專利名稱：微生物發(fā)酵合成γ-氨基丁酸的方法及發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵方法，尤其涉及一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法及發(fā)酵培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
Y -氨基丁酸(Y-aminobutyric acid,簡稱GABA)是一種非蛋白質(zhì)組成的天然氨基酸，是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布的最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，約50%的中樞突觸部位以GABA為遞質(zhì)，在大腦皮質(zhì)、海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)和小腦起重要作用，并對機(jī)體的多種功能具有調(diào)節(jié)作用，所以GABA是一種很好的醫(yī)療藥物及保健品的原料。隨著研究深入，GABA的生理功能不斷得到闡明，已發(fā)展成為一種新型功能性因子，正逐漸被廣泛用于醫(yī)藥、食品保健、化工及農(nóng)業(yè)等行業(yè)。
乳酸菌是一種存在于人類體內(nèi)的益生菌，能夠?qū)⑻妓衔锇l(fā)酵生成乳酸，有幫助消化、有助于人體腸道的健康等功能，因此常被視為健康食品。科學(xué)家長期研究的結(jié)果證明，以乳酸菌為代表的益生菌是人體必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，它們數(shù)量的多和少，直接影響到人的健康與壽命。因此，利用乳酸菌生產(chǎn)的GABA能達(dá)到食品安全級， 并可進(jìn)一步豐富乳酸菌作為益生菌的保健功效，具有廣闊應(yīng)用范圍和市場前景 。
小米是我國北方主要小雜糧之一，具有“百谷之首”的美譽(yù)。小米糠是小米加工過程的副產(chǎn)品，占小米質(zhì)量的6% 8%。按照我國小米年產(chǎn)量500萬t計(jì)算，每年加工小米將廣生小米糖40萬t左右。研究表明，小米糖中含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、多糖、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)素和生育酚、亞油酸、Y-谷維醇、植物留醇、神經(jīng)酰胺等生理活性物質(zhì)。因此， 小米糠在國外被譽(yù)為“天賜營養(yǎng)源”。在我國，小米糠絕大多數(shù)被用作低附加值的禽獸飼料或作為食物資源加以利用僅局限于提取米糠油和米糠蛋白，利用率頗低，未將其所具有的營養(yǎng)價值和資源效益充分發(fā)揮，浪費(fèi)了這一大自然資源。聯(lián)合國工業(yè)發(fā)展組織稱其為“一種未充分利用的工業(yè)原料”。目前，隨著研究的深入，有以小米糠為原料添加生化成分進(jìn)行食藥用真菌培養(yǎng)的報(bào)道，但用小米糠為培養(yǎng)基通過微生物發(fā)酵合成GABA的研究未見有報(bào)道。 該培養(yǎng)基具有配方簡單、原料價格低廉，純天然、無污染等優(yōu)點(diǎn)。
目前在稻米糠研究上較為深入，國內(nèi)外在稻米糠的綜合開發(fā)利用上已取得一些成果和專利。如中國發(fā)明專利(申請?zhí)?01010145627. 8申請日2010-04_02)公開了一種發(fā)酵生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其包括步驟將米糠、谷氨酸及奶粉按比例混合，其余以水補(bǔ)足，以制作培養(yǎng)基；然后，將乳酸菌液接種至冷卻后的培養(yǎng)基，并于均勻混合后，在 30-42°C下發(fā)酵4小時以上。由此方法及其培養(yǎng)基所得到的發(fā)酵物的Y-氨基丁酸含量遠(yuǎn)高于米糠原料，可以直接作為食品添加物。該專利所用的菌種是商業(yè)型制作酸奶的代號為 YC-380乳酸菌粉，由嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌按比例混合調(diào)配而成。
小米糠和稻米糠均為農(nóng)產(chǎn)品加工過程的副產(chǎn)品，但據(jù)研究，在主要營養(yǎng)成分上存在較大的差異，如表I所有示，粗蛋白質(zhì)含量小米糠為12. 3%、稻米糠為6. 8%,粗脂肪含量小米糠為12. 4%、稻米糠為7. 9%，中性洗滌纖維含量小米糠為54. 0%、稻米糠為22. 9%等等。
表I小米糠與稻米糠主要營養(yǎng)成分的比較(％)營養(yǎng)成分有機(jī)物粗蛋白質(zhì)粗纖維粗脂肪無氮浸出物粗灰分中性洗滌纖維酸性洗滌纖維小米糠92. 612. 327. 812.440. 47. I54. O36.4稻米糠86. 36. 832. 47. 939. 23. 722. 913.4目前，隨著研究的深入，有以小米糠為原料添加生化成分進(jìn)行食藥用真菌培養(yǎng)的報(bào)道， 但用小米糠為培養(yǎng)基通過微生物發(fā)酵合成GABA的研究未見有報(bào)道。該培養(yǎng)基具有配方簡單、原料價格低廉，純天然、無污染等優(yōu)點(diǎn)。
常規(guī)利用乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)GABA使用的是MRS發(fā)酵培養(yǎng)基，其配方為酪蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖、乙酸鈉、磷酸氫二鉀、檸檬酸二胺、吐溫-80、硫酸鎂、硫酸錳及谷氨酸 (或其鈉鹽)。相對于本發(fā)明用的小米糠培養(yǎng)基，一方面，MRS成分復(fù)雜，導(dǎo)致下游GABA分·離純化操作復(fù)雜；另一方面，MRS的原料價格較高，從而降低了工業(yè)生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)可行性和競爭性。如申請人申請的中國發(fā)明專利(申請?zhí)?00910102279. 3申請日:2009-09_10)公開了高產(chǎn)Y-氨基丁酸的短乳桿菌L2菌株用于Y-氨基丁酸制備的方法，短乳桿菌L2菌株藏編號為CCTCC NO :M209132，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)，保藏日期為2009年6月25日包括以下的步驟①挑取適量菌種接入液體MRS 中，30°C活化培養(yǎng)12 18 h ;②在TYG培養(yǎng)液中，取培養(yǎng)后的種子培養(yǎng)液，按O. 3 O. 8 % 的接種量接種后，30°C靜置培養(yǎng)18 30h作發(fā)酵種子?、墼谫|(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 5 2. 0%谷氨酸鈉的TYG液體培養(yǎng)基中，取培養(yǎng)18 30h的種子培養(yǎng)液，按2 4%接種量接種，30°C靜置培養(yǎng)45 50 h，可得高GABA含量的乳酸菌培養(yǎng)液。如果將小米糠這一農(nóng)副產(chǎn)品進(jìn)一步開發(fā)利用，作為培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基，大大降低了它的成本，具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中天然食品GABA含量較低、不安全；而培養(yǎng)基成分存在高鹽分、高成本等問題。本發(fā)明的一個目的在于提供一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，該方法生物合成GABA操作簡便、產(chǎn)量高、易于分離純化，無污染、產(chǎn)品達(dá)到食品安全級。本發(fā)明的另外一個目的是提供一種微生物發(fā)酵合成Y -氨基丁酸的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的配制簡單、原料價格低廉，純天然。
為了實(shí)現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案一種微生物發(fā)酵合成Y -氨基丁酸的方法，該方法采用的微生物為短乳桿菌 {LactobacillusL2菌株,該菌株同中國發(fā)明專利(申請?zhí)?00910102279. 3申請日2009-09-10)所述的短乳桿菌L2菌株，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為 中國武漢武漢大學(xué)，保藏編號為=CCTCC NO M 209132，該短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化后，取菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)用作發(fā)酵種子，再以f 5%體積百分比的接種量接種于培養(yǎng)基中，所述的培養(yǎng)基包括小米糠10 g/L 100 g/L，L-谷氨酸鈉3(T80g/L， 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始PH為3. 0(Γ5. 00，2(T45°C靜止培養(yǎng)50h 80 h，即得高含Y -氨基丁酸的乳酸菌發(fā)酵液。
作為優(yōu)選，所述的L-谷氨酸鈉為4(T70g/L。最優(yōu)選為L-谷氨酸鈉為50g/L。
作為優(yōu)選，所述的調(diào)節(jié)pH為3. 50 4· 50。
作為優(yōu)選，所述的靜止培養(yǎng)的溫度為25 40°C。
作為優(yōu)選，所述的靜止培養(yǎng)的時間為66 h 72 h。
為了實(shí)現(xiàn)上述的第二個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由小米糠10 g/L 100 g/L, L-谷氨酸鈉3(T80g/L，加入蒸餾水混合后，調(diào)節(jié)pH 3. 0(Γ5. 00，滅菌制得。
作為優(yōu)選，所述的L-谷氨酸鈉為4(T70g/L。最優(yōu)選為L-谷氨酸鈉為50g/L。
作為優(yōu)選，所述的調(diào)節(jié)pH為3. 50 4· 50。
本發(fā)明由于采用了上述的技術(shù)方案，所述的培養(yǎng)基的配制簡單、原料價格低廉，純天然；生物合成GABA操作簡便、產(chǎn)量高、易于分離純化，無污染、產(chǎn)品達(dá)到食品安全級。本發(fā)明使用小米糠培養(yǎng)乳酸菌，旨在高產(chǎn)高效生產(chǎn)食藥用級的GABA或直接作為功能食品添加物，為工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)提供可行性，也為微生物發(fā)酵生產(chǎn)GABA提供了新的方法，與常規(guī)的培養(yǎng)基相比具有更廣泛的應(yīng)用前景。


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圖檢測圖。
圖.-MSG底物濃度對短乳桿菌L2菌株GABA合成的影響。圖8短乳桿菌L2菌株小米糠發(fā)酵液中純化的GABA透明針狀結(jié)晶。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實(shí)施方式
做一個詳細(xì)的說明。
I 菌株短乳桿菌)L2菌株。該菌株由本實(shí)驗(yàn)室前期從酸菜中篩選,具有高產(chǎn)Y-氨基丁酸的特點(diǎn)，在TYG液體培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h GABA產(chǎn)量可達(dá)5 g/L 12 g/ L，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，編號為CCTCC NO M 209132。
2培養(yǎng)基瓊脂試管斜面培養(yǎng)基酵母膏10 g,葡萄糖15 g,碳酸韓15 g,瓊脂15 g,蒸懼水1000 mL。用于L2菌株的保藏。
TYG液體培養(yǎng)基胰蛋白胨O. 5 %，酵母膏O. 5 %，葡萄糖I. O %，丁二酸鈉O. 5 %， PH6. 5。用于L2菌株前期菌種篩選。
MRS平板培養(yǎng)基葡萄糖10 g,酵母膏10 g,蛋白胨5 g,乙酸鈉2 g,硫酸鎂20 mg, 硫酸猛I mg,氯化鈉I mg,硫酸亞鐵I mg,瓊脂20 g,蒸懼水1000 mL,pH6. 50。用于L2菌株菌種活化。
GYP種子培養(yǎng)基胰蛋白胨5 g,葡萄糖10 g,酵母膏5 g, 丁二酸鈉5 g,蒸懼水 1000 mL, pH 6. 50。用于L2菌株種子的制備。5
不同濃度的小米糠培養(yǎng)基小米糠10 g/L 80 g/L，L-谷氨酸鈉(L-MSG) 50g/L, 蒸餾水1000 mL, pH4. 00。用于L2菌株發(fā)酵合成GABA。
3操作條件的確定3. I小米糠發(fā)酵參數(shù)的確定 3. I. I發(fā)酵培養(yǎng)基成分的確定探討了以小米糠和稻米糠為主要成分的培養(yǎng)基配方對短乳桿菌L2菌株GABA合成的影響。分別向小米糠培養(yǎng)基(小米糠50 g/L, L-MSG 20 g/L，蒸餾水1000 mL)和稻米糠培養(yǎng)基(稻米糠50 g/L, L-MSG 20 g/L，蒸餾水1000 mL)中加入10 g/L的脫脂奶粉進(jìn)行對比試驗(yàn)。然后將初始PH調(diào)成4. 00，按3% (v/v)接入的培養(yǎng)24 h種子液，30°C靜止培養(yǎng)24 h， 用高效液相色譜測定發(fā)酵液中GABA的含量。結(jié)果顯示試驗(yàn)所采用的8種培養(yǎng)基配方，其中的有4種較適用于L2菌株GABA的合成，而又以培養(yǎng)基6 (小米糠+ L-MSG)為最適宜GABA 合成配方(附圖I)。表明小米糠和稻米糠對短乳桿菌L2菌株GABA合成的影響不同，并且在小米糠中加入脫脂奶粉對L2菌株合成GABA幾乎沒有影響。
3. I. 2適宜初始pH的確定選取最適宜GABA合成小米糠培養(yǎng)基配方(小米糠50 g/L，L-MSG 20g/L，蒸餾水1000 mL)用IN的碳酸氫鈉和IN的檸檬酸溶液調(diào)成不同的培養(yǎng)基初始pH，分別為3. 00,3. 60、 4. 00,4. 40,4. 60,4. 80,5. 00,5. 20,5. 40,5. 60,5. 80,6. 00 和 6. 20，然后按 3% (v/v)接入的培養(yǎng)24 h種子液，30°C靜止培養(yǎng)24 h，用高效液相色譜測定發(fā)酵液中GABA的含量。結(jié)果表明L2菌株用小米糠培養(yǎng)基生產(chǎn)GABA適宜初始pH為pH4. 00 (附圖2)。
3. I. 3適宜培養(yǎng)溫度的確定將小米糠培養(yǎng)基(小米糠50 g/L, L-MSG 20 g/L，蒸餾水1000 mL)初始pH調(diào)成4. 00， 然后按 3% (v/v)接入的培養(yǎng) 24 h 種子液，分別在 4。。、10。。、20。。、30。。、40。。、50。。、60 V、 70°C八個溫度下靜置培養(yǎng)24 h，用高效液相色譜測定發(fā)酵液中GABA的含量。結(jié)果表明L2 菌株發(fā)酵生產(chǎn)GABA的溫度以30°C為宜(附圖3)。
3. I. 4適宜發(fā)酵時間的確定將上述小米糠培養(yǎng)基(小米糠50 g/L，L-MSG 50 g/L，蒸餾水1000 mL)初始pH調(diào)成4.00，然后按3% (v/v)接入的培養(yǎng)24 h種子液，30°C靜止培養(yǎng)108 h，每6 h取樣測定發(fā)酵液PH變化和GABA的含量。結(jié)果顯示隨著發(fā)酵時間的延長，發(fā)酵液pH在(Γ12 h略有下降，但隨著GABA的逐步合成，pH逐步上升。在發(fā)酵72 h時，發(fā)酵液的對應(yīng)pH和GABA的含量分別是6. 41和28. 247 g/L，當(dāng)高于pH 6. 20時，已不適合GABA的合成(附圖4)。本著經(jīng)濟(jì)效益最大化的原則，最佳發(fā)酵時間確定為66 h^72 ho
3. I. 5適宜底物濃度的確定將不同L-MSG濃度的小米糠培養(yǎng)基(小米糠50 g/L, L-MSG分別為20 g/L,30 g/L,40 g/L、50 g/L、60 g/L，蒸餾水1000 mL)初始pH調(diào)成4. 00，然后按3% (v/v)接入的培養(yǎng)24 h種子液，30°C靜止培養(yǎng)72 h，用高效液相色譜測定不同L-MSG濃度發(fā)酵液中GABA的含量。 結(jié)果表明L2菌株發(fā)酵生產(chǎn)GABA適宜底物L(fēng)-MSG濃度為50 g/L (附圖5)。
4具體操作和實(shí)施方法短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子；以3% (v/v)的接種量接種到小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基(小米糠添加量10g/L 80 g/L, L-MSG 50g/L，初始 pH 4. 00，蒸餾水 1000 mL)中，30°C靜止培養(yǎng)約 66 h 72 h，即可得高GABA含量的乳酸菌發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)高效液相色譜分析GABA的產(chǎn)量可達(dá)12 g/ L 32 g/L (附圖6，附圖7)，經(jīng)分離純化洗脫、濃縮與結(jié)晶等步驟可得GABA透明針狀結(jié)晶 (附圖8)。
實(shí)施例I短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3% (v/v)的接種量接種于含10 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為12. 247 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例2短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3% (v/v)的接種量接種到含20 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為19. 134 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例3短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3 % (v/v)的接種量接種于含30 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為23. 78 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例4短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3% (v/v)的接種量接種于含40 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 V 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為27. 398 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例5短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3 %(v/v)的接種量接種于含50 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 V 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為28. 247 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例6短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3% (v/v)的接種量接種于含60 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為29. 904 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
實(shí)施例7短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3 % (v/v)的接種量接種于含70 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為32. 037 g/L的乳酸菌發(fā)酵液(附圖7)。
實(shí)施例8短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化24 h后，取一環(huán)菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)24 h作發(fā)酵種子，以3 % (v/v)的接種量接種于含80 g/L小米糠發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C 靜止培養(yǎng)約66 h 72 h，經(jīng)高效液相色譜分析可得GABA含量為29. 647 g/L的乳酸菌發(fā)酵液。
權(quán)利要求
1.一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，該方法采用的微生物為短乳桿菌iLactobacillusbrevis') L2菌株,該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)，保藏編號為CCTCCNO :M209132，其特征在于短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化后，取菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)用作發(fā)酵種子，再以f 5%體積百分比的接種量接種于培養(yǎng)基中，所述的培養(yǎng)基包括小米糠10g/L 100g/L，L-谷氨酸鈉3(T80g/L,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH為3. 00 5. 00，2(T45°C靜止培養(yǎng)50h 80h，即得高含Y -氨基丁酸的乳酸菌發(fā)酵液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，其特征在于L-谷氨酸鈉為4(T70g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，其特征在于L-谷氨酸鈉為50g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，其特征在于調(diào)節(jié) pH 為 3. 50 4· 50。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，其特征在于靜止培養(yǎng)的溫度為25 40°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的方法，其特征在于靜止培養(yǎng)的時間為66h 72h。
7.微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的培養(yǎng)基，其特征在于該培養(yǎng)基由小米糠10g/L 100g/L，L-谷氨酸鈉3(T80g/L，加入蒸餾水混合后，調(diào)節(jié)pH3. 00^5. 00，滅菌制得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的培養(yǎng)基，其特征在于L-谷氨酸鈉為40 70g/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的培養(yǎng)基，其特征在于L-谷氨酸鈉為50g/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物發(fā)酵合成Y-氨基丁酸的培養(yǎng)基，其特征在于調(diào)節(jié)ρΗ3· 50 4· 50。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵方法，尤其涉及一種微生物發(fā)酵合成γ-氨基丁酸的方法及發(fā)酵培養(yǎng)基。一種微生物發(fā)酵合成γ-氨基丁酸的方法，該方法采用的微生物為短乳桿菌(Lactobacillusbrevis)L2菌株，該短乳桿菌L2菌株經(jīng)MRS培養(yǎng)平板活化后，取菌種轉(zhuǎn)接到GYP種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)用作發(fā)酵種子，再以1~5%體積百分比的接種量接種于培養(yǎng)基中，所述的培養(yǎng)基包括小米糠10g/L～100g/L，L-谷氨酸鈉30~80g/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH為3.00~5.00，20~45℃靜止培養(yǎng)50h～80h，即得高含γ-氨基丁酸的乳酸菌發(fā)酵液。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基的配制簡單、原料價格低廉，純天然；生物合成GABA操作簡便、產(chǎn)量高、易于分離純化，無污染、產(chǎn)品達(dá)到食品安全級。
文檔編號C12P13/00GK102925504SQ20121030237
公開日2013年2月13日 申請日期2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月23日
發(fā)明者蔣冬花, 高愛同 申請人:浙江師范大學(xué)