一種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻凈化處理方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻凈化處理方法。該方法采用酒精梯度脫水后置于鋁箔紙直接烘干的方法實(shí)現(xiàn)硅藻殼體的凈化，操作簡(jiǎn)單、效率高、安全性高、耗時(shí)少、不對(duì)環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)并且易于觀察。本發(fā)明的有益效果是：該方法通過采用梯度酒精高速離心去除硅藻殼周圍的雜質(zhì)組分，凈化效果好，且不易破壞原有種屬硅藻的形貌。在較短時(shí)間烘干后的硅藻有效地吸附在鋁箔紙上；操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、效率高、安全性高、不對(duì)環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。
【專利說明】—種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻凈化處理方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及微藻的凈化處理技術(shù)，具體地涉及水體硅藻的凈化處理技術(shù)，更具體地涉及ー種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法。
【背景技術(shù)】
[0003]硅藻是ー類具有色素體的單細(xì)胞植物，全世界約有16000多種，體長(zhǎng)在Iiim到200 u m之間，根據(jù)生存模式分為浮游和底棲兩大類，而根據(jù)形狀可分為中心硅藻綱和羽紋硅藻綱兩大類。硅藻分布極其廣泛，在條件適宜的情況下，只要有水的地方，一般都有硅藻的蹤跡。因?yàn)楣柙宸N類多、數(shù)量大，被稱為海洋的“草原”，其為地球提供大約20%的氧氣，并且可作為許多海洋生物的餌料。
[0004]硅藻的細(xì)胞壁由無定形ニ氧化硅和有機(jī)質(zhì)(主要是多肽和蛋白質(zhì))構(gòu)成，故得名“硅藻”。硅藻細(xì)胞壁因種類和生存條件的不同，表現(xiàn)出精致而豐富的多級(jí)微納米孔隙和微結(jié)構(gòu)，且具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、巨大的比表面積和多種光學(xué)特性。對(duì)硅藻部分、個(gè)體、種群和群體等不同層次的研究已經(jīng)在各領(lǐng)域展開，從而使硅藻在仿生合成、微納米器件、古氣候研究、生物監(jiān)測(cè)等方面有很好的應(yīng)用前景。
[0005]活體硅藻相比較硅藻土 (硅藻化石)，具有種類豐富、形體完整、可純化培養(yǎng)等優(yōu)勢(shì)，但是由于活體硅藻來源于不同水體，浄化和觀察比較困難。在現(xiàn)有的文獻(xiàn)檢索中發(fā)現(xiàn)，常用的硅藻凈化或提純方法都比較復(fù)雜，涉及到H2O2AlCl清洗、加熱、過濾、重液提取、凍干等步驟。盡管這些方法可達(dá)到較高的浄化要求，有機(jī)質(zhì)去除干凈，硅藻形態(tài)保持完好，但是僅用于硅藻的電鏡觀察和藻種鑒別，以上方法不僅操作繁瑣、耗時(shí)較長(zhǎng)，而且涉及較多的化學(xué)試劑。
[0006]若能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)的前提下，實(shí)現(xiàn)硅藻的快速?zèng)坊瑸楣柙宓奈⒂^形貌記錄和藻種鑒別提供極大幫助。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的弊病，提供一種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法，該方法采用酒精梯度脫水后置于鋁箔紙直接烘干的方法實(shí)現(xiàn)硅藻殼體的凈化，操作簡(jiǎn)單、效率高、安全性高、耗時(shí)少、不對(duì)環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)并且易于觀察。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻凈化處理方法，包括以下步驟:
(1)用移液槍或膠頭滴管取5-15mL藻液放入離心管,在3000r/min-4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3-5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液A ;
(2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為159-30%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min-4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3-5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ；
(3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%飛0%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min-4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3-5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ；
(4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90-100%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min-4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3-5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；
(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E；
(6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在90-130°C下烘l0-l5min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
[0009]通過在場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡下的觀察，采用本發(fā)明的方法分離提取出的硅藻保持原有種屬硅藻的形貌，并且微觀結(jié)構(gòu)清晰，無明顯的孔道堵塞現(xiàn)象。
[0010]本發(fā)明的從硅藻中分離提取硅藻殼體方法的優(yōu)點(diǎn):
1、該方法通過采用梯度酒精高速離心去除硅藻殼周圍的雜質(zhì)組分，浄化效果好，且不易破壞原有種屬硅藻的形貌。
[0011]2、該方法將酒精溶液浸潤(rùn)的硅藻殼置于鋁箔紙上，充分發(fā)揮了酒精蒸發(fā)速度快，硅藻吸附能力強(qiáng)的特點(diǎn)，在較短時(shí)間烘干后的硅藻有效地吸附在鋁箔紙上。
[0012]3、本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、效率高、安全性高、不對(duì)環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。
[0013]4、本發(fā)明從不同水樣中提取出不同形貌的硅藻殼體，為藻種觀察與鑒別提供了快捷的通道，為微納研究提供了新的素材，也將為人們探索硅藻的新性質(zhì)和新用途提供極大幫助。
【具體實(shí)施方式】
[0014]為了詳細(xì)說明本發(fā)明的方法的技術(shù)內(nèi)容，以下結(jié)合實(shí)施方式作進(jìn)ー步說明。
[0015]實(shí)施例1:
(1)用移液槍或膠頭滴管取5mL藻液放入離心管,在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ;
(2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ；
(3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ；
(4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；
(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E；
(6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在90°C下烘lOmin，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
[0016]實(shí)施例2:
(1)用移液槍或膠頭滴管取10mL藻液放入離心管,在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ;
(2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ；
(3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ；
(4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；
(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E；
(6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在110°C下烘13min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
[0017]實(shí)施例3:
(1)用移液槍或膠頭滴管取15mL藻液放入離心管,在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ;
(2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的低濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ；
(3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的中濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ；
(4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%的高濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；
(5)將裝有娃藻濃縮液D的離 心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E；
(6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在130°C下烘15min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
[0018]在本發(fā)明中，采用日立S-4800場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡(工作參數(shù)0.8kV，10 ii A)可以觀察出鋁箔紙上的硅藻細(xì)胞壁形貌結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰，保留著原始的結(jié)構(gòu)形貌。
[0019]以上所揭露的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，當(dāng)然不能以此來限定本發(fā)明之權(quán)利范圍，因此依本發(fā)明權(quán)利要求所作的等同變化，仍屬于本發(fā)明所涵蓋的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)用移液槍或膠頭滴管取5?15mL藻液放入離心管,在3000r/min?4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3?5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液A ; (2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為159-30%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min?4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3?5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ； (3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%飛0%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min?4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3?5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ； (4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90-100%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min?4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3?5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E； (6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在9(T130°C下烘5?15min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)用移液槍或膠頭滴管取5mL藻液放入離心管,在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ; (2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ； (3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ； (4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E； (6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在90°C下烘lOmin，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)用移液槍或膠頭滴管取IOmL藻液放入離心管,在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ； (2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ； (3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ； (4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E； (6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在110°C下烘13min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便于掃描電鏡觀察的簡(jiǎn)易硅藻浄化處理方法，其特征是:包括以下步驟: (1)用移液槍或膠頭滴管取15mL藻液放入離心管,在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液，得到硅藻濃縮液A ; (2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的低濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液B ； (3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的中濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液C ； (4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%的高濃度酒精至離心管2/3處，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,去除上清液,得到娃藻濃縮液D ；(5)將裝有娃藻濃縮液D的離心管震蕩30s使娃藻充分分散,得到娃藻濃縮液E； (6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在130°C下烘15min，干燥后即可放入掃描電鏡觀 察。
【文檔編號(hào)】C12N1/12GK103436449SQ201310389793
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月2日
【發(fā)明者】鄧湘云, 李健保, 蔣文凱, 張國(guó)慶, 劉鵬偉, 王豐喜, 景亞妮, 白成英, 楊杰 申請(qǐng)人:海南大學(xué)