專利名稱：糖化血紅蛋白的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測(cè)定方法、測(cè)定試劑及測(cè)定試劑盒。另外，本發(fā)明涉及含有無(wú)色型色原體的水溶液的保存方法、無(wú)色型色原體的穩(wěn)定化方法。
背景技術(shù)：
糖化血紅蛋白是在血紅蛋白上結(jié)合葡萄糖而成的糖化物。血紅蛋白具有由α鏈、 β鏈構(gòu)成的四聚體結(jié)構(gòu)，但將β鏈的N末端糖化后的血紅蛋白稱為血紅蛋白Alc，血糖值越高越增加，因此，作為糖尿病標(biāo)志物，在臨床檢查中進(jìn)行日常測(cè)定作為血糖控制的指標(biāo)。
作為糖化血紅蛋白的測(cè)定方法，已知HPLC法等色譜法、電泳法、膠乳免疫凝聚法等利用抗體的免疫測(cè)定法、使用作用于糖化蛋白的酶和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶的酶測(cè)定法等。
作為糖化血紅蛋白的酶測(cè)定法，已知如下方法等首先，通過(guò)改性劑使含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白改性，使蛋白質(zhì)分解酶作用于改性糖化血紅蛋白，接著，使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽，使生成的過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶等過(guò)氧化活性物質(zhì)存在下與氧化顯色型色原體反應(yīng)而導(dǎo)入色素中，由生成的色素的吸光度測(cè)定糖化血紅蛋白。在此， 改性劑用于使蛋白質(zhì)分解酶能夠作用于糖化血紅蛋白，目前為止已知含有乙酸基的化合物或其鹽、N-?；；撬峄蚱潲}、聚氧乙烯烷基醚硫酸或其鹽(專利文獻(xiàn)I);聚氧乙烯烷基醚硫酸鹽類、聚氧乙烯烷基苯基醚硫酸鹽類等陰離子類表面活性劑(專利文獻(xiàn)2);月桂基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉等磺酸化合物(專利文獻(xiàn)3);磺酸化合物和硝基化合物(專利文獻(xiàn)4);季銨鹽、烷基芐基二甲基氯化銨、月桂基二甲胺氧化物等(專利文獻(xiàn)5)改性劑。
另外，糖化血紅蛋白的酶測(cè)定法中，經(jīng)常使用如下方法將糖化血紅蛋白轉(zhuǎn)變成過(guò)氧化氫，使所生成的過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶等過(guò)氧化活性物質(zhì)存在下與氧化顯色型色原體反應(yīng)而導(dǎo)入色素中，由所生成的色素的吸光度測(cè)定糖化血紅蛋白。在此，作為氧化顯色型色原體，經(jīng)常使用無(wú)色型色原體。無(wú)色型色原體是在過(guò)氧化物酶等過(guò)氧化活性物質(zhì)存在下與過(guò)氧化氫反應(yīng)而生成色素的色原體的一種，與耦合型色原體不同，無(wú)色型色原體是其本身單獨(dú)即可生成色素的色原體，已知有吩噻嗪類的無(wú)色型色原體、三苯基甲烷類的無(wú)色型色原體、二苯胺類的無(wú)色型色原體等(例如參照專利文獻(xiàn)6 8)。
作為高靈敏度色原體，無(wú)色型色原體適合用于對(duì)試樣中僅微量存在的應(yīng)該定量的成分進(jìn)行定量(例如參照非專利文獻(xiàn)I)。但是，另一方面，其保存穩(wěn)定性差， 特別是具有在溶液中隨時(shí)間而自然顯色的缺點(diǎn)，由于該無(wú)色型色原體所具有的穩(wěn)定性不良，產(chǎn)生無(wú)法準(zhǔn)確地測(cè)定試樣中應(yīng)該定量的成分的問(wèn)題。
針對(duì)該無(wú)色型色原體所具有的穩(wěn)定性不良的問(wèn)題，目前為止已研究并報(bào)道了無(wú)色型色原體在溶液中穩(wěn)定化的方法(例如參照專利文獻(xiàn)9、10)。
現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:W02006/013921小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)2 W02005/049858小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)3 W02004/007760小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)4 W02003/107011小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)5 :日本特開(kāi)2009-159989號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)6 :日本特開(kāi)昭57-029297號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)7 :日本特開(kāi)平3-206896號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)8 :日本特開(kāi)昭62-093261號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)9 W02005/088305小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)10 W02007/083703 小冊(cè)子
非專利文獻(xiàn)
非專利文獻(xiàn)1:臨床檢查，1997 年，Vol. 41，No. 9，p. 1014-1019發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問(wèn)題
在糖化血紅蛋白的酶測(cè)定法中，關(guān)于目前已知的糖化血紅蛋白的改性劑，由于糖化血紅蛋白的改性不充分，因此，無(wú)法令人滿意地進(jìn)行蛋白質(zhì)分解酶反應(yīng)，存在不能進(jìn)行糖化血紅蛋白的準(zhǔn)確測(cè)定的問(wèn)題。另外，在糖化血紅蛋白的測(cè)定方法中，關(guān)于所使用的無(wú)色型色原體，以往已知的保存方法需要在嚴(yán)苛的條件下進(jìn)行保存等，不一定可以說(shuō)是能夠令人滿意的方法。
本發(fā)明的目的在于提供準(zhǔn)確地測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的方法、試劑和試劑盒、以及能夠準(zhǔn)確地測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的、含有無(wú)色型色原體的水溶液的保存方法和無(wú)色型色原體的穩(wěn)定化方法。
用于解決問(wèn)題的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明人對(duì)本問(wèn)題進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)如下見(jiàn)解通過(guò)在吡啶_鹽、鹽、咪唑丨翁鹽或異喹啉ft鹽存在下使含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白與蛋白質(zhì)分解酶反應(yīng)，能夠使血紅蛋白和糖化血紅蛋白充分地改性，從而能夠準(zhǔn)確地測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白。另外發(fā)現(xiàn)吡啶I翁鹽、轔鹽、咪唑鹽或異喹啉Ii鹽使無(wú)色型色原體穩(wěn)定化的見(jiàn)解，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明涉及以下的[I] [18]。
[I] 一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測(cè)定方法，其特征在于，在選自由由以下通式⑴表示的吡啶_鹽、由以下通式(II)表示的鎮(zhèn).鹽、由以下通式(III)表示的咪唑讀ik和由以下通式(IV )表示的異喹啉鍵.鹽組成的組中的至少一種鹽存在下，使含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白與蛋白質(zhì)分解酶反應(yīng)，使果糖基肽氧化酶作用于得到的反應(yīng)產(chǎn)物，并測(cè)定生成的過(guò)氧化氫，
權(quán)利要求
1.一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測(cè)定方法，其特征在于，在選自由由以下通式(I)表示的吡啶I翁鹽、由以下通式(II)表示的鱗鹽、由以下通式(III)表示的咪唑Il鹽和由以下通式(IV)表示的異喹啉德鹽組成的組中的至少一種鹽存在下，使含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白與蛋白質(zhì)分解酶反應(yīng)，使果糖基肽氧化酶作用于得到的反應(yīng)產(chǎn)物，并測(cè)定生成的過(guò)氧化氫，
2.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其中，過(guò)氧化氫的測(cè)定利用過(guò)氧化氫測(cè)定試劑來(lái)進(jìn)行。
3.如權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其中，過(guò)氧化氫測(cè)定試劑為含有過(guò)氧化物酶和無(wú)色型色原體的試劑。
4.如權(quán)利要求3所述的測(cè)定方法，其中，無(wú)色型色原體為吩噻嗪類色原體。
5.如權(quán)利要求4所述的測(cè)定方法，其中，吩噻嗪類色原體為10-(羧甲基氨基羰基)-3，7_雙(二甲氨基)吩噻嗪。
6.一種糖化血紅蛋白測(cè)定試劑，其為用于測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的試劑，其特征在于，含有蛋白質(zhì)分解酶、果糖基肽氧化酶以及選自由由以下通式(I)表示
7.如權(quán)利要求6所述的測(cè)定試劑，其還含有過(guò)氧化氫測(cè)定試劑。
8.如權(quán)利要求7所述的測(cè)定試劑，其中，過(guò)氧化氫測(cè)定試劑為含有過(guò)氧化物酶和無(wú)色型色原體的試劑。
9.如權(quán)利要求8所述的測(cè)定試劑，其中，無(wú)色型色原體為吩噻嗪類色原體。
10.如權(quán)利要求9所述的測(cè)定試劑，其中，吩噻嗪類色原體為10-(羧甲基氨基羰 基)-3，7-雙(ニ甲氨基)吩噻嗪。
11.ー種糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒，其為用于測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅 蛋白的試劑盒，其特征在干，包含第一試劑和第二試劑，所述第一試劑含有蛋白質(zhì)分解酶 以及選自由由以下通式⑴表示的吡啶信鹽、由以下通式(II)表示的憐_鹽、由以下通式(III)表示的咪唑I翁鹽和由以下通式(IV)表示的異喹啉鍵:鹽組成的組中的至少ー種鹽， 所述第二試劑含有果糖基肽氧化酶，
12.如權(quán)利要求11所述的測(cè)定試劑盒，其中，過(guò)氧化物酶和無(wú)色型色原體還分別包含 在第一試劑和第二試劑中或者分別包含在第二試劑和第一試劑中。
13.如權(quán)利要求12所述的測(cè)定試劑盒，其中，無(wú)色型色原體為吩噻嗪類色原體。
14.如權(quán)利要求13所述的測(cè)定試劑盒，其中，吩噻嗪類色原體為10-(羧甲基氨基羰 基)-3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪。
15.一種含有無(wú)色型色原體的水溶液的保存方法，其特征在于，在含有無(wú)色型色原體的 水溶液中添加選自由由以下通式⑴表示的吡啶_鹽、由以下通式(II)表示的禱鹽、由以下通式(III)表示的咪唑f翁鹽和由以下通式(IV)表示的異喹啉_丨鹽組成的組中的至少一 種鹽，
16.一種無(wú)色型色原體的穩(wěn)定化方法，其特征在于，使無(wú)色型色原體在含有選自由由以下通式(I)表示的吡啶鎬鹽、由以下通式(II)表示的鎊鹽、由以下通式(III)表示的咪唑 鍵鹽和由以下通式(IV)表示的異喹啉鎮(zhèn)鹽組成的組中的至少一種鹽的水溶液中共存,
17.如權(quán)利要求15或16所述的方法，其中，無(wú)色型色原體為吩噻嗪類色原體。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，吩噻嗪類色原體為10-(羧甲基氨基羰 基)-3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪。
全文摘要
一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測(cè)定方法，其特征在于，在選自由吡啶鹽、鹽、咪唑鹽和異喹啉鹽組成的組中的至少一種鹽存在下，使含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白與蛋白質(zhì)分解酶反應(yīng)，使果糖基肽氧化酶作用于得到的反應(yīng)產(chǎn)物，并測(cè)定生成的過(guò)氧化氫。根據(jù)本發(fā)明，提供準(zhǔn)確地測(cè)定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的方法。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK103069003SQ20118003860
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2011年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月11日
發(fā)明者征矢陽(yáng)代, 村上智美, 角田春樹(shù), 大杉友, 依田彩子, 松下政嗣 申請(qǐng)人:協(xié)和梅迪克斯株式會(huì)社