專利名稱：六種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及六種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用。
背景技術：
大環(huán)化合物是一類重要的治療用抗生素。臺勾霉素(Tiacumicins)是一系列18 元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯抗生素的總稱。臺勾霉素BCTiacumicin B)在生產(chǎn)臺勾霉素(Tiacumicins) 的菌株中是一個主要產(chǎn)物，其擁有一個18元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯，兩個脫氧糖基和一個芳香環(huán)支鏈，其生產(chǎn)菌株主要包括，放線菌指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085，S,動放線菌Actinoplanes deccanensisATCC 21983禾口小抱鏈菌 Catellatospora sp. Bp3323_81 等。指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085 為小單孢菌科(Micromonosporaceae)放線菌，能夠產(chǎn)生多種臺勾霉素類化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供六種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用。本發(fā)明通過對指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085進行針對Tiacumicin B氧甲基轉(zhuǎn)移酶的基因敲除突變，得到該氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因缺失突變株，從該突變株的培養(yǎng)物中分離到了六種新的臺勾霉素類化合物，并且發(fā)現(xiàn)它們對金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC四213，蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringensis，糞腸球菌Enterococcus faecalis ATCC 29212具有較好的抑菌活性，可以用于制備抗菌藥物，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的六種臺勾霉素類化合物，其結(jié)構(gòu)如式(1)所示
權利要求
1.如式(1)所示的六種臺勾霉素類化合物
2.—種權利要求1所述的化合物1-6的制備方法，其特征在于，所述的化合物1-6 是從對指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085 的 tiaS5-氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因進行敲除后的tiaS5-氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因敲除突變株TCM70的發(fā)酵培養(yǎng)物中分離得到的。
3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的化合物1-6的制備方法包括以下步驟將大孔樹脂加入tiaS5-氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因敲除突變株TCM70的培養(yǎng)基中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后，分離出發(fā)酵液中的大孔樹脂，經(jīng)乙醇洗脫，乙醇提取物經(jīng)濃縮回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層經(jīng)濃縮后得代謝產(chǎn)物粗提物，將該粗提物經(jīng)硅膠柱層析，以體積比從100 O 5 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為 100 1-20 1梯度下洗脫下來的餾分，再經(jīng)凝膠柱層析，以體積比1 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑洗脫，進而用ODS反相中壓液相色譜，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔徑，50um 粒徑，40 X 2. 5cm I. D.，流速為20ml/min，以體積分數(shù)從10% -85%的乙腈/水梯度洗脫，其中以體積分數(shù)從陽％ -60%的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分1，以體積分數(shù)從60% -65% 的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分2，以體積分數(shù)從65% -70%的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分3，以體積分數(shù)從70% -75%的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分4，以體積分數(shù)從 75% -80%的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分5，以體積分數(shù)從80% -85%的乙腈/水梯度洗脫下來的為餾分6 ；餾分1經(jīng)ODS反相中壓液相色譜，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔徑，50um粒徑，20X2. 5cm I. D.，流速為15ml/min，以體積分數(shù)從10% -65%的乙腈/水梯度洗脫，收集體積分數(shù)60-65%的乙腈/水梯度洗脫下來的餾分，再用硅膠柱層析，以體積比為8 1的氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，收集餾分，得到化合物5 ；溜分2經(jīng)ODS反相中壓液相色譜，YMC*GEL 0034球型填料，12(^孔徑，5011111粒徑，40\2. 5cm I. D.，流速為20ml/min,以體積分數(shù)從 10% -68%的乙腈/水梯度洗脫，收集體積分數(shù)65-68%的乙腈/水梯度洗脫下來的餾分， 再用制備薄層層析，以體積比為8 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0.45的餾分，得到化合物2;餾分3經(jīng)制備薄層層析，以體積比為8 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0.5的餾分，而后經(jīng)凝膠柱層析，以體積比1 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑洗脫，得到化合物3;餾分4經(jīng)制備薄層層析，以體積比為10 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0. 5的餾分，后經(jīng)半制備高效液相色譜，以體積比為65%的乙腈/ 水洗脫，流速3ml/min，收集保留時間為40. 5min的餾分，最后經(jīng)制備薄層層析，以體積比為 10 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0.55的餾分，得到化合物4;餾分5經(jīng) ODS反相中壓液相色譜，YMOGEL ODS-A球型填料，120A孔徑，50um粒徑，40 X 2. 5cm I. D.， 流速為20ml/min，以體積分數(shù)從10% -75%的乙腈/水梯度洗脫，收集體積分數(shù)70-75%的乙腈/水梯度洗脫下來的餾分，再用制備薄層層析，以體積比為10 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0. 6的餾分，得到化合物1 ；餾分6經(jīng)制備薄層層析，以體積比為 10 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，收集RF值為0.65的餾分，后經(jīng)ODS反相中壓液相色譜，YMOGEL ODS-A 球型填料，120A 孔徑，50um 粒徑，20 X 2. 5cm I. D.，流速為 15ml/min,以體積分數(shù)從10 % -78 %的乙腈/水梯度洗脫，收集體積分數(shù)75-78 %的乙腈/水梯度洗脫下來的餾分，然后用硅膠柱層析，以體積比為50 1的乙酸乙酯-甲醇作為流動相洗脫，得到化合物6。
4.權利要求1所述的六種臺勾霉素類化合物在制備抗菌藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了六種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用。本發(fā)明以指孢囊菌NRRL 18085作為原始菌，對該菌的tiaS5-氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)嵭星贸@得tiaS5-氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因敲除突變株(TCM70)。對突變株發(fā)酵產(chǎn)物粗提物采用正相硅膠、反相硅膠、凝膠等柱層析色譜技術和制備薄層層析色譜技術等，從突變株TCM70得到化合物1-6。這六種化合物對金黃色葡萄球菌，蘇云金芽孢桿菌，糞腸球菌等都具有較好的抑制活性。與母體化合物臺勾霉素B相比較，化合物1和6均對糞腸球菌和金黃色葡萄球菌具有較低的MIC值，表明它們具有更好的抑菌活性，特別是化合物6，其針對金黃色葡萄球菌的活性比母體化合物臺勾霉素B提高了8倍，因此有望研發(fā)成為抗菌新藥。
文檔編號C12R1/645GK102219815SQ20111010405
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月25日 優(yōu)先權日2010年12月14日
發(fā)明者張光濤, 張海波, 張長生, 李蘇梅, 牛四文, 肖毅, 胡濤, 鞠建華 申請人:中國科學院南海海洋研究所