一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，將冷凍保藏管中的芽孢桿菌、醋酸桿菌、釀酒酵母、乳酸桿菌、及藍(lán)藻分別在斜面中活化，之后純化得各斜面菌種，備用；利用各斜面菌種制備相應(yīng)的原菌液；將各原菌液按2：2：2：1：1的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；將一級(jí)種子按5%的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅱ中培養(yǎng)得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；最后將二級(jí)種子按5%的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅲ培養(yǎng)以獲得復(fù)合微生態(tài)制劑的成品。利用該復(fù)合微生態(tài)制劑能夠?qū)Σ枞~農(nóng)藥起到降解的作用，而且作用效果顯著；另外，本發(fā)明復(fù)合微生態(tài)制劑還具有生態(tài)環(huán)保、及成本較低的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種農(nóng)產(chǎn)品種植領(lǐng)域用的復(fù)合微生態(tài)制劑，尤其涉及一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑。
【【背景技術(shù)】】
[0002]農(nóng)藥的發(fā)明與應(yīng)用為人類戰(zhàn)勝病蟲害、提高農(nóng)作物的產(chǎn)量開辟了道路。但是，人們?cè)谑褂棉r(nóng)藥防止病蟲草害的同時(shí)，也使糧食、蔬菜、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中殘留部分農(nóng)藥成份，逐漸積累，形成了部分農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留超標(biāo)，同時(shí)耕地在長(zhǎng)期的種植生產(chǎn)中，不間斷地使用農(nóng)藥化肥，也使土壤環(huán)境中積累了農(nóng)藥、重金屬等殘留，造成新生產(chǎn)種植的農(nóng)產(chǎn)品部分農(nóng)藥、重金屬殘留超標(biāo)。
[0003]其中，茶葉是 人們?nèi)粘Ｉ钪械闹匾镔|(zhì)之一，其是多年生的灌木或小喬木，每年對(duì)茶樹噴灑農(nóng)藥造成茶園和茶樹中部分農(nóng)藥和重金屬殘留超標(biāo)，不僅影響了茶葉的品質(zhì)，而且對(duì)廣大喝茶者的身體健康造成威脅。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，能夠?qū)Σ枞~農(nóng)藥起到降解的作用，而且作用效果顯著。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的:一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0006](I)原菌種斜面培養(yǎng):將冷凍保藏管中的芽孢桿菌、醋酸桿菌、釀酒酵母、乳酸桿菌、及藍(lán)藻分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得芽孢桿菌斜面菌種、醋酸桿菌斜面菌種、釀酒酵母斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及藍(lán)藻斜面菌種，備用；
[0007](2)原菌種液體培養(yǎng):將芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基I中，之后置于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得芽孢桿菌原菌液；將醋酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基II中，接著于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得醋酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基III中，接著于28-30°C下好氧培養(yǎng)3天得釀酒酵母原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基IV中，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天得乳酸桿菌原菌液；將藍(lán)藻斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基V中，接著置于28-30°C下，用熒光燈每天照射10-14小時(shí)，好氧培養(yǎng)3-5天，得藍(lán)藻原菌液；
[0008](3)—級(jí)種子培養(yǎng):將芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、乳酸桿菌原菌液、及藍(lán)藻原菌液按2:2:2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基I中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地:先接種芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、藍(lán)藻原菌液，并于280C -30°C好氧培養(yǎng)3天，然后再接種乳酸桿菌原菌液，于37°C厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
[0009](4) 二級(jí)種子培養(yǎng):將所得的一級(jí)種子按5%的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基II中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子;
[0010](5)成品培養(yǎng):將所得的二級(jí)種子按5%的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基III中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得復(fù)合微生態(tài)制劑的成品。
[0011]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基I上，之后于30°c好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。
[0012]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中醋酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養(yǎng)基II，并將斜面培養(yǎng)基II置于121°C下滅菌20min，接著冷卻至60°C以下加入無水乙醇，且每IOOOml斜面培養(yǎng)基II需加入IOOml無水乙醇，之后用接種環(huán)將醋酸桿菌接種于斜面培養(yǎng)基II上，然后于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH5.5。
[0013]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基III上，之后于28-30°C下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為30min ;且該斜面培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0014]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基IV上，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基IV的組分為:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳.0.28克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0015]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中藍(lán)藻在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將藍(lán)藻接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基V上，之后于28-30°C，熒光燈下每天照射10-14小時(shí)，且好氧培養(yǎng)3-5天；所述斜面培養(yǎng)基V的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、瓊脂20克、水1000ml、PH 自然。
[0016]進(jìn)一步地，所述步驟(2)中液體培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液體培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然；液體培養(yǎng)基IV的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28、水1000ml、PH6.8 ;液體培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、水1000ml、PH自然。
[0017]進(jìn)一步地，所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0018]進(jìn)一步地，所述步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0019]進(jìn)一步地，所述步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0020]本發(fā)明一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑的有益效果在于:利用該復(fù)合微生態(tài)制劑能夠?qū)Σ枞~農(nóng)藥起到降解的作用，而且作用效果顯著；另外，本發(fā)明復(fù)合微生態(tài)制劑還具有生態(tài)環(huán)保、及成本較低的特點(diǎn)。
【【具體實(shí)施方式】】
[0021]本發(fā)明一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0022](I)原菌種斜面培養(yǎng):將冷凍保藏管中的芽孢桿菌、醋酸桿菌、釀酒酵母、乳酸桿菌、及藍(lán)藻分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得芽孢桿菌斜面菌種、醋酸桿菌斜面菌種、釀酒酵母斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及藍(lán)藻斜面菌種，備用；
[0023](2)原菌種液體培養(yǎng):將芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基I中，之后置于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得芽孢桿菌原菌液；將醋酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基II中，接著于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得醋酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基III中，接著于28-30°C下好氧培養(yǎng)3天得釀酒酵母原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基IV中，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天得乳酸桿菌原菌液；將藍(lán)藻斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基V中，接著置于28-30°C下，用熒光燈每天照射10-14小時(shí)好氧培養(yǎng)3-5天，得藍(lán)藻原菌液；
[0024](3)—級(jí)種子培養(yǎng):將芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、乳酸桿菌原菌液、及藍(lán)藻原菌液按2:2:`2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基I中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地:先接種芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、藍(lán)藻原菌液，并于28-30°C好氧培養(yǎng)3天，然后再接種乳酸桿菌原菌液，于37°C厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
[0025](4) 二級(jí)種子培養(yǎng):將所得的一級(jí)種子按5%的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基II中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子;
[0026](5)成品培養(yǎng):將所得的二級(jí)種子按5%的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基III中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得復(fù)合微生態(tài)制劑的成品。
[0027]其中:步驟(I)中芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基I上，之后于30°C好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。步驟(I)中醋酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養(yǎng)基II，并將斜面培養(yǎng)基II置于121°C下滅菌20min，接著冷卻至60°C以下加入無水乙醇，且每IOOOml斜面培養(yǎng)基II需加入IOOml無水乙醇，之后用接種環(huán)將醋酸桿菌接種于斜面培養(yǎng)基II上，然后于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH5.5。步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基III上，之后于28°C -30°C下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為30min ;且該斜面培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基IV上，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基IV的組分為:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。步驟(I)中藍(lán)藻在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將藍(lán)藻接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基V上，之后于28°C _30°C，熒光燈下每天照射10-14小時(shí)，且好氧培養(yǎng)3_5天；所述斜面培養(yǎng)基V的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、瓊脂20克、水1000ml、PH自然。
[0028]步驟(2)中液體培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液體培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然；液體培養(yǎng)基IV的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28、水1000ml、PH6.8 ;液體培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、水1000ml、PH自然。
[0029]步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%,余量為水。步驟
.(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂
0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0030]需要說明的是，本發(fā)明中各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比。
[0031]為了證明本發(fā)明復(fù)合微生態(tài)制劑能夠?qū)Σ枞~中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行降解， 申請(qǐng)人:以如下試驗(yàn)進(jìn)行闡述說明，具體地:
[0032]于春季在漳平市南洋鄉(xiāng)選擇了一片約10年樹齡的水仙茶園，將該茶園一分兩半，一半為實(shí)驗(yàn)組，另一半為對(duì)照組:實(shí)驗(yàn)組中，在采摘青葉前7天、15天兩次分別將本發(fā)明復(fù)合微生態(tài)制劑的100倍清水稀釋液噴灑于青葉上，噴灑時(shí)均為晴天的早晨；而對(duì)照組不噴灑；之后在同一天對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別依次進(jìn)行青葉采摘、茶葉制作，且按照烏龍茶工藝制作成品，且將制成的茶葉送至福建省茶葉質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站進(jìn)行檢驗(yàn)；檢測(cè)結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組茶葉的各項(xiàng)指標(biāo)均符合NY/T288綠色食品茶葉的要求，而對(duì)照組茶葉不符合綠色食品茶葉指標(biāo)要求，具體檢測(cè)數(shù)據(jù)見表I。
[0033]表I實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組茶葉的檢測(cè)數(shù)據(jù)(mg/kg)
[0034]
【權(quán)利要求】
1.一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:其制備方法的具體步驟如下: (1)原菌種斜面培養(yǎng):將冷凍保藏管中的芽孢桿菌、醋酸桿菌、釀酒酵母、乳酸桿菌、及藍(lán)藻分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得芽孢桿菌斜面菌種、醋酸桿菌斜面菌種、釀酒酵母斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及藍(lán)藻斜面菌種，備用； (2)原菌種液體培養(yǎng):將芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基I中，之后置于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得芽孢桿菌原菌液；將醋酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基II中，接著于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天得醋酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基III中，接著于28-30°C下好氧培養(yǎng)3天得釀酒酵母原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基IV中，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天得乳酸桿菌原菌液；將藍(lán)藻斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基V中，接著置于28-30°C下且熒光燈每天照射10-14小時(shí)，好氧培養(yǎng)3-5天，得藍(lán)藻原菌液；(3) —級(jí)種子培養(yǎng):將芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、乳酸桿菌原菌液、及藍(lán)藻原菌液按2:2:2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基I中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地:先接種芽孢桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、釀酒酵母原菌液、藍(lán)藻原菌液，并于28°C -30°C好氧培養(yǎng)3天，然后再接種乳酸桿菌原菌液，于37°C厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子； (4)二級(jí)種子培養(yǎng):將所得的一級(jí)種子按5%的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基II中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子； (5)成品培養(yǎng):將所得的二級(jí)種子按5%的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基III中，并于28-30°C下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得復(fù)合微生態(tài)制劑的成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(I)中芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基I上，之 后于30°C好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(I)中醋酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養(yǎng)基II，并將斜面培養(yǎng)基II置于121°C下滅菌20min，接著冷卻至60°C以下加入無水乙醇，且每IOOOml斜面培養(yǎng)基II需加入IOOml無水乙醇，之后用接種環(huán)將醋酸桿菌接種于斜面培養(yǎng)基II上，然后于30°C下好氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH5.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基III上，之后于28-30°C下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為30min ;且該斜面培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基IV上，之后于37°C下厭氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基IV的滅菌溫度為.121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基IV的組分為:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉.5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(I)中藍(lán)藻在斜面中活化的具體操作為:用接種環(huán)將藍(lán)藻接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基V上，之后于28-30°C，熒光燈下每天照射10-14小時(shí)，好氧培養(yǎng)3_5天；所述斜面培養(yǎng)基V的滅菌溫度為121°C、滅菌時(shí)間為20min ;且該斜面培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、瓊脂20克、水1000ml、PH自然。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(2)中液體培養(yǎng)基I的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養(yǎng)基II的組分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氫二鉀0.5克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液體培養(yǎng)基III的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然；液體培養(yǎng)基IV的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28、水.1000ml、PH6.8 ;液體培養(yǎng)基V的組分:硝酸鈉1.5克、磷酸氫二鉀0.05克、硫酸鎂0.08克、氯化鈣0.04克、碳酸鈉0.02克、檸檬酸0.006克、檸檬酸鐵0.006克、硫酸鋅0.001克、氯化錳0.001克、水1000ml、PH自然。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)茶葉農(nóng)藥殘留降解的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于:所述步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀.0.1%、硫酸鎂0.0 5%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103436470SQ201310374344
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月23日
【發(fā)明者】陳琳, 莫艷華, 秦火保, 周世須 申請(qǐng)人:福州大用生物應(yīng)用科技有限公司