一種基于氣體熱脹冷縮的微流道pcr擴(kuò)增系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括氣體腔、隔熱層、退火低溫區(qū)、延伸適溫區(qū)、熱變高溫區(qū)、PCR試劑、半導(dǎo)體加熱制冷片和單片機(jī)；整個(gè)系統(tǒng)利用半導(dǎo)體帕爾帖原理，通過互換電極來使半導(dǎo)體制冷片加熱技術(shù)實(shí)現(xiàn)氣體的熱脹冷縮，從而改變?cè)谡w微通道中PCR試劑兩邊壓強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)PCR試劑在三個(gè)不同溫區(qū)內(nèi)移動(dòng)，達(dá)到PCR試劑的擴(kuò)增循環(huán)；本系統(tǒng)不僅可以減少相應(yīng)的芯片誤差，而且對(duì)于微型系統(tǒng)結(jié)構(gòu)中，壓強(qiáng)的作用更為明顯，大大提高了對(duì)PCR試劑的控制能力，其主要適用于失重條件下的空間范圍內(nèi)應(yīng)用的PCR擴(kuò)增工作和微型結(jié)構(gòu)的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。
【專利說明】一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，屬于生物學(xué)和分析化學(xué)及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著我國(guó)載人航天技術(shù)的日趨成熟，航天任務(wù)周期的逐漸延長(zhǎng)，對(duì)航天員健康保障的要求也會(huì)越來越高。航天器中處于非監(jiān)控狀態(tài)的微生物嚴(yán)重威脅航天員的健康。長(zhǎng)期航天飛行中，微生物菌群的增長(zhǎng)及菌株變異會(huì)影響儀器設(shè)備的性能及工作環(huán)境條件，對(duì)航天器及其儀器設(shè)備的正常運(yùn)行產(chǎn)生危害。為了預(yù)防空間飛行中感染性疾病的發(fā)生、傳播和進(jìn)行有效治療，必須嚴(yán)密監(jiān)控航天器中的微生物。其中PCR擴(kuò)增技術(shù)正是檢測(cè)系統(tǒng)的反應(yīng)核心技術(shù)之一，一個(gè)合理的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)不僅增加了設(shè)備的便攜性、實(shí)用性，而且提高了PCR擴(kuò)增效率。
[0003]PCR—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外模擬自然DNA復(fù)制過程的核酸擴(kuò)增技術(shù)，即無(wú)性細(xì)胞分子克隆技術(shù)，其原理類似于天然DNA的復(fù)制，是體外酶促反應(yīng)選擇性地合成特異性DNA的一種方法。反應(yīng)步驟是人工合成一對(duì)寡核苷酸引物與特異擴(kuò)增DNA片段兩條鏈的兩端序列分別互補(bǔ)，由高溫(在攝氏96度左右)熱變性、低溫(在攝氏55度左右)復(fù)性和適溫(在攝氏72度左右)延伸組成一個(gè)周期循環(huán)進(jìn)行，使DNA片段得以迅速擴(kuò)增。在合適條件下，這種循環(huán)不斷重復(fù)，前一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物DNA可作為后一個(gè)循環(huán)的模板DNA參與DNA的合成，使產(chǎn)物DNA的量按2η方式擴(kuò)增。從理論上講經(jīng)過三十多次的循環(huán)反應(yīng)，DNA擴(kuò)增倍數(shù)為IO6~109。PCR技術(shù)的實(shí)用性，使得其應(yīng)用廣泛，多用于醫(yī)學(xué)應(yīng)用來檢測(cè)細(xì)菌、病毒類疾病；診斷 遺傳疾病；診斷腫瘤；應(yīng)用于法醫(yī)物證學(xué)。
[0004]半導(dǎo)體加熱制冷原理一帕爾帖原理，即利用當(dāng)兩種不同的導(dǎo)體組成的電路且通有直流電時(shí)，在接頭處除焦耳熱以外還會(huì)釋放出某種其它的熱量，而另一個(gè)接頭處則吸收熱量，且帕爾帖效應(yīng)所引起的這種現(xiàn)象是可逆的，改變電流方向時(shí)，放熱和吸熱的接頭也隨之改變，吸收和放出的熱量與電流強(qiáng)度成正比，且與兩種導(dǎo)體的性質(zhì)及熱端的溫度有關(guān)。金屬材料的帕爾帖效應(yīng)比較微弱，而半導(dǎo)體材料則要強(qiáng)得多，因而得到實(shí)際應(yīng)用的溫差電制冷器件都是由半導(dǎo)體材料制成的。帕爾帖原理的物理原理為:電荷載體在導(dǎo)體中運(yùn)動(dòng)形成電流，由于電荷載體在不同的材料中處于不同的能級(jí)，當(dāng)它從高能級(jí)想低能級(jí)運(yùn)動(dòng)時(shí)，就會(huì)釋放出多余的熱量。反之，就需要從外界吸收熱量(即表現(xiàn)為制冷)。半導(dǎo)體電子制冷又稱熱電制冷，或者溫差電制冷，它是利用"帕爾帖效應(yīng)"的一種制冷方法，與壓縮式制冷和吸收式制冷并稱為世界三大制冷方式。
[0005]在PCR反應(yīng)過程中，PCR產(chǎn)物是隨著循環(huán)次數(shù)的增長(zhǎng)呈指數(shù)增加的狀態(tài)，所以在微型生物芯片中,往往起始樣品中的所要檢測(cè)的目標(biāo)DNA數(shù)量太少，需要不斷的復(fù)制,才能達(dá)到檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)；研究表明PCR擴(kuò)增循環(huán)進(jìn)行40次循環(huán)后，到達(dá)了一個(gè)生物曲線峰值，之后如果再進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，目標(biāo)產(chǎn)物也不會(huì)再有明顯增加，所以實(shí)驗(yàn)一般都取40次PCR擴(kuò)增循環(huán)。[0006]目前市場(chǎng)上有很多應(yīng)用PCR擴(kuò)增反應(yīng)的儀器。但是這些儀器都過于龐大不易攜帶并且都受到重力限制，無(wú)法適應(yīng)空間作業(yè)要求?，F(xiàn)在PCR擴(kuò)增反應(yīng)儀器都是應(yīng)用單片機(jī)對(duì)步進(jìn)電機(jī)的控制操作，實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR試劑在三個(gè)溫區(qū)的移動(dòng)，但是其中控制電路中的AD芯片與DA芯片存在自己本身的延時(shí)誤差，由于PCR擴(kuò)增反應(yīng)是一個(gè)40次循環(huán)的反復(fù)過程，所以由于每一個(gè)循環(huán)都存在一部分不可避免誤差性，導(dǎo)致40次反復(fù)循環(huán)后嚴(yán)重影響了擴(kuò)增結(jié)果。因此對(duì)于微型系統(tǒng)結(jié)構(gòu)造成的誤差損失更為明顯。而且如果為提高電路控制芯片的質(zhì)量減少客觀誤差的同時(shí)，卻提高了設(shè)備的成本并且效果并不明顯。此外由于電路的本身體積限制，降低了系統(tǒng)的集成性，不能后續(xù)為檢測(cè)與采集系統(tǒng)增添外設(shè)。 [0007]因此，本發(fā)明提出了一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，該系統(tǒng)的氣體腔被半導(dǎo)體加熱制冷片包裹，使得在氣體腔中的氣體溫度能完全快速的升溫/降溫，通過改變?cè)噭﹥蛇呂⑼ǖ纼?nèi)的壓強(qiáng)差來實(shí)現(xiàn)PCR試劑在整個(gè)微通道中移動(dòng)的目的；運(yùn)用氣體熱脹冷縮原理通過PCR試劑兩邊不同的壓強(qiáng)來控制的移動(dòng)，不僅可以減少相應(yīng)的芯片誤差，而且對(duì)于微型系統(tǒng)結(jié)構(gòu)中，壓強(qiáng)的作用更為明顯，大大提高了對(duì)PCR試劑的控制能力，其主要適用于失重條件下的空間范圍內(nèi)應(yīng)用的PCR擴(kuò)增工作和微型結(jié)構(gòu)的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供了一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，主要用于失重條件下的空間范圍內(nèi)應(yīng)用的PCR擴(kuò)增工作和微型結(jié)構(gòu)的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng)的后續(xù)搭建，目的在于將微通道循環(huán)PCR擴(kuò)增模塊和半導(dǎo)體加熱制冷模塊集成，實(shí)現(xiàn)適用于空間作業(yè)要求的便攜式微型化PCR熒光實(shí)時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)，達(dá)到功能集成、結(jié)構(gòu)縮微、重量輕體積小全自動(dòng)檢測(cè)的目標(biāo)。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括氣體腔、隔熱層、退火低溫區(qū)、延伸適溫區(qū)、熱變高溫區(qū)、PCR試劑、半導(dǎo)體加熱制冷片和單片機(jī)；系統(tǒng)的動(dòng)力裝置包括氣體腔、半導(dǎo)體加熱制冷片和單片機(jī)；微通道中包括三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)、延伸適溫區(qū)、熱變高溫區(qū)；其中，系統(tǒng)的動(dòng)力裝置主體為兩個(gè)氣體腔，氣體腔一側(cè)與隔熱層相接觸，另一側(cè)由半導(dǎo)體加熱片環(huán)形包裹，半導(dǎo)體加熱片與單片機(jī)連接并由其控制；三個(gè)溫區(qū)的退火低溫區(qū)、延伸適溫區(qū)、熱變高溫區(qū)各自中間處設(shè)有隔熱層，以保證三個(gè)溫區(qū)的溫度恒定；兩個(gè)溫區(qū)連接處的隔熱層設(shè)有PCR試劑內(nèi)通過的微通道口。
[0010]整個(gè)系統(tǒng)利用半導(dǎo)體帕爾帖原理，通過互換電極來使半導(dǎo)體制冷片加熱技術(shù)實(shí)現(xiàn)氣體的熱脹冷縮，從而改變?cè)谡w微通道中PCR試劑兩邊壓強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)PCR試劑在三個(gè)不同溫區(qū)內(nèi)移動(dòng)，達(dá)到PCR試劑的擴(kuò)增循環(huán)；利用一個(gè)氣體腔為系統(tǒng)動(dòng)力的主體，類似于溫度計(jì)里液體升降原理，而且微型器皿里的氣體壓強(qiáng)更為明顯。氣體腔加熱的時(shí)候整個(gè)氣體膨脹，對(duì)PCR試劑產(chǎn)生向外的推力；反之氣體腔制冷的時(shí)候整個(gè)氣體收縮，對(duì)PCR試劑產(chǎn)生向內(nèi)的拉力。具體操作如下:將整個(gè)微通道(包括氣體腔)內(nèi)注滿了膨脹系數(shù)大的氣體或易汽化的氣體，之后把PCR試劑加入相應(yīng)的初始上下兩個(gè)微通道的退火低溫區(qū)當(dāng)中；其中試劑不與氣體相溶、相反應(yīng)，并且由于微通道毛細(xì)吸附性，微通道中會(huì)出現(xiàn)一段PCR試劑，通過加熱一邊的氣體腔并制冷另一邊的氣體腔來完成PCR試劑向制冷的一方的方向移動(dòng)，完成在微通道中三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)一延伸適溫區(qū)一熱變高溫區(qū)的一次循環(huán)；然后由單片機(jī)控制的半導(dǎo)體制冷片改變其內(nèi)部壓強(qiáng)即將原來加熱的一方變?yōu)橹评洳⒅评涞囊环阶優(yōu)榧訜?，使將PCR試劑在微通道內(nèi)由再次回到退火低溫區(qū)，再進(jìn)行下一次循環(huán)工作任務(wù)。循環(huán)是由退火低溫區(qū)一延伸適溫區(qū)一熱變高溫區(qū)之后再退火低溫區(qū)一延伸適溫區(qū)一熱變高溫區(qū)不斷進(jìn)行的。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果。
[0012]1、經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得出系統(tǒng)提高PCR擴(kuò)增反應(yīng)的效率，這種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其實(shí)驗(yàn)裝置的搭建滿足“功能集成結(jié)構(gòu)微縮”易于便攜的技術(shù)特點(diǎn)，并且運(yùn)用單片機(jī)對(duì)半導(dǎo)體加熱制冷片的合理算法控制，使得PCR試劑在三個(gè)溫度區(qū)中準(zhǔn)確移動(dòng)。
[0013]2、相比傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增裝置中在其溫度區(qū)中部分的PCR試劑需要充分反應(yīng)才可以繼續(xù)移動(dòng)，導(dǎo)致PCR擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)間過多的浪費(fèi)在PCR試劑的移動(dòng)時(shí)間上與PCR試劑反應(yīng)的等待時(shí)間上。所以對(duì)于此系統(tǒng)中，不僅PCR試劑可以在一個(gè)溫度區(qū)內(nèi)完全反應(yīng)之后立刻進(jìn)入下一個(gè)溫度區(qū)進(jìn)行反應(yīng)，而且對(duì)于雙對(duì)稱結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，才可以分別反應(yīng)兩種不同的PCR試劑，因此提高了 PCR擴(kuò)增反應(yīng)的效率。
[0014]3、經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得出此系統(tǒng)改善了單片機(jī)系統(tǒng)的控制算法的同時(shí)，節(jié)約資源，而且系統(tǒng)更加微型化；對(duì)于傳統(tǒng)由電機(jī)驅(qū)動(dòng)的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，由于步進(jìn)電機(jī)的大小所限很難將整個(gè)系統(tǒng)做的微型化，而且由于傳統(tǒng)控制電路中的AD芯片與DA芯片自帶的系統(tǒng)誤差，對(duì)于微型化系統(tǒng)芯片小的誤差也會(huì)放大化，而且經(jīng)過40次循環(huán)，會(huì)把每一次誤差成倍數(shù)增加；所以本系統(tǒng)中對(duì)于半導(dǎo)體加熱制冷片進(jìn)行控制，不僅不需要對(duì)步進(jìn)電機(jī)的復(fù)雜控制，只是對(duì)于溫度的控制，大大減少了系統(tǒng)的控制電路體積，而且不免了芯片的固定誤差，增大了單片機(jī)的控制精度，因此本系統(tǒng)可以在增加系統(tǒng)效率的同時(shí)將體積做的更加微型化。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)總結(jié)構(gòu)圖。
[0016]圖2為系統(tǒng)中的半導(dǎo)體加熱制冷模塊側(cè)面剖視圖。
[0017]圖3為基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)工作原理圖
[0018]圖中:1、氣體腔，2、隔熱層，3、退火低溫區(qū)，4、延伸適溫區(qū)，5、熱變高溫區(qū)，6、PCR試劑，7、半導(dǎo)體加熱制冷片,8、單片機(jī)。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0020]如圖1所示為基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)總結(jié)構(gòu)圖，圖2為系統(tǒng)中的半導(dǎo)體加熱制冷模塊側(cè)面剖視圖，該系統(tǒng)包括氣體腔1、隔熱層2、退火低溫區(qū)3、延伸適溫區(qū)4、熱變高溫區(qū)5、PCR試劑6、半導(dǎo)體加熱制冷片7和單片機(jī)8 ;系統(tǒng)的動(dòng)力裝置包括氣體腔1、半導(dǎo)體加熱制冷片7和單片機(jī)8 ;微通道中包括三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)3、延伸適溫區(qū)4、熱變高溫區(qū)5 ;其中，系統(tǒng)的動(dòng)力裝置主體為兩個(gè)氣體腔I，氣體腔I 一側(cè)與隔熱層2相接觸，另一側(cè)由半導(dǎo)體加熱片7環(huán)形包裹，半導(dǎo)體加熱片7與單片機(jī)8連接并由其控制；三個(gè)溫區(qū)的退火低溫區(qū)3、延伸適溫區(qū)4、熱變高溫區(qū)5各自中間處設(shè)有隔熱層2，以保證三個(gè)溫區(qū)的溫度恒定； 兩個(gè)溫區(qū)連接處的隔熱層2設(shè)有PCR試劑6內(nèi)通過的微通道口。[0021]如圖3所示為基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)工作原理圖，整個(gè)系統(tǒng)利用半導(dǎo)體帕爾帖原理，通過互換電極來使半導(dǎo)體制冷片7加熱技術(shù)實(shí)現(xiàn)氣體的熱脹冷縮，從而改變?cè)谡w微通道中PCR試劑6兩邊壓強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)PCR試劑6在三個(gè)不同溫區(qū)內(nèi)移動(dòng)，達(dá)到 PCR試劑6的擴(kuò)增循環(huán)；利用一個(gè)氣體腔I為系統(tǒng)動(dòng)力的主體，類似于溫度計(jì)里液體升降原理，而且微型器皿里的氣體壓強(qiáng)更為明顯。氣體腔I加熱的時(shí)候整個(gè)氣體膨脹，對(duì)PCR試劑6產(chǎn)生向外的推力；反之氣體腔I制冷的時(shí)候整個(gè)氣體收縮，對(duì)PCR試劑6產(chǎn)生向內(nèi)的拉力。具體操作如下:將整個(gè)微通道(包括氣體腔I)內(nèi)注滿了膨脹系數(shù)大的氣體或易汽化的氣體，之后把PCR試劑6加入相應(yīng)的初始上下兩個(gè)微通道的退火低溫區(qū)3當(dāng)中；其中試劑不與氣體相溶、相反應(yīng)，并且由于微通道毛細(xì)吸附性，微通道中會(huì)出現(xiàn)一段PCR試劑6，通過加熱一邊的氣體腔并制冷另一邊的氣體腔來完成PCR試劑6向制冷的一方的方向移動(dòng)，完成在微通道中三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)3—延伸適溫區(qū)4一熱變高溫區(qū)5的一次循環(huán)；然后由單片機(jī)8控制的半導(dǎo)體制冷片7改變其內(nèi)部壓強(qiáng)即將原來加熱的一方變?yōu)橹评洳⒅评涞囊环阶優(yōu)榧訜幔箤CR試劑6在微通道內(nèi)由再次回到退火低溫區(qū)3，再進(jìn)行下一次循環(huán)工作任務(wù)。循環(huán)是由退火低溫區(qū)3—延伸適溫區(qū)4一熱變高溫區(qū)5之后再退火低溫區(qū)3—延伸適溫區(qū)4一熱變高溫區(qū)5不斷進(jìn)行 的。
【權(quán)利要求】
1.一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于:該系統(tǒng)包括氣體腔(I)、隔熱層(2)、退火低溫區(qū)(3)、延伸適溫區(qū)(4)、熱變高溫區(qū)(5)、PCR試劑(6)、半導(dǎo)體加熱制冷片(7)和單片機(jī)(8);系統(tǒng)的動(dòng)力裝置包括氣體腔(I)、半導(dǎo)體加熱制冷片(7)和單片機(jī)(8);微通道中包括三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)(3)、延伸適溫區(qū)(4)、熱變高溫區(qū)(5);其中，系統(tǒng)的動(dòng)力裝置主體為兩個(gè)氣體腔(1)，氣體腔(I) 一側(cè)與隔熱層(2)相接觸，另一側(cè)由半導(dǎo)體加熱片(7)環(huán)形包裹，半導(dǎo)體加熱片(7)與單片機(jī)(8)連接并由其控制；三個(gè)溫區(qū)的退火低溫區(qū)(3)、延伸適溫區(qū)(4)、熱變高溫區(qū)(5)各自中間處設(shè)有隔熱層(2);兩個(gè)溫區(qū)連接處的隔熱層(2 )內(nèi)設(shè)有PCR試劑(6 )通過的微通道口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣體熱脹冷縮的微流道PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于:整個(gè)系統(tǒng)利用半導(dǎo)體帕爾帖原理，通過互換電極來使半導(dǎo)體制冷片(7)加熱技術(shù)實(shí)現(xiàn)氣體的熱脹冷縮，從而改變?cè)谡w微通道中PCR試劑(6)兩邊壓強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)PCR試劑(6)在三個(gè)不同溫區(qū)內(nèi)移動(dòng)，達(dá)到PCR試劑(6)的擴(kuò)增循環(huán)；利用一個(gè)氣體腔(I)為系統(tǒng)動(dòng)力的主體，氣體腔(I)加熱的時(shí)候整個(gè)氣體膨脹，對(duì)PCR試劑(6 )產(chǎn)生向外的推力；反之氣體腔(I)制冷的時(shí)候整個(gè)氣體收縮，對(duì)PCR試劑(6 )產(chǎn)生向內(nèi)的拉力；將整個(gè)微通道內(nèi)注滿了膨脹系數(shù)大的氣體或易汽化的氣體，之后把PCR試劑(6)加入相應(yīng)的初始上下兩個(gè)微通道的退火低溫區(qū)(3)當(dāng)中；其中試劑不與氣體相溶、相反應(yīng)，并且由于微通道毛細(xì)吸附性，微通道中會(huì)出現(xiàn)一段PCR試劑(6)，通過加熱一邊的氣體腔并制冷另一邊的氣體腔來完成PCR試劑(6)向制冷的一方的方向移動(dòng)，完成在微通道中三個(gè)溫區(qū)即退火低溫區(qū)(3) —延伸適溫區(qū)(4) 一熱變高溫區(qū)(5)的一次循環(huán)；然后由單片機(jī)(8)控制的半導(dǎo)體制冷片(7)改變其內(nèi)部壓強(qiáng)即將原來加熱的一方變?yōu)橹评洳⒅评涞囊环阶優(yōu)榧訜?，使將PCR試劑(6)在微通道內(nèi)由再次回到退火低溫區(qū)(3)，再進(jìn)行下一次循環(huán)工作任務(wù)；循環(huán)是由退火低溫區(qū)(3) —延伸適溫區(qū) (4)一熱變高溫區(qū)(5)之后再退火低溫區(qū)(3) —延伸適溫區(qū)(4) 一熱變高溫區(qū)(5)不斷進(jìn)行的。
【文檔編號(hào)】C12M1/38GK103614294SQ201310606738
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月25日
【發(fā)明者】吳堅(jiān), 于倫, 王富吉, 陳濤, 鄭楊 申請(qǐng)人:北京工業(yè)大學(xué)