherapycomesofage(人類基因治療時代的來臨）·A.D.Miller，Nature(自然），357,455-460(1992)[0022]非專利文獻6:Thebasicscienceofgenetherapy(基因治療的基本基礎科學）·R.C.Mulligan，Science(科學），14,926-932(1993)[0023]非專利文獻7:Controllablegenetherapypharmaceuticsofnon-viralgenedeliverysystems(非病毒基因傳輸體系的可控基因治療藥物）·E.TomlinsonandA.P.Rolland，J.ControlRelease(控釋雜志），39,357-372(1996)[0024]非專利文獻8:BreathingLifeintoPolycations!FunctionalizationwithpH-ResponsiveEndosomolyticPeptidesandPolyethyleneGlycolEnablessiRNADelivery(注入生命多聚陽離子：具有pH響應的內(nèi)溶酶體多肽的功能化和聚乙二醇使小干擾RNA的傳遞）·M.Meyer，A.Philipp，R.Oskuee，C.SchmidtandE.Wagner，J.Am.Chem.Soc.(美國化學會期刊），l3〇,3272_3273(2〇〇8)[0025]非專利文獻9:RNAinterference-mediatedgenesilencingofpleiotrophinthroughpolyethylenimine-compIexedsmallinterferingRNAsinvivoexertsantitumoraleffectsinglioblastomaxenografts(通過與聚乙稀亞胺復合的小干擾RNA的多效性的RNA干擾介導的基因沉默在體內(nèi)進行膠質(zhì)母細胞瘤異體移植的抗腫瘤效果）·M.Grzelinski，B.Urban-Klein，T.Martens，K.Lamszus，ILBakowsky，S.Hobel，RCzubaykoandA.Aigner，Hum.Gene.Ther.(基因治療），17,751-766(2006)[0026]非專利文獻10:MonomolecularAssemblyofsiRNAandPoly(ethyleneglycol)-PeptideCopolymers(小干擾RNA與聚乙二醇-多肽共聚物的單分子組裝）·J.DeRouchey，C.Schmidt，G.F.Walker，C.Koch，C.Plank，E.WagnerandJ.0·Raedler，Biomacromolecules(生物大分子），9,724-732(2008)[0027]非專利文獻11:Tat_conjugatedPAMMdendrimersasdeliveryagentsforantisenseandsiRNAoligonucleotides(TAT共輒的PAMM樹狀高分子作為用于反義和小干擾RNA寡聚核苷酸的運輸試劑）.H.Kang，R.DeLong，Μ.H.FisherandR.LJuliano,Pharm.Res.(藥物研究），22,2099-2106(2005)[0028]非專利文獻12:MolecularRecognitionofAdenine，Cytosine，andUracilinaSingle-StrandedRNAbyaNaturalPolysaccharide(通過天然多糖在單鏈RNA中的腺口票呤、胞啼啶和尿啼啶的分子識別：Schizophyllan.Κ·SakuraiandS.Shinkai，J.Am.Chem.Soc.(美國化學會期刊），l22,452〇-4521(2〇00)[0029]非專利文獻13:Polysaccharide-PolynucleotideComplexes(多糖-多核苷酸配合物）·2.ComplementaryPolynucleotideMimicBehavioroftheNaturalPolysaccharideSchizophyllanintheMacromolecularComplexwithSingle-StrandedRNAandDNA(在與單鏈RNA和DNA復合的大分子復合物中天然多糖裂裥菌素的補充性模擬多核苷酸行為）·K.Sakurai，M.MizuandS.Shinkai，Biomacromolecules(生物大分子），2,641-650(2001)[0030]非專利文獻14:Dectin_ltargetingdeliveryofTNF-aantisenseODNscomplexedwithβ-1，3-glucanprotectsmicefromLPS-inducedhepatitis(C型凝集素受體Dectin-I靶向復合有β-1，3-葡聚糖的TNF-α反義ODNs的傳遞保護小鼠免得LPS-誘導肝炎·S.Mochizuki,Κ.Sakurai,J.Control.Release(控釋雜志），151，（2011)155-161.[0031]非專利文獻15:StructuralAnalysisoftheCurdlan/Poly(cytidylicacid)ComplexwithSemiempiricalMolecularOrbitalCalculations(米用半經(jīng)驗分子軌道理論對凝膠多糖/聚胞苷酸復合物的結(jié)構分析評估.K.Miyoshi,K.Uezu,K.SakuraiandS.Shinkai,Biomacromolecules(生物大分子），6,1540-1546(2005)【
發(fā)明內(nèi)容】[0032]發(fā)明要解決的技術問題[0033]但是，DNA-siRNA核酸復合物相對于生物體內(nèi)廣泛存在的核糖核酸酶并不穩(wěn)定，因此與RNA同樣存在在生物體內(nèi)容易被迅速分解的問題。事實上，在為了評價DNA-siRNA核酸復合物的血清中穩(wěn)定性而將核酸復合物在10%血清中孵育后、使用聚丙烯酰胺凝膠電泳確認分子量的變化時，確認到了在DNA與SiRNA的結(jié)合部分被切斷而得到的條帶。這一現(xiàn)象在與β-1，3-葡聚糖復合化而得的核酸復合物中也觀察到過，我們認為，即使將復合物投與到生物體內(nèi)，其也會被迅速切斷成DNA與RNA，導致DNA-siRNA核酸復合物的細胞導入效率降低、靶基因的沉默活性降低等。[0034]本發(fā)明是鑒于上述問題而作出的，提供一種即使在生物體內(nèi)也不會在DNA與RNA的結(jié)合部發(fā)生分解的核酸復合物。[0035]用于解決問題的技術方案[0036]本發(fā)明的第1方案通過提供一種核酸復合物從而解決了上述問題，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，其中，與前述單鏈DNA結(jié)合的前述核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端核苷酸的2'位的羥基被烷氧基或鹵素原子置換。[0037]本發(fā)明的第2方案通過提供一種核酸復合物從而解決了上述問題，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，其中，與前述單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核苷酸的3'位與和其相鄰的核糖核苷酸的5'位之間的磷酸二酯基被硫代磷酸酯基（硫代磷酸酯基：-〇-p〇⑶-〇-，具有將磷酸基的P=〇置換成P=S的結(jié)構。）、二硫代磷酸二酯基（-O-PS(S)-O-)及三硫代磷酸二酯基（-O-PS(S)-S-)中的任一個置換。[0038]本發(fā)明的第1及第2方案中，前述單鏈DNA的核苷酸數(shù)可以為10以上。此外，本發(fā)明的第1及第2方案中，前述單鏈DNA可以為聚脫氧腺嘌呤。[0039]本發(fā)明的第1及第2方案中，可以是前述單鏈DNA的磷酸二酯基中的至少一部分被硫代磷酸酯基、二硫代磷酸二酯基及三硫代磷酸二酯基中的任一個置換。此外，此時可以是前述單鏈DNA的磷酸二酯基中的至少50%以上被硫代磷酸酯基、二硫代磷酸二酯基及三硫代磷酸二酯基中的任一個置換。[0040]本發(fā)明的第1及第2方案中，前述雙鏈RNA可以為siRNA。此外，此時，前述siRNA可以為21mer型或27mer型。進而，前述siRNA的革El基因可以為在表達Dectin-I的細胞中表達的基因。[0041]本發(fā)明的第3方案通過提供一種核酸多糖復合物從而解決了上述問題，所述核酸多糖復合物中，1分子的本發(fā)明第1及第2方案的核酸復合物的單鏈DNA部位與2分子的具有β-1，3-葡聚糖骨架的多糖形成3螺旋結(jié)構。[0042]本發(fā)明的第3方案中，前述具有β-1，3-葡聚糖骨架的多糖優(yōu)選為西佐喃。[0043]本發(fā)明的第4方案通過提供一種藥物組合物從而解決了上述問題，所述藥物組合物包含本發(fā)明的第3方案的核酸多糖復合物。[0044]本發(fā)明的第5方案通過提供一種核酸復合物的穩(wěn)定化方法從而解決了上述問題，所述核酸復合物的穩(wěn)定化方法為增大核酸復合物對于核糖核酸酶的穩(wěn)定性的方法，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物；其中，用烷氧基或鹵素原子置換與前述單鏈DNA結(jié)合的前述核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端核苷酸中的2'位的羥基。[0045]本發(fā)明的第6方案通過提供一種核酸復合物的穩(wěn)定化方法從而解決了上述問題，所述核酸復合物的穩(wěn)定化方法為增大核酸復合物對于核糖核酸酶的穩(wěn)定性的方法，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物；其中，用硫代磷酸酯基、二硫代磷酸二酯基及三硫代磷酸二酯基中的任一個置換與前述單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核苷酸的3'位與和其相鄰的核糖核苷酸的5'位之間的磷酸二酯基。[0046]發(fā)明的效果[0047]通過在單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的DNA-RNA核酸復合物中，用烷氧基或鹵素原子置換與單鏈DNA結(jié)合的核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端核苷酸中的2'位的羥基、或用硫代磷酸酯基、二硫代磷酸二酯基及三硫代磷酸二酯基中的任一者置換與單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核苷酸的3'位與和其相鄰的核糖核苷酸的5'位之間的磷酸二酯基，聚脫氧核糖核苷酸與聚核糖核苷酸的結(jié)合部的穩(wěn)定性提高，即使在生物體內(nèi)也不易被水解。因此，本發(fā)明的核酸復合物在生物體內(nèi)不會被迅速分解而喪失功能，能夠維持原本的功能。例如，在由siRNA的5'側(cè)末端側(cè)結(jié)合有poly(dA)等用于與β-1，3-葡聚糖（西佐喃等）形成穩(wěn)定復合物的聚脫氧核苷酸的核酸復合物、與β-1，3-葡聚糖形成的核酸多糖復合物中，應用本發(fā)明的核酸復合物時，在細胞質(zhì)內(nèi)不會被分解、能夠切實地將siRNA遞送到細胞核，可以預期會增大利用RNA干擾來抑制致病基因表達的核酸藥物的有用性及治療效果?！緦＠綀D】【附圖說明】[0048]圖1為表示dA40-siRNA的血清中分解實驗（實施例1)的結(jié)果的凝膠熒光圖像。[0049]圖2A為表示使用5'側(cè)末端附加了FITC的反義鏈調(diào)制的熒光修飾dAlO-siRNA的血清中分解物的鑒定實驗（實施例2)結(jié)果的凝膠熒光圖像。[0050]圖2B為表示使用3'側(cè)末端附加了FITC的反義鏈調(diào)制的熒光修飾dAlO-siRNA的血清中分解物的鑒定實驗（實施例2)結(jié)果的凝膠熒光圖像。[0051]圖2C為表示dA-siRNA的分解反應的圖像圖。[0052]圖3為表示2'-0-甲基修飾對于RNA的分解產(chǎn)生的效果（實施例3)的凝膠熒光圖像。[0053]圖4為表示2'-O-甲基修飾對于單鏈RNA的分解產(chǎn)生的效果（實施例4)的凝膠熒光圖像。[0054]圖5為表示2'-0_甲基修飾位置對于血清中的核酸復合物的分解產(chǎn)生的效果（實施例5)的凝膠熒光圖像。[0055]圖6為表示堿基的種類對DNA的分解產(chǎn)生的影響（實施例6、7)的凝膠熒光圖像。[0056]圖7為表示硫代磷酸酯修飾對于RNA的分解產(chǎn)生的效果（實施例8)的凝膠熒光圖像。[0057]圖8為表示DNA連接在RNA的3'側(cè)末端時的影響（實施例9)的凝膠熒光圖像。【具體實施方式】[0058]以下，對用于具體實施本發(fā)明的實施方式進行說明。[0059]本發(fā)明的第一實施方式的核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核苷酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核苷酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，其中，與單鏈DNA結(jié)合的核糖核苷酸鏈的5'側(cè)末端核苷酸中的2'位的羥基被烷氧基或鹵素原子置換。即，本實施方式的核酸復合物相當于下述通式（I)中的R2為烷氧基或鹵素原子的情況。其中，式（I)中，R1為腺嘌呤（A)、鳥嘌呤（G)、尿嘧啶（U)及胞嘧啶（C)中的任一種，R3及R5為磷酸酯基（-PO2-O-)。這里，作為烷氧基的具體例子，可以列舉碳數(shù)1?5的直鏈或支鏈烷氧基、碳數(shù)5?15的芳烷基、0-烯丙（allyl)基等烯基烷基等，優(yōu)選碳數(shù)1?3的烷氧基、特別優(yōu)選甲氧基。此外，作為鹵素原子的具體例子，可以列舉氟原子（F)、氯原子（Cl)、溴原子（Br)及碘原子（I)，特別優(yōu)選氟原子。[0060][化學式1][0061]【權利要求】1.一種核酸復合物，其為單鏈DM的3'側(cè)末端的脫氧核糖核巧酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核巧酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，與所述單鏈DNA結(jié)合的所述核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端核巧酸中的2'位的哲基被燒氧基或面素原子置換。2.-種核酸復合物，其為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核巧酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核巧酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物，與所述單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核巧酸的3'位與和其相鄰的核糖核巧酸的5'位之間的磯酸二醋基被硫代磯酸醋基、二硫代磯酸二醋基二硫代磯酸二醋基及=硫代磯酸二醋基中的任一個置換。3.根據(jù)權利要求1或2所述的核酸復合物，其中，所述單鏈DNA的核巧酸數(shù)為10W上。4.根據(jù)權利要求1?3中的任一項所述的核酸復合物，其中，所述單鏈DNA為聚脫氧腺嚷嶺。5.根據(jù)權利要求1?4中的任一項所述的核酸復合物，其中，所述單鏈DNA的磯酸二醋基中的至少一部分被硫代磯酸醋基、二硫代磯酸二醋基及=硫代磯酸二醋基中的任一個置換。6.根據(jù)權利要求5所述的核酸復合物，其中，所述單鏈DNA的磯酸二醋基中的至少50%W上被硫代磯酸醋基、二硫代磯酸二醋基及=硫代磯酸二醋基中的任一個置換。7.根據(jù)權利要求1?6中的任一項所述的核酸復合物，其中，所述雙鏈RNA為siRNA。8.根據(jù)權利要求7所述的核酸復合物，其中，所述siRNA為21mer型或27mer型。9.根據(jù)權利要求7或8所述的核酸復合物，其中，所述siRNA的祀基因為在表達Dectin-1的細胞中表達的基因。10.-種核酸多糖復合物，其中，1分子的權利要求1?9中的任一項所述的核酸復合物的單鏈DNA部位與2分子的具有0-1，3-葡聚糖骨架的多糖形成3螺旋結(jié)構。11.根據(jù)權利要求10所述的核酸多糖復合物，其中，所述具有0-1，3-葡聚糖骨架的多糖為西佐喃。12.-種藥物組合物，包含權利要求10或11所述的核酸多糖復合物。13.-種核酸復合物的穩(wěn)定化方法，其為增大核酸復合物對于核糖核酸酶的穩(wěn)定性的方法，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核巧酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核巧酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物；其中，用燒氧基或面素原子置換與所述單鏈DNA結(jié)合的所述核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端核巧酸中的2'位的哲基。14.一種核酸復合物的穩(wěn)定化方法，其為增大核酸復合物對于核糖核酸酶的穩(wěn)定性的方法，所述核酸復合物為單鏈DNA的3'側(cè)末端的脫氧核糖核巧酸殘基的3'位與雙鏈RNA中的一條核糖核巧酸鏈的5'側(cè)末端的核糖核巧酸殘基的5'位結(jié)合的核酸復合物；其中，用硫代磯酸醋基、二硫代磯酸二醋基及S硫代磯酸二醋基中的任一個置換與所述單鏈DNA結(jié)合的最初的核糖核巧酸的3'位與和其相鄰的核糖核巧酸的5'位之間的磯酸二醋基?！疚臋n編號】C12N15/113GK104471063SQ201380032032【公開日】2015年3月25日申請日期:2013年6月19日優(yōu)先權日:2012年6月20日【發(fā)明者】櫻井和朗,望月慎一,田中素子,樋口貞春申請人:獨立行政法人科學技術振興機構