專利名稱：雜交瘤細胞株3g1及其產生的抗黃曲霉毒素b1單克隆抗體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及雜交瘤細胞株3G1及其產生的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體。
背景技術：
黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉分泌產生的次生代謝產物，是能引起人畜各種損害的天然有毒化合物。黃曲霉毒素目前已發(fā)現(xiàn)20余種，其中黃曲霉毒素BI (AFBl)的毒性最強，它的毒性是氰化鉀的10倍，砒霜的68倍。歷史上發(fā)生過很多AFBl污染食物鏈引發(fā)的人類中毒事件。奶牛攝入了 AFBl污染了的谷物后，經體內代謝后形成另一種致癌物質黃曲霉毒素Ml (AFM1)，AFMl進入牛奶中則會嚴重威脅人類健康。另外，AFBl還能污染多種原料，包括水果、干果、蔬菜、調味品、油料作物、煙草及中草藥等，由此可見=AFBl對食物鏈的污染極其廣泛，幾乎在食物鏈的每個環(huán)節(jié)都能發(fā)現(xiàn)存在。除此，在熱帶和亞熱帶 地區(qū)農產品和食品中AFBl的檢出率更高，污染更嚴重，花生、玉米和花生油等糧油食品污染最為嚴重，同時，AFBl超標而導致的農產品國際貿易糾紛事件也時常發(fā)生，1999年、2000年、2001年我國出口歐盟的花生到岸后，40%以上被歐盟檢出黃曲霉毒素總量和AFBl分量超標，遭到退貨或被迫轉口貿易，致使我國農產品進出口貿易蒙受巨大損失，影響了我國農產品國際市場聲譽。因此，加強花生等農產品及制品中AFBl的檢測、特別是速測，及時了解和掌握農產品中AFBl的污染情況對保障我國食品消費安全具有重要意義?，F(xiàn)有的黃曲霉毒素檢測方法主要包括薄層層析法、精密儀器分析法和免疫學分析法。其中薄層層析法是黃曲霉毒素檢測最常用的檢測方法，該方法不需要特殊的儀器設備，一般實驗室都可開展，但存在試劑消耗量大、操作繁瑣、結果易受干擾、準確性差，不能準確定量，且對實驗人員和周圍環(huán)境污染危害較大等不足，不適于現(xiàn)場快速檢測。精密儀器分析法包括熒光分光光度法和高效液相色譜法等，這個些方法靈敏度高，檢測結果準確，但所需的儀器設備昂貴，樣品前處理過程繁瑣，要求黃曲霉毒素樣品純化程度高，檢測過程耗時，對實驗環(huán)境要求高，難以實現(xiàn)快速檢測。近年來，用于黃曲霉毒素檢測的免疫分析技術逐漸發(fā)展起來，克服了前兩者的一些缺點，具有特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、檢測成本低、對實驗人員和周圍環(huán)境的污染危害小等優(yōu)點，適于現(xiàn)場批量檢測等。免疫分析是利用抗原和抗體的特異性的結合反應和抗體、抗原上的標記物的生物、物理或化學放大作用來對超微量殘留物進行定性、定量檢測，所以要研究建立針對黃曲霉毒素BI的任何一種免疫學檢測技術，都必須先獲得抗黃曲霉毒素BI的抗體。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的問題是提供雜交瘤細胞株3G1及其產生的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體。本發(fā)明提供了雜交瘤細胞株3G1，該細胞株已于2010年7月13日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC NO.C201014，分類命名為小鼠雜交瘤細胞3G1。其具有序列表中SEQ ID NO. I所示的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體重鏈可變區(qū)編碼基因序列和序列表中SEQ ID NO. 2所示的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體輕鏈可變區(qū)編碼基因序列?？裹S曲霉毒素BI單克隆抗體，它由保藏編號為CCTCC NO. C201014的雜交瘤細胞株3G1分泌產生。其重鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ ID NO. 3所示的氨基酸序列；輕鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ ID NO. 4所示的氨基酸序列。該抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體可以識別黃曲霉毒素BI，對黃曲霉毒素BI的50%抑制濃度IC5tl為I. 6ng/mL。抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體在黃曲霉毒素BI測定中的應用。本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株3G1是采用兩步篩選法獲得的，其具體步驟為將黃曲霉毒素BI在H2SO4作用下轉化為其半縮醛形式AFB2a,然后與BSA氨基發(fā)生醛胺縮合反應，在NaBH4還原作用下C=N被還原為C-N，生成AFB2a-BSA復合物完全抗原AFB1-BSA，用其免疫BALB/c小鼠4-6次，最后一次加強免疫用2倍于前一次免疫劑量的AFB2a-BSA,免疫3天后進行細胞融合。采用ELISA方法分兩步進行篩選融合細胞第一步采用間接ELISA法篩選出僅能抗黃曲霉毒素而不抗載體蛋白BSA的陽性克隆；第二步采用間接競爭ELISA法對 第一步篩選出的陽性克隆培養(yǎng)液進行檢測，采用AFBl作為競爭原，選擇吸光值低、靈敏度較高的陽性克隆進行有限稀釋法繼續(xù)克隆，克隆后10天左右采用同樣的兩步篩選法進行抗體檢測，如此重復克隆2-3次后，最終篩選獲得雜交瘤細胞株3G1。本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體的制備方法，步驟如下將獲得的雜交瘤細胞株1C8注射預先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/c小鼠，收集該小鼠的腹水，純化處理后獲得抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體。按上述方案，所述的純化方法為辛酸-硫酸銨法，具體操作為用雙層濾紙過濾小鼠腹水，過濾后的腹水于4°C，12000r/min離心15min以上，吸取上清，將上清與4倍體積的醋酸鹽緩沖液混合,邊攪拌邊緩慢加入正辛酸,每毫升腹水所需的正辛酸體積為30 35U L，室溫混合30 60min，4°C靜置2h以上，然后4°C，12000r/min離心30min以上，棄沉淀，將得到的上清液用雙層濾紙過濾后，加入1/10濾液體積的摩爾濃度為0. lmol/L和pH7. 4的磷酸鹽緩沖液，用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)該混合液的pH至7. 4，4 °C預冷，緩慢加入硫酸銨至硫酸銨終濃度為0. 277g/mL, 4°C靜置2h以上，然后4°C，12000r/min離心30min以上，棄上清，將所得沉淀用原腹水體積1/10的O.Olmol/L磷酸鹽緩沖液重懸，裝入透析袋，用純水透析，將充分透析好的蛋白溶液置_70°C冰箱冷凍，然后用冷凍真空干燥機凍干，收集凍干粉，即得純化好的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體，將抗體置_20°C冰箱中備用；
醋酸鹽緩沖液0. 29g醋酸鈉加入0. 14ImL醋酸，純水定容至IOOmL ；
0. lmol/L磷酸鹽緩沖液0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至100mL。本發(fā)明的有益效果在于
(I)本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株3G1可以用于制備高效價抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體，抗黃曲霉毒素BI小鼠腹水抗體酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測得的效價可達6. 40 X IO60(2)本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體靈敏度高、特異性好，對黃曲霉毒素BI的50%抑制濃度IC5tl為I. 6ng/mL,與黃曲霉毒素B2交叉反應率為6. 4%，與黃曲霉毒素Gl和黃曲霉毒素G2的交叉反應率均小于1%。
(3)本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體可應用于測定黃曲霉毒素BI含量。


圖I為本發(fā)明實施例4制備的黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條的正視圖。圖中1紙板、2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊；6質控線；7檢測線。圖2為本發(fā)明實施例4制備的黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條的左視圖。圖中1紙板；2吸水墊；3檢測墊；4金標墊；5樣品墊。圖3為應用本發(fā)明實施例4提供的黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條檢測樣品的結果判定圖。圖中8對照試紙條；9檢測試紙條；6質控線；7檢測線。
具體實施例方式實施例I :雜交瘤細胞株3G1的篩選
I.抗原合成及動物免疫
購買市售黃曲霉毒素BI標準品進行完全抗原合成，具體合成步驟如下將4 mg AFBl溶于2 mL丙酮，加入40 UL 10% H2SO4Jg合物在56 V攪拌反應4 h;產物蒸干后，加入5 mL的1120，用25 mL氯仿提取兩次，然后用20 mL H2O洗滌有機層，保留有機層；蒸去有機溶劑，得黃色固體產物。取I. 0 mg產物，向其中加入2 mL 0. 5% BSA溶液(4 mL PBS (磷酸鹽緩沖液，PH7. 4)溶解 20 mg BSA) 37 °C反應 30 min ;加入 100 U L 6. 5 mM NaBH4,4°C反應30 min ;加入50 u L 0. lmol/L HCl，除去過量的NaBH4。在4°C條件下，PBS溶液(磷酸 鹽緩沖液，PH7. 4)透析3d，除去AFBl及AFB2a,最后進行常規(guī)紫外掃描法鑒定，鑒定結果表明制備得到了黃曲霉毒素BI完全抗原AFB2a-BSA。購買6周齡雌性BALB/c小鼠6只，免疫自行合成的黃曲霉毒素BI完全抗原AFB2a-BSA。第一次免疫將完全抗原AFB2a-BSA與等量福氏完全佐劑混合乳化，然后小鼠頸背部皮下多點注射。第二次免疫于首免4周后進行，采用福氏不完全佐劑與等體積完全抗原AFB2a-BSA乳化，小鼠腹腔注射。第三次免疫與第二次免疫間隔時間4周，免疫方式及劑量與第二次相同，第四次免疫于第三次免疫3周后進行，免疫方式及免疫劑量與第二次免疫相同，每次免疫劑量為每鼠50ii g。前3次每次免疫后一周，尾靜脈采血，分離血清，采用間接ELISA法監(jiān)測小鼠血清抗體效價。第4次免疫后一周，尾靜脈采血，分離血清，采用間接ELISA法監(jiān)測小鼠血清抗體效價，并用間接競爭ELISA法測定小鼠血清靈敏度，選擇效價、靈敏度均相對較高的血清對應的小鼠進行最后一次加強免疫，免疫劑量為之前的2倍。AFBl 購于 Sigma-Aldrich 公司。2.細胞融合
最后一次加強免疫3天后，采用50% (重量百分數(shù))的聚乙二醇即PEG (分子量為1450)作融合劑，按常規(guī)方法進行細胞融合，具體步驟如下
(I)頸椎脫白法處死免疫小鼠，在無菌條件下取脾臟，分離脾細胞，與鼠源骨髓瘤細胞SP2/0以5 : I的個數(shù)比混合，用RPMI-1640基礎培養(yǎng)液洗混合細胞，然后用50%PEG融合，融合時間I分鐘，然后加滿RPMI-1640基礎培養(yǎng)液，離心，移去上清，小鼠脾細胞和鼠源骨髓瘤細胞SP2/0形成的融合細胞用72mL RPMI-1640基礎培養(yǎng)液重懸，將重懸起來的細胞滴加到96孔細胞培養(yǎng)板內，2滴/孔，置37°C二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)，所述的RPMI-1640基礎培養(yǎng)液為含有20% (體積百分數(shù))胎牛血清，2% (重量百分數(shù))生長因子和1% (重量百分數(shù))次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶核苷。上述SP2/0購于上海泛柯生物科技有限公司；RPMI-1640基礎培養(yǎng)液購于Hyclone公司；1%次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)購于 Sigma-Aldrich 公司。3.細胞株的篩選及克隆
待細胞融合后第12天左右，細胞集落長到占孔底1/2面積大小，培養(yǎng)液變黃，即可進行抗體檢測。采用ELISA方法對有雜交瘤細胞生長的培養(yǎng)孔進行篩選，篩選分兩步進行，第一步采用間接ELISA法篩選出抗黃曲霉毒素BI而不抗載體蛋白BSA的陽性孔；第二步采用間接競爭ELISA法對第一步篩選出的陽性孔進行檢測，用黃曲霉毒素BI作為競爭原，選擇吸光值和靈敏度均較高的孔(吸光值較高指競爭原為0的孔即陰性對照孔的最終測定值較高，靈敏度較高指抑制率為50%時的競爭原濃度亦即IC5tl值較小)，采用有限稀釋法進行克隆，克隆后10天左右采用同樣的兩步法進行檢測，如此重復克隆2-3次后，獲得雜交瘤細胞 株 3G1。實施例2 :抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體雜交瘤細胞株系3G1抗體可變區(qū)序列測定
(1)提取總RNA:采用天根公司的總RNA提取試劑盒并按照說明書提取可產生雜交瘤細胞株系3G1的總RNA ；
(2)合成cDNA:以步驟I獲得的總RNA為模板，oligo(dT) 15為引物，按照SuperScript -2 II反轉錄酶說明書進行反轉錄,合成cDNA第一鏈；引物oligo (dT) 15由Invitrogen 購得；
(3)PCR法克隆可變區(qū)基因根據(jù)GENEBANK中小鼠抗體基因序列的保守位點設計引物，以cDNA為模版擴增抗體輕、重鏈可變區(qū)基因。PCR程序為94°C 30s,55°C lmin、72°C Imin，擴增30個循環(huán)，最后72°C延伸lOmin。PCR產物經過I % (重量百分數(shù))的瓊脂糖凝膠電泳分離后，用試劑盒純化回收DNA片段，連接到載體pMD18-T中，轉化大腸桿菌DH5 a感受態(tài)細胞，挑取陽性克隆，送至上海桑尼生物科技有限公司進行測序。其中引物的序列分別為重鏈可變區(qū)引物為 5'-AGG TSM ARC TGC AGS AGT CffG G_3’(22mer)和 5'-TGA GGA GACGGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC-3’(32mer)其中 S、M、R 和 W 為兼并堿基，M=A/C，R=A/G，S=C/G，W=A/T，輕鏈可變區(qū)引物為 5’-GAC ATT GAG CTC ACC CAG CTT GGT GCC _3’(24mer)和 5’-CCG TTT CAG CTC CAG CTT GGT CCC-3’(24mer)。得到的基因序列結果重鏈可變區(qū)編碼基因序列長347bp，序列如SEQ ID NO: I所示，根據(jù)所獲得的基因序列推導出該基因序列所編碼的重鏈可變區(qū)由115個氨基酸組成，序列如SEQ ID NO:3所示。輕鏈可變區(qū)編碼基因序列長338bp，序列如SEQ ID NO:2所示，根據(jù)所獲得的基因序列推導出該基因序列所編碼的輕鏈可變區(qū)由110個氨基酸組成，序列如 SEQ ID NO:4 所示。實施例3 :抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體的制備純化、亞型和特性鑒定
將實施例2獲得的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體雜交瘤細胞株系3G1注射預先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/c小鼠，收集該小鼠的腹水，采用辛酸-硫酸銨法純化抗體，具體操作為用雙層濾紙過濾小鼠腹水，4°C，12000r/min離心15min，吸取上清，將所得腹水上清與4倍體積的醋酸鹽緩沖液混合，攪拌下緩慢加入正辛酸，每毫升腹水所需的正辛酸體積為33 u L，室溫混合30min，4°C靜置2h，然后4°C，12000r/min離心30min，棄沉淀，將得到的上清液用雙層濾紙過濾后，加入1/10濾液體積的摩爾濃度為0. lmol/L和pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)該混合液的pH值至7. 4，4 °C預冷，緩慢加入硫酸銨至硫酸銨終濃度為0. 277g/mL, 4°C靜置2h，然后4°C，12000r/min離心30min，棄上清，將所得沉淀用原腹水體積1/10的0. Olmol/L磷酸鹽緩沖液重懸，裝入透析袋，對純水透析，將充分透析好的蛋白溶液置_70°C冰箱冷凍，之 后用冷凍干燥機凍干，收集凍干粉，SP得純化好的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體，將抗體置_20°C冰箱中備用；
所述的醋酸鹽緩沖液為0. 29g醋酸鈉，0. 141mL醋酸加水定容至IOOmL所得；所述的
0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液為0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，磷酸二氫鉀0. 02g，加水定容至IOOmL所得。用市售亞型鑒定試劑盒鑒定雜交瘤細胞株3G1分泌的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體的亞型為IgG2a。用常規(guī)非競爭酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測得3G1的鼠腹水抗體的效價可達
6.4X106,即鼠腹水抗體稀釋6. 4X IO6倍時的溶液測定結果為陽性。用常規(guī)間接競爭ELISA法鑒定其對黃曲霉毒素BI的靈敏度為I. 6ng/mL，與黃曲霉毒素B2交叉反應率為6. 4%，黃曲霉毒素Gl與G2的交叉反應率均小于1%。實施例4 :抗體應用
將雜交瘤細胞株3G1分泌的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體用于制備黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條，制備方法包括以下步驟
(1)吸水墊的制備
將吸水紙剪裁成長16mm寬3mm的規(guī)格,即得吸水墊；
(2)檢測墊的制備 檢測線的包被
將黃曲霉毒素人工合成完全抗原AFB2a-BSA配制成0. lmg/mL的包被液A ;于距硝酸纖維素膜上沿15mm的位置，用點噴方式將包被液A橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測線，每厘米檢測線所需完全抗原AFB2a-BSA的包被量為75ng，然后于37°C條件下干燥15分鐘；所述的包被液A為IOmg黃曲霉毒素人工合成完全抗原AFB2a-BSA，Ig牛血清白蛋白，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；
質控線的包被
將兔抗鼠多克隆抗體配成0. 2mg/mL的包被液B ;于距檢測線5mm的位置，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得質控線，每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為lOOng，然后于37°C條件下干燥15分鐘；
所述的包被液B為將20mg兔抗鼠多克隆抗體，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；
所述的硝酸纖維素膜長25mm，寬3mm ；
(3)樣品墊的制備
將玻璃纖維膜剪裁成長13mm寬3mm的規(guī)格，放入封閉液A中浸濕，取出，于37°C條件下干燥6小時，得樣品墊，然后置干燥器中室溫保存；
所述的封閉液A為2g牛血清白蛋白，2. 5g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；
(4)金標墊的制備
將玻璃纖維膜剪裁成長9mm寬3mm的規(guī)格，放入封閉液B中浸濕，取出，于37°C條件下干燥16小時，于干燥好的玻璃纖維膜上，用點噴方式將納米金標記的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體溶液橫向噴涂，每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體為600ng，然后真空冷凍干燥6h，置干燥器中室溫保存；
所述的封閉液B為2g牛血清白蛋白，0. ImL曲拉通X-100，0. 3g聚乙烯吡咯烷酮，2. 5g蔗糖，0. 02g疊氮化鈉，0. 8g氯化鈉，0. 29g十二水磷酸氫二鈉，0. 02g氯化鉀，0. 02g磷酸二氫鉀，加水定容至IOOmL所得；
所述的納米金標記的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體溶液的具體標記方法為量取 50. OmL質量濃度為0. 01%的納米金溶液，用0. I mol/L碳酸鉀水溶液調節(jié)溶液pH值為
5.5 ;在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入2. 5mL 0. lmg/mL的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體水溶液，繼續(xù)攪拌30min ;加入質量濃度為10%牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的終質量濃度為1%，繼續(xù)攪拌30min ;于4°C放置2h后，1500r/min離心15min，取上清液，棄沉淀；將上清液12000r/min離心30 min,棄去上清液,加入50. OmL標記洗漆保存液；再以12000r/min離心30 min，棄去上清液，將沉淀用標記洗滌保存液重懸，得到5. OmL濃縮物，置4°C冰箱備用，其中納米金標記的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體溶液的質量濃度為0. 06mg/mL ；
所述納米金溶液中納米金的粒徑為15nm ；
所述的0. I mol/L碳酸鉀水溶液為13. 8g碳酸鉀溶于純水定容至IOOOmL, 0. 22Mm濾膜過濾所得；所述的0. lmg/mL抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體水溶液為Img抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體溶解在10 mL純水中制成；所述的10%牛血清白蛋白水溶液為IOg牛血清白蛋白溶解在IOOmL純水中，0. 22Mm濾膜過濾所得；所述的標記洗滌保存液為2. Og聚乙二醇-20000,0. 2g疊氮鈉，0. 1235克硼酸，純水定容至1000mL，0. 22Mm濾膜過濾所得；
(5)試紙條的組裝在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1_，即得黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條，見圖I和圖2。上述黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條的應用
分別取已知不含黃曲霉毒素BI的1#和2#花生樣品進行粉碎，然后采用10%甲醇水(V甲醇/V水=1 9)攪拌混勻，吸取1#和2#待測花生樣品各lmL，取IOOyL稀釋好的樣品溶液分別加入不冋濃度的黃曲霉毒素BI標準品作為加標樣品，然后各100 y L加入黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條的樣品墊，作為檢測組；同時取100 UL不含有黃曲霉毒素BI的空白花生樣品作為陰性對照加入另一黃曲霉毒素BI免疫層析試紙條的樣品墊，將其作為對照試紙條，15分鐘后讀取結果；檢測結果1#檢測試紙條的質控線顯示出紅色線條，而檢測線不顯色，則判為陽性結果，表明待測樣品中的黃曲霉毒素BI的含量大于或等于10ng/mL，見圖3-1 ；2#檢測試紙條的質控線顯示出紅色線條，而檢測線顏色比對照試紙條檢測線顏色淺，則判為陽性結果，表明待測樣品中黃曲霉毒素BI的含量高于或等于Ing/mL，并小于10 ng/mL，見圖 3-2。
權利要求
1.雜交瘤細胞株3G1，其特征在于它保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO. C201014。
2.抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體，它由保藏編號為CCTCCNO. C201014的雜交瘤細胞株3G1分泌產生。
3.根據(jù)權利要求2所述的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體在黃曲霉毒素BI測定中的應用。
4.根據(jù)權利要求2所述的抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體的的制備方法，其特征在于將獲得的雜交瘤細胞株1C8注射預先用福氏不完全佐劑處理過的BALB/c小鼠，收集該小鼠的腹水，純化處理后獲得抗黃曲霉毒素BI單克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及雜交瘤細胞株3G1及其產生的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體。本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株3G1(CCTCC NO.C201014)可以用于制備高效價抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測得的效價可達6.40×106；本發(fā)明提供的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體靈敏度高、特異性好，對黃曲霉毒素B1的50%抑制濃度IC50為1.6ng/mL，與黃曲霉毒素B2交叉反應率為6.4%，與黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2的交叉反應率均小于1%；可應用于測定黃曲霉毒素B1含量。
文檔編號C12R1/91GK102747043SQ20121011761
公開日2012年10月24日 申請日期2012年4月20日 優(yōu)先權日2012年4月20日
發(fā)明者丁小霞, 張兆威, 張奇, 張文, 李冉, 李培武, 李鑫 申請人:中國農業(yè)科學院油料作物研究所