專利名稱：解淀粉芽胞桿菌906及其所產(chǎn)生的細菌素和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種解淀粉芽胞桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)906及其所產(chǎn)生的細菌素和細菌素的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
單核細胞增生李斯特菌(簡稱單增李斯特菌)、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌是肉類、蛋類、乳制品等很多食品中的常見致病菌，隨著人們生活水平的日益提高，天然防腐劑的開發(fā)越來越受國內(nèi)外研究者的重視。解淀粉芽胞桿菌是廣泛存在于自然界的一種非致病性細菌。目前，對其研究主要集中在抑制植物病原真菌和病毒(申莉莉等，2010);抑制黑曲霉、棉花枯萎病菌(Lisianne等，2010);抑制大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌(Diaz，2007)等。現(xiàn)有還沒有關(guān)于利 用解淀粉芽胞桿菌產(chǎn)生的細菌素抑制單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌等致病菌的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供一種解淀粉芽胞桿菌906。本發(fā)明的第二個目的是提供一種由解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素。本發(fā)明的第三個目的是提供細菌素的應(yīng)用。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種解淀粉芽胞桿菌906，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO M2012095。解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素。所述細菌素在生產(chǎn)食品中的應(yīng)用。所述細菌素在生產(chǎn)食品防腐劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素對多種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及真菌有抑制作用，尤其是對常見的致病菌如金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌、沙門氏菌和阪崎腸桿菌的抑制效果顯著，比相同濃度乳酸鏈球菌素(nisin)的抑制效果要強很多倍。


圖I是解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素與nisin對金黃色葡萄球菌抑制效果比較的試驗照片；圖2是解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素與nisin對沙門氏菌抑制效果比較的試驗照片；圖3是解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素與nisin對單增李斯特菌抑制效果比較的試驗照片；
圖4是解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素與nisin對阪崎腸桿菌抑制效果比較的試驗照片。圖中a、b、c、d、e、g 分別表不 nisin 的濃度 125IU/ml、250I U/ml、500IU/ml、1000IU/ml、2000IU/ml、4000IU/ml ；f為細菌素的濃度320AU/ml ；h為生理鹽水空白對照。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例和附圖對本發(fā)明做進一步說明。實施例I細菌素的提取在無菌環(huán)境下，將大米平鋪于馬鈴薯培養(yǎng)基中，于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，然后 將對周圍微生物有明顯抑制作用的菌落挑出，在營養(yǎng)瓊脂平板上劃線分離純化獲得單個菌落，通過菌株的生理生化特征命名為解淀粉芽胞桿菌906并保存。采用BLAST分析法對解淀粉芽胞桿菌906菌株的16S rRNA基因序列與GenBank數(shù)據(jù)庫比較分析發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽胞桿菌906與解淀粉芽胞桿菌FZB42 (登錄號CP000560)的相似性高達99. 9 %，只有兩個堿基不同，即解淀粉芽胞桿菌906第200和584個堿基分別為A和G，而解淀粉芽胞桿菌FZB42中分別為G和A，解淀粉芽胞桿菌906的16S rRNA基因序列為AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG GACGAACGCT GGCGGCGTGC CTAATACATGCAAGTCGAGC 60GGACAGATGG GAGCTTGCTC CCTGATGTTA GCGGCGGACG GGTGAGTAACACGTGGGTAA 120CCTGCCTGTA AGACTGGGAT AACTCCGGGA AACCGGGGCT AATACCGGATGGTTGTCTGA 180ACCGCATGGT TCAGACATGA AAGGTGGCTT CGGCTACCAC TTACAGATGGACCCGCGGCG 240CATTAGCTAG TTGGTGAGGT AACGGCTCAC CAAGGCGACG ATGCGTAGCCGACCTGAGAG 300GGTGATCGGC CACACTGGGA CTGAGACACG GCCCAGACTC CTACGGGAGGCAGCAGTAGG 360GAATCTTCCG CAATGGACGA AAGTCTGACG GAGCAACGCC GCGTGAGTGATGAAGGTTTT 420CGGATCGTAA AGCTCTGTTG TTAGGGAAGA ACAAGTGCCG TTCAAATAGGGCGGCACCTT 480GACGGTACCT AACCAGAAAG CCACGGCTAA CTACGTGCCA GCAGCCGCGCTAATACGTAG 540GTGGCAAGCG TTGTCCGGAA TTATTGGGCG TMAGGGCTC GCAGGCGGTTTCTTAAGTCT 600GATGTGAAAG CCCCCGGCTC AACCGGGGAG GGTCATTGGA AACTGGGGAACTTGAGTGCA 660GAAGAGGAGA GTGGAATTCC ACGTGTAGCG GTGAAATGCG TAGAGATGTGGAGGAACACC 720AGTGGCGAAG GCGACTCTCT GGTCTGTAAC TGACGCTGAG GAGCGAAAGCGTGGGGAGCG 780AACAGGATTA GATACCCTGG TAGTCCACGC CGTAAACGAT GAGTGCTAAGTGTTAGGGGG 840TTTCCGCCCC TTAGTGCTGC AGCTAACGCA TTAAGCACTC CGCCTGGGGAGTACGGTCGC 900AAGACTGAAA CTCAAAGGAA TTGACGGGGG CCCGCACAAG CGGTGGAGCATGTGGTTTAA 960TTCGAAGCAA CGCGAAGAAC CTTACCAGGT CTTGACATCC TCTGACAATCCTAGAGATAG 1020GACGTCCCCT TCGGGGGCAG AGTGACAGGT GGTGCATGGT TGTCGTCAGCTCGTGTCGTG 1080AGATGTTGGG TTAAGTCCCG CAACGAGCGC AACCCTTGAT CTTAGTTGCCAGCATTCAGT 1140TGGGCACTCT AAGGTGACTG CCGGTGACAA ACCGGAGGAA GGTGGGGATGACGTCAAATC 1200ATCATGCCCC TTATGACCTG GGCTACACAC GTGCTACAAT GGACAGAACAAAGGGCAGCG 1260AAACCGCGAG GTTAAGCCAA TCCCACAAAT CTGTTCTCAG TTCGGATCGCAGTCTGCAAC 1320TCGACTGCGT GAAGCTGGAA TCGCTAGTAA TCGCGGATCA GCATGCCGCGGTGAATACGT 1380TCCCGGGCCT TGTACACACC GCCCGTCACA CCACGAGAGT TTGTAACACCCGAAGTCGGT 1440GAGGTAACCT TTATGGAGCC AGCCGCCGAA GGTGGGACAG ATGATTGGGGTGAAGTCGTA 1500ACAAGGTAAC CA分離獲得解淀粉芽胞桿菌906菌株在37°C的營養(yǎng)肉湯中振蕩培養(yǎng)24h，離心后(10000rpm/min,20分鐘)收集上清液，上清液經(jīng)過濾除菌，然后通過質(zhì)量濃度為60%的硫酸銨沉淀后透析，最后通過Sephadex G-100柱層析收集各組分,裝柱前用pH為6. 8, 20mM的磷酸鹽緩沖液平衡，并用相同的緩沖液沖洗，收集的有活性組分即為解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素。查閱有關(guān)資料，尚無解淀粉芽胞桿菌906產(chǎn)生的細菌素抑制金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌、阪崎腸桿菌、沙門氏菌等致病菌的報道。解淀粉芽胞桿菌906為新的菌株，已于2012年3月31日送交位于湖北省武漢市武漢大學內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)保藏，保藏號為 CCTCCNO M2012095o實施例2細菌素的應(yīng)用 解淀粉芽胞桿菌906 (CCTCCNO M2012095)產(chǎn)生的細菌素對單增李斯特菌、阪崎腸桿菌和金黃色葡萄球菌等有明顯的抑制效果。分別在7ml純牛奶中加入Iml菌濃度為108Cfu/ml單增李斯特菌、阪崎腸桿菌和金黃色葡萄球菌和2ml細菌素后在常溫下放置三天檢測菌落總數(shù)，試驗結(jié)果見表I。表I細菌素對致病菌的抑制效果試驗
權(quán)利要求
1.一種解淀粉芽胞桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)906,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCNO M2012095o
2.解淀粉芽胞桿菌(BacilIus amyloliquefaciens)906所產(chǎn)生的細菌素。
3.權(quán)利要求2所述的細菌素在生產(chǎn)食品中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求2所述的細菌素在生產(chǎn)食品防腐劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種解淀粉芽胞桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)906，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCNOM2012095。本發(fā)明還公開了解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素和細菌素的應(yīng)用。解淀粉芽胞桿菌906所產(chǎn)生的細菌素對多種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及真菌有抑制作用，尤其是對常見的致病菌如金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌、沙門氏菌和阪崎腸桿菌的具有較強的抑制作用，因此在生產(chǎn)食品和食品防腐劑中開發(fā)利用潛在價值很大。
文檔編號C12N1/20GK102676425SQ20121012815
公開日2012年9月19日 申請日期2012年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月27日
發(fā)明者宋文超, 張雋嫻, 蘇靖, 郭愛玲, 陳平, 韋琰琰 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學