用于敲低vps11的小分子干擾rna、重組載體及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于敲低VPS11的小分子干擾RNA、shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒和宿主細胞及其應用，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPS11的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19～27bp。本發(fā)明提供的重組慢病毒載體能在宿主細胞內穩(wěn)定、長期地轉錄得到VPS11-shRNA；本發(fā)明提供的VPS11-shRNA經過宿主細胞加工后可生成能沉默VPS11表達的小分子干擾RNA；本發(fā)明提供的小分子干擾RNA能靶向突觸融合蛋白VPS11的mRNA，并導致所述mRNA降解，并導致基因沉默效應，降低VPS11的表達水平。
【專利說明】用于敲低VPS11的小分子干擾RNA、重組載體及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及分子生物學、基因工程技術以及生物醫(yī)藥領域，具體涉及一種用于敲低VPSll的小分子干擾RNA、重組載體及其應用。
【背景技術】
[0002]VPSll蛋白在細胞囊泡運輸過程中起著極其重要的作用，細胞囊泡運輸又是細胞內及細胞間的物質運輸?shù)闹饕緩街?，所以研究VPSll蛋白在細胞囊泡運輸中的信號通路對研究各項細胞、組織、器官及生物體生命活動都有重要意義的，而研究VPSll在信號通路中的作用有必要提供一種敲低VPSll的表達水平的方法以及穩(wěn)定敲低VPSll的表達水平的細胞系。
[0003]RNA干擾(RNA interference, RNAi)可誘發(fā)的基因沉默。當細胞中導入與內源性mRNA編碼區(qū)同源的雙鏈RNA時，該mRNA發(fā)生降解而導致基因表達沉默，是一種降低目標蛋白表達水平的有效途徑。
[0004]因此，有必要提供一種采用RNA干擾技術對VPSll進行基因沉默的方法以及一種穩(wěn)定敲低VPSll的表達水平的細胞系。

【發(fā)明內容】
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種用于敲低VPSll的小分子干擾RNA、shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒和宿主細胞及應用。
[0006]本發(fā)明提供的小分子干擾RNA能直接特異性靶向VPSll的mRNA并導致mRNA降解，產生基因沉默效應；本發(fā)明提供的shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒能通過促使宿主細胞中VPSll的mRNA降解間接地沉默VPSll的表達，降低VPSll的表達水平。
[0007]本發(fā)明涉及的英文縮寫及其中文釋義如下:
[0008]VPSll:所述 VPSll 蛋白的 Genebank 登錄號為 ΝΜ_021729.4 ；
[0009]mRNA:信使 RNA ；siRNA:小分子干擾 RNA ；shRNA:短發(fā)夾 RNA ；
[0010]VPSll-shRNA:具有靶向VPSll蛋白的信使RNA的短發(fā)夾RNA ；
[0011]第一方面，本發(fā)明提供了一種小分子干擾RNA，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
[0012]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的長度為21~27bp。
[0013]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2所示。
[0014]第二方面，本發(fā)明提供了一種shRNA，所述shRNA具有如第一方面所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。
[0015]優(yōu)選地，本發(fā)明第二方面提供了的一種shRNA，為具有莖環(huán)結構的單鏈RNA，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，其中，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
[0016]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的長度為21~27bp。[0017]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2所示。
[0018]第三方面，本發(fā)明提供了一種shRNA的編碼DNA，所述shRNA具有如第一方面所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。
[0019]優(yōu)選地，本發(fā)明第三方面提供了的一種shRNA的編碼DNA，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，其中，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
[0020]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的長度為21~27bp。
[0021]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2所示。
[0022]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA的含有SEQ ID NO: 3或4所示的核苷酸序列。
[0023]具體地，在此優(yōu)選條件下，所述SEQ ID NO:3 (5，_3，)為:
[0024]GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAACAGC TTTTT ；
[0025]所述SEQ ID NO:4 (5，_3，)為:
[0026]AAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAA ACAGC。
[0027]進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID N0:3和4所示的核苷酸序列的5’端或3’端具有酶切位點。
[0028]更進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID NO:3和4所示的核苷酸序列的5’端的酶切位點分別為 Age I 和 EcoR I。
[0029]在此優(yōu)選條件下，所述編碼shRNA的DNA具有如SEQ ID N0:5或6所示的核苷酸序列。
[0030]具體地，所述SEQ ID NO:5 (5，_3，)為:
[0031 ] CCGG GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAACAG CTTTTT O
[0032]所述SEQ ID NO:6 (5，_3，)為:
[0033]AATTCAAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTT AAACAGC0
[0034]其中，雙劃線標識的堿基處為酶切位點，波浪線表示的序列為SiRNA的正義鏈，單劃線標識的序列為siRNA的反義鏈，斜體標識的序列為形成shRNA發(fā)卡時的環(huán)區(qū)序列。
[0035]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA還包括RNA聚合酶III啟動子。
[0036]進一步優(yōu)選地，所述RNA聚合酶III啟動子為人源的U6啟動子或人源的Hl啟動子。
[0037]進一步優(yōu)選地，所述RNA聚合酶III啟動子為鼠源的U6啟動子或鼠源的Hl啟動子。
[0038]第四方面，本發(fā)明提供了一種重組載體，所述重組載體為在所述重組載體為在pLK0.1質粒的多克隆位點、pEN-hHlc質粒的多克隆位點或pDSL-hpUGIP質粒的重組位點插入如第三方面所述的編碼shRNA的DNA得到的重組載體。
[0039]優(yōu)選地，本發(fā)明第四方面提供了的一種重組載體，所述重組載體為在所述重組載體為在pLK0.1質粒的多克隆位點、pEN-hHlc質粒的多克隆位點或pDSL-hpUGIP質粒的重組位點插入編碼shRNA的DNA得到的重組載體，其中，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，其中，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
[0040]優(yōu)選地，所述pLK0.1質粒的多克隆位點為Age I和EcoR I酶切位點。[0041 ] 優(yōu)選地，所述pEN-hHlc質粒的多克隆位點為BamHI和XhoI酶切位點。
[0042]優(yōu)選地，所述pDSL-hpUGIP質粒的重組位點為attRl和attR2，其中，attRl位于pDSL-hpUGIP 質粒的 2614 ~2738bp 位點，attR2 位于 pDSL-hpUGIP 質粒的 4194 ~4318bp位點。
[0043]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的長度為21~27bp。
[0044]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2所示。
[0045]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA的含有SEQ ID NO: 3或4所示的核苷酸序列。
[0046]具體地，在此優(yōu)選條件下，所述SEQ ID NO:3 (5，_3，)為:
[0047]GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAACAGC TTTTT ；
[0048]所述SEQ ID NO:4 (5，_3，)為:
[0049]AAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAA ACAGC。
[0050]進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID N0:3和4所示的核苷酸序列的5’端或3’端具有酶切位點。
[0051]更進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID NO:3和4所示的核苷酸序列的5’端的酶切位點分別為 Age I 和 EcoR I。
[0052]在此優(yōu)選條件下，所述編碼shRNA的DNA具有如SEQ ID N0:5或6所示的核苷酸序列。
[0053]具體地，所述SEQ ID NO:5 (5，_3，)為:
[0054]CCGGGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAA CAGCTTTTTG ；
[0055]所述SEQ ID NO:6 (5，_3，)為:
[0056]AATTCAAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTT CTTAAACAGC。
[0057]在此優(yōu)選條件下，將目的基因VPSll-shRNA插入到慢病毒pLK0.1質粒的Age I和EcoR I 位點，得到 pLK0.1-VPS11-shRNA 載體。
[0058]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA還包括RNA聚合酶III啟動子。
[0059]進一步優(yōu)選地,所述RNA聚合酶III啟動子為人源的U6啟動子或人源的Hl啟動子。
[0060]進一步優(yōu)選地，所述RNA聚合酶III啟動子為鼠源的U6啟動子或鼠源的Hl啟動子。
[0061]本發(fā)明構建的pLK0.1-VPSlΙ-shRNA慢病毒載體具有很高的感染效率以及轉錄效率，載體上編碼shRNA的DNA基因片段能通過重組作用插入宿主基因組，從而持續(xù)、穩(wěn)定地沉默VPSll的表達。
[0062]第五方面，本發(fā)明提供了一種重組慢病毒，是如第四方面所述重組載體與包膜載體psPAX2和包裝載體pMD2.G共轉染哺乳動物細胞得到的重組慢病毒。
[0063] 優(yōu)選地，本發(fā)明第五方面提供了的一種重組慢病毒，是重組載體與包膜載體psPAX2和包裝載體pMD2.G共轉染哺乳動物細胞得到的重組慢病毒，其中，所述重組載體為在pLK0.1質粒的多克隆位點插入編碼shRNA的DNA得到的重組載體，其中，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
[0064]優(yōu)選地，所述pLK0.1質粒的多克隆位點為Age I和EcoR I酶切位點。[0065]優(yōu)選地，所述pEN-hHlc質粒的多克隆位點為BamHI和XhoI酶切位點。
[0066]優(yōu)選地，所述pDSL-hpUGIP質粒的重組位點為為attRl和attR2，其中，attRl位于pDSL-hpUGIP 質粒的 2614 ~2738bp 位點，attR2 位于 pDSL-hpUGIP 質粒的 4194 ~4318bp位點。
[0067]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的長度為21~27bp。
[0068]優(yōu)選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2所示。
[0069]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA的含有SEQ ID NO: 3或4所示的核苷酸序列。
[0070]具體地，在此優(yōu)選條件下，所述SEQ ID NO:3 (5，_3，)為: [0071]GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAACAGC TTTTT ；
[0072]所述SEQ ID NO:4 (5，_3，)為:
[0073]AAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAA ACAGC。
[0074]進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID N0:3和4所示的核苷酸序列的5’端或3’端具有酶切位點。
[0075]更進一步優(yōu)選地，所述SEQ ID NO:3和4所示的核苷酸序列的5’端的酶切位點分別為 Age I 和 EcoR I。
[0076]在此優(yōu)選條件下，所述編碼shRNA的DNA具有如SEQ ID N0:5或6所示的核苷酸序列。
[0077]具體地，所述SEQ ID NO:5 (5，_3，)為:
[0078]CCGGGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAA CAGCTTTTTG ；
[0079]所述SEQ ID NO:6 (5，_3，)為:
[0080]AATTCAAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTT CTTAAACAGC。
[0081]在此優(yōu)選條件下，將目的基因VPSll-shRNA插入到慢病毒pLK0.1質粒的Age I和EcoR I 位點，得到 pLK0.1-VPS11-shRNA 載體。
[0082]優(yōu)選地，所述編碼shRNA的DNA還包括RNA聚合酶III啟動子。
[0083]進一步優(yōu)選地,所述RNA聚合酶III啟動子為人源的U6啟動子或人源的Hl啟動子。
[0084]進一步優(yōu)選地，所述RNA聚合酶III啟動子為鼠源的U6啟動子或鼠源的Hl啟動子。
[0085]優(yōu)選地，將本發(fā)明提供的pLK0.1-VPSl Ι-shRNA慢病毒表達載體和包裝載體PSPAX2以及包膜載體pMD2.G轉染293T細胞進行慢病毒包裝，即可得到所述重組慢病毒。
[0086]本發(fā)明通過將編碼VPSll-shRNA的DNA構建到慢病毒載體的多克隆位點之間或重組位點之間，得到重組慢病毒表達載體后，通過轉染細胞、篩選穩(wěn)定表達細胞系，可構建得到穩(wěn)定表達的細胞系，實現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長期的表達，非常適合于對VPSll的RNA干擾研究。
[0087]此外，本發(fā)明提供的慢病毒載體還可連同慢病毒包裝質粒一起侵染宿主細胞后，得到有活性的能夠轉錄VPSll-shRNA的重組慢病毒。所述重組慢病毒侵染宿主細胞后，能將編碼VPSlΙ-shRNA的基因整合到宿主細胞基因組，有助于編碼VPSlΙ-shRNA的基因穩(wěn)定、長期地在宿主細胞內進行轉錄，從而得到小分子干擾RNA，對VPSll的mRNA進行降解，并導致基因沉默效應，降低VPSll的表達水平。[0088]本發(fā)明提供的重組慢病毒不僅具有很高的感染效率，還具有更廣泛的宿主范圍，能侵染神經元、肌細胞、肝細胞、腫瘤細胞、內皮細胞等多種類型的細胞，又很少引發(fā)機體的免疫反應，應用范圍十分廣泛。
[0089]第六方面，本發(fā)明提供了一種宿主細胞，包括如第一方面所述的小分子干擾RNA、如第二方面所述的shRNA、如第三方面所述的編碼shRNA的DNA、如第四方面所述的重組載體和如第五方面所述的重組慢病毒中的至少一種。
[0090]優(yōu)選地，所述宿主細胞為293T細胞或Hela細胞。
[0091]優(yōu)選地，所述宿主細胞為穩(wěn)定敲低VPSll的表達水平的細胞系。
[0092]進一步優(yōu)選地，所述宿主細胞為穩(wěn)定敲低VPSll的表達水平的Hela細胞系。
[0093]第七方面，本發(fā)明提供了一種如第一方面所述的小分子干擾RNA、如第二方面所述的shRNA、如第三方面所述的編碼shRNA的DNA、如第四方面所述的重組載體或如第五方面所述的重組慢病毒在制備抑制突觸融合蛋白VPSll基因表達的藥物中的應用。
[0094]本發(fā)明提供的所述小分子干擾RNA、shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒或宿主細胞及其應用具有如下有益效果:
[0095]本發(fā)明提供的編碼shRNA的DNA構建到慢病毒載體的多克隆序列位點之間或重組位點之間可得到重組慢病毒載體，該重組慢病毒載體轉染宿主細胞后，或連同慢病毒包裝質粒一起侵染宿主細胞后，能將編碼VPSll-shRNA的基因整合到宿主細胞基因組，有助于編碼VPSll-shRNA的基因穩(wěn)定、長期地在宿主細胞內進行轉錄得到VPSll-shRN ；
[0096]本發(fā)明提供的VPSll-shRNA經過宿主細胞加工后可生成能沉默VPSll表達的小分子干擾RNA ；
[0097]本發(fā)明提供的小分子干擾RNA能靶向突觸融合蛋白VPSll的mRNA，并導致所述mRNA降解，并導致基因沉默效應，降低VPSll的表達水平。
[0098]綜上，本發(fā)明為降低VPSll的表達水平提供了一種有效的RNA干擾方案，該方案優(yōu)選為采用本發(fā)明提供的小分子干擾RNA、shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒或宿主細胞進行RNA干擾。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0099]圖1為本發(fā)明實施例采用的的pLK0.1載體的質粒圖譜；
[0100]圖2為本發(fā)明實施例4提供的Hela細胞VPSll的mRNA的RT-PCR檢測結果；
[0101]圖3為本發(fā)明實施例4提供的Hela細胞VPSll表達量的western blot檢測結果。
【具體實施方式】
[0102]以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發(fā)明的保護范圍。 [0103]下述實施例中所用的方法如無特別說明均為常規(guī)方法，具體步驟可參見:((Molecular Cloning:A Laboratory Manual K Sambrookj J., Russell, David W., MolecularCloning:A Laboratory Manual, 3rd edition，2001，NY，Cold Spring Harbor)。所用引物及DNA序列均由英濰捷基(上海)貿易有限公司合成。[0104]本發(fā)明采用的pLK0.1載體購自Open Biosystems公司，pLK0.1載體的質粒圖譜分別如圖1所示；oligo dT、各種限制性內切酶和Taq酶均購自TaKaRa公司，T4DNA連接酶購自NEB公司，膠回收試劑盒和質粒少量抽提試劑盒購自OMEGA公司，質粒大量抽提試劑盒購自Nucleo Bond公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清均購自HyClone公司；轉染試劑Magetran購自Origene公司；倒置顯微鏡為Olympus產品，熒光倒置顯微鏡為Nikon公司產品。
[0105]本發(fā)明實施例的Hela細胞培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基。
[0106]若無特別說明，本發(fā)明采用的其他試劑均為市售商品。
[0107]實施例1
[0108]一種制備編碼VPSll-shRNA的DNA的方法，包括如下步驟:
[0109]根據(jù)GeneBank序列庫中已有的人VPSll序列和shRNA設計原則，利用siRNA在線設計工具(http://www.sirnawizard.com/index, php)對人 VPSll 序列的編碼 DNA (干涉片段)進行設計，并在NCBI網(wǎng)站對設計的片段進行BLAST驗證，保證人的其它基因(VPS11除外)中沒有此片段的同源序列，得到如下序列:
[0110]VPSll-shRNA (SEQ ID NO:3) (5，-3，):
[0111]GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAACAGC TTTTT ；
[0112] VPSll-shRNA (SEQ ID N0:4) (5’ -3’):
[0113]AAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAAC AGC ；
[0114]并分別引入限制性內切酶Age I和EcoR I的酶切位點，合成得到如下VPSll-shRNA的引物序列:
[0115]VPSl 1-shRNA-F (SEQ ID N0:5) (5’-3’):
[0116]CCGG GCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTTAAA CAGCTTTTT Q；
[0117]VPSl1-shRNA-R (SEQ ID NO:6) (5，-3，):
[0118]AAAAAGCTGTTTAAGAAGAACCTGTTCTCGAGAACAGGTTCTTCTT AAACAGC ；
[0119]在所述SEQ ID N0:5和SEQ ID NO:6中，下劃線部分分別為Age I和EcoR I的酶切位點。
[0120]實施例2
[0121]一種慢病毒重組載體pLK0.1-VPSl Ι-shRNA的構建方法，通過應用DNA亞克隆技術的方式，將合成的干涉片段VPSl1-ShRNA-F和VPSll_shRNA-R進行混合并退火后，通過粘性末端連接到載體pLK0.1的Age I和EcoR I多克隆微點，得到pLK0.1-VPSl 1-shRNA慢病毒重組載體，將得到慢病毒重組載體pLK0.1-VPSl Ι-shRNA進行測序鑒定。
[0122]具體包括以下步驟:
[0123]1、干涉片段退火
[0124]將新合成的成對干涉片段溶解為50uM溶液，分別吸取IOuL于PCR管中混勻后，放入95°C水浴鍋lOmin，隨即關閉水域自然降溫至室溫。
[0125]反應體系如下:
[0126]
總體系20 μ I
[0127]
【權利要求】
1.一種小分子干擾RNA，其特征在于:所述小分子干擾RNA具有與翻譯突觸融合蛋白VPSll的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19~27bp。
2.如權利要求1所述的小分子干擾RNA，其特征在于，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如 SEQ ID NO:1 或 SEQ ID NO: 2 所示。
3.一種shRNA，為具有莖環(huán)結構的單鏈RNA，其特征在于，所述shRNA具有如權利要求1或權利要求2所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。
4.一種編碼shRNA的DNA，其特征在于，所述shRNA具有如權利要求1或權利要求2所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。
5.如權利要求4所述的編碼shRNA的DNA，其特征在于，所述編碼shRNA的DNA的含有SEQ ID N0:3或SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
6.如權利要求4所述的編碼shRNA的DNA，其特征在于，所述編碼shRNA的DNA還包括RNA聚合酶III啟動子。
7.—種重組載體，其特征在于，所述重組載體為在pLK0.1質粒的多克隆位點、pEN-hHlc質粒的多克隆位點或pDSL-hpUGIP質粒的重組位點插入如權利要求4~6任一所述的編碼shRNA的DNA得到的重組載體。
8.—種重組慢病毒，其特征在于，是如權利要求7的b)所述的重組載體與包膜載體psPAX2和包裝載體pMD2.G共轉染哺乳動物細胞得到的重組慢病毒。
9.一種宿主細胞，其特征在于，包括如權利要求1所述的小分子干擾RNA、如權利要求3所述的shRNA、如權利要求4所述的編碼shRNA的DNA、如權利要求7的b)所述的重組載體和如權利要求8的所述的重組慢病毒中的至少一種。`
10.如權利要求1所述的小分子干擾RNA、如權利要求3所述的shRNA、如權利要求4所述的編碼shRNA的DNA、如權利要求7的b)所述的重組載體和如權利要求8的所述的重組慢病毒中的至少一種在制備抑制突觸融合蛋白VPSll基因表達的藥物中的應用。
【文檔編號】C12N5/10GK103695427SQ201310746080
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權日:2013年12月30日
【發(fā)明者】楊詩涵, 俞謙, 李紅昌 申請人:深圳先進技術研究院