專利名稱：低溫下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.及分離培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于污水處理領(lǐng)域，涉及一株具有低溫下去除污水中氨氮的菌及分離培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
低溫對生物處理能力產(chǎn)生重大影響的原因是由于溫度的降低影響了微生物的生長及代謝并使污水處理系統(tǒng)中微生物群系發(fā)生了改變。在溫度下降過程中，中溫菌的代謝活性逐漸下降，到一定溫度時便失去活性，而適于低溫環(huán)境的低溫微生物的數(shù)量由于自身的生理特性及各種生態(tài)因子的抑制作用，在數(shù)量上無法達到優(yōu)勢菌群的地位，從而導(dǎo)致污水處理廠冬季出水水質(zhì)下降。因此亟需一種能在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的菌株。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有菌低溫脫氨氮效果不佳，提供一種在低溫下能去除污水 pIllMMWlii Rhodanobacter sp·。本發(fā)明的第二個目的是提供一種低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的分離培養(yǎng)方法。本發(fā)明的第三個目的是提供一種低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的用途。一種低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.亞白2CGMCC No. 5沘3，其具有在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的能力。一種低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.亞白2CGMCC No. 5283在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的用途。低溫優(yōu)選為8_12°C。低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.的分離培養(yǎng)方法，包括如下步驟(1)將第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液放入小試SBR反應(yīng)器中，將污水處理廠污泥接種所述第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液中，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4-6天，取出上清液，加入第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4-6天，取出上清液，加入第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4-6天，富集、馴化低溫細菌；(2)取IOmL步驟(1)獲得的污泥，加入已裝有90mL滅菌蒸餾水和20 30粒滅菌玻璃珠的250mL錐形瓶中，振蕩10 30min，使細菌細胞充分釋放到上清液中；靜置20 40min，取ImL上清液加入裝有9mL無菌蒸餾水的試管中，得到10_2的菌懸液，按上述方法依次做系列稀釋，一直做到10_8為止；(3)選取梯度為10_5 10_8的菌懸液，分別取ImL接種于亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基， 每個稀釋度做3個平行樣，編號；10°C在有氧的條件下保濕培養(yǎng)2 3周；
(4)從步驟(3)中的亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中挑選菌落大，形態(tài)不同的單菌落，在亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中再次劃線分離，重復(fù)平板劃線分離3-4次，使平板上的菌落在顯微鏡中的形態(tài)相同，單一，大小相似即為單菌落，命名為亞白2，經(jīng)鑒定為低溫條件下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.。所述第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成NH4Cl 0.0764g、乙酸鈉2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸餾水至 lOOOmL。所述第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成NH4Cl 0. 191g、乙酸鈉2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸餾水至 1000mL。所述第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成NH4Cl 0.382g、乙酸鈉2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸餾水至 1000mL。所述亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基由下述組分組成NH4Cl 0.0764g、乙酸鈉2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. 01g、FeS04 0. Olg、瓊脂 20g，加蒸溜水至 1000mL。實驗結(jié)果表明盡管受到低溫環(huán)境的明顯抑制，投加本發(fā)明的一種去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp亞白2CGMCC No. 5沘3，在低溫下，特別是在8_12°C的條件下，對氨氮去除有明顯的強化作用，氨氮去除率提高了 10%，出水氨氮濃度最高為4. ang/L，優(yōu)于一級A的出水標準(水溫彡12°C時，一級A標準的控制指標為8mg/L)。


圖1為低溫好氧條件下去除污水中氨氮的一種去除污水中氨氮的菌 Rhodanobacter sp.的馴化分離培養(yǎng)流程圖。圖2為亞白2氨氮去除試驗。圖3為Iihodanobacter sp.細菌鑒定方法流程。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例1低溫下去除污水中氨氮的鞘脂桿菌的分離培養(yǎng)方法，包括如下步驟(1)將第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液放入小試SBR反應(yīng)器中，將天津紀莊子污水處理廠曝氣池的污泥接種所述第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液中，在10°c，連續(xù)培養(yǎng)5天，取出上清液，加入第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在10°C，連續(xù)培養(yǎng)5天，取出上清液，加入第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在10°C，連續(xù)培養(yǎng)5天，富集、馴化低溫細菌；(2)取IOmL步驟(1)獲得的污泥，加入已裝有90mL滅菌蒸餾水和30粒滅菌玻璃珠的250mL錐形瓶中，振蕩20min，使細菌細胞充分釋放到上清液中；靜置30min，取ImL上清液加入裝有9mL無菌蒸餾水的試管中，得到10_2的菌懸液，按上述方法依次做系列稀釋， 一直做到10_8為止；
(3)選取梯度為10_5 10_8的菌懸液，分別取ImL接種于亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基， 每個稀釋度做3個平行樣，編號；10°C在有氧的條件下保濕培養(yǎng)3周；(4)從步驟(3)中的亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中挑選菌落大，滴入格里斯試劑變紅的形態(tài)不同的單菌落，在亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中再次劃線分離，重復(fù)平板劃線分離3次，使平板上的菌落在顯微鏡中的形態(tài)相同，單一，大小相似即為單菌落，命名為亞白2，經(jīng)鑒定為低溫條件下去除污水中氨氮的菌Iihodanobacter sp.。實施例2第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0. 0764g、乙酸鈉2g、 MgS047H200. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg,加蒸餾水至 1000mL。實施例3第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0. 191g、乙酸鈉2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸溜水至 IOOOmL0實施例4第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0. 382g、乙酸鈉2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O O.Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸溜水至 IOOOmL0實施例5亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基由下述組分組成=NH4Cl 0. 0764g、乙酸鈉2g、MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg、瓊脂 20g，加蒸餾水至 1000mL。實施例6格里斯試劑的配制1、對氨基苯磺酸試劑(A液)0. 5克對氨基苯磺酸溶于150毫升20%的稀醋酸溶液中，儲于棕色瓶，冷藏備用。2、α-萘胺試劑(B液)0. 5克α -萘胺加到20毫升蒸餾水和150毫升20%的稀醋酸溶液中，儲于棕色瓶，冷藏備用。3、格里斯試劑的使用液取等比例的A液與B液混合即可使用。實施例7本發(fā)明的菌Rhodanobacter sp.具有以下微生物學(xué)特性1.形態(tài)學(xué)特性在顯微鏡下觀察，為桿狀，長5. 2 μ m，寬0. 69 μ m ；在亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基上形成淡黃色菌落。2.培養(yǎng)學(xué)特性在10°C下，在亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，本發(fā)明的Iihodanobacter sp.菌株具有以下特性。表面光滑濕潤，表面凸起，邊緣整齊規(guī)則，個體呈圓形，菌體呈淡黃色。3.生理特性好氧條件下去除污水中氨氮的革蘭氏陽性細菌，接觸酶陽性、甲基紅試驗陰性、水解淀粉、液化明膠、不產(chǎn)生吲哚、生長PH值為6 8，生長溫度5 30°C。
權(quán)利要求
1.一種低溫下去除污水中氨氮的菌Miodanobacter sp.亞白2CGMCC No. 5觀3，其具有在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的能力。
2.權(quán)利要求1的一種低溫下去除污水中氨氮的菌Miodanobactersp.亞白2CGMCC No. 5283在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征是所述低溫為8-12°C。
4.低溫下去除污水中氨氮的菌Miodanobactersp.的分離培養(yǎng)方法，其特征是包括如下步驟(1)將第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液放入小試SBR反應(yīng)器中，將污水處理廠污泥接種所述第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液中，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4 6天，取出上清液，加入第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4 6天，取出上清液，加入第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液，在8 12°C，連續(xù)培養(yǎng)4 6天，富集、馴化低溫細菌；(2)取IOmL步驟(1)獲得的污泥，加入已裝有90mL滅菌蒸餾水和20 30粒滅菌玻璃珠的250mL錐形瓶中，振蕩10 30min，使細菌細胞充分釋放到上清液中；靜置20 40min， 取ImL上清液加入裝有9mL無菌蒸餾水的試管中，得到10_2的菌懸液，按上述方法依次做系列稀釋，一直做到10_8為止；(3)選取梯度為10_5 10_8的菌懸液，分別取ImL接種于亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基，每個稀釋度做3個平行樣，編號；10°C在有氧的條件下保濕培養(yǎng)2 3周；(4)從步驟(3)中的亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中挑選菌落大，形態(tài)不同的單菌落，在亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基平板中再次劃線分離，重復(fù)平板劃線分離3 4次，使平板上的菌落在顯微鏡中的形態(tài)相同，單一，大小相似即為單菌落，命名為亞白2，經(jīng)鑒定為低溫條件下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobactersp.的分離培養(yǎng)方法，其特征是所述第一種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0.0764g、乙酸鈉 2g、MgS047H20 0.05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O O.Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸餾水至 lOOOmL。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobactersp.的分離培養(yǎng)方法，其特征是所述第二種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0. 191g、乙酸鈉 2g、MgS047H20 0.05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O O.Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸餾水至 lOOOmL。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobactersp.的分離培養(yǎng)方法，其特征是所述第三種亞硝酸細菌培養(yǎng)液由下述組分組成=NH4Cl 0.382g、乙酸鈉 2g、MgS047H20 0.05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O O.Olg、FeSO4 O.Olg，加蒸餾水至 lOOOmL。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的低溫下去除污水中氨氮的菌Iihodanobactersp.的分離培養(yǎng)方法，其特征是所述亞硝酸細菌固體培養(yǎng)基由下述組分組成=NH4Cl 0. 0764g、乙酸鈉2g、 MgS047H20 0. 05g、K2HPO4 0. 2g、NaCl 0. 12g、MnSO4H2O 0. Olg、FeSO4 0. Olg、瓊脂 20g，加蒸餾水至lOOOmL。
全文摘要
本發(fā)明公開了低溫下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.及分離培養(yǎng)方法，低溫下去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp.亞白2CGMCC No.5283，其具有在低溫好氧條件下去除污水中氨氮的能力。實驗結(jié)果表明盡管受到低溫環(huán)境的明顯抑制，投加本發(fā)明的一種去除污水中氨氮的菌Rhodanobacter sp亞白2CGMCC No.5283，在低溫下，特別是在8-12℃的條件下，對氨氮去除有明顯的強化作用，氨氮去除率提高了10％，出水氨氮濃度最高為4.2mg/L，優(yōu)于一級A的出水標準(水溫≤12℃時，一級A標準的控制指標為8mg/L)。
文檔編號C12R1/01GK102443556SQ201110416288
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者胡春萍 申請人:首創(chuàng)愛華(天津)市政環(huán)境工程有限公司