專利名稱：賽道威畢赤酵母及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種賽道威畢赤酵母及其用途，屬于釀酒技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
生香酵母簡(jiǎn)單的說(shuō)是指在生長(zhǎng)、繁殖過(guò)程中能產(chǎn)生芳香氣味物質(zhì)的酵母，這些香味物質(zhì)主要是酯類，因此，生香酵母又稱為產(chǎn)酯酵母。目前報(bào)道的生香酵母主要有產(chǎn)膜酵母和假絲酵母，其中大部份是異常漢遜酵母和少量球擬酵母屬，它們是中國(guó)白酒酯香主要產(chǎn)生菌，因此從酒曲中分離篩選出生香酵母對(duì)中國(guó)傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵白酒的生產(chǎn)具有重大的現(xiàn)實(shí)
眉、ο我國(guó)是白酒生產(chǎn)大國(guó)，隨著菌種篩選、誘變等技術(shù)的成熟，我國(guó)各地區(qū)先后篩選出了上千種產(chǎn)酯量較高的菌株或菌種。一般來(lái)說(shuō)，產(chǎn)酯性能優(yōu)異的生香酵母的產(chǎn)酯量可以達(dá)到200mg/100ml左右，如張曉娟等，西南菌種站部分釀酒增香酵母產(chǎn)酯性能初探，《四川食品與發(fā)酵》，2007年第3期公開了幾種產(chǎn)酯性能較高的菌株，其菌株的產(chǎn)酯量最高可以達(dá)到 230. 2mg/100ml。由于生香酵母的重要意義，雖然目前已經(jīng)篩選得到產(chǎn)酯量200mg/100ml左右的菌株，人們還是希望通過(guò)改進(jìn)篩選或誘變等方法得到產(chǎn)酯量更高的生香酵母，這也是本領(lǐng)域研究人員的長(zhǎng)期追求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種產(chǎn)酯能力更高的生香酵母。本發(fā)明生香酵母菌株是由四川劍南春集團(tuán)有限責(zé)任公司的酒曲中分離得到的賽道威畢赤酵母新菌株，該菌株已于2011年05月16日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所， 郵編100101)保藏，分類命名為賽道威畢赤酵母(Pichia sydowiorum)，保藏號(hào)為CGMCC No.4865。本發(fā)明賽道威畢赤酵母新菌株通過(guò)下述方法篩選得到1、取1 2克酒曲(由四川劍南春集團(tuán)有限責(zé)任公司提供)到50ml麥芽汁三角瓶中，于搖床QOOrpm/min)培養(yǎng)48小時(shí)，再取Iml接種到麥芽汁試管中培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)3 次的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)即可。麥芽汁制備取大麥芽一定量，粉碎，加4倍于麥芽量的水，在55 60°C水浴中保溫糖化，不斷攪拌，經(jīng)3 4h后，至糖化液與碘液反應(yīng)不顯藍(lán)色為止。煮沸后過(guò)濾，將濾液稀釋至5° Β ，加入一定量乳酸，于115°C滅菌20min備用。2、取上述方法培養(yǎng)的酵母液，按10倍梯度稀釋到10_6，取稀釋度為10_4、10_5、10_6 各0.2ml的溶液，分別涂布于5° Β 麥芽汁培養(yǎng)基平板，26°C培養(yǎng)48小時(shí)。3、挑取平板上長(zhǎng)出的典型酵母單菌落進(jìn)行描述性記錄，并同時(shí)制片鏡檢，然后選擇不同類型的酵母菌落分別接于麥芽汁固體斜面培養(yǎng)基上，于26°C培養(yǎng)48小時(shí)。
4、取不同類型的酵母菌株，分別于^TC麥芽汁培養(yǎng)基培養(yǎng)7天，測(cè)定各發(fā)酵液中酯含量，篩選產(chǎn)酯含量最高的菌株。5、酵母菌鑒定利用美國(guó)Biolog公司全自動(dòng)微生物鑒定儀，Biolog公司獨(dú)創(chuàng)的碳源利用方法，利用微生物對(duì)不同碳源代謝率的差異，針對(duì)每一類微生物篩選95種不同碳源，配合四唑類顯色物質(zhì)(如TTC、TV)，固定于96孔板上(Al孔為陰性對(duì)照)，接種菌懸液后培養(yǎng)一定時(shí)間， 通過(guò)檢測(cè)微生物細(xì)胞利用不同碳源進(jìn)行新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的氧化還原酶與顯色物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致的顏色變化(吸光度)以及由于微生物生長(zhǎng)造成的濁度差異(濁度)，與標(biāo)準(zhǔn)菌株數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，即可得出最終鑒定結(jié)果。測(cè)試步驟①、在BUY培養(yǎng)基上，^TC培養(yǎng)待鑒定的酵母菌(即產(chǎn)酯含量最高的菌株)。②、樣品準(zhǔn)備及觀察特征，利用濕法制備(水片法)或革蘭氏染色來(lái)確認(rèn)待鑒定菌株是酵母菌。③、接種準(zhǔn)備以裝有空白無(wú)菌水玻璃管調(diào)100% T透光率，用標(biāo)準(zhǔn)比濁管校正，制備特定濃度菌懸液，調(diào)為47% T，接種到Y(jié)T微平板，每孔IOOul菌懸液。④、微平板培養(yǎng)于^TC培養(yǎng)鑒定板，將板放入一個(gè)密閉的塑料袋或其他盒中，加入浸濕的紙團(tuán)或毛巾，用以保持濕度，避免在培養(yǎng)過(guò)程中使鑒定板中菌懸液因蒸發(fā)而減少影響結(jié)果。培養(yǎng)鑒定板M，48或72h，直到得到鑒定結(jié)果。經(jīng)鑒定，篩選得到的產(chǎn)酯含量最高的菌株為賽道威畢赤酵母(Pichia sydowiorum)新菌株，其信息包括產(chǎn)酯能力500mg/100ml左右，該菌株的淀粉化合物實(shí)驗(yàn)為陰性，該菌株不產(chǎn)生脲酶，該菌株的碳源同化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。表1本發(fā)明賽道威畢赤酵母新菌株的碳源同化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.賽道威畢赤酵母(Pichiasydowiorum)，保藏號(hào)為 CGMCC No. 4865。
2.含有權(quán)利要求1所述的菌株的酒曲。
3.權(quán)利要求1所述的菌株或權(quán)利要求2所述的酒曲在生產(chǎn)乙酸乙酯酯化酶中的用途。
4.權(quán)利要求1所述的菌株或權(quán)利要求2所述的酒曲在生產(chǎn)乙酸乙酯中的用途。
5.權(quán)利要求1所述的菌株或權(quán)利要求2所述的酒曲在白酒發(fā)酵中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種賽道威畢赤酵母及其用途，屬于釀酒技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種產(chǎn)酯能力更高的生香酵母。本發(fā)明生香酵母菌株是由四川劍南春集團(tuán)有限責(zé)任公司的酒曲中分離得到的賽道威畢赤酵母新菌株，該菌株已于2011年05月16日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，分類命名為賽道威畢赤酵母(Pichia sydowiorum)，保藏號(hào)為CGMCC No.4865。本發(fā)明賽道威畢赤酵母新菌株的產(chǎn)值能力可以達(dá)到500mg/100ml左右，遠(yuǎn)高于目前的生香酵母的產(chǎn)酯能力。本發(fā)明為乙酸乙酯、乙酸乙酯酯化酶和高品質(zhì)白酒的生產(chǎn)提供了一種新的選擇，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12P7/62GK102250780SQ20111017470
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月27日
發(fā)明者劉孟華, 唐清蘭, 徐占成, 徐姿靜, 樊科權(quán), 焦小川 申請(qǐng)人:四川劍南春(集團(tuán))有限責(zé)任公司