專利名稱：一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法
技術領域：
本發(fā)明屬于放線菌生物防治技術領域，尤其是涉及一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法。
背景技術：
放線菌菌株710是一種稀有菌株，能夠?qū)Ψ言缫哂休^好的抑制作用。因此Streptomyces sp. 710可以作為有潛在開發(fā)價值的抗生素產(chǎn)生菌。為了進一步開發(fā)利用該菌，有必要對其發(fā)酵培養(yǎng)基進行了選擇，提高抗生素的產(chǎn)量，將會對開發(fā)新型農(nóng)藥提供依據(jù)?！?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種操作方法簡單、實驗結(jié)果準確的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法。本發(fā)明的技術方案是一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，包括如下步驟(I)、用接種環(huán)將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號培養(yǎng)基斜面上，“Z”字法，在28°C下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；(2)、用無菌接種環(huán)挑取3 5環(huán)接種于裝有IOOmL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25°C，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液，其中液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2. 5g、CaC032 . 0g、H20 1000ml、小米浸種 10. 4g ；(3)、以番茄早疫為供試菌，將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合以1:9、2 :8、3 7制成平板接入番茄早疫的菌餅(選出最佳發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合的比例)，以無菌水處理作為對照，培養(yǎng)2天，采用十字交叉法測定抑菌圈直徑，每個處理重復3次；(4)、采用單因子實驗，測定碳源、氮源、NaCl進行選擇，在單因子測試的基礎上用正交試驗進行選擇。優(yōu)選的，步驟(4)中碳源的選擇方法，采用如下步驟進行在液體發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎上，其他成分不變而改變碳源的種類，選取三種濃度10. 0g/L、15. 0g/L、20. Og/L的葡萄糖，每個處理重復3次，進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性，選擇最佳濃度，在其基礎上分別加入蔗糖、乳糖、小米浸種作碳源進行單因子試驗，蔗糖、乳糖、小米分別取三種濃度10. Og/L、15. Og/L、20. Og/L，每個處理重復3次，進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。優(yōu)選的，步驟(4)中氮源的選擇方法，采用如下步驟進行固定初始液體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源為10. 0g/L的葡萄糖和15. 0g/L的小米，其他成分不變，改變氮源種類，分別加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2S04作為氮源作為單因子試驗，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2S04分別設計3. 0g/L、6. 0g/L、9. 0g/L三個濃度水平，每個處理重復3次，進行藥瓶發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。優(yōu)選的，步驟(4)中NaCl的選擇方法，固定碳源為3. 0g/L酵母膏，其他成分不變，分別加入0. 0,2. 5,5. 0,7. 5、10. Og/L的NaCl，每個處理重復3次，進行搖瓶發(fā)酵，測定發(fā)酵
液抑菌活性。優(yōu)選的，步驟(4)中正交試驗，在以上單因子實驗結(jié)果的基礎上，選取葡萄糖、酵母膏、NaCl三個因素，分別取3個水平進行正交試驗，按照L9(33)安排實驗。一種根據(jù)如上所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法確定的放線菌710菌株的培養(yǎng)基，其特征在于包括葡萄糖10. 0g，酵母膏3. 0g, NaCl 5. 0g，小米15g，CaC032. 0g，水IOOOmL0本發(fā)明的優(yōu)點及效果本發(fā)明選擇合適的培養(yǎng)基以及合理的供試菌，試驗步驟實際合理，通過本發(fā)明的操作方法，可以得到有效的放線菌710發(fā)酵條件，提 高代謝產(chǎn)物抑菌活性，可以提高抗生素的產(chǎn)量，將會對開發(fā)新型農(nóng)藥提供依據(jù)。
具體實施例方式為了理解本發(fā)明，下面通過具體的實施例對本發(fā)明作進一步說明。一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，包括如下步驟(I)、用接種環(huán)將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號培養(yǎng)基斜面上，“Z”字法，在28°C下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；(2)、用無菌接種環(huán)挑取3 5環(huán)接種于裝有IOOmL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25°C，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液，其中液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2. 5g、CaC032 . 0g、H20 1000ml、小米浸種 10. 4g ；(3)、以番茄早疫為供試菌，將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合以1:9、2 :8、3 :7制成平板接入番茄早疫的菌餅(選出最佳發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合的比例)，以無菌水處理作為對照，培養(yǎng)2天，采用十字交叉法測定抑菌圈直徑，每個處理重復3次；(4)、采用單因子實驗，測定碳源、氮源、NaCl進行選擇，在單因子測試的基礎上用正交試驗進行選擇。步驟(4)中碳源的選擇方法，采用如下步驟進行在液體發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎上，其他成分不變而改變碳源的種類，選取三種濃度10. 0g/L、15. 0g/L、20. 0g/L的葡萄糖，每個處理重復3次，進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性，選擇最佳濃度，在其基礎上分別加入蔗糖、乳糖、小米浸種作碳源進行單因子試驗，蔗糖、乳糖、小米分別取三種濃度10. 0g/L、15.0g/L、20.0g/L，每個處理重復3次，進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。不同碳源對放線菌710產(chǎn)抑菌物質(zhì)的影響，如表I所示，結(jié)果表明，采用10. 0g/L的葡萄糖和15. 0g/L的小米作為碳源時，發(fā)酵液的抑菌圈直徑最大。表I
權(quán)利要求
1.一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，其特征在于，包括如下步驟(1)、用接種環(huán)將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號培養(yǎng)基斜面上，“Z”字法，在 28°C下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；(2)、用無菌接種環(huán)挑取3 5環(huán)接種于裝有IOOmL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25°C，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液，其中液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2. 5g、CaC032 . 0g、H20 1000ml、小米浸種 10. 4g ；(3)、以番茄早疫為供試菌，將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合以1:9、2 :8、3 :7制成平板接入番茄早疫的菌餅，以無菌水處理作為對照，培養(yǎng)2天，采用十字交叉法測定抑菌圈直徑，每個處理重復3次；(4)、采用單因子實驗，測定碳源、氮源、NaCl進行選擇，在單因子測試的基礎上用正交試驗進行選擇。
2.如權(quán)利要求1所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中碳源的選擇方法，采用如下步驟進行在液體發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎上，其他成分不變而改變碳源的種類，選取三種濃度10. 0g/L、15. 0g/L、20. Og/L的葡萄糖,每個處理重復3次,進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性，選擇最佳濃度，在其基礎上分別加入蔗糖、乳糖、小米浸種作碳源進行單因子試驗，蔗糖、乳糖、小米分別取三種濃度10. 0g/L、15. 0g/L、20. Og/L，每個處理重復3次，進行搖床發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。
3.如權(quán)利要求1所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中氮源的選擇方法，采用如下步驟進行固定初始液體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源為10. Og/L的葡萄糖和 15. Og/L的小米，其他成分不變，改變氮源種類，分別加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2S04作為氮源作為單因子試驗，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2S04分別設計3. 0g/L、6. 0g/L、9. Og/ L三個濃度水平，每個處理重復3次，進行藥瓶發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。
4.如權(quán)利要求1所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中 NaCl的選擇方法，固定碳源為3. 0g/L酵母膏，其他成分不變，分別加入0. 0,2. 5,5. 0,7. 5、10.0g/L的NaCl，每個處理重復3次，進行搖瓶發(fā)酵，測定發(fā)酵液抑菌活性。
5.如權(quán)利要求1所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中正交試驗，在以上單因子實驗結(jié)果的基礎上，選取葡萄糖、酵母膏、NaCl三個因素，分別取3個水平進行正交試驗，按照L9 (33)安排實驗。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法確定的放線菌710菌株的培養(yǎng)基，其特征在于包括葡萄糖10. Og,酵母膏3. 0g, NaCl 5. Og,小米 15g, CaC032. Og,水 IOOOmLo
全文摘要
本發(fā)明公開了一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，包括如下步驟(1)、將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號培養(yǎng)基斜面上，在28℃下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；(2)、挑取3～5環(huán)接種于裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，25℃，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液；(3)、以番茄早疫為供試菌，將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合制成平板接入番茄早疫的菌餅，培養(yǎng)2天，測定抑菌圈直徑；(4)、采用單因子實驗。本發(fā)明試驗步驟實際合理，通過本發(fā)明的操作方法，可以得到有效的放線菌710發(fā)酵條件，提高代謝產(chǎn)物抑菌活性，可以提高抗生素的產(chǎn)量，將會對開發(fā)新型農(nóng)藥提供依據(jù)。
文檔編號C12Q1/18GK103014131SQ20121049337
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日
發(fā)明者楊鐵順, 趙亮, 柯盛發(fā), 趙永和, 劉青, 吳建平, 閔宇 申請人:天津濱海國際花卉科技園區(qū)股份有限公司