專利名稱：一種浸溶油頁巖的復(fù)合菌劑及浸溶方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物浸礦技術(shù)，尤其是生物浸溶油頁巖的復(fù)合菌劑及浸溶油頁巖的方法
背景技術(shù)：
油頁巖(oil shale)又稱油母頁巖，是一種含有機(jī)質(zhì)(通常約> 3. 5% )的重要能源礦產(chǎn)，其資源量巨大，是石油和天然氣的重要補(bǔ)充和替代資源。油頁巖是一種重要的能源礦產(chǎn)，其資源量巨大，是石油和天然氣的重要補(bǔ)充和替代資源。我國油頁巖資源較為豐富，全國油頁巖資源為7199. 37億t，頁巖油資源為476. 44億t，頁巖油可回收資源為119. 79 億t，總體而言我國油頁巖的含油率屬中等水平，無機(jī)礦物質(zhì)含量普遍較高。合理開發(fā)綜合利用油頁巖資源，必能取得良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，近些年來國內(nèi)外對油頁巖研究較多，主要研究技術(shù)和專利集中在物理和化學(xué)方面，而利用微生物技術(shù)對頁巖油進(jìn)行浸礦處理具有設(shè)備簡單、操作方便、成本低、污染少等優(yōu)點(diǎn)，利于綜合利用和環(huán)境保護(hù)，對實(shí)現(xiàn)資源和經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展有著重要作用和意義。微生物浸礦技術(shù)在一些金屬的提取如銅、金、鎳、鈾等都已有實(shí)際應(yīng)用的，尤其是對黑頁巖中的金屬元素的提取，在提取金屬元素的同時(shí)黑頁巖本身也遭到破壞?；诖宋覀冊O(shè)想利用微生物浸礦技術(shù)處理油頁巖，在保持油頁巖中有機(jī)物不遭到破壞的前提條件下去除其中無機(jī)礦物質(zhì)。微生物浸礦技術(shù)應(yīng)用于油頁巖的處理，主要是利用微生物菌體直接作用，或者是通過其代謝產(chǎn)物間接作用將油頁巖中的無機(jī)礦物質(zhì)分解、去除掉，而不破壞油頁巖中的有機(jī)物。目前應(yīng)用于油頁巖浸礦的菌種主要分為兩大類?！愂腔茏责B(yǎng)型細(xì)菌主要是氧化硫硫桿菌(T. thiooxidans)以及氧化亞鐵鐵桿菌(Ferrobacillus ferrooxidans),它們具有亞鐵氧化酶或還原硫氧化酶,這些酶能催化礦物中的亞鐵和還原硫迅速氧化，結(jié)果導(dǎo)致礦物中的有價(jià)金屬轉(zhuǎn)化為溶液中的離子，低價(jià)硫轉(zhuǎn)化為S042_并釋放出H+，能夠?qū)⒂晚搸r中的碳酸鹽、黃鐵礦及其它溶于酸的無機(jī)礦物質(zhì)去除，剩下一個(gè)多孔的有機(jī)物與無機(jī)物緊密結(jié)合的硅干酪。另一類是化能異養(yǎng)型細(xì)菌主要是膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosu)、膠凍樣芽孢桿菌等。硅酸鹽菌在生長過程中產(chǎn)生的多種代謝產(chǎn)物對礦物有浮選作用，使礦石中的鋁硅酸鹽礦物微粒特別是石英分散到浸出液中，同時(shí)能釋放出硅酸鹽組成成分中的磷、鉀、硅等元素，達(dá)到分解硅酸鹽的目的。我國油頁巖普遍具有較高含量的硅酸鹽類礦物質(zhì)，硅酸鹽性質(zhì)穩(wěn)定不易去除且與干酪根緊密結(jié)合，而直接用化學(xué)方法去除會(huì)破壞干酪根造成能源損失，降低油頁巖的能量產(chǎn)值，利用微生物浸礦技術(shù)處理油頁巖則可以成功避免這個(gè)問題，因此研究如何利用微生物去除硅酸鹽是本技術(shù)方法的核心內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種既能有效去除油頁巖中無機(jī)礦物質(zhì)的同時(shí)又能保持油頁巖中有機(jī)物穩(wěn)定的復(fù)合浸礦菌劑；本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種膠凍樣芽孢桿菌和氧化亞鐵硫桿菌篩選和馴化方法；本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種膠凍樣芽孢桿菌和氧化亞鐵硫桿菌兩種浸礦菌種的保存和制備方法；本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供一種膠凍樣芽孢桿菌和氧化亞鐵硫桿菌兩種浸礦菌劑浸溶油頁巖的方法本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的浸溶油頁巖的復(fù)合浸礦菌劑，其活性成分為氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans)和膠凍樣芽抱桿菌(Bacillus mucilaginosus)。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，包括以下步驟a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ；b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml, 8000rpm離心5min,用滅菌的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的選擇性硅酸鹽培液體培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次；C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4 °C冰箱保存。d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)。步驟b中所述的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液配方為蔗糖10. 0g，Na2HP042. 0g,MgSO4 · 7Η200· 2g, NaClO. lg，蒸餾水 1000ml ；硅酸鹽培養(yǎng)基配方為蔗糖10. 0g, K2HP042. 0g, MgSO4 · 7H200. 2g，NaClO. lg，酵母膏 0. 5g，(NH4) 2S042g，蒸懼水 1000ml ；浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1_3天。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，包括以下步驟e、將權(quán)利要求2中的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液接種于硅酸鹽培養(yǎng)基中活化，并傳代2次；f、將活化后的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5% -8%的接種量接入含有硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48_50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠凍樣芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ；h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。
步驟g中的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為淀粉2. 88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨O. 24g/L ；亞硝酸鈉O. 47g/L ;尿素O. 18g/L，用地下水配制。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，包括以下步驟①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B;②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d,重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存；④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1_3天。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，包括以下步驟⑤、將氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次；⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5% -8%的接種量接入發(fā)酵 罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48-50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IO7/ml ；⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟⑤中所述的9K培養(yǎng)基配方為a 液(NH4) 2S043. Og, K2HPO4O. 5g, KC10. lg，MgSO4. 7Η200· 5g，Ca (NO3) 20· Olg ;去離子水 800mL, H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0,121 °C高壓滅菌 20min ；b 液Fe SO4. 7Η2044· 78g/L，去離子水 200mL，H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0，用孔徑為
O.22 μ m的濾膜過濾除菌，將滅菌后的a液與b液按4 :1的比例混勻；步驟d中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為油頁巖粉末20g/L，黃鐵礦 20g/L，(NH4)2S043. Og/L，K2HPO4O. 5g/L，KC10. lg/L,MgSO4. 7H200. 5g/L，Ca(NO3)2O. 01g/L，硫酸調(diào) pH2 3，地下水配制。用膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillusferrooxidans)浸溶油頁巖的方法，包括以下步驟分兩階段進(jìn)行第一階段先將油頁巖粉碎至l_5cm, 5-10cm, 10_15cm, 15_20cm,每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25%，在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4-5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶油頁巖，以去除油頁巖中酸溶性組分，連續(xù)浸礦4天，浸礦結(jié)束后用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌，取樣分析浸礦效果，油頁巖失重8%左右，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)量提高了 7%左右。第二階段在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4_5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)稀釋制備的膠凍樣芽孢桿菌工作液連續(xù)浸礦6天，浸溶油頁巖中的硅酸鹽組分，硅酸鹽菌浸礦結(jié)束取樣分析綜合浸礦效果，油頁巖失重18%左右，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)量提高了20%左右。有益效果利用篩選到的兩種菌制備浸礦菌劑分兩段浸礦，浸礦效果相對已有技術(shù)非常明顯，浸礦結(jié)束后利用SEM觀測油頁巖表面發(fā)生明顯能有效的去除油頁巖中的無機(jī)礦物質(zhì)，保持有機(jī)物穩(wěn)定性，油頁巖本身也變的疏松。在微生物作用下礦物質(zhì)結(jié)構(gòu)明顯變化，脫離油頁巖主體現(xiàn)象很顯著；同時(shí)利用XRD測定油頁巖無機(jī)物晶形在微生物作用下也發(fā)生明顯變化；而利用紅外色譜檢測得到的結(jié)果是，浸礦后油頁巖的有機(jī)物得到了有效的 積累，尤其是鏈狀脂肪烴的積累。浸礦結(jié)束后油頁巖變得疏松，有分層現(xiàn)象的出現(xiàn)，重量與浸礦前相比降低了 18%左右。利用鋁甑干餾法測定浸礦后頁巖油產(chǎn)率提高了 20%左右。


附圖I是未經(jīng)氧化亞鐵硫桿菌處理的樣品掃描電鏡照片附圖2是經(jīng)氧化亞鐵硫桿菌處理的樣品浸礦4d后掃描電鏡照片附圖3a是未經(jīng)膠凍樣芽孢桿菌處理的樣品掃描電鏡照片附圖3b是未經(jīng)膠凍樣芽孢桿菌處理的樣品能譜照片附圖4a是經(jīng)膠凍樣芽孢桿菌處理的樣品掃描電鏡照片附圖4b是經(jīng)膠凍樣芽孢桿菌處理的樣品能譜照片附圖5是膠凍樣芽孢桿菌浸礦過程硅酸鹽溶解圖附圖6是XRD分析浸礦過程中各組分相對含量變化附圖7是IR分析浸礦過程中油頁巖中有機(jī)物的富集及穩(wěn)定性分類命名膠凍樣芽孢桿菌拉丁文名Bacillusmucilaginosus保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心地址北京市朝陽區(qū)大屯路保藏日期2012年09月07日保藏編號(hào)CGMCCNo. 6542分類命名氧化亞鐵硫桿菌拉丁文名Thiobacillusferrooxidans保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心地址北京市朝陽區(qū)大屯路保藏日期2012年09月07日保藏編號(hào)CGMCCNo. 654具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明浸溶油頁巖的復(fù)合浸礦菌劑，其活性成分為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillusmucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans)。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，包括以下步驟a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ;b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml, 8000rpm離心5min,用滅菌的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次； C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4 °C冰箱保存。d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)。步驟b中所述的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液配方為蔗糖10. 0g，Na2HP042. 0g,MgSO4 · 7Η200· 2g, NaClO. lg，蒸餾水 1000ml ；選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基配方為蔗糖10. 0g,K2HP042. 0g，MgSO4 ·7Η200. 2g,NaC10. lg,酵母膏 0. 5g，(NH4) 2S042g，蒸餾水 1000ml ；浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1_3天。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，包括以下步驟e、將權(quán)利要求2中的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液接種于娃酸鹽培養(yǎng)基中活化,并傳代2次；f、將活化后的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5% -8%的接種量接入含有硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48_50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠凍樣芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ；h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟g中的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為淀粉2. 88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨0. 24g/L ；亞硝酸鈉0. 47g/L ;尿素0. 18g/L，用地下水配制。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，包括以下步驟①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B;②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d，重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存；④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1_3天。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，包括以下步驟⑤、將氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次； ⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5% -8%的接種量接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48-50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IO7/ml ；⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟⑤中所述的9K培養(yǎng)基配方為a 液(NH4) 2S043. Og, K2HPO4O. 5g, KC10. lg，MgSO4. 7Η200· 5g，Ca (NO3) 20· Olg ;去離子水 800mL, H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0,121 °C高壓滅菌 20min ；b 液Fe SO4. 7Η2044· 78g/L，去離子水 200mL, H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0，用孔徑為
O.22 μ m的濾膜過濾除菌，將滅菌后的a液與b液按4 :1的比例混勻；步驟d中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為油頁巖粉末20g/L，黃鐵礦 20g/L，(NH4)2S043. Og/L, K2HPO4O. 5g/L，KC10. lg/L,MgSO4. 7H200. 5g/L，Ca(NO3)2O. 01g/L，硫酸調(diào) pH2 3，地下水配制。用膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillusferrooxidans)浸溶油頁巖的方法，包括以下步驟分兩階段進(jìn)行第一階段先將油頁巖粉碎至l-5cm,5-10cm, 10-15cm, 15-20cm,每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25%，在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4-5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶已去除油頁巖中酸溶性組分，連續(xù)浸礦4天，浸礦結(jié)束后用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌，取樣分析浸礦效果，油頁巖失重8%，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)量提高了 7%。第二階段在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4_5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)稀釋制備的膠凍樣芽孢桿菌工作液連續(xù)浸礦6天，浸溶油頁巖中的硅酸鹽組分，硅酸鹽菌浸礦結(jié)束取樣分析綜合浸礦效果，油頁巖失重18%左右，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)量提高了20%左右；實(shí)施例I
步驟一、浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，包括以下步驟①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B;②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d,重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存；④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化2天。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，包括以下步驟⑤、將氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次；⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照6%的接種量接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IOVml ；
⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦；待用。步驟二、浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，包括以下步驟a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ;b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml,8000rpm離心5min,用滅菌的蔗糖 10. Og, Κ2ΗΡ042· Og, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，酵母膏 0. 5g，(NH4) 2S042g，蒸餾水1000ml制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的蔗糖 10. 0g, Na2HP042. 0g, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，蒸餾水 1000ml 制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次；C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4 °C冰箱保存。d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化2天。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，包括以下步驟e、將權(quán)利要求2中的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液接種于娃酸鹽培養(yǎng)基中活化,并傳代2次；f、將活化后的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5%的接種量接入含有淀粉2. 88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨O. 24g/L ;亞硝酸鈉O. 47g/L ;尿素O. 18g/L，用地下水配制的硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間48h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠凍樣芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ；
h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟三、選取樺甸地下開采油頁巖礦石，選取粒徑在l_5cm, 5-10cm, 10_15cm,15-20cm的樣品，每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25%配比并混合。步驟四、將配比混合好的油頁巖40kg加入到的浸礦槽中，按固液比為I :1，投加氧化亞鐵硫桿菌發(fā)酵液制備的工作液40L ;在室溫條件下，曝氣量為4L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶已去除油頁巖中酸溶性組分，控制溫度在30°C，pH=3，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶4天，結(jié)束第一階段浸礦。步驟五、用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌后放入浸礦槽中，固液比為I :1，投加膠凍樣芽孢桿菌液40L，在室溫條件下，曝氣量為5L/min，控制溫度在30°C，pH = 7，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶6天，去除硅酸鹽組分，完成第二階段浸礦。全部樣品浸礦結(jié)束后，經(jīng)測試浸礦結(jié)果，干餾后頁巖油產(chǎn)量提高了 22%。實(shí)施例2步驟一、浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，包括以下步驟①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B;②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d,重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存；④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化3天。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，包括以下步驟⑤、將氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次；⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照8%的接種量接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間49h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IOVml ；⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦；待用。步驟二、浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，包 括以下步驟a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ；b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml,8000rpm離心5min,用滅菌的蔗糖 10. Og, Κ2ΗΡ042· Og, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，酵母膏 0. 5g，(NH4) 2S042g，蒸餾水1000ml制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的蔗糖 10. Og, Na2HP042. Og, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，蒸餾水 1000ml 制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次；C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4 °C冰箱保存。d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化3天。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，包括以下步驟e、將權(quán)利要求2中的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液接種于娃酸鹽培養(yǎng)基中活化,并傳代2次；f、將活化后的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照8%的接種量接入含有淀粉2. 88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨O. 24g/L ;亞硝酸鈉O. 47g/L ;尿素O. 18g/L，用地下水配制的硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠凍樣芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ；h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟三、選取農(nóng)安油頁巖礦石，選取粒徑在l_5cm, 5-10cm, 10_15cm, 15_20cm的樣品，每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25 %配比并混合。步驟四、將配比混合好的油頁巖40kg加入到的浸礦槽中，按固液比為I :1，投加氧化亞鐵硫桿菌發(fā)酵液制備的工作液40L ;在室溫條件下，曝氣量為4L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶已去除油頁巖中酸溶性組分，控制溫度在28°C，pH=3，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶4天，結(jié)束第一階段浸礦。步驟五、用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌后放入浸礦槽中，固液比為I :1，投加膠凍樣芽孢桿菌工作液40L，在室溫條件下，曝氣量為5L/min,控制溫度在28°C，pH = 7，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶6天，去除硅酸鹽組分，完成第二階段浸礦。全部樣品浸礦結(jié)束后，經(jīng)測試浸礦結(jié)果，干餾后頁巖油產(chǎn)量提高了 21%。實(shí)施例3
步驟一、浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，包括以下步驟①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B;②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d,重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存；④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化2天。浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，包括以下步驟⑤、將氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次；⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照7%的接種量接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間48h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IOVml ；⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦；待用。步驟二、浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，包括以下步驟a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ；b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml,8000rpm離心5min,用滅菌的蔗糖 10. Og, Κ2ΗΡ042· Og, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，酵母膏 0. 5g，(NH4) 2S042g，蒸餾水1000ml制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的蔗糖 10. Og, Na2HP042. Og, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. lg，蒸餾水 1000ml 制備的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次；C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4 °C冰箱保存。d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化2天。浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，包括以下步驟e、將權(quán)利要求2中的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌液接種于娃酸鹽培養(yǎng)基中活化,并傳·代2次；f、將活化后的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照7%的接種量接入含有淀粉
2.88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨O. 24g/L ;亞硝酸鈉O. 47g/L ;尿素O. 18g/L，用地下水配制的硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為49h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠凍樣芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ；h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。步驟三、選取撫順油頁巖礦石，選取粒徑在l_5cm, 5-10cm, 10_15cm, 15_20cm的樣品，每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25 %配比并混合。步驟四、將配比混合好的油頁巖40kg加入到的浸礦槽中，按固液比為I :1，投加氧化亞鐵硫桿菌發(fā)酵液制備的工作液40L ;在室溫條件下，曝氣量為4L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶已去除油頁巖中酸溶性組分，控制溫度在25°C，pH=3，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶4天，結(jié)束第一階段浸礦。步驟五、用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌后放入浸礦槽中，固液比為I :1，投加膠凍樣芽孢桿菌工作液40L，在室溫條件下，曝氣量為4L/min,控制溫度在25°C，pH = 7，飽和通氣狀態(tài)下，連續(xù)浸溶6天，去除硅酸鹽組，完成第二階段浸礦。全部樣品浸礦結(jié)束后，經(jīng)測試浸礦結(jié)果，干餾后頁巖油產(chǎn)量提高了 19%。
權(quán)利要求
1.一種浸溶油頁巖的復(fù)合浸礦菌劑，其特征在于，其活性成分為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxifans)。
2.—種浸溶油頁巖中娃酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，其特征在于，包括以下步驟 a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經(jīng)嚴(yán)重風(fēng)化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養(yǎng)液中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群A ； b、馴化,取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml,8000rpm離心5min,用滅菌的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7天，重新傳代，共馴化5次； C、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到I株硅酸鹽高效單菌，4°C冰箱保存。
d、經(jīng)鑒定該株娃酸鹽高效單菌為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillusmucilaginosus)。
步驟b中所述的選擇性硅酸鹽培養(yǎng)液配方為蔗糖10. Og，Na2HP042. Og,MgSO4 · 7Η200· 2g, NaClO. lg，蒸餾水 1000ml ； 硅酸鹽培養(yǎng)基配方為蔗糖10. Og, Κ2ΗΡ042· 0g, MgSO4 · 7Η200· 2g，NaClO. Ig,酵母膏.0.5g，(NH4) 2S042g，蒸餾水 1000ml。
3.一種浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠質(zhì)芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，其特征在于，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養(yǎng)基中活化，取保藏的菌種置于IOOml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1_3天。
4.一種浸溶油頁巖中娃酸鹽的膠質(zhì)芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 e、將權(quán)利要求2中的膠質(zhì)芽孢桿菌浸礦菌液接種于硅酸鹽培養(yǎng)基中活化，并傳代2次； f、將活化后的膠質(zhì)芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期； g、將步驟f中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5%-8%的接種量接入含有硅酸鹽菌發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48_50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液中膠質(zhì)芽孢桿菌的濃度達(dá)到108/ml ； h、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。
步驟g中的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為淀粉2. 88g/L ;麥芽糖2. 08g/L ;硝酸銨0. 24g/L ;亞硝酸鈉0. 47g/L ;尿素0. 18g/L，用地下水配制。
5.一種浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，其特征在于，包括以下步驟 ①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30°C恒溫振蕩器中振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；接種于9K培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)5天，即為油頁巖浸礦菌群B ； ②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養(yǎng)基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養(yǎng)基中，在30°C，120rpm搖床里培養(yǎng)7d,重新傳代，共馴化5次；③、馴化結(jié)束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到I株高效浸礦產(chǎn)酸單菌，4°C冰箱保存； ④、經(jīng)鑒定該株高效浸礦產(chǎn)酸菌為氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillusferrooxidans0
6.一種浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，其特征在于，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1-3天。
7.一種浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 ⑤、將權(quán)利要求5中的氧化亞鐵硫桿菌接種于9K培養(yǎng)基中活化，并傳代2次； ⑥、將活化后的化亞鐵硫桿浸礦菌重新接種于9K培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期； ⑦、將步驟⑥中振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌種按照5%-8%的接種量接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中含有產(chǎn)酸菌對應(yīng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為30°C，設(shè)定DO值為6mg/L，發(fā)酵時(shí)間為48-50h，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得發(fā)酵液，氧化亞鐵硫桿菌的發(fā)酵液菌濃度達(dá)到IOVml ； ⑧、將獲得的發(fā)酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。
8.按照權(quán)利要求7所述的浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，其特征在于，步驟⑤中所述的9K培養(yǎng)基配方為a 液(NH4) 2S043. Og, K2HPO4O. 5g，KC10. lg, MgSO4. 7H200. 5g，Ca(NO3)2O. Olg ;去離子水800mL, H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0,121 °C高壓滅菌 20min ；b 液Fe SO4. 7Η2044· 78g/L,去離子水 200mL, H2SO4 調(diào)節(jié) pH 至 2. 0，用孔徑為 0. 22 μ m的濾膜過濾除菌，將滅菌后的a液與b液按4 1的比例混勻。
9.按照權(quán)利要求7所述的浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的制備方法，其特征在于，步驟d中的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為 油頁巖粉末 20g/L,黃鐵礦 20g/L, (NH4) 2S043. 0g/L, K2HPO4O. 5g/L，KC10. lg/L，MgSO4. 7H200. 5g/L，Ca(NO3)2O. 01g/L，硫酸調(diào) pH2 3，地下水配制。
10.一種膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans)浸溶油頁巖的方法,其特征在于,包括以下步驟分兩階段進(jìn)行 第一階段先將油頁巖粉碎至l-5cm,5-10cm, 10-15cm, 15-20cm,每種粒徑范圍的樣品質(zhì)量比均為25%，在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4-5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶已去除油頁巖中酸溶性組分，連續(xù)浸礦4天，浸礦結(jié)束后用地下水沖洗油頁巖去除浸溶過程中殘留的酸性培養(yǎng)基及浸礦菌，取樣分析浸礦效果，油頁巖失重8%左右，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)量提高了 7%左右。
第二階段在室溫條件下，按固液比為I :1，曝氣量為4-5L/min，用發(fā)酵后并經(jīng)稀釋制備的膠凍樣芽孢桿菌工作液連續(xù)浸礦6天，浸溶油頁巖中的硅酸鹽組分，硅酸鹽菌浸礦結(jié)束取樣分析綜合浸礦效果，油頁巖失重18%左右，鋁甑干餾法測定頁巖油產(chǎn)率提高了 20%左右。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種浸溶油頁巖的復(fù)合菌劑及浸溶方法。浸溶油頁巖的復(fù)合浸礦菌劑，其活性成分為氧化亞鐵硫桿菌和膠凍樣芽孢桿菌。浸溶方法分兩個(gè)階段第一階段用發(fā)酵后并經(jīng)液稀釋制備的氧化亞鐵硫桿菌工作液浸溶油頁巖中酸溶性組分；第二階段用發(fā)酵后并經(jīng)稀釋制備的膠凍樣芽孢桿菌工作液浸溶油頁巖中的硅酸鹽組分。用SEM觀測浸礦后油頁巖，有效的去除了油頁巖中的無機(jī)礦物質(zhì)，礦物質(zhì)結(jié)構(gòu)變化明顯，脫離油頁巖主體現(xiàn)象顯著；利用XRD測定油頁巖無機(jī)物晶形也發(fā)生明顯變化；用紅外色譜檢測浸礦后有機(jī)物得到了有效積累，尤其是鏈狀脂肪烴的積累。重量與浸礦前相比降低了18％左右。利用鋁甑干餾法測定浸礦后頁巖油產(chǎn)率提高了20％左右。
文檔編號(hào)C12N1/36GK102965302SQ20121037600
公開日2013年3月13日 申請日期2012年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月30日
發(fā)明者張?zhí)m英, 張學(xué)慶, 任何軍, 高松, 安永磊 申請人:吉林大學(xué)