專利名稱：一種管狀細菌纖維素的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種管狀細菌纖維素的制備方法。
背景技術：
細菌纖維素是指在不同條件下，由醋酸菌屬、土壤桿菌屬、根瘤菌屬和八疊球菌屬等中的某種微生物合成的纖維素的統(tǒng)稱。醋酸菌屬中的木醋桿菌Acetobacter xyIinum由于產(chǎn)生纖維素效率最高而被廣泛用于細菌纖維素基礎研究以及應用研究的模板微生物。細菌纖維素的制備方法目前主要為靜態(tài)培養(yǎng)與動態(tài)培養(yǎng)兩種。由于菌種為革蘭氏陰性原生細胞體的賴氧生存屬性，使細菌纖維素形成于糖源與有氧區(qū)與的交界處。靜態(tài)培養(yǎng)得到的細菌纖維素材料根據(jù)培養(yǎng)容器形狀不同以及應用領域能夠形成薄膜狀，管狀等規(guī)則幾何形狀。在靜態(tài)培養(yǎng)過程中，嚴格要求不使培養(yǎng)容器產(chǎn)生劇烈晃動以避免細菌纖維素 產(chǎn)生分層或部分黏連的現(xiàn)象，降低材料的應用價值。此外，靜態(tài)培養(yǎng)周期較長，成本過高，細菌纖維素產(chǎn)量無法滿足大規(guī)模生產(chǎn)的要求；動態(tài)培養(yǎng)是指在培養(yǎng)過程中，將氧氣或空氣以氣泡形式通入培養(yǎng)容器中并結(jié)合機械攪拌的方式，人為地使原本氧氣含量十分有限的培養(yǎng)液含有接近空氣中的氧氣含量，制備細菌纖維素。由于培養(yǎng)過程中存在著剪切應力，因此得到的細菌纖維素為絮狀、星形、團簇狀、球形、橢圓等不規(guī)則幾何形狀，應用價值不高。此外，有研究發(fā)現(xiàn)動態(tài)培養(yǎng)條件下會產(chǎn)生菌種細胞變異體，變異體不具有產(chǎn)生纖維素的能力，因此動態(tài)培養(yǎng)時間過久會抑制纖維素的產(chǎn)量?，F(xiàn)有技術有報道利用先動態(tài)，后靜態(tài)的“兩步法”制備細菌纖維素，廣泛應用于東南亞地區(qū)“納塔”(椰果)產(chǎn)業(yè)?！皟刹椒ā蹦軌蛟谝欢ǔ潭壬咸岣邌我混o態(tài)培養(yǎng)細菌纖維素的產(chǎn)量，但是從實質(zhì)上說，仍然是兩種不同的制備工藝的簡單疊加，無法實現(xiàn)細菌纖維素材料既保證產(chǎn)量，又具有規(guī)整的幾何外形?，F(xiàn)有技術采用透氧材料制成中空模具，利用菌種賴氧生存的生物特性，在模具內(nèi)腔通入一定壓力的空氣或氧氣,置于接入菌種的發(fā)酵培養(yǎng)液中；或者將接入菌種的發(fā)酵培養(yǎng)液灌滿中空模具內(nèi)部，將其置于一定壓力的環(huán)境中。靜置一段時間后，細菌分泌纖維素包覆模具外壁或緊貼模具內(nèi)腔，形成異型中空材料。這種方法能夠獲得外形不局限于簡單的薄膜、管狀的異型中空細菌纖維素材料。需要指出的是，現(xiàn)有技術利用透氧材料人為創(chuàng)造氣/液界面，培養(yǎng)細菌纖維素材料存在培養(yǎng)周期長的缺陷。采用現(xiàn)有技術要使的細菌纖維素材料具有能夠滿足應用要求的力學性能，培養(yǎng)周期需要兩周甚至更長的時間。有研究認為，微生物形成細菌纖維素的關鍵在于其所處環(huán)境滿足有氧與有糖兩個條件。細菌纖維素內(nèi)部由于上方空氣擴散作用而存在一個有氧區(qū)，同時由于下方培養(yǎng)液滲透作用而存在一個碳源區(qū)，處于有氧區(qū)與碳源區(qū)重疊區(qū)域，也稱為“有效區(qū)域”，的細菌才是真正產(chǎn)生纖維素的細菌，80%的纖維素來自于這部分細菌，因此也稱為“活性菌”。從實質(zhì)上說，現(xiàn)有技術采用透氧材料制備細菌纖維素仍屬于靜態(tài)培養(yǎng)范疇，沒有將動態(tài)培養(yǎng)與靜態(tài)培養(yǎng)各自的優(yōu)勢完全結(jié)合起來。現(xiàn)有技術將采用透氧材料制備得到的中空異型細菌纖維素應用于人造血管的構建，并已取得一定的成果。但是，僅依靠單層透氧材料制備得到的管狀細菌纖維素其有著內(nèi)腔致密，外壁疏松的不對稱結(jié)構。疏松的外壁使得材料的縫合性能較差。在縫合處容易由于材料與周圍組織的順應性不夠而形成內(nèi)膜增生，進而導致血栓的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種管狀細菌纖維素的制備方法。 采用雙層透氧材料嵌套的方式，構造出內(nèi)外雙層氣/液界面，將細菌纖維素在培養(yǎng)過程中，內(nèi)部有氧區(qū)與碳源區(qū)重疊區(qū)域為現(xiàn)有技術的兩倍，將制備周期由2周甚至更長時間縮短至10天以內(nèi)。在現(xiàn)有公開技術的基礎上，本發(fā)明通過精確調(diào)節(jié)中空透氧模具內(nèi)管內(nèi)部壓力氣體以及外管外部氣體的壓力，使中空透氧模具的內(nèi)管與外管都能夠沿徑向產(chǎn)生收縮/舒張，周期性的交替變化。由于中空透氧模具內(nèi)管與外管的徑向收縮/舒張幅度很小，一般不超過5%，因此這種制備管狀細菌纖維素的過程是一個“準靜態(tài)”的過程。不會因為徑向變化幅度過大而使材料產(chǎn)生物理分層或部分黏連的情況。通過調(diào)節(jié)中空透氧模具內(nèi)管內(nèi)部與外管外部的氧氣體積濃度，能夠控制材料內(nèi)部纖維素的疏密程度，快速構筑出一個內(nèi)腔致密光滑、外壁縫合性良好、沿徑向纖維素微纖絲取向規(guī)整的具備差異化結(jié)構的管狀細菌纖維素材料。細菌纖維素(Bacterial Cellulose，也稱微生物纖維素)是一種納米纖維材料。其以細菌細胞內(nèi)部作為生物合成反應器，將葡萄糖小分子在酶催化作用下經(jīng)過一系列復雜的變構過程最終通過β -1, 4-糖苷鍵結(jié)合形成β -1, 4-葡萄糖鏈由細菌系細胞側(cè)面的催化位點擠出。β -1, 4-葡萄糖鏈彼此之間通過分子內(nèi)與分子間氫鍵作用，逐步、分層地形成脂多糖層、類晶團聚體、纖維素微纖并最終形成纖維素。這一系列的細胞外(Extracellular)成形過程被稱為“纖維素的自組裝”。正是這個獨特的微生物參與的過程賦予了細菌纖維素良好的理化性能超細三維網(wǎng)狀結(jié)構；良好的吸濕、保濕以及透氣性能；超高的持水性與濕態(tài)強度；高抗張強度與彈性模量等等。大量研究表明細菌纖維素材料具有良好的體內(nèi)、體外生物相容性，加上其優(yōu)異的形狀可調(diào)控性與形狀維持性使其在構建體內(nèi)、體外組織工程支架材料具有得天獨厚的優(yōu)勢。本發(fā)明的一種管狀細菌纖維素的制備方法，采用中空透氧模具培養(yǎng)細菌纖維素，所述的中空透氧模具是由同軸的外管和內(nèi)管嵌套組成，所述的外管內(nèi)徑與所述的內(nèi)管外徑差為I IOmm;所述的內(nèi)管中通入壓力氣體，所述的內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間充滿接入菌種的培養(yǎng)液；所述的中空透氧模具外部為氣體。作為優(yōu)選的技術方案如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的中空透氧模具的內(nèi)管與外管均由透氧材料根據(jù)所需修復的人體組織的實際形狀、直徑以及大小制作得到的；所述的中空透氧模具在外形上與人體乳內(nèi)動脈、隱靜脈、尿道、十二指腸或膽管的形狀一致；所述的透氧材料是指在常溫常壓下的氧氣透過速率為100 IOOOmLnT2. s—1，孔隙均一度偏差〈±0. 3的材料。如上所述的菌種是指能夠生物合成纖維素的微生物，包括木醋桿菌、產(chǎn)醋桿菌、醋化桿菌、巴氏醋桿菌、葡萄糖桿菌、農(nóng)桿菌、根瘤菌、八疊球菌、洋蔥假單胞菌、椰毒假單胞菌或空腸彎曲菌中的一種或幾種。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的透氧材料是指通過針織、機織或編織的方法將棉、紗、聚乙烯纖維、聚丙烯纖維和/或PET纖維制成的中空多孔材料，或通過模具一次成型將硅橡膠、膨體聚四氟乙烯、乳膠或陶瓷透氧材料制成的中空透氧支架。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的壓力氣體是指氧氣體積濃度在10 100%范圍內(nèi)，壓力在I 1. 5個標準大氣壓范圍內(nèi)的氣體。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的壓力氣體是指內(nèi)管中氣體壓力在設定下限與設定上限之間交替轉(zhuǎn)換的氣體，設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，設定下限最小不低于I個標準大氣壓，轉(zhuǎn)換頻率為65 165次/分鐘。
如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的中空透氧模具外部的氣體是指氧氣體積濃度在10 100%范圍內(nèi)的氣體，壓力在I 1. 5個標準大氣壓范圍內(nèi)的氣體。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的中空透氧模具外部的氣體是指中空透氧模具外部的氣體壓力在設定下限與設定上限之間交替轉(zhuǎn)換的氣體，設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，設定下限最小不低于I個標準大氣壓，轉(zhuǎn)換頻率為65 165次/分鐘。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，具體包括以下步驟I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇2 5，蛋白胨O. 05、. 5，酵母膏O. 05、. 5，檸檬酸O. θΓθ. 1，磷酸氫二鈉O. 02、. 2，磷酸二氫鉀ο. οΓο. 1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為4. O 6. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X IO5 2X IO7個/ml ；3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，28 32°C靜置培養(yǎng)；通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素；所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為三種情況之一(I)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變；最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ；(2)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ；(3)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ；所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓或階段性增壓；連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止；階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止；所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為三種情況之一(I)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變；最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ；(2)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度10 50% ；(3)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ；
所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓或階段性增壓；連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止；階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止；所述靜置培養(yǎng)直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止；4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為I 10wt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2 10小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的高壓蒸汽滅菌后紫外輻照是指將所述發(fā)酵培養(yǎng)液置于高壓滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌處理30分鐘后取出置于紫外燈下輻照冷卻至室溫。如上所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，所述的通純氧是指將醫(yī)用氧以IL/min的速度通入上述的培養(yǎng)液中，并維持30分鐘；所述的接種是指用滅菌后的接種環(huán)鉤取適量保存于4°C下試管中的菌種，并轉(zhuǎn)移至上述的發(fā)酵培養(yǎng)液中；所述的擴培是指將接入菌種后的發(fā)酵培養(yǎng)液于28 32°C下?lián)u床培養(yǎng)8 24小時。有益效果與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是(I)通過透氧材料嵌套的方式，在培養(yǎng)過程中人為創(chuàng)造雙層氣/液界面，使細菌纖維素內(nèi)部“有效區(qū)域”擴充一倍，提高了纖維素的產(chǎn)率，縮短了管狀細菌纖維素的制備周期。(2)通過使中空透氧模具內(nèi)管與外管產(chǎn)生周期性的收縮/舒張交替變化，使得到的管狀細菌纖維素內(nèi)部纖維素微纖絲沿徑向取向，使材料在徑向具有更好的力學強度，能夠滿足更廣的應用需求。(3)雙層氣/液界面使管狀細菌纖維素的外壁更致密，提高了材料在臨床應用時的縫合性能，降低了植入人體后，由于與周圍組織順應性不足而發(fā)生內(nèi)膜增生與血栓的機率。(4)通過精確控制培養(yǎng)過程中，中空透氧模具內(nèi)管內(nèi)壓力氣體與外管外氣體的氧氣體積濃度，能夠得到內(nèi)腔、外壁致密平滑，內(nèi)部彈性疏松的三明治對稱結(jié)構的管狀細菌纖維素。
(5)—種管狀細菌纖維素的制備方法成型過程簡單，材料制備周期短，制備過程綠色環(huán)保、簡便快速、制備成本低廉，是一種理想的生物醫(yī)用支架材料。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例1I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇2，蛋 白胨O. 05，酵母膏O. 05，檸檬酸O. 01，磷酸氫二鈉O. 02，磷酸二氫鉀O. 01，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為4. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X105個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，28°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例2I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為6. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，32°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為50%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為50%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為10wt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持10小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素 高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例3I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇3，蛋白胨O. 3，酵母膏O. 3，檸檬酸O. 05，磷酸氫二鈉O. 1，磷酸二氫鉀O. 05，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X106個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為30%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣分壓為30%
直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為2wt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持4小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例4I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；
發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°c靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第二種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例5I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；
將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于1個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓,最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10 50%所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例61)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第一種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%
所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。
4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例7I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第二種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例8I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。
所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第二種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第二種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%需要指出的是，中空透氧模具內(nèi)管與外管應同時處于收縮或同時處于舒張狀態(tài)。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例9I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第二種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓,最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10 50%所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例10I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第二種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10 50%所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓,最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10 50%所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化 鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。
實施例11I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的p H為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況I)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例12I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。
通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第一種情況
恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變。最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例13I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ；所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第二種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ；直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。
4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例14I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；
發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第二種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例15I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；
2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ； 所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ；所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例16I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%
所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保 持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例17I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10%所述的逐漸增加分為連續(xù)性增壓。連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. O，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。實施例18I)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇5，蛋白胨O. 5，酵母膏O. 5，檸檬酸O.1，磷酸氫二鈉O. 2，磷酸二氫鉀O.1，余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為5. O ;將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；2)菌種擴培；將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培；擴培程度菌種細胞數(shù)目在2X107個/ml。3)靜置培養(yǎng)；將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，30°C靜置培養(yǎng)。通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素。所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為第三種情況內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ；所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓 力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止。所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為第三種情況恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限。設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積分壓為10% ；所述的逐漸增加為階段性增壓。階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止。直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止。4)后處理培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為lwt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。
權利要求
1.一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征是采用中空透氧模具培養(yǎng)細菌纖維素，所述的中空透氧模具是由同軸的外管和內(nèi)管嵌套組成，所述的外管內(nèi)徑與所述的內(nèi)管外徑差為I IOmm ;所述的內(nèi)管中通入壓力氣體，所述的內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間充滿接入菌種的培養(yǎng)液；所述的中空透氧模具外部為氣體。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的中空透氧模具的內(nèi)管與外管均由透氧材料根據(jù)所需修復的人體組織的實際形狀、直徑以及大小制作得到的；所述的中空透氧模具在外形上與人體乳內(nèi)動脈、隱靜脈、尿道、十二指腸或膽管的形狀一致；所述的透氧材料是指在常溫常壓下的氧氣透過速率為100 IOOOmL. πΓ2.S_\孔隙均一度偏差〈±0. 3的材料；所述的菌種是指能夠生物合成纖維素的微生物，包括木醋桿菌、產(chǎn)醋桿菌、醋化桿菌、巴氏醋桿菌、葡萄糖桿菌、農(nóng)桿菌、根瘤菌、八疊球菌、洋蔥假單胞菌、椰毒假單胞菌或空腸彎曲菌中的一種或幾種。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的透氧材料是指通過針織、機織或編織的方法將棉、紗、聚乙烯纖維、聚丙烯纖維和/或PET纖維制成的中空多孔材料，或通過模具一次成型將硅橡膠、膨體聚四氟乙烯、乳膠或陶瓷透氧材料制成的中空透氧支架。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的壓力氣體是指氧氣體積濃度在10 100%范圍內(nèi)，壓力在I 1. 5個標準大氣壓范圍內(nèi)的氣體。
5.根據(jù)權利要求1或4所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的壓力氣體是指內(nèi)管中氣體壓力在設定下限與設定上限之間交替轉(zhuǎn)換的氣體，設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，設定下限最小不低于I個標準大氣壓，轉(zhuǎn)換頻率為65 165次/分鐘。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的中空透氧模具外部的氣體是指氧氣體積濃度在10 100%范圍內(nèi)的氣體，壓力在I 1. 5個標準大氣壓范圍內(nèi)的氣體。
7.根據(jù)權利要求1或6所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的中空透氧模具外部的氣體是指中空透氧模具外部的氣體壓力在設定下限與設定上限之間交替轉(zhuǎn)換的氣體，設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，設定下限最小不低于I個標準大氣壓，轉(zhuǎn)換頻率為65 165次/分鐘。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于具體包括以下步驟1)發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配； 發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分數(shù)計，單位為wt% :葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇2 5，蛋白胨O. 05、. 5，酵母膏O. 05、. 5，檸檬酸O. 0Γ0. 1，磷酸氫二鈉O. 02、. 2，磷酸二氫鉀ο. οΓο. 1，余量為水； 發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為4. O 6. O ; 將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液； 2)囷種擴Jfl ; 將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴培； 擴培程度菌種細胞數(shù)目在2 X IO5 2 X IO7個/ml ;3)靜置培養(yǎng)； 將擴培后的菌液與調(diào)配好的發(fā)酵培養(yǎng)液均勻混合后，灌入中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間的區(qū)域，置于恒溫環(huán)境內(nèi)，28 32°C靜置培養(yǎng)； 通過在培養(yǎng)過程中向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體，同時調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)的氣體壓力，培養(yǎng)管狀細菌纖維素； 所述的向中空透氧模具內(nèi)管充入壓力氣體為三種情況之一 (1)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變；最大不超過1.5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ； (2)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ； (3)內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ； 所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓或階段性增壓；連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止；階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力達到設定上限為止； 所述的調(diào)節(jié)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體壓力為三種情況之一 (1)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中恒定不變；最大不超過1.5個標準大氣壓，最小不低于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ； (2)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體在培養(yǎng)過程中，在壓力設定上限和壓力設定下限間不斷交替變換；設定上限最大不超過1. 5個標準大氣壓，最小要高于1. 3個標準大氣壓；設定下限最大不超過1. 3個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度10 50% ； (3)恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力在培養(yǎng)過程中逐漸增加至設定上限；設定上限最大不超過1.5個標準大氣壓，最小要高于I個標準大氣壓；氧氣體積濃度為10 50% ； 所述的逐漸增加為連續(xù)性增壓或階段性增壓；連續(xù)性增壓是指每分鐘使內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力上升O. 1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止；階段性增壓是指每小時是內(nèi)管內(nèi)壓力氣體的壓力增加1%個標準大氣壓，直至恒溫環(huán)境內(nèi)氣體的壓力達到設定上限為止； 所述靜置培養(yǎng)直至中空透氧模具內(nèi)管外壁與外管內(nèi)壁間培養(yǎng)液收干為止； 4)后處理 培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的細菌纖維素浸泡至濃度為I 10wt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2 10小時，用純凈水清洗至pH為7. 0，材料內(nèi)毒素〈O. 5EU/ml，再將處理后的細菌纖維素高壓滅菌并包裝低溫封存。
9.根據(jù)權利要求8所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的高壓蒸汽滅菌后紫外輻照是指將所述發(fā)酵培養(yǎng)液置于高壓滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌處理30分鐘后取出置于紫外燈下輻照冷卻至室溫。
10.根據(jù)權利要求8所述的一種管狀細菌纖維素的制備方法，其特征在于，所述的通純氧是指將醫(yī)用氧以lL/min的速度通入上述的培養(yǎng)液中，并維持30分鐘；所述的接種是指用滅菌后的接種環(huán)鉤取適量保存于4°C下試管中的菌種，并轉(zhuǎn)移至上述的發(fā)酵培養(yǎng)液中；所述的擴培是指 將接入菌種后的發(fā)酵培養(yǎng)液于28 32°C下?lián)u床培養(yǎng)8 24小時。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種管狀細菌纖維素的制備方法，采用雙層透氧材料嵌套組成中空透氧模具培養(yǎng)細菌纖維素。在現(xiàn)有公開技術基礎上，通過精確調(diào)節(jié)中空透氧模具內(nèi)管內(nèi)部壓力氣體與外管外部氣體的壓力以及氧氣體積濃度，是中空透氧模具的內(nèi)管與外管能夠沿徑向產(chǎn)生收縮/舒張的周期性交替變化。由于徑向形變幅度很小，不超過5%，因此培養(yǎng)過程是一個“準靜態(tài)”的過程。本發(fā)明在現(xiàn)有技術基礎上，將細菌纖維素內(nèi)部“有效區(qū)域”擴充一倍，縮短管狀細菌纖維素的培養(yǎng)周期，同時，使管狀細菌纖維素外壁更致密，提高材料的縫合性，降低了植入人體后在縫合處發(fā)生內(nèi)膜增生與血栓的機率。本發(fā)明材料制備周期短，制備過程綠色環(huán)保、簡便快速、制備成本低廉。
文檔編號C12R1/01GK103014096SQ20121057592
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權日2012年12月26日
發(fā)明者陳仕艷, 楊敬軒, 鄭羿, 李喆, 王利群, 王華平 申請人:東華大學