專利名稱：一種Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種醫(yī)用實(shí)驗(yàn)裝置,具體涉及一種用于Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)裝置。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是當(dāng)前危害人類健康的重要疾病之一，是新世紀(jì)人類第一殺手，對(duì)人類生存構(gòu)成最嚴(yán)重的威脅。WHO警告稱，如不采取有效措施到2030年全球?qū)⒂?600萬(wàn)新增癌癥病例，死亡例數(shù)將躍至1700萬(wàn)。惡性腫瘤所致的絕大部位死亡都是因?yàn)槟[瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。原發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤的部位。轉(zhuǎn)移是指惡性腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散到整個(gè)機(jī)體的過(guò)程。惡性腫瘤細(xì)胞要擴(kuò)散到整個(gè)機(jī)體，必須首先越過(guò)或繞過(guò)鄰近細(xì)胞。它們通過(guò)重構(gòu)細(xì)胞骨架(cytoskeleton)；以及通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜(plasma membrane)表面的蛋白質(zhì)(proteins),附著于其它細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix)。細(xì)胞能向前遷移靠細(xì)胞將其“部分身體”向前延伸，再讓后部分跟著而前移動(dòng)。細(xì)胞就這樣向前爬行直到撞上它不能繞過(guò)的障礙。這個(gè)障礙常常是圍繞著組織的一層厚厚的蛋白質(zhì)和糖蛋白(glycoproteins),稱為基底層或基底膜(basal lamina or basement membrane)。為了穿過(guò)這層基底膜，惡性腫瘤細(xì)胞必須分泌一種酶(enzymes)的混合物，將基底膜的蛋白質(zhì)降解，以便穿過(guò)這層膜。由惡性腫瘤細(xì)胞分泌的酶有一組叫做間質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteases) (MMP)0這些酶充當(dāng)“分子剪刀”將這些阻擋腫瘤細(xì)胞移行的蛋白質(zhì)剪斷。一旦穿過(guò)基底膜，腫瘤細(xì)胞便可以多種方式轉(zhuǎn)移到全身。比如通過(guò)血液轉(zhuǎn)移，即腫瘤細(xì)胞從血管內(nèi)皮細(xì)胞間擠過(guò)而進(jìn)入血流，隨血流播散到全身。一旦進(jìn)入血流，腫瘤細(xì)胞則以懸浮飄逸方式通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)它要到達(dá)的地方，然后，進(jìn)入組織，駐扎下來(lái)。在新的部位，它們開(kāi)始生長(zhǎng)、增殖，形成新的腫瘤。目前，腫瘤轉(zhuǎn)移的模型包括體外浸潤(rùn)模型和體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型。體外研究多為浸潤(rùn)模型研究，多數(shù)是為了了解腫瘤細(xì)胞對(duì)周圍相連組織的侵潤(rùn)性，最主要有以下幾方面:①研究腫瘤細(xì)胞對(duì)結(jié)締組織上皮細(xì)胞基質(zhì)分子的降介力，這些基質(zhì)由很多生物大分子組成，腫瘤細(xì)胞只有穿透基質(zhì)屏障，才能從原位組織中脫落或在新的組織中著床后生長(zhǎng)。因此，這些在體外作用的藥物分子的作用結(jié)果可以反映實(shí)際體內(nèi)的一些情況。此外，一些復(fù)合膜，如Matrigel膜(包含LN、IV膠原、接觸蛋白、肝素硫酸多糖等構(gòu)建的類似生物膜)也能進(jìn)行體外的浸潤(rùn)研究，且更接近于體內(nèi)藥物作用結(jié)果。在室溫條件下，Matrigel聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染、基因表達(dá)等多項(xiàng)研究。由于Matrigel在常溫條件下很快就發(fā)生聚合，因此在使用Matrige l的實(shí)驗(yàn)中，必須使用預(yù)冷的移液管、槍頭等。Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)前期需要進(jìn)行如下準(zhǔn)備:(I) Transwell培養(yǎng)板準(zhǔn)備，所有操作均需無(wú)菌操作；(2) _20°C保存的Matrigel在冰上保2V 8°C過(guò)夜融化；(3)在冰上用預(yù)冷的槍頭吸取IOOiIl Matrigel加入冰預(yù)冷的300 無(wú)血清培養(yǎng)基中，充分混均；(4)取上述稀釋的Matrigel 25 U I加入Transwell板上室，覆蓋整個(gè)聚碳酯膜，37°C, 30 min,使Matrigel聚合成膠?，F(xiàn)有技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作會(huì)遇到以下困難:(I)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的槍頭、吸管等要預(yù)冷，一般情況是放在冰箱的_20°C預(yù)冷，但實(shí)驗(yàn)時(shí)必須取出，如果是一批實(shí)驗(yàn)這樣很難保證所用槍頭、吸管等的溫度；(2) Matrigel對(duì)溫度要求控制比較高，如果溫度高了，Matrigel就會(huì)發(fā)生聚合，無(wú)法確保實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。(3)這些操作平常為了保持低溫狀態(tài)，需要在冰上進(jìn)行。而這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)所有的操作均需無(wú)菌，因?yàn)樾枰^察的時(shí)間往往都比較長(zhǎng)，為6-24h不等。然而制冰機(jī)的制冰通常使用的是自來(lái)水，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中Transwell板，槍頭盒及Matrigel等等都放在冰上處理，非常容易被污染。因此，如何提供一種實(shí)驗(yàn)裝置，確保Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟跍囟确€(wěn)定且無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行批量操作是本實(shí)用新型所要解決的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的發(fā)明目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)裝置，用于Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)，確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟诤銣氐臈l件下進(jìn)行批量操作，且防止污染。為達(dá)到上述發(fā)明目的，本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案是:一種Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，包括盒體和制冷機(jī)構(gòu)，所述盒體為透明的雙層玻璃盒，盒體內(nèi)部由分隔板隔離，構(gòu)成-20°C -18°C的預(yù)冷區(qū)以及OV 4°C的操作區(qū)，所述盒體頂面對(duì)應(yīng)預(yù)冷區(qū)和操作區(qū)各設(shè)有至少一個(gè)門。上述技術(shù)方案中，制冷機(jī)構(gòu)可采用常規(guī)機(jī)構(gòu)，例如半導(dǎo)體制冷器、蒸發(fā)式制冷機(jī)構(gòu)
坐寸O 優(yōu)選的技術(shù)方案，所述門為移門，在盒體頂面設(shè)有4個(gè)所述移門，每一移門上設(shè)有手柄。移門結(jié)構(gòu)便于拿取實(shí)驗(yàn)材料并保持溫度。上述技術(shù)方案中，所述移門之間設(shè)有密封條，移門下方設(shè)有滑軌。一般地，所述預(yù)冷區(qū)內(nèi)設(shè)有槍頭盒放置區(qū)、插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿放置區(qū)和試管架放置區(qū)。所述槍頭盒放置區(qū)由3部分構(gòu)成，分別放置大、中、小槍頭盒。所述操作區(qū)由試管架放置區(qū)、與Matrigel包裝瓶匹配的凹槽、實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)區(qū)構(gòu)成。優(yōu)選的技術(shù)方案，所述操作區(qū)的內(nèi)壁上，位于實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)區(qū)兩側(cè)對(duì)稱設(shè)置有一對(duì)紫外燈和一對(duì)日光燈，裝置外壁上設(shè)有溫控開(kāi)關(guān)、紫外燈開(kāi)關(guān)和日光燈開(kāi)關(guān)。紫外燈用于實(shí)驗(yàn)前滅菌，以提供無(wú)菌操作環(huán)境，日光燈對(duì)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)提供充分照明。上述技術(shù)方案中，裝置的長(zhǎng)度為60 70cm，寬度為40 45cm，高度為20 25cm。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn):1.本實(shí)用新型將預(yù)冷區(qū)和操作區(qū)緊靠在一起，使得操作更加方便，能夠確保實(shí)驗(yàn)室溫度穩(wěn)定，對(duì)于批量操作十分有利，且設(shè)有專門放置Matrigel的凹槽,保證Matrigel溫度的穩(wěn)定，有效避免Matrigel因溫度過(guò)高而發(fā)生聚合。2.實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)旁側(cè)對(duì)稱設(shè)有一對(duì)紫外燈，可以消毒滅菌，防止污染。3.實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)旁側(cè)對(duì)稱設(shè)有一對(duì)日光燈，使得操作區(qū)更加明亮，便于操作。4.本 實(shí)用新型盒體頂面設(shè)有四個(gè)透明移門，一方面易于觀察，另一方面可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要隨時(shí)開(kāi)關(guān)移門，確保溫度穩(wěn)定。

圖1是實(shí)施例一中裝置的內(nèi)部結(jié)構(gòu)俯視圖。圖2是實(shí)施例一中盒體的頂面俯視圖。圖3是實(shí)施例一中裝置的正面視圖。其中:1、預(yù)冷區(qū)；2、操作區(qū)；3、雙層玻璃盒；4、槍頭盒放置區(qū)；5、插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿放置區(qū)；6、試管架放置區(qū)；7、凹槽；8、日光燈；9、紫外燈；10、溫控開(kāi)關(guān)；11、日光燈開(kāi)關(guān)；12、紫外燈開(kāi)關(guān)；13、移門；14、手柄。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步描述:實(shí)施例一:參見(jiàn)圖1至圖3所示，一種Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，包括盒體、制冷機(jī)構(gòu)和支撐臺(tái)，所述盒體為透明的雙層玻璃盒3，其頂面設(shè)有4個(gè)移門13，移門13上設(shè)有手柄14，所述移門之間設(shè)有密封條，移門下方設(shè)有軌道，以方便拿取和保持溫度。所述盒體內(nèi)部相鄰設(shè)有預(yù)冷區(qū)I和操作區(qū)2，通過(guò)制冷機(jī)構(gòu)，使得預(yù)冷區(qū)的溫度保持在-20°C -18°C，操作區(qū)的溫度保持在(TC 4°C，所述預(yù)冷區(qū)I內(nèi)設(shè)有槍頭盒放置區(qū)4、插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿放置區(qū)5和試管架放置區(qū)6，所述操作區(qū)2內(nèi)設(shè)有試管架放置區(qū)6，其內(nèi)壁上對(duì)稱設(shè)有一對(duì)紫外燈9和一對(duì)日光燈8，所述支 撐臺(tái)上設(shè)有溫控開(kāi)關(guān)10、紫外燈開(kāi)關(guān)12和日光燈開(kāi)關(guān)11。本實(shí)施例中，所述操作區(qū)內(nèi)設(shè)有一凹槽7，其大小與市售Matrigel包裝瓶相匹配，用于放置Matrigel包裝瓶，以保證Matrigel處于最佳恒溫狀態(tài)。本實(shí)施例中，設(shè)有3個(gè)槍頭盒放置區(qū)4，分別用于放置大、中、小槍頭盒。所述實(shí)驗(yàn)裝置長(zhǎng)度為60-70cm，寬度為40_45cm，高度為20_25cm。
權(quán)利要求1.一種Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置,包括盒體和制冷機(jī)構(gòu),其特征在于:所述盒體為透明的雙層玻璃盒，盒體內(nèi)部由分隔板隔離，構(gòu)成-200C -18°C的預(yù)冷區(qū)以及0°C 4°C的操作區(qū)，所述盒體頂面對(duì)應(yīng)預(yù)冷區(qū)和操作區(qū)各設(shè)有至少一個(gè)門。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述門為移門，在盒體頂面設(shè)有4個(gè)所述移門，每一移門上設(shè)有手柄。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述移門之間設(shè)有密封條，移門下方設(shè)有滑軌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述預(yù)冷區(qū)內(nèi)設(shè)有槍頭盒放置區(qū)、插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿放置區(qū)和試管架放置區(qū)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述槍頭盒放置區(qū)由3部分構(gòu)成，分別放置大、中、小槍頭盒。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述操作區(qū)由試管架放置區(qū)、與Matrigel包裝瓶匹配的凹槽、實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)區(qū)構(gòu)成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:所述操作區(qū)的內(nèi)壁上，位于實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)區(qū)兩側(cè)對(duì)稱設(shè)置有一對(duì)紫外燈和一對(duì)日光燈，裝置外壁上設(shè)有溫控開(kāi)關(guān)、紫外燈開(kāi)關(guān)和日光燈開(kāi)關(guān)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，其特征在于:裝置的長(zhǎng)度為60 70cm,寬 度為40 45cm,高度為20 25cm。
專利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種Transwell實(shí)驗(yàn)用裝置，包括盒體和制冷機(jī)構(gòu)，其特征在于所述盒體為透明的雙層玻璃盒，盒體內(nèi)部由分隔板隔離，構(gòu)成-20℃～-18℃的預(yù)冷區(qū)以及0℃～4℃的操作區(qū)，所述盒體頂面對(duì)應(yīng)預(yù)冷區(qū)和操作區(qū)各設(shè)有至少一個(gè)門。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于加工制作，能夠確保實(shí)驗(yàn)在恒溫的條件下進(jìn)行批量操作，且防止實(shí)驗(yàn)器材在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中受到污染。
文檔編號(hào)C12M1/00GK203112816SQ2013201065
公開(kāi)日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月10日
發(fā)明者秦立強(qiáng), 徐加英, 焦旸, 柴之芳, 樊賽軍 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)