一種卡介菌多糖核酸制備過程中的斜面培養(yǎng)新工藝的制作方法
【專利摘要】一種卡介菌多糖核酸制備過程中的斜面培養(yǎng)新工藝，屬于生物制品生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明提供了卡介菌多糖核酸原粉制備過程中的培養(yǎng)工藝，其特征在于：從源頭上控制馬鈴薯質(zhì)量，選取荷蘭7號馬鈴薯為生產(chǎn)原材料，并將切好的馬鈴薯塊置于1%的NaHCO3溶液中浸泡30分鐘，用1%NaHCO3溶液浸泡后的馬鈴薯，起到固定淀粉作用，避免收集菌體時，將土豆混入其中，提高卡介菌多糖核酸的質(zhì)量；從培養(yǎng)方式上，采用固體培養(yǎng)和浮膜培養(yǎng)結(jié)合的方式，采用30-35°斜面培養(yǎng)的方式，這種斜面培養(yǎng)新工藝大大提高了菌體的收獲率。使菌體收率從單管收率4g提高到6.5-7.0g。
【專利說明】一種卡介菌多糖核酸制備過程中的斜面培養(yǎng)新工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種卡介菌多糖核酸制備過程中的一種斜面培養(yǎng)新工藝。屬于生物制品生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]卡介菌多糖核酸是一種有效的新型免疫調(diào)節(jié)劑。研究表明，卡介菌多糖核酸通過調(diào)節(jié)機體內(nèi)的細胞免疫、體液免疫、刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，激活單核-巨噬細胞功能，增強自然殺傷細胞功能來增強機體抗病能力；通過穩(wěn)定肥大細胞，封閉IgE功能,減少脫顆粒細胞釋放活性物質(zhì)，以及具有抗乙酰膽堿所致的支氣管痙攣作用，達到抗過敏及平喘作用。通過卡介菌多糖核酸對T細胞致敏，產(chǎn)生細胞介導的傳染免疫，致敏T淋巴細胞在抗原的特異性刺激下分化，增值并合成，釋放一系列淋巴因子，從而發(fā)揮細胞免疫功能，引起特異性抗體生成及對疣體的免疫排斥而抗病毒作用；還可以通過增強機體內(nèi)巨噬細胞的自然毒效應和誘導干擾素的形成。
[0003]現(xiàn)有的卡介菌多糖核酸原粉制備全過程是培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)、收菌、破菌、提取、透析、精制和制備干粉。其中培養(yǎng)這道工序，直接關(guān)系到原粉的收率和質(zhì)量，是至關(guān)重要的。目前國內(nèi)生產(chǎn)廠家一般采用原始的培養(yǎng)方法?，F(xiàn)有的卡介菌多糖核酸原粉制備過程中培養(yǎng)方法是:將馬鈴薯切成長約40mm馬鈴薯段，將已配好的液體培養(yǎng)基加至菌種管，取備用的馬鈴薯塊，將馬鈴薯放入菌種管內(nèi)，然后蓋好硅膠塞，經(jīng)過接種，傳代，將接菌后的蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)?？ń榫w收集、破菌、提取、精制獲得卡介菌多糖、核酸。
[0004]原始的工藝由于從馬鈴薯的選種、培養(yǎng)的方式不科學，使菌體的單管收率很低，僅為4g左右。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了卡介菌多糖核酸原粉制備過程中培養(yǎng)工藝，從原料的選材上選用特殊種屬的荷蘭7號馬鈴薯，荷蘭7號馬鈴薯生產(chǎn)是從核心種薯繁育、種薯生產(chǎn)、質(zhì)量檢測、病害防治、認證到倉儲、運輸?shù)囊幌盗型晟?、嚴謹?shù)臉藴驶Ｊ?，有完善的馬鈴薯生產(chǎn)體系和質(zhì)量監(jiān)督體系，從源頭上控制馬鈴薯質(zhì)量；從培養(yǎng)方式上，我們采用30-35°斜面，固體培養(yǎng)和浮膜培養(yǎng)結(jié)合的培養(yǎng)方式，大大提高了菌體的收獲率，單管收率在6.5-7.0g。從原材料的選種到菌體的培養(yǎng)上的科學化，提高了卡介菌多糖核酸質(zhì)量和收率。
[0006]本發(fā)明具有如下優(yōu)點:
[0007]1、本發(fā)明的選材上選擇荷蘭7號馬鈴薯，提高了卡介菌多糖核酸的質(zhì)量。
[0008]2、本發(fā)明選用固體和浮膜相結(jié)合的方式培養(yǎng)，大大提高了菌體收率。
[0009]3、本發(fā)明的斜面培養(yǎng)方式提高了菌體的收率，使菌體收率從單管收率4g提高到
6.5-7.0g0【具體實施方式】
[0010]以下通過具體實施例進一步描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或者改變都將納入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
[0011]實施例1
[0012]取新鮮無芽荷蘭7號馬鈴薯和由市場購得的普通土豆，分別標記為“試驗組一”和“試驗組二”，分別用模具切成長約60mm、直徑30mm的土豆段，再用刀切成一側(cè)呈斜面的土豆塊，將切好的土豆塊置于l%NaHC03溶液中浸泡30分鐘，然后棄去NaHC03溶液，用純化水沖洗30分鐘，加適量蘇通液體培養(yǎng)基加熱至70-75°C，恒溫20分鐘，棄去液體培養(yǎng)基，備用。
[0013]將已配好的液體培養(yǎng)基加至菌種管球形凹處，取備用的土豆塊，將土豆塊厚端一側(cè)朝下放入菌種管內(nèi)，然后蓋好硅膠塞置于壓力蒸汽滅菌柜中滅菌。溫度:121°C，壓力:
0.12MPa，滅菌時間:30分鐘。
[0014]兩組分別制得菌種管120支，進行傳代斜面培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度:37±2°C ;濕度:45-75%;培養(yǎng)時間:20天。
[0015]培養(yǎng)結(jié)束后剔出污染，混濁的菌種管，收集馬鈴薯培養(yǎng)基內(nèi)表面培養(yǎng)物，兩組實驗隨機各取一百支菌種管，收集稱重對比，結(jié)果見表一。
[0016]實施例2
[0017]選取新鮮無芽荷蘭7號馬鈴薯，按實施例1方法制得菌種管240支，每120支菌種管作為一組，標記為“試驗組三”和“試驗組四”，從培養(yǎng)方式上，試驗組三我們采用30-35°斜面傾斜，實驗組四采用直立培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)后，兩組隨機各取100支菌種管集菌稱重對比，結(jié)果見表二。
[0018]表一
[0019]
【權(quán)利要求】
1.在卡介菌多糖核酸制備過程中，包括: (1)選取荷蘭7號馬鈴薯，用穿刺器刺成長約60mm，直徑30mm的土豆段，再用刀切成一側(cè)呈斜面30-35°的土豆塊； (2)將切好的土豆塊置于l%NaHC03溶液中浸泡30分鐘，然后棄去NaHC03溶液，用純化水沖洗30分鐘； (3)將液體培養(yǎng)基加至菌種管球形凹處，取備用的土豆塊，將土豆塊厚端一側(cè)朝下放入菌種管內(nèi)，并使土豆約兩公分長度浸泡在培養(yǎng)液中，然后蓋好硅膠塞置于壓力蒸汽滅菌柜中滅菌。溫度:121°C，壓力:0.12MPa，時間:30分鐘； (4)挑選在蘇 通馬鈴薯培養(yǎng)基上生長飽滿、色淺黃、形狀干皺成團、長勢良好的菌苔作為菌種，進行傳代。將接菌后的蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，菌種管放置與水平面呈30— 35°角，成斜面培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度:37±2°C ;濕度:45-75% ;培養(yǎng)時間:20~25天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1卡介菌的一種培養(yǎng)方法，其特征在于，土豆的選取為荷蘭7號馬鈴薯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1卡介菌的一種培養(yǎng)方法，其特征在于，切好的土豆塊置于溶液中浸泡30分鐘，其溶液為1%的NaHC03。
4.根據(jù)權(quán)利要求1卡介菌的一種培養(yǎng)方法，其特征在于，菌種管放置與水平面呈30—35°角，成斜面培養(yǎng)。
【文檔編號】C12R1/32GK103923851SQ201310571073
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2013年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月15日
【發(fā)明者】宮麗, 趙柏松, 張巖, 宋水燕, 孫寶華, 朱曉宇, 房麗君 申請人:吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司