專利名稱：一種利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Y-氨基丁酸技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用食果糖乳桿菌生產(chǎn) Y-氨基丁酸的方法。
背景技術(shù)：
γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)又稱氨酪酸，是一種非蛋白質(zhì)組成的天然氨基酸。GABA具有許多重要的生理功能，如降低血壓、鎮(zhèn)靜、增強(qiáng)記憶、調(diào)節(jié)呼吸系統(tǒng)、抗焦慮，尤其對更年期的失眠、壓抑和自身失調(diào)療效良好。此外，GABA還具有改善人體肝功能，活化腎功能，預(yù)防肥胖，防止皮膚老化，促進(jìn)乙醇代謝，消臭作用等功效。隨著GABA 的生理功能不斷研究和闡明，已經(jīng)發(fā)展成為一種新型的功能性因子，在功能性食品的開發(fā)中有很大潛力，正逐漸應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等行業(yè)。目前，微生物生產(chǎn)GABA的可行性已經(jīng)得到了證實，短乳桿菌、乳酸乳球菌、植物乳桿菌等多種乳酸菌生產(chǎn)GABA均有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種采用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，成本低，所得培養(yǎng)液中Y-氨基丁酸的含量高。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，包括如下步驟
(1)活化將食果糖乳桿菌菌塊溶解后接種于MRS液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)活化；
(2)發(fā)酵活化后的食果糖乳桿菌接種于含1%(體積)谷氨酸鈉的MRS培養(yǎng)基中，在 30 35°C、pH 3.0 4.0條件下發(fā)酵培養(yǎng)2 10天，所得培養(yǎng)液中即含有Y -氨基丁酸。為了獲得大量的食果糖乳桿菌，可將活化后的食果糖乳桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)后再進(jìn)行發(fā)酵，擴(kuò)大培養(yǎng)具體操作如下將活化好的食果糖乳桿菌接種于液體MRS培養(yǎng)基中，30°C擴(kuò)大培養(yǎng)。優(yōu)選的，前述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y -氨基丁酸的方法為
(1)活化用無菌水或培養(yǎng)液溶解食果糖乳桿菌菌塊，接種于MRS液體培養(yǎng)基上，300C 培養(yǎng)活化；
(2)擴(kuò)大培養(yǎng)將活化好的食果糖乳桿菌以1、(體積)的接種量接種于MRS培養(yǎng)基中， 30°C培養(yǎng)48小時；
(3)發(fā)酵活化后的食果糖乳桿菌以10%的接種量接種于含1%(體積)谷氨酸鈉的MRS 培養(yǎng)基中，在30 35°C、pH 3. 0 4. 0條件下發(fā)酵培養(yǎng)2 10天，所得培養(yǎng)液中即含有 Y-氨基丁酸。前述方法中所用到的食果糖乳桿菌為食果糖乳桿菌LactcAacillus fructivorans，保藏編號為 CGMCC No. 1. M27。前述方法中所用的MRS培養(yǎng)基為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、 乙酸鈉5g、檸檬酸鈉0. 05g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0. 2g、硫酸錳0. 05g、吐溫80 1ml，蒸餾水1000ml，混合后調(diào)整pH5.0，高壓121°C，滅菌20min。采用前述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，最終獲得的發(fā)酵培養(yǎng)液中 Y -氨基丁酸的含量為2. 15g/L 6. 35g/L。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次采用食果糖乳桿菌進(jìn)行生產(chǎn)Y-氨基丁酸的目標(biāo)培養(yǎng)，以谷氨酸鈉為主要底物，利用具有食品安全性的食果糖乳桿菌(LactcAacillus fructivorans)發(fā)酵制得含Y -氨基丁酸的產(chǎn)物，發(fā)酵原料易于獲取，轉(zhuǎn)化過程中副產(chǎn)物少，無有害物質(zhì)存在，具有成本低及Y-氨基丁酸含量高、可安全用于食品等優(yōu)點，同時食果糖乳桿菌作為食品級微生物，是果蔬發(fā)酵中天然優(yōu)勢乳酸菌，發(fā)酵性能、風(fēng)味特性及安全性好，以其生產(chǎn)的含Y-氨基丁酸發(fā)酵產(chǎn)物可應(yīng)用于食品、藥品、飼料中，可以直接食用或根據(jù)生產(chǎn)需要作為富集Y-氨基丁酸的功能基料?，F(xiàn)有技術(shù)中還未見有用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的報道。
具體實施例方式1、菌種食果糖乳桿菌(LactcAacillus fructivorans)菌種，來源于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC No. 1.2427，安瓿管密封保存的凍干食果糖乳桿菌，于冰箱4-6°C保藏。2、菌種活化菌種使用前需活化?；罨唧w操作方法先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱，用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管。用Iml無菌水或培養(yǎng)液溶解IOmg菌塊，使用無菌吸管移入新鮮MRS液體培養(yǎng)基上，30°C進(jìn)行適溫培養(yǎng)。3、擴(kuò)大培養(yǎng)食果糖乳桿菌在MRS培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，具體操作為將活化好的食果糖乳桿菌，以21 (體積)的接種量接種于液體MRS培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)48h。4、發(fā)酵培養(yǎng)將擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種以10% (體積)的接種量接種至含有1% (體積)谷氨酸鈉的MRS培養(yǎng)基中，在30-35 °C、pH 3.0-4.0 (通過滴加HCl或NaOH控制)條件下培養(yǎng)發(fā)酵2天，所得培養(yǎng)液中Y -氨基丁酸含量達(dá)2. 15g/L，繼續(xù)發(fā)酵10天后，所得培養(yǎng)液中 Y-氨基丁酸含量達(dá)6. 35g/L。上述方法中所用到的MRS培養(yǎng)基為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖 5g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉0. 05g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0. 2g、硫酸錳0. 05g,吐溫80 1ml，蒸餾水1000ml，混合后調(diào)整pH5. 0，高壓121°C，滅菌20min。
權(quán)利要求
1.一種利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于包括如下步驟(1)活化將食果糖乳桿菌菌塊溶解后接種于MRS液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)活化；(2)發(fā)酵活化后的食果糖乳桿菌接種于含1%(體積)谷氨酸鈉的MRS培養(yǎng)基中，在 30 35°C、pH 3.0 4.0條件下發(fā)酵培養(yǎng)2 10天，所得培養(yǎng)液中即含有Y -氨基丁酸。
2.按照權(quán)利要求1所述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于活化后的食果糖乳桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)后再進(jìn)行發(fā)酵，擴(kuò)大培養(yǎng)具體操作如下將活化好的食果糖乳桿菌接種于液體MRS培養(yǎng)基中，30°C擴(kuò)大培養(yǎng)。
3.按照權(quán)利要求2所述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于包括如下步驟(1)活化用無菌水或培養(yǎng)液溶解食果糖乳桿菌菌塊，接種于MRS液體培養(yǎng)基上，30°C 培養(yǎng)活化；(2)擴(kuò)大培養(yǎng)將活化好的食果糖乳桿菌以1、(體積)的接種量接種于MRS培養(yǎng)基中， 30°C培養(yǎng)48小時；(3)發(fā)酵活化后的食果糖乳桿菌以10%的接種量接種于含1%(體積)谷氨酸鈉的MRS 培養(yǎng)基中，在30 35°C、pH 3. 0 4. 0條件下發(fā)酵培養(yǎng)2 10天，所得培養(yǎng)液中即含有 Y-氨基丁酸。
4.按照權(quán)利要求1至3任一所述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于所述食果糖乳桿菌Lactobacillus fructivorans的保藏編號為CGMCC No. 1. 2427。
5.按照權(quán)利要求1至3任一所述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于所述MRS培養(yǎng)基為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉0. 05g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0. 2g、硫酸錳0. 05g,吐溫80 1ml，蒸餾水1000ml，混合后調(diào)整pH5. 0，高壓121 °C，滅菌20min。
6.按照權(quán)利3所述利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)后的培養(yǎng)液中Y -氨基丁酸的含量為2. 15g/L 6. 35g/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用食果糖乳桿菌生產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，包括(1)活化將食果糖乳桿菌菌塊溶解后接種于MRS液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)活化；(2)發(fā)酵活化后的食果糖乳桿菌接種于含1%谷氨酸鈉的MRS培養(yǎng)基中，在30～35℃、pH3.0～4.0條件下發(fā)酵培養(yǎng)2～10天，所得培養(yǎng)液中即含有γ-氨基丁酸，發(fā)酵原料易于獲取，轉(zhuǎn)化過程中副產(chǎn)物少，無有害物質(zhì)存在，具有成本低及γ-氨基丁酸含量高、可安全用于食品等優(yōu)點，可應(yīng)用于食品、藥品、飼料中，可以直接食用或根據(jù)生產(chǎn)需要作為富集γ-氨基丁酸的功能基料?，F(xiàn)有技術(shù)中還未見有用食果糖乳桿菌生產(chǎn)γ-氨基丁酸的報道。
文檔編號C12R1/225GK102260720SQ20111020292
公開日2011年11月30日 申請日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者丁筑紅, 李仲軍, 韓江雪, 黃衛(wèi)星 申請人:貴州大學(xué)