專利名稱：發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicinγ₁I的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用棘孢小單孢菌發(fā)酵生產(chǎn)抗生素CaliCheamiCinY1I的新發(fā)酵培養(yǎng)基，還涉及用該發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicin y J的方法以及該發(fā)酵培養(yǎng)基的用途。
背景技術(shù)：
1987年，美國氰胺公司(CYANAMID)的Lederle實(shí)驗(yàn)室從德克薩斯州的生硝或白堊土壤中分離出棘抱小單抱菌(Micromonospora echinosporasp. calichensis),并在含有溴或碘的培養(yǎng)基中對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵后獲得了 7種不同的活性化合物，主要包括=Calicheamicin3 iBr、Y1Br, a 21、a 31、@ J、y J和S J，這種抗腫瘤抗生素屬于烯二炔類抗生素，能夠通過斷裂細(xì)胞DNA,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不可恢復(fù)的損傷,從而殺死癌細(xì)胞。其中CalicheamicinY1I的抗癌活性最聞。由于烯二炔類抗生素的毒性較大，因此在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)未受到醫(yī)藥界的重視，但是隨著單克隆抗體技術(shù)的不斷成熟，惠氏公司(現(xiàn)輝瑞公司)將重組人源化⑶33單克隆抗體與抗腫瘤抗生素Calicheamicin y J連接制備出吉妥單抗Mylotarg(gemtuzumabozogamicin),這一研究成果大大的激發(fā)醫(yī)藥行業(yè)對(duì)于單抗藥物的研究。在這一研究中，抗腫瘤抗生素Calicheamicin y J僅僅作為“彈頭藥物”，而⑶33單克隆抗體則具有導(dǎo)向功 能。因此如果將抗腫瘤抗生素Calicheamicin Y J與不同的單克隆抗體連接很可能制備出新的抗腫瘤藥物。因此，抗腫瘤抗生素Calicheamicin y J的微生物發(fā)酵工藝也倍受醫(yī)藥行業(yè)的關(guān)注。目前，Calicheamicin y J主要由輝瑞制藥公司通過發(fā)酵進(jìn)行生產(chǎn),但其報(bào)道的發(fā)酵配方僅僅簡(jiǎn)單的碳氮源培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為28°C,培養(yǎng)時(shí)間144h。由于其發(fā)酵培養(yǎng)基種的營(yíng)養(yǎng)成分僅為簡(jiǎn)單的碳氮源培養(yǎng)基，菌體活力較差，發(fā)酵單位較低，而且Calicheamicin y J主要是通過斷裂DNA產(chǎn)生作用，菌株的自身耐受性較低，因此其報(bào)道的最高發(fā)酵單位為10mg/Lo中國北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院又發(fā)現(xiàn)了一株新的產(chǎn)生Calicheamicin Y J的小單孢菌C3509，但是其并未報(bào)道相關(guān)的產(chǎn)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題就是針對(duì)現(xiàn)有的利用棘孢小單孢菌發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicin y J的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵單位較低,產(chǎn)率低等缺陷,提供了一種新的用于棘孢小單孢菌發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicin Y J的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法和用途，從而提高calicheamicin y J的發(fā)酵單位,提高生產(chǎn)效率,降低生產(chǎn)成本。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是一種用于棘孢小單孢菌發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicin y J的發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括有機(jī)碳源和有機(jī)氮源，按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)，所述有機(jī)碳源的含量為5-130g/L，優(yōu)選20-110g/L ;所述有機(jī)氮源的含量為2-150g/L，優(yōu)選為4-60g/L，更優(yōu)選為15_40g/L ;所述有機(jī)碳源為蔗糖、糖蜜、甘油和玉米淀粉中的一種或多種；所述有機(jī)氮源包括細(xì)豆柏和/或玉米漿粉。在本發(fā)明一較佳的實(shí)施方式中，所述的有機(jī)碳源為混合物A或混合物B，所述混合物A為由蔗糖和糖蜜組成的混合物，所述混合物B為由蔗糖、糖蜜和甘油組成的混合物。此時(shí)，所述混合物A或混合物B的含量較佳地為5-70g/L，更佳地為20-70g/L。在所述混合物A或混合物B中，所述鹿糖的含量較佳地為5-40g/L ;所述糖蜜的含量較佳地為5-20g/L ;所述甘油的含量較佳地為5-10g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。在本發(fā)明另一較佳的實(shí)施方式中，所述的有機(jī)碳源為組分I與玉米淀粉的混合物。所述組分I為由蔗糖、糖蜜和甘油中的一種或多種組成的混合物，較佳地為混合物A或混合物B。所述混合物A為由蔗糖和糖蜜組成的混合物，所述混合物B為由蔗糖、糖蜜和甘油組成的混合物。此時(shí)，所述組分I的含量較佳地為5-70g/L ;玉米淀粉的含量較佳地為5-60g/Lo在所述混合物A或混合物B中，所述鹿糖的含量較佳地為5-40g/L ;所述糖蜜的含量較佳地為5-20g/L ;所述甘油的含量較佳地為5-10g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基 的總體積計(jì)。在本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述的有機(jī)氮源較佳地還包括黃豆餅粉和/或蛋白胨。所述黃豆餅粉的含量較佳地為5-60g/L，所述蛋白胨的含量較佳地為5-60g/L。其中，所述的黃豆餅粉較佳地選自本領(lǐng)域常用的各種黃豆餅粉，較佳地為熱榨黃豆餅粉和/或冷榨黃豆餅粉。所述熱榨黃豆餅粉的含量較佳地為2-30g/L，所述冷榨黃豆餅粉的含量較佳地為2-30g/L。所述蛋白胨較佳地選自本領(lǐng)域各種常用的蛋白胨，較佳地為胰蛋白胨、大豆蛋白胨和魚胨中的一種或多種。所述胰蛋白胨的含量較佳地為5-20g/L，所述大豆蛋白胨的含量較佳地為5-20g/L，所述魚胨的含量較佳地為5-20g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。在本發(fā)明一較佳的實(shí)施方式中，所述的有機(jī)氮源還包括氨基酸，進(jìn)一步補(bǔ)充氮源。所述的氨基酸可選用本領(lǐng)域常用的各種氨基酸，較佳地為異亮氨酸、亮氨酸和精氨酸中的一種或多種，更佳地為異亮氨酸。所述氨基酸的含量為本領(lǐng)域的常規(guī)含量，較佳地為0. 5-2. Og/L，更佳地為0. 5-1. Og/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。在本發(fā)明一較佳的實(shí)施方式中，所述的有機(jī)氮源包括組分2和細(xì)豆柏。所述組分2為所述黃豆餅粉、所述玉米漿粉和所述蛋白胨中的一種或多種，較佳地為所述黃豆餅粉、所述玉米漿粉和所述蛋白胨。其中，所述組分2的含量較佳地為6-130g/L，更佳地為10-45g/L ;所述細(xì)豆柏的含量較佳地為2-20g/L，更佳地為4-15g/L ;所述組分2中，所述黃豆餅粉的含量較佳地為2-60g/L，更佳地為4-15g/L ;所述玉米漿粉的含量較佳地為2-20g/L，更佳地為4-15g/L ;所述蛋白胨的含量較佳地為2-50g/L，更佳地為4-15g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。更佳地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中還包括氨基酸0. 5-2. Og/L,優(yōu)選0. 5-1. Og/L。所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。較佳地，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基還包括按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)為0. 1-0. 4g/L的無機(jī)氮源。所述的無機(jī)氮源可為本領(lǐng)域培養(yǎng)基中常用的無機(jī)氮源，如KNO3和/或(NH4)2SO40在本發(fā)明一較佳的實(shí)施方式中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括有機(jī)碳源、有機(jī)氮源以及無機(jī)氮源，其中所述有機(jī)碳源為組分120-70g/L和玉米淀粉5-60g/L ;所述有機(jī)氮源為組分210-45g/L、細(xì)豆柏2-20g/L和0. 5-2. Og/L氨基酸，所述無機(jī)氮源為0. 1-0. 4g/L KNO3,所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。在本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，為了增加一些酶的活性，較佳地還進(jìn)一步包含常見的可以增加酶活性的金屬離子。所述的金屬離子優(yōu)選錳離子、鋅離子、鎂離子和亞鐵離子中的一種或多種，更佳地為鎂離子和亞鐵離子，最佳地為錳離子、鋅離子、鎂離子和亞鐵離子。所述錳離子可以本領(lǐng)域培養(yǎng)基原料的常規(guī)形式添加，如MnCl2 *440。所述鋅離子可以本領(lǐng)域培養(yǎng)基原料的常規(guī)形式添加，如ZnS04。所述鎂離子可以本領(lǐng)域培養(yǎng)基原料的常規(guī)形式添加，如MgSO4 7H20。所述亞鐵離子可以本領(lǐng)域培養(yǎng)基原料的常規(guī)形式添加，如FeSO4 7H20。所述金屬離子的含量為本領(lǐng)域中可以增加酶活性的金屬離子的常規(guī)含量，較佳地為0. 1-1. 2g/L，所述含量按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中，如常規(guī)的棘孢小單孢菌的發(fā)酵培養(yǎng)基一樣，較佳的還進(jìn)一步含有礦物質(zhì)。所述的礦物質(zhì)一般作為pH調(diào)節(jié)劑、提供calicheamicin Y J分子結(jié)構(gòu)中硫元素的硫源以及提供calicheamicin y J分子結(jié)構(gòu)中碘元素的碘源中的一種或多種。所述的PH調(diào)節(jié)劑較佳地為I. 0-4. Og/L的CaC03。所述硫源為常規(guī)的發(fā)酵培養(yǎng)基中用于提供硫元素的硫源，較佳地為Na2S04、Na2S203、Na2S03和Na2S中的一種或者多種，所述硫源的含量較佳地為0. 1-0. 15g/L。所述碘源為常規(guī)的發(fā)酵培養(yǎng)基中用于提供碘元素的碘源，較佳地為KI，其中KI的含量較佳地為0. 1-0. 5g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基如常規(guī)的棘孢小單孢菌的發(fā)酵培養(yǎng)基一樣，較佳地還可以含有消泡劑。消泡劑的用量為常規(guī)用量。在本發(fā)明一較佳的實(shí)施方式中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含有所述有機(jī)碳源、所述有機(jī)氮源、所述無機(jī)氮源、所述碘源、亞鐵離子、鎂離子和PH調(diào)節(jié)劑；較佳地還包括所述硫源。在本發(fā)明一更佳的實(shí)施方式中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含有所述有機(jī)碳源、所述有機(jī)氮源、所述無機(jī)氮源、所述碘源以及所述硫源；其中，所述的有機(jī)碳源為5_70g/L所述組分I以及5-60g/L玉米淀粉；所述的有機(jī)氮源為所述組分2和細(xì)豆柏，或?yàn)樗鼋M分2、細(xì)豆柏和氨基酸；所述細(xì)豆柏的含量為2-20g/L，較佳地為4-15g/L ;所述氨基酸較佳地為異亮氨酸；所述異亮氨酸的含量為0. 5-2. Og/L，較佳地為0. 5-1. Og/L ； 所述無機(jī)氮源為0. 1-0. 4g/L硝酸鉀；所述的碘源為0. 1-0. 5g/L KI ；所述的硫源為0. 1-0. 15g/L Na2S2O3 ；較佳地還包括0. 1-0. 3g/L亞鐵離子和0. 1-0. 3g/L鎂離子；所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。本發(fā)明的一最佳的實(shí)施方式中，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基包含鹿糖5_40g/L ;糖蜜5-20g/L ;甘油5-10g/L ;玉米淀粉5-60g/L ;黃豆餅粉2_60g/L，較佳地為4_15g/L ;玉米漿粉2-20g/L，較佳地為4-15g/L ;胰蛋白胨4-20g/L ;細(xì)豆柏2_20g/L，較佳地為4_15g/L ;異亮氨酸 0. 5-2. Og/L ；KN03 0. 1-0. 3g/L ；MgS04 7H20 0. 1-0. 3g/L ；FeS04 7H20 0. 1-0. 3g/L ；MnCl2 *4H20 0. 1-0. 3g/L ；ZnSO4 0. 1-0. 3g/L ；Na2S203 0. 1-0. 15g/L ；CaCO31. 0-4. Og/L ;以及KI 0. 1-0. 3g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值較佳地為pH5. 0-8. 0，更佳地是pH5. 5-7. 5。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是一種抗生素calicheamicin y J的發(fā)酵生產(chǎn)方法,其包括步驟(a)將棘抱小單抱菌(Micromonospora echinospora sp. calichensis)的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是如上所述的任一項(xiàng)發(fā)酵培養(yǎng)基;(b)從發(fā)酵液中分離出抗生素calicheamicin Y J。在步驟(a)中，所述的棘抱小單抱菌(Micromonospora echinosporasp.calichensis)較佳地為棘孢小單孢菌NRRL-18149。在步驟(a)中，所述的棘孢小單孢菌的種子液是按常規(guī)的方法將棘孢小單孢菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)而得到的。所述的種子培養(yǎng)基可以是現(xiàn)有的棘孢小單孢菌的種子培養(yǎng)基，較佳選自Medium S培養(yǎng)基。種子培養(yǎng)的溫度較佳的是25_32°C。所述種子液的接種量是本領(lǐng)域的常規(guī)接種量，一般為10% -15% (v/v)?！ぴ诓襟E(a)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度是此類發(fā)酵培養(yǎng)的常規(guī)溫度，較佳地為20-40°C，更佳地為25-32°C。所述發(fā)酵培養(yǎng)的時(shí)間是此類發(fā)酵培養(yǎng)的常規(guī)時(shí)間，較佳地為5-7 天。在步驟(b)中，從發(fā)酵液中分離出CalicheamicinY1I的方法可以是常規(guī)的方法，將發(fā)酵液用等體積乙酸乙酯與發(fā)酵液混合超聲，離心取上清液即可。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之三是所述的發(fā)酵培養(yǎng)基在將棘抱小單抱菌(Micromonospora echinospora sp. calichensis)發(fā)酵轉(zhuǎn)化成抗生素calicheamicin y J中的用途。所述的棘孢小單孢菌較佳地為棘孢小單孢菌NRRL-18149。本發(fā)明中，上述優(yōu)選條件在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。本發(fā)明中，上述優(yōu)選條件在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于本發(fā)明提供了一種有利于棘孢小單孢菌高效發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicin y J的發(fā)酵培養(yǎng)基以及相應(yīng)的發(fā)酵方法和用途。通過優(yōu)選發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮源成分及配比，優(yōu)化培養(yǎng)溫度、pH等發(fā)酵參數(shù),從而大大提高calicheamicin Y J的產(chǎn)量。本發(fā)明提供的calicheamicin y J的發(fā)酵生產(chǎn)方法提高了 calicheamicin y J的發(fā)酵單位，適用于calicheamicin y J的規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。對(duì)比實(shí)施例I取一株棘抱小單抱菌(Micromonosporaechinospora sp.calichensis)NRRL-18149劃線于斜面培養(yǎng)基，28 °C培養(yǎng)4d后接種于搖瓶種子培養(yǎng)基，裝液量為20ml/250ml，于30°C，250rpm的旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)48h。種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d。發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液用等體積乙酸乙酯與發(fā)酵液混合超聲，離心取上清液即可。其中所用的斜面培養(yǎng)基組成ISP2培養(yǎng)基，組分為葡萄糖4. Og/L，酵母浸粉4. Og/L，麥芽浸粉 10. Og/L，瓊脂粉 20g/L，pH7. 2。所用的種子培養(yǎng)基組成Medium S培養(yǎng)基,組分為鹿糖5. Og/L,酵母浸粉5. Og/L,胰蛋白胨 5. Og/L，牛肉膏 3. 0g/L，麥芽糊精 24. 0g/L, CaC034. 0g/L, pH7. 2。發(fā)酵培養(yǎng)基的組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,胰蛋白胨4. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L，MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L，CaCO3 2. 5g/L，pH7. 2。此實(shí)施例為初始發(fā)酵培養(yǎng)基，以后的所有培養(yǎng)基優(yōu)化均以此培養(yǎng)基作為對(duì)照，此培養(yǎng)基calicheamicin y J產(chǎn)量定為100%。HPLC 測(cè)定，CaliCheamiCiny1I 產(chǎn)量為 10mg/L。實(shí)施例I 發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,玉米漿粉4. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 119%。實(shí)施例2發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖18. 0g/L,糖蜜 7. 0g/L,細(xì)豆柏 4. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 121 。實(shí)施例3發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖22. 0g/L，糖蜜8. 0g/L，玉米漿粉4. 0g/L，細(xì)豆柏4. 0g/L，冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 4. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 125%。實(shí)施例4發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L，糖蜜5. 0g/L，玉米漿粉4. 0g/L，細(xì)豆柏8. 0g/L，冷榨黃豆餅粉 8. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 136%。實(shí)施例5發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,玉米漿粉20. 0g/L,細(xì)豆柏20. 0g/L,冷榨黃豆餅粉30. 0g/L,熱榨黃豆餅粉30. 0g/L,胰蛋白胨20. 0g/L,魚胨20. 0g/L,大豆蛋白胨 10. Og/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 112%。實(shí)施例6發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. Og/L,糖蜜5. Og/L,玉米漿粉8. Og/L,細(xì)豆柏12. Og/L，冷榨黃豆餅粉 4. Og/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 144%。
實(shí)施例I發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,玉米漿粉10. 0g/L,細(xì)豆柏4. Og/L，冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 12. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 128%。實(shí)施例8發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L，糖蜜5. 0g/L，玉米漿粉8. 0g/L，細(xì)豆柏7. 0g/L，冷榨黃豆餅粉 11. 0g/L，胰蛋白胨 4. 0g/L, FeSO4 *7H20 0. lg/L,MgSO4 *7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 135%。實(shí)施例9發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L，糖蜜5. 0g/L，玉米漿粉9. 0g/L，細(xì)豆柏8. 0g/L，冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 12. 0g/L, FeSO4 *7H20 0. lg/L, MgSO4 *7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 150%。實(shí)施例10發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. Og/L，冷榨黃豆餅粉 7. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 154%。
實(shí)施例11發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. Og/L,糖蜜5. Og/L,玉米漿粉20g/L，細(xì)豆柏18g/L，冷榨黃豆餅粉 10. Og/L，胰蛋白胨 12g/L，F(xiàn)eSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L,CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 119%。實(shí)施例12 發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖30. Og/L,糖蜜5. Og/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. Og/L，冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 9. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 143%。實(shí)施例13發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖5. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. 0g/L,冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO32. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 123%。實(shí)施例14發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖10. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. 0g/L,冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H200. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO32. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 126%。實(shí)施例15發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜15. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. Og/L,冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L,胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 132%。實(shí)施例16發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏 12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉 4. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H200. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。
按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 160%。實(shí)施例17發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖40. Og/L,糖蜜20. Og/L,甘油10. Og/L,玉米淀粉60g/L，玉米漿粉12. Og/L,細(xì)豆柏12. Og/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaC032. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 172%。
實(shí)施例18發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜10. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉5g/L，玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L,FeSO4 *7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaC032. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 148%。實(shí)施例19發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖18. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaC032. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 192%。實(shí)施例20發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖40. 0g/L，糖蜜20. 0g/L，甘油10. 0g/L，玉米淀粉40. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L,細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L, FeSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 172%。實(shí)施例21發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油6. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 210%。實(shí)施例22
發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. Og/L，糖蜜8. Og/L，甘油5. Og/L，玉米淀粉50. Og/L，玉米漿粉12. Og/L，細(xì)豆柏12. Og/L，冷榨黃豆餅粉4. Og/L，胰蛋白胨8. Og/L，亮氨酸I. Og/L,FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KIO. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 153%。實(shí)施例23發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖15. 0g/L，糖蜜5. 0g/L，甘油5. 0g/L，玉米淀粉50. 0g/L，玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，精氨酸I. 0g/L，F(xiàn)eSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KIO. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml 的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 127%。實(shí)施例24發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸2. Og/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 192%。實(shí)施例25發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖5. 0g/L，玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨 8. 0g/L，異亮氨酸 0. 5g/L，F(xiàn)eSO4 7H200. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 148%。實(shí)施例26發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸l.Og/L, Na2SO4 0. 15g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L,pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 208%。實(shí)施例27發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, Na2S2O3 0. 15g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L,pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 235%。實(shí)施例28發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖12. Og/L，糖蜜5. Og/L，甘油5. Og/L，玉米淀粉50. Og/L，玉米漿粉12. Og/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, KNO3 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L,CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml 的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 248%。實(shí)施例29 發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, KNO3 0. 4g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L,CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 228%。
實(shí)施例30發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, (NH4)2SO4 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L，F(xiàn)eSO4 7H20 0. lg/L，MgSO4 7H20 0. 2g/L，KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 225%。實(shí)施例31發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸l.Og/L, KNO3 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, MnCl2 4H20 0. 2g/L, ZnSO4 0. 25g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 2g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 257%。實(shí)施例32發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, KNO3 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, MnCl2 4H20 0. 4g/L, ZnSO4 0. 35g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 35g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH7. 2。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 245%。實(shí)施例33發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. Og/L,糖蜜5. Og/L,甘油5. Og/L,玉米淀粉50. Og/L,玉米漿粉12. Og/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, KNO3 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, MnCl2 4H20 0. 4g/L, ZnSO4 0. 35g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 35g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH5。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。·calicheamicin y J 產(chǎn)量為 228%。實(shí)施例34發(fā)酵培養(yǎng)基組成蔗糖20. 0g/L,糖蜜5. 0g/L,甘油5. 0g/L,玉米淀粉50. 0g/L,玉米漿粉12. 0g/L，細(xì)豆柏12. 0g/L，冷榨黃豆餅粉4. 0g/L，胰蛋白胨8. 0g/L，異亮氨酸I. Og/L, KNO3 0. 15g/L, Na2S2O3 0. 15g/L, MnCl2 4H20 0. 4g/L, ZnSO4 0. 35g/L, FeSO4 7H20 0. lg/L, MgSO4 7H20 0. 35g/L, KI 0. lg/L, CaCO3 2. 5g/L, pH8. 0。按對(duì)比實(shí)施例中I制得的種子液以10% (v/v)接種量接種于裝液量為20ml的250ml發(fā)酵搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵周期6d，其他條件同對(duì)比實(shí)施例I。calicheamicin y J 產(chǎn)量為 213%。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵生產(chǎn)抗生素CalicheamicinY1I的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于其包括有機(jī)碳源和有機(jī)氮源，按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)，所述有機(jī)碳源的含量為5-130g/L，優(yōu)選為20-110g/L ;所述有機(jī)氮源的含量為2-150g/L，優(yōu)選為4-60g/L，更優(yōu)選為15_40g/L ;所述有機(jī)碳源為蔗糖、糖蜜、甘油和玉米淀粉中的一種或多種；所述有機(jī)氮源包括細(xì)豆柏和/或玉米衆(zhòng)粉。
2.如權(quán)利要求I所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述有機(jī)碳源為混合物A或混合物B，其中，所述混合物A為由蔗糖和糖蜜組成的混合物，所述混合物B為由蔗糖、糖蜜和甘油組成的混合物；所述混合物A或混合物B的含量較佳地為5-70g/L，更佳地為20-70g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
3.如權(quán)利要求I所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述有機(jī)碳源為組分I與玉米淀粉的混合物；所述組分I為蔗糖、糖蜜和甘油中的一種或多種，較佳地為混合物A或混合物B ;此時(shí)，所述組分I的含量較佳地為5-70g/L，更佳地為20-70g/L ;玉米淀粉的含量較佳地為5-60g/L ;所述混合物A或混合物B同權(quán)利要求3所述；所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總 體積計(jì)。
4.如權(quán)利要求2或3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于在所述混合物A或混合物B中，蔗糖的含量為5-40g/L ;糖蜜的含量為5-20g/L ;甘油的含量為5_10g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述的有機(jī)氮源還包括黃豆餅粉和/或蛋白胨；所述黃豆餅粉的含量較佳地為5-60g/L，所述蛋白胨的含量較佳地為5-60g/L ;所述黃豆餅粉較佳地為熱榨黃豆餅粉和/或冷榨黃豆餅粉；所述熱榨黃豆餅粉的含量較佳地為2-30g/L，所述冷榨黃豆餅粉的含量較佳地為2-30g/L ;所述蛋白胨較佳地為胰蛋白胨、大豆蛋白胨和魚胨中的一種或多種；所述胰蛋白胨的含量較佳地為5-20g/L，所述大豆蛋白胨的含量較佳地為5-20g/L，所述魚胨的含量較佳地為5-20g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
6.如權(quán)利要求5所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述有機(jī)氮源還包括氨基酸，所述氨基酸較佳地為異亮氨酸、亮氨酸和精氨酸中的一種或多種；所述氨基酸的含量較佳地為0.5-2. Og/L，更佳地為0. 5-1. Og/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
7.如權(quán)利要求5或6所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述有機(jī)氮源包括組分2和細(xì)豆柏，較佳地還包括所述氨基酸；所述組分2為所述黃豆餅粉、所述玉米漿粉和所述蛋白胨中的一種或多種，較佳地為所述黃豆餅粉、所述玉米漿粉和所述蛋白胨；其中，所述組分2的含量較佳地為6-130g/L，更佳地為10-45g/L ;所述細(xì)豆柏的含量較佳地為2_20g/L，更佳地為4-15g/L ;所述組分2中，所述黃豆餅粉的含量較佳地為2-60g/L，更佳地為4_15g/L ;所述玉米漿粉的含量2-20g/L，更佳地為4-15g/L ;所述蛋白胨的含量較佳地為2-50g/L，更佳地為 4-15g/L。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)為0. 1-0. 4g/L的無機(jī)氮源；所述無機(jī)氮源較佳地為KNO3和/ 或(NH4)2SO40
9.如權(quán)利要求8所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括有機(jī)碳源、有機(jī) 氮源以及無機(jī)氮源，所述有機(jī)碳源為所述組分120-70g/L和玉米淀粉5-60g/L ;所述有機(jī)氮源為所述組分210-45g/L、細(xì)豆柏2-20g/L和所述氨基酸0. 5-2. Og/L，所述無機(jī)氮源為KNO3.0.1-0. 4g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基中還包括可增加酶活性的金屬離子、礦物質(zhì)和消泡劑中的一種或多種；所述可增加酶活性的金屬離子優(yōu)選錳離子、鋅離子、鎂離子和亞鐵離子中的一種或多種；所述錳離子較佳地以MnCl2 4H20的形式添加，所述鋅離子較佳地以ZnSO4的形式添加，所述鎂離子較佳地以MgSO4 7H20的形式添加，所述亞鐵離子較佳地以FeSO4 7H20的形式添加；所述可增加酶活性的金屬離子的含量較佳地為0. 1-1. 2g/L ;所述礦物質(zhì)包括pH調(diào)節(jié)劑、硫源和碘源中的一種或多種；所述PH調(diào)節(jié)劑較佳地為I. 0-4. Og/L的CaCO3 ;所述硫源較佳地為Na2S04、Na2S2O3^ Na2SO3和Na2S中的一種或者多種，所述硫源的含量較佳地為0. 1-0. 15g/L ;所述碘源較佳地為KI，KI的含量較佳地為0. 1-0. 5g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
11.如權(quán)利要求10所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含蔗糖.5-40g/L ；糖蜜5-20g/L ；甘油5-lOg/L ;玉米淀粉5_60g/L ;黃豆餅粉2_60g/L，較佳地為4-15g/L ;玉米漿粉2-20g/L，較佳地為4-15g/L ;胰蛋白胨4_20g/L ;細(xì)豆柏2_20g/L，較佳地為 4-15g/L ;異亮氨酸 0. 5-2. Og/L ；KN03 0. 1-0. 3g/L ；MgS04 7H20 0. 1-0. 3g/L ；FeSO4 7H20 0. 1-0. 3g/L ；MnCl2 *4H20 0. 1-0. 3g/L ；ZnS04 0. 1-0 . 3g/L ；Na2S203 0. 1-0. 15g/L ；CaCO3 I. 0-4. Og/L ;以及KI 0. 1-0. 3g/L ;所述含量皆按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)。
12.如權(quán)利要求I所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為pH5. 0-8. 0，較佳地為 pH5. 5-7. 5。
13.—種抗生素calicheamicinyj的發(fā)酵生產(chǎn)方法,其特征在于其包括下述步驟 (a)將棘抱小單抱菌(Micromonosporaechinospora sp. calichensis)的種子液接種于權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是如上所述的任一項(xiàng)發(fā)酵培養(yǎng)基； (b)從發(fā)酵液中分離出抗生素calicheamiciny 即可。
14.如權(quán)利要求13所述的發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于在步驟(a)中，所述的棘孢小單孢菌為棘孢小單孢菌NRRL-18149 ;所述棘孢小單孢菌的種子液為將棘孢小單孢菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到，所述種子培養(yǎng)基較佳地為Medium S培養(yǎng)基；種子培養(yǎng)的溫度較佳為25-320C ;所述種子液的接種量為體積百分比10% -15% ;發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為20-40°C，較佳地為25-32°C ;發(fā)酵培養(yǎng)的時(shí)間為5-7天。
15.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基在將棘孢小單孢菌(Micromonosporaechinospora sp. calichensis)發(fā)酵轉(zhuǎn)化成抗生素calicheamicin y J中的用途，所述的棘孢小單孢菌較佳地為棘孢小單孢菌NRRL-18149。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicinγ1I的發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括有機(jī)碳源和有機(jī)氮源，按所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計(jì)，所述有機(jī)碳源的含量為5-130g/L，優(yōu)選為20-110g/L；所述有機(jī)氮源的含量為2-150g/L，優(yōu)選為4-60g/L，更優(yōu)選為15-40g/L；所述有機(jī)碳源為蔗糖、糖蜜、甘油和玉米淀粉中的一種或多種；所述有機(jī)氮源包括細(xì)豆柏和/或玉米漿粉。本發(fā)明還提供了用該發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)抗生素calicheamicinγ1I的方法以及該發(fā)酵培養(yǎng)基的用途。本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基能夠大幅提供calicheamicinγ1I的發(fā)酵單位，提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本，適用于calicheamicinγ1I的規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P13/02GK102747115SQ20111009852
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2011年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月19日
發(fā)明者王巖, 陳少欣, 韓培 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院