液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，它由以下重量比的原料混合制成：乙酸鈉3-24、檸檬酸鈉10-26、甘油6-16、對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.02-0.07。本發(fā)明穩(wěn)定劑加入液體右旋糖苷酶后可在4℃下保存4個(gè)月后其相對(duì)酶活力保持在85%以上。本發(fā)明液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑配伍科學(xué)，穩(wěn)定效果明顯，成本低廉，維持液體右旋糖苷酶酶活高且穩(wěn)定性強(qiáng)，是一種高效的液體右旋糖苷酶穩(wěn)定劑，對(duì)海洋右旋糖苷酶液體制劑的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。
【專利說(shuō)明】液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種液體的右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，屬于生物工程領(lǐng)域；本發(fā)明還涉及穩(wěn)定劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]右旋糖苷酶(EC3.2.1.11)是一種可以水解右旋糖苷鏈內(nèi)及鏈端α -1, 6糖苷鍵的糖苷水解酶，因而常被應(yīng)用于制糖工業(yè)、血漿代用品的生產(chǎn)及牙菌斑的預(yù)防及治療等。從海洋環(huán)境出發(fā)，篩選得到一株高產(chǎn)右旋糖苷酶的海洋節(jié)桿菌，與陸源酶相比，海洋酶的耐鹽、耐堿、耐低溫等特性更利于工業(yè)化應(yīng)用，因此該酶有望成為制糖工業(yè)、血漿代用品、牙膏、漱口液生產(chǎn)工業(yè)用右旋糖苷酶。
[0003]在酶制劑工業(yè)化應(yīng)用過程中，酶不可避免需要在一定條件下進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸和儲(chǔ)存等環(huán)節(jié)，作為一種生物催化劑，特別是在常溫條件下，液體酶的活性在長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸和儲(chǔ)存過程中極易受到環(huán)境因素變化及微生物污染的影響，嚴(yán)重限制了液體右旋糖苷酶制劑的廣泛應(yīng)用。因此，研究開發(fā)一種優(yōu)質(zhì)高效且成本低廉的液體右旋糖苷酶穩(wěn)定劑，對(duì)高活性、高穩(wěn)定性右旋糖苷酶制劑的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種海洋液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，以使添加了該復(fù)合穩(wěn)定劑的海洋右旋糖苷酶在較長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸和存儲(chǔ)后仍具有較好的酶活力。
[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，其特點(diǎn)是，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸鈉3-24 ；檸檬酸鈉10-26 ；
甘油6-16; 對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.02-0.07。
[0006]本發(fā)明所述的液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑中:各原料的重量百分比優(yōu)選為: 乙酸鈉18 ； 檸檬酸鈉20 ；
甘油16 ； 對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.05。
[0007]本發(fā)明所述的液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑可以在增強(qiáng)液體右旋糖苷酶穩(wěn)定性中的應(yīng)用。在該應(yīng)用中，所述的液體右旋糖苷酶優(yōu)選由海洋細(xì)菌節(jié)桿菌發(fā)酵獲得。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下:
1.本發(fā)明液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑配伍科學(xué)，穩(wěn)定效果明顯，成本低廉，穩(wěn)定劑加入液體右旋糖苷酶后可在4°C下保存4個(gè)月后其相對(duì)酶活力保持在85%以上。25°C下保存13周，比不加復(fù)合穩(wěn)定劑的右旋糖苷酶活力殘留率由O提高到70.8%，且能較好抑制微生物的生長(zhǎng)。不加穩(wěn)定劑的酶液在60°C下處理5min時(shí)殘余酶活是未處理的20.5%，而加了穩(wěn)定劑的酶液在60°C下處理720min時(shí)殘余酶活是未處理的73.5%。不加穩(wěn)定劑的酶液25°C放置4周，37°C放置I周后，酶活完全喪失。加穩(wěn)定劑的酶液25°C放置13周，37°C放置4周，殘余酶活仍在65%以上。
[0009]2.本發(fā)明穩(wěn)定劑構(gòu)成成分簡(jiǎn)單，制備方法容易，成本低廉，維持液體右旋糖苷酶酶活高且穩(wěn)定性強(qiáng)，是一種高效的液體右旋糖苷酶穩(wěn)定劑，對(duì)海洋右旋糖苷酶液體制劑的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為加有本發(fā)明復(fù)合穩(wěn)定劑的液體海洋右旋糖苷酶的熱穩(wěn)定性圖；
圖2為未加本發(fā)明復(fù)合穩(wěn)定劑的液體海洋右旋糖苷酶熱穩(wěn)定性圖；
圖3為本發(fā)明穩(wěn)定劑對(duì)右旋糖苷酶25°C儲(chǔ)存的影響圖；
圖4為本發(fā)明穩(wěn)定劑對(duì)右旋糖苷酶37°C儲(chǔ)存的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。下述實(shí)施例是說(shuō)明的，不能以以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0012]實(shí)施例1，一種液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸鈉3 ；檸檬酸鈉10 ；
甘油6 ；對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.02。
[0013]實(shí)施例2，一種液體海洋右旋`糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸鈉24 ；檸檬酸鈉26 ；
甘油16 ；對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.07。
[0014]實(shí)施例3，一種液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸鈉10 ； 檸檬酸鈉20 ；
甘油12 ；對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.04。
[0015]實(shí)施例4，一種液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成:
乙酸鈉18 ；檸檬酸鈉20 ；
甘油16 ；對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.05。
[0016]為了考察穩(wěn)定劑對(duì)酶液保藏的效果，發(fā)明人利用本實(shí)施例的復(fù)合穩(wěn)定劑做了以下實(shí)驗(yàn)。
[0017]實(shí)驗(yàn)一:加和不加本實(shí)施例復(fù)合穩(wěn)定劑對(duì)右旋糖苷酶的熱穩(wěn)定性的影響實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見圖1和圖2,穩(wěn)定劑添加后,酶的穩(wěn)定性提高,不加穩(wěn)定劑的酶液在60°C下處理5min時(shí)殘余酶活是未處理的20.5%，而加了穩(wěn)定劑的酶液在60°C下處理720min時(shí)殘余酶活是未處理的73.5%ο
[0018]實(shí)驗(yàn)二:將不加穩(wěn)定劑的酶液(I號(hào))和加穩(wěn)定劑的酶液(2號(hào))分別置于25°C和37°C培養(yǎng)箱中，每隔一定時(shí)間取樣進(jìn)行酶活力測(cè)定和微生物的鏡檢和計(jì)數(shù)，以O(shè)h的酶活為對(duì)照組測(cè)定殘余酶活，結(jié)果見圖3 (25°C)和圖4 (37°C)，不加穩(wěn)定劑的酶液25°C放置4周，37°C放置I周后，酶活完全喪失。加穩(wěn)定劑的酶液25°C放置13周，37°C放置4周，殘余酶活仍在70%以上。[0019]將本發(fā)明復(fù)合穩(wěn)定劑分別添加到100ml液體右旋糖苷酶中，25 1:和37°C保存，進(jìn)行酶活力測(cè)定，測(cè)定步驟如下:
右旋糖苷酶發(fā)酵液(由海洋的節(jié)桿菌發(fā)酵制備)。
[0020]酶活力測(cè)定方法:將50 μ L酶液與150 μ L、3%的右旋糖苷20 000 (50mmol/L,pH 5.5乙酸鈉緩沖液配制)45 ° C水浴15 min后，DNS法測(cè)定還原糖含量。酶活力單位定義(U/ml):上述反應(yīng)條件下，每分鐘催化釋放IymoL麥芽糖所需的酶量為一個(gè)活力單位。
【權(quán)利要求】
1.一種液體海洋右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于，該穩(wěn)定劑由以下重量配比的原料混合溶解制成: 乙酸鈉3-24 ；檸檬酸鈉10-26 ； 甘油6-16; 對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.02-0.07。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于:各原料的重量百分比為: 乙酸鈉18 ； 檸檬酸鈉20 ； 甘油16 ； 對(duì)羥基苯甲酸復(fù)合酯鈉0.05。
3.權(quán)利要求1或2所述的液體右旋糖苷酶復(fù)合穩(wěn)定劑在增強(qiáng)液體右旋糖苷酶穩(wěn)定性中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的液體右旋糖苷酶由海洋細(xì)菌節(jié)桿菌發(fā)酵獲得。`
【文檔編號(hào)】C12N9/96GK103497945SQ201310494423
【公開日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】王淑軍, 呂明生, 王德龍, 王小貝, 焦豫良, 房耀維, 劉姝 申請(qǐng)人:淮海工學(xué)院