專利名稱：草酸相關(guān)疾病治療方法和組合物的制作方法
草酸相關(guān)疾病治療方法和組合物
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)根據(jù)美國(guó)聯(lián)邦法典第35篇第119條(35USC 119)要求2009年11月25日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)61/281，907和2010年5月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào) 61/395,929的優(yōu)先權(quán)。
聯(lián)邦政府資助研發(fā)聲明本發(fā)明得到政府支持，授予單位為美國(guó)全國(guó)衛(wèi)生研究所(NIH)補(bǔ)充替代全國(guó)補(bǔ)藥和選擇性藥物中心(NCCAM)，授權(quán)號(hào)碼1R43AT006065-01。政府對(duì)本發(fā)明有一定權(quán)利。
背景技術(shù)：
每年大約有3百萬人因腎結(jié)石前往就醫(yī)。在這3百萬患者當(dāng)中，在美國(guó)超過一百五十萬人患有腎結(jié)石相關(guān)疾病。腎結(jié)石是一種極為常見且令人痛苦的尿路疾病。最常見的類型為與草酸或者磷酸結(jié)合形式的鈣結(jié)石，其中大約有70%為草酸鈣。(Tsujihata， Μ. (2008)草酸 鈣腎結(jié)石形成和腎小管細(xì)胞損傷的機(jī)制，《國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志》15，115-120; Daudon, Μ.，Dore, J. C.，Jungers, P.,和 Lacour, B. (2004)結(jié)石成分隨患者年齡和性別變化一種多變量流行病學(xué)方法，《泌尿科雜志》32，241-247。)多種疾病狀態(tài)與體內(nèi)草酸過量有關(guān)，包括原發(fā)性高草酸尿、繼發(fā)性高草酸尿、自閉癥、外陰疼痛、終末期腎病相關(guān)草酸沉積、心臟傳導(dǎo)障礙、克羅恩病、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、尿石癥、終末期腎病相關(guān)草酸沉積、結(jié)節(jié)病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、纖維肌痛、腦-肝-腎綜合征、減肥手術(shù)和其它腸道疾病。草酸通常形成于植物中，且主要集中在葉子、堅(jiān)果、水果和皮中。在食物中，草酸特別在以下植物性食物中含量較高蔬菜、谷物、堅(jiān)果、豆類和飲料。一般草酸每日攝入量在 80-120mg之間，但是可能從44-350mg/天不等。膳食中草酸可以在食物中形成鈉、鉀或鈣鹽。草酸可以通過整個(gè)胃腸道(GI)吸收，包括胃、小腸和大腸。因此，從這些器官中清除膳食中草酸可以有效地阻止草酸吸收。尿路中分泌的草酸有10-70%來源于膳食中草酸的吸收，因此膳食吸收極有可能是尿路中草酸鈣過度飽和的主要原因。(Holmes，R. P.， Goodman, H. O.和Assimos, D. G. (2001)膳食草酸對(duì)泌尿草酸排泄的貢獻(xiàn)，《國(guó)際腎臟期刊》 59,270-276。)據(jù)認(rèn)為，草酸鈣過度飽和是草酸鈣結(jié)石形成過程中起決定性作用的推動(dòng)力。 因此，通過減少草酸鈣過度飽和，結(jié)石形成風(fēng)險(xiǎn)也可能會(huì)顯著降低。已知的治療方法幾乎沒有通過減少或阻止系統(tǒng)膳食草酸吸收來顯著降低結(jié)石形成的風(fēng)險(xiǎn)。限制膳食草酸吸收的方法之一是口服給予草酸降解酶，與胃、小腸和大腸接觸。 提供此類治療的一大難點(diǎn)在于胃內(nèi)強(qiáng)酸環(huán)境，使得酶很難在低PH值和高胃蛋白酶活性環(huán)境下持續(xù)存在并發(fā)揮功能。小腸和大腸內(nèi)由于胰蛋白酶和糜蛋白酶活性較高，也為酶的持續(xù)存在造成了環(huán)境困難因素。胃中PH值受多種因素的影響，包括個(gè)體胃健康相關(guān)條件、膳食量和膳食內(nèi)容等。所有這些因素使得胃內(nèi)PH值可能在1.9-5.5這一大范圍內(nèi)變動(dòng)。人的胃內(nèi)由于存在酸袋，使得PH值具有不均一性。因此，關(guān)鍵在于找到一種在該酸性pH值范圍內(nèi)穩(wěn)定和強(qiáng)效的草酸降解酶，作為有效的人體治療藥物。此外，這種草酸降解酶還必須能夠在5. 5-8. O的pH范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，才能經(jīng)受住腸道內(nèi)環(huán)境。這種草酸降解酶必須免受胃中蛋白酶的消化，以及小腸和大腸中胰蛋白酶和糜蛋白酶的消化。
概述本發(fā)明提供了一個(gè)實(shí)施例，一種草酸降解組合物，其中包括至少一種草酸降解酶。 該組合物包括一種濃縮的不可溶真菌生物樣品組分，能夠在PH值I. 9及以上環(huán)境中有效地降解草酸。名詞“生物樣品”在本文中是指大量來自相關(guān)物種的細(xì)胞或含有細(xì)胞的組織。在典型的實(shí)施例中，生物樣品為勻漿或經(jīng)其它方式碎裂，從而使生物樣品中細(xì)胞破裂或溶解。 草酸脫羧酶(OxDC)和草酸氧化酶(OxOx)在不可溶細(xì)胞組分中均有發(fā)現(xiàn)，即細(xì)胞中蛋白質(zhì)和其它非水溶性結(jié)構(gòu)(細(xì)胞壁/膜)。生物樣品中的不可溶組分可以通過去除非水溶性組分中至少一部分水和水溶性細(xì)胞組分進(jìn)行濃縮。不可溶組分的濃縮可以通過行業(yè)傳統(tǒng)方法實(shí)現(xiàn)，例如過濾、離心、冷凍干燥和/或簡(jiǎn)單地干燥。在另一個(gè)實(shí)施例中，提供了一種減少對(duì)象體內(nèi)草酸含量的方法。該方法包括給予對(duì)象有效治療劑量的一種組合物，其中包括至少一種草酸降解酶。至少一種草酸降解酶包括一種酶，在PH為I. 9-6. 3下具有活性，能夠降解對(duì)象消化道內(nèi)可溶性草酸。在另一個(gè)實(shí)施例中，提供了一種預(yù)防/治療對(duì)象草酸相關(guān)臨床狀況的方法。該方法包括給予需要對(duì)象有效治療劑量的一種含有至少一種草酸降解酶的組合物。草酸相關(guān)臨床狀況包括以下中的一種原發(fā)性高草酸尿、自閉癥、繼發(fā)性高草酸尿、克羅恩病、炎癥性腸病、 結(jié)腸炎、心臟傳導(dǎo)障礙、尿石癥、外陰疼痛、減肥手術(shù)、結(jié)節(jié)病、哮喘、慢性阻塞性肺病 (COPD)、纖維肌痛、腦-肝-腎綜合征、終末期腎病相關(guān)草酸沉積和其它腸道疾病。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種產(chǎn)品，其中包括封裝材料和有效劑量的草酸降解酶。封裝材料包括以下中至少一種丸劑、糖丸、袋裝、片劑、散裝、棒和/或食物添加劑。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種治療草酸相關(guān)臨床狀況的治療方法。該方法包括聯(lián)合給予需要該治療對(duì)象有效劑量的第一種組合物和第二種組合物，前者組合物在對(duì)象胃內(nèi)釋放酶，后者在對(duì)象腸道內(nèi)釋放酶。該方法揭示了當(dāng)酶釋放時(shí)，第一種組合物在胃中降解草酸， 而第二種組合物在腸道內(nèi)降解草酸。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種衍生自一種真菌源的草酸降解組合物。該組合物包括至少第一種組合物和第二種組合物。第一種組合物包括至少一種草酸降解酶，其中第一種組合物在pH值I. 9-6. 3范圍內(nèi)pH值下釋放至少一種草酸降解酶。第二種組合物包括至少一種草酸降解酶，其中所述第二種組合物在PH值5. 5-8. O范圍內(nèi)pH值下釋放至少一種草酸降解酶。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種產(chǎn)品，其中包括封裝材料和有效劑量的草酸降解酶。該產(chǎn)品包括一種第一種組合物，其中第一種組合物在第一個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下能夠發(fā)揮作用。該產(chǎn)品還包括一種第二種組合物，其中第二種組合物在第二個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下能夠發(fā)揮作用。該產(chǎn)品包括至少一種第一種草酸降解酶和一種第二種草酸降解酶。


圖I是顯示pH值I. 9-6. 3來自三種真菌種類的OxDC的pH活性特征圖。圖2顯示來自三種真菌種類的OxDc的熱穩(wěn)定性。圖3 是顯不 pH 值 5. 0-8. 5 來自 Bougainvillea buganvilla 的 OxOx 的 pH 活性特征的圖。圖4顯不來自牛肝菌(Boletus flaviporus)、雞腿燕(Coprinus cometus)的 OxDC 和來自雞腿菇的配方OxDC的pH活性。圖5顯示在pH值為2. 4、3. 4和5. 2的3種食物混合樣品中來自柱狀田頭菇 (Agrocybe aegerita)的OxDC對(duì)可溶性草酸的降解。
發(fā)明詳述本發(fā)明基于發(fā)明者研發(fā)一種在對(duì)象體內(nèi)降解草酸的新組合物。對(duì)OxDC活性在本發(fā)明繼承的超過一百二十種不同蘑菇種類中進(jìn)行了評(píng)估，詳見實(shí)施例2。它們中間很多是可使用或醫(yī)用蘑菇。很多來自這些蘑菇真菌的OxDC活性在pH值I. 9-2. 5,2. 5-3. 0,3. 0-3. 5、
3.5-4. 0,4. 0-4. 5,4. 5-5. 0,5. 0-5. 5,5. 5-6. O 和 6. 0-6. 3 能夠保持穩(wěn)定和有效，并且能夠防止胃蛋白酶消化。此外，部分真菌品系在溫度超過70°C時(shí)能夠保持穩(wěn)定并顯示出OxDC活性。這一特性非常有助于預(yù)測(cè)活性。因此，本發(fā)明包括這些PH值和熱穩(wěn)定草酸降解酶。與之相應(yīng)，本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例提供了一種包括至少一種草酸降解酶的草酸降解組合物。該組合物包括一種濃縮的不可溶真菌生物樣品組分，能夠在PH值I. 9及以上環(huán)境中有效地降解草酸。本發(fā)明另一方面提供了一種組合物，其中至少有一種草酸降解酶包括一種在I. 9-5. 5pH值范圍內(nèi)pH值下能進(jìn)行配方且具有活性的酶，和/或第二種在5. 0-8. OpH值范圍內(nèi)pH值下具有活性的酶，或者一種第一種和第二種酶的組合。本發(fā)明另一個(gè)較為詳細(xì)的實(shí)施例中包括了一種組合物，其中酶包括以下至少一種草酸氧化酶 (OxOx)和/或草酸脫羧酶(OxDC)。草酸脫羧酶(OxDC)是一種能夠降解草酸的酶。本文中公布的OxDC組合物一般來自于可食用或無毒真菌，具有作為潛在的治療性、醫(yī)用食物、膳食補(bǔ)充或其它治療方案的理想特性，因?yàn)樗鼈冊(cè)诶?pH 水平 I. 9-2. 5,2. 5-3. 0,3. 0-3. 5,3. 5-4. 0,4. 0-4. 5,4. 5-5. O、 5. 0-5. 5,5. 5-6. O下能夠保持穩(wěn)定和活性。本發(fā)明OxDC組合物可以進(jìn)入細(xì)胞，或者可以與細(xì)胞膜相結(jié)合或以其它方式與細(xì)胞壁相關(guān)聯(lián)。OxDC組合物能夠防止胃蛋白酶消化，能夠降解胃、小腸和大腸中吸收的大部分草酸。OxDC可以通過發(fā)酵培植的真菌菌絲或這些真菌形成的子實(shí)體或蘑菇制備。這些含有OxDC的真菌菌絲或清潔后的蘑菇或子實(shí)體可以通過研磨、搗碎、溶解成懸液、混合或其它本行業(yè)技術(shù)員熟知的適當(dāng)處理方法制成溶液、粉末或其它劑型。然后可以將菌絲、蘑菇或子實(shí)體制劑干燥并制成片劑或膠囊，包裝成小袋，制成棒狀，制成糖丸，加入到食物混合物中，或者采取其它本行業(yè)技術(shù)員熟知的適當(dāng)給藥方法。一方面，本發(fā)明的草酸降解組合物可以與正餐和含草酸的零食一起食用。這種產(chǎn)品可以廣泛應(yīng)用于形成草酸鈣結(jié)石人群或人或動(dòng)物中其它草酸相關(guān)狀況。這種組合物特殊的一方面在于設(shè)計(jì)用于降解非全身性草酸，胃腸道中草酸，尤其是胃中草酸，預(yù)防外源性草酸(如來自食物)進(jìn)入全身循環(huán)。在一個(gè)較為詳細(xì)的實(shí)施例中，該酶在PH值I. 9-6下保持活性和穩(wěn)定。根據(jù)一個(gè)替代實(shí)施例，一種草酸降解酶據(jù)發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞壁結(jié)合后在pH值3. 0-6. 5下具有活性，但是提純和支撐微粒后只能在PH值3. 0-7. O下具備活性。根據(jù)另一個(gè)替代實(shí)施例，含有草酸降解酶的組合物包括第一種在胃中保持穩(wěn)定和活性的酶和第二種在胃中保持穩(wěn)定但是只在腸道中具備活性的酶。另一類草酸降解酶,草酸氧化酶(OxOx)在更高等植物和真菌中表達(dá),能夠催化草酸通過氧氣依賴氧化成C02，同時(shí)形成H202。本發(fā)明其中一方面是關(guān)于從植物和真菌中找到的草酸氧化酶(OxOx)，它們?cè)诶鏿H值水平I. 9-2. 5、2. 5-3. O、3. 0-3. 5、3. 5-4. O、
4.0-4. 5,4. 5-5. 0,5. 0-5. 5,5. 5-6. O下能夠保持穩(wěn)定和具備如上所述的活性。一種來自 Bouganvillea buganvillea 的特定 OxOX 在 pH 值 5. 5-8. O 下顯不出活性。這些OxOx和OxDC酶可以直接從這些植物或真菌中制備，或者通過編碼OxOx和 OxDC的基因分別制備，通過克隆這些基因，使用普遍接受的適當(dāng)流程亞克隆到重組表達(dá)系統(tǒng)中，重組表達(dá)系統(tǒng)包括但不限于大腸桿菌、細(xì)菌、酵母、真菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。經(jīng)提純以后，所表達(dá)的OxOx酶可以通過不同的方法制成能夠抵抗胃中胃蛋白酶和小腸和大腸中胰蛋白酶和糜蛋白消化的制劑，這些方法包括但不限于微囊法、附著于大分子如PEG或修飾OxOx酶分子表面。酶制劑可以制成包括但不限于片劑、膠囊、小袋、糖丸、棒，或加入到其它食物組合物或其它各種給藥模式制劑。因此，本發(fā)明為關(guān)于一種組合物，其中這些草酸降解酶嵌入到一種聚合物材料中，該材料可以保護(hù)酶在胃內(nèi)環(huán)境下不被降解。這些含有OxOx的真菌菌絲或清潔后的蘑菇或子實(shí)體可以通過研磨、搗碎、溶解成懸液、混合或其它本行業(yè)技術(shù)員熟知的適當(dāng)處理方法制成溶液、粉末或其它物理外觀。然后可以將菌絲、蘑菇或子實(shí)體制劑或植物材料干燥并制成片劑或膠囊，包裝成小袋，制成棒狀， 制成糖丸，加入到食物混合物中，或者采取其它本行業(yè)技術(shù)員熟知的適當(dāng)給藥方法。
另一個(gè)實(shí)施例提供了一種產(chǎn)品，其中包括封裝材料和有效劑量的草酸降解酶。該封裝材料包括以下中至少一種丸劑、糖丸、袋裝、片劑、散裝、棒和/或食物添加劑。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種產(chǎn)品，其中包括封裝材料和有效劑量的草酸降解酶。該產(chǎn)品包括第一種組合物和第二種組合物，其中前者在第一個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下能夠發(fā)揮作用，后者在第二個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下能夠發(fā)揮作用。該產(chǎn)品包括至少一種第一種草酸降解酶和一種第二種草酸降解酶。第一種草酸降解酶可以包括第一種口服劑量組分，而第二種草酸降解酶可以包括第二種口服劑量組分。第一種口服單元組分可以包繞第二種口服單元組分，或者相反。第一個(gè)PH值范圍包括pH值I. 9-5. 5，第二個(gè)pH值范圍包括5. 5-8. O。 在一個(gè)特定的實(shí)施例中，產(chǎn)品是指一種含兩種 組分的丸劑或片劑，其中第一種組分包含在第二種組分之中。本文中所使用的術(shù)語“口服單元”是指單獨(dú)的、預(yù)先確定的劑量，為一種適合口服的固體、半固體和/或液體體積和大小?？诜卧影ǖ粌H限于膠囊、片劑、 液體懸液、粉末和錠劑等。并且，口服單元可以是指一種組合物預(yù)先確定的量，裝于一個(gè)安瓿、小袋或其它打開后可以釋放出口服給藥內(nèi)容物的容器中。本文中，術(shù)語“對(duì)象”和“患者”是可以交換使用的。本文中，術(shù)語“對(duì)象”是指一種動(dòng)物，優(yōu)選一種哺乳動(dòng)物，如非靈長(zhǎng)類(如奶牛、豬、馬、狗、大鼠等)和靈長(zhǎng)類(如猴子和人)，最優(yōu)選人。在替代實(shí)施例中，本發(fā)明是關(guān)于可以通過重組表達(dá)生產(chǎn)的OxDC。本發(fā)明其中一方面是關(guān)于從植物和真菌中找到的多種草酸脫羧酶(OxDC)，它們?cè)诶鏿H值水平5. 0-5. 5、
5.5-6. O和6. 0-6. 5下能具備活性。來自這些真菌的編碼OxDC基因可以通過本行業(yè)技術(shù)人員普遍接受的適當(dāng)?shù)牧鞒淘诎ǖ幌抻诖竽c桿菌、細(xì)菌、酵母、真菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中克隆和外源性表達(dá)。由包括但不限于大腸桿菌、細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞克隆、亞克隆和表達(dá)的重組OxDC可以通過色譜方法和本領(lǐng)域人員熟悉的多種其它方法進(jìn)行提純。純化 OxDC可以進(jìn)一步制成不被胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶消化的產(chǎn)品，同時(shí)獲得其它有益特性，包括有效期長(zhǎng)和更寬的pH值活性。制劑可以使OxDC酶在pH水平5. 0-5. 5,5. 5-6. O、6.0-6. 5和6. 5-7. O下具有活性。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明為關(guān)于第二類草酸降解酶，草酸氧化酶(E. C. I. 2. 3. 4， OxOx)，在高等植物中表達(dá)。該酶在種子發(fā)芽或防御寄生蟲入侵時(shí)催化草酸通過氧氣依賴氧化成CO2,同時(shí)產(chǎn)生H2O2 (40)。部分真菌據(jù)報(bào)告能夠生成這種酶(41)。本發(fā)明測(cè)試的幾種真菌確實(shí)表現(xiàn)出OxOx活性。來自本發(fā)明測(cè)試的幾種植物和真菌的OxOx在pH值I. 9-5. 5下保持穩(wěn)定和活性，適合用于降解人體胃中膳食性草酸。來自本發(fā)明測(cè)試的幾種植物和真菌的其它OxOx在pH值5. 0-8. 5下保持穩(wěn)定和活性，適合用于降解非人體胃中、小腸和大腸中膳食性草酸。本發(fā)明是關(guān)于來自植物和真菌中的OxOx酶，可以直接從這些有機(jī)體中制備(40) (41) (42)。植物或真菌可以在能夠獲得高OxOx含量的條件下培養(yǎng)。生產(chǎn)流程可以與其它食物加工流程類似，包括但不限于清潔、消毒、碾磨、干燥和包裝。在一個(gè)替代實(shí)施例中，本發(fā)明是關(guān)于可以通過重組表達(dá)生產(chǎn)的OxOx。來自這些植物或真菌的編碼OxOx的基因可以在包括但不限于大腸桿菌、細(xì)菌、真菌、酵母(43，44)或其它植物類型中克隆和外源性表達(dá)(40，45，46)。帶有重組OxOx的植物可以與使用天然表達(dá) OxOx的植物相同的方式用作原材料。由包括但不限于大腸桿菌、細(xì)菌、真菌或酵母或其它合適的表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組OxOx可以通過普遍接受的流程提純并進(jìn)一步制成最終產(chǎn)品。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明是關(guān)于OxOx或OxDC酶干粉、溶液或其它能夠加工成各種不同給藥方法的物理外觀，給藥方法包括但不限于片劑、膠囊、不同類型的糖丸或棒、袋裝或直接作為粉劑。另一個(gè)實(shí)施例提供了一種組合物，其中至少有一種草酸降解酶來自以下有機(jī)體的細(xì)胞樣品美味齒菌(Dentinum reparandum)、綠燕(Russula virescens)、發(fā)光假蜜環(huán)菌 (Armillaria tabescens)、紅雞油菌(Cantharellur cinnabarinur)、Boletur rubellus var fraternus、堆金錢菌(Collybia acervata)、軟靴耳(Crepidotus mollis)、亞撫柄牛肝菌(Boletur subglabripes)、網(wǎng)柄牛肝菌(Boletus ornatipes)、黃多孔菌(Polyporus elegans)、灰光柄燕(Pluteus cervinus)、澄黃硬皮馬勃(Sderoderma citrinum)、平恭(Pleurotus ostreatus)、長(zhǎng)根 (Xerula radicata)、Telephoro vlalis、豬肚 (Clitocybe)、絲膜菌(Cortinarius cedretorun)、藍(lán)綠乳燕(Lactarius indigo)、密裙紅 (Russula densifolia) > Amanita rhopalopus、Clitocybe hydrograma、黃蓋我鳥骨菌(Amanita gemmata)、Cortinarius lewisii、白腐菌(Pleurotus eryngii)、裂絲蓋傘(Inocybe rimosa)、Lactarius atrorividus、花蓋紅 (Russula cyanoxhanth)、多根硬皮馬勃(Sderoderma polyrhizum)、香燕(Lentinula edodes)、真姬燕(Hypsizygus tessellates)、金針 (Flammulina velutipes)、Leucangia carthusiana、Tuber oregonese、灰樹花菌(Grifola frondosa)、Boletus rubricitrinus、兄弟牛月干菌 (Boletus fraternus) > Gyroporus subalbellus、Leucoagaricus americanus、發(fā)光類胳燕(Omphalotus olearius)、假鬼傘(Coprinus disseminates)、黑褐鵝膏菌(Amanita brunnescens)、葉綠紅 (Russula helerophylla) > Mycorrhaphium adustum、假密環(huán)菌 (Armillaria tabescense)、Boletus flaviporus、Russula pectintoides、Lentinula boryana、Amanita mutabilis、Gyroporus subalbellus 2nd、靴狀金錢菌(Collybia peronata)、皺蓋乳 (Lactarius corrugis)、平紅蓋 (Rhodocybe)、Macrocybe titaus、金錢菌(Collybia)、變形菌(Pluteus) ΛLactarius yazooensis、山楊撫柄牛肝菌(Leccinum insigne)、雞腿燕(Coprinus comatus)、塊莖形多孔菌(Polyporus tuberaster)、柱狀田頭燕(Agrocybe aegerita)、變色栓菌(Trametes versicolor)、靈芝(Ganoderma Iucidum)、 偷燕(Hypsizygus ulmarius)、暖季型香燕(Lentinula edodes (warm))、冷季型香燕 (Lentinula edodes (cold))、寬范圍型香燕(Lentinula edodes (wide range))、Russula amoenolens λ Lactarius tomentosu 和 / 或姬松鸞(Agaricus blazei) 0 研究發(fā)現(xiàn)從這些篩選的真菌中獲得的OxDC和/或OxOx的最佳pH值范圍為I.9-6.3。研究發(fā)現(xiàn)從這些篩選的真菌中獲得的Ox DC和/或OxOx的活性pH值范圍為I. 9-6. 3，如表I所示。
表I來自篩選真菌的OxDC和OxOx的最佳和活性pH值范圍
權(quán)利要求
1.草酸降解組合物，該組合物包括至少一種草酸降解酶，所述組合物包括一種濃縮的不可溶真菌生物樣品組分，其中所述組和物能夠在pH值I. 9及以上環(huán)境中有效地降解草酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的組合物，其中所述至少有一種草酸降解酶包括一種在I.9-6. 3pH 值范圍內(nèi)pH值下具有活性的第一種酶，和/或在5. 0-8. OpH值范圍內(nèi)pH值下具有活性的第二種酶，或者第一種和第二種酶的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的組合物，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
4.權(quán)利要求I的組合物，其中所述至少一種草酸降解酶來源于以下中的一種美味齒菌(Dentinum reparandum)、綠 (Russula virescens)、發(fā)光假蜜環(huán)菌(Armillaria tabescens)、 紅雞油菌(Cantharellur cinnabarinur)、Boletur rubellus var fraternus、堆金錢菌(Collybia acervata)、軟靴耳(Crepidotus mollis)、亞撫柄牛肝菌(Boletur subglabripes)、網(wǎng)柄牛肝菌(Boletus ornatipes)、黃多孔菌(Polyporus elegans)、灰光柄燕(Pluteus cervinus)、禮黃硬皮馬勃(Sderoderma citrinum)、 平燕(Pleurotus ostreatus)、長(zhǎng)根 (Xerula radicata)、Telephoro vlalis、豬肚 ^ (Clitocybe)、Cortinarius cedretorun、藍(lán)綠乳 (Lactarius indigo)、密糟紅燕(Russula densifolia)、Amani ta rhopalopus、Clitocybe hydrograma、黃蓋我鳥嘗菌(Amanita gemmata)、Cortinarius lewisii、白腐菌(Pleurotus eryngii)、裂絲蓋傘 (Inocybe rimosa)、Lactarius atrorividus、花蓋紅 (Russula cyanoxhanth)、多根硬皮馬勃(Sderoderma polyrhizum)、香燕(Len tinula edodes)、真姬燕(Hypsizygus tessellates)、金針 (Flammulina velutipes)、Leucangia carthusiana、Tuber oregonese、灰樹花菌(Grifola frondosa)、Boletus rubricitrinus、兄弟牛月干菌 (Boletus fraternus)、Gyroporus subalbellus、Leucoagaricus americanus、發(fā)光類胳燕(Omphalotus olearius)、假鬼傘(Coprinus disseminates)、黑褐我鳥膏菌(Amanita brunnescens)、葉綠紅 (Russula helerophylla)、Mycorrhaphium adustum、假密環(huán)菌 (Armillaria tabescense)、Boletus flaviporus、Russula pectintoides、Lentinula boryana、Amanita mutabilis、Gyroporus subalbellus 2nd、靴狀金錢菌(Collybia peronata)、皺蓋乳 (Lactarius corrugis)、平紅蓋 (Rhodocybe)、Macrocybe titaus、 金錢菌(Collybia)、變形菌(Pluteus)、Lactarius yazooensis、山楊撫柄牛肝菌(Leccinum insigne)、雞腿燕(Coprinus comatus)、塊莖形多孔菌(Polyporus tuberaster)、柱狀田頭燕(Agrocybe aegerita)、變色栓菌(Trametes versicolor)、靈芝(Ganoderma Iucidum)、 偷燕(Hypsizygus ulmarius)、暖季型香燕(Lentinula edodes (warm))、冷劑型香燕 (Lentinula edodes (cold))、寬范圍型香燕(Lentinula edodes (wide range))、Russula amoenolens、Lactarius tomentosu 和 / 或姬松駕(Agaricus blazei)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述至少一種草酸降解酶獲得自以下中的兩種或以上金針燕(Flammulina velutipes)、柱狀田頭燕(Agrocybe aegerita)和雞腿燕 (Coprinus comatus)，或其任意組合，其中所述酶在pH值范圍I. 9-6. 3內(nèi)pH值下具有活性。
6.—種降低對(duì)象體內(nèi)草酸含量的方法，包括給予所述對(duì)象有效治療劑量的一種組合物，其中包括至少一種草酸降解酶，所述至少一種草酸降解酶包括一種在pH值范圍I. 9-6. 3內(nèi)pH值下具有活性的酶，其中所述酶降解所述對(duì)象消化道內(nèi)可溶性草酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述有效治療劑量的所述組合物經(jīng)口服給予所述對(duì)象。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和/ 或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述酶為草酸氧化酶。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述酶從真菌分離。
11.權(quán)利要求6的方法，其中所述酶為草酸脫羧酶。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述酶從一種真菌或細(xì)菌分離。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述酶從一種在發(fā)酵環(huán)境下培育的真菌或細(xì)菌分離。
14.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括一種在pH值I.9-5. 5 范圍內(nèi)PH值下具有活性的酶。
15.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括一種在pH值5.5-8. O 范圍內(nèi)PH值下具有活性的酶。
16.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種草酸降解酶來源于金針菇 (Flammulina velutipes)、柱狀田頭燕(Agrocybe aegerita)和雞腿燕(Coprinus comatus)，其中所述酶在pH值范圍I. 9-5. 5內(nèi)pH值下具有活性。
17.草酸相關(guān)臨床狀況的治療方法，其中所述方法包括給予需要對(duì)象有效治療劑量的權(quán)利要求I的組合物，其中所述草酸相關(guān)臨床狀況包括以下中的一種原發(fā)性高草酸尿、自閉癥、繼發(fā)性高草酸尿、克羅恩病、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、心臟傳導(dǎo)障礙、尿石癥、外陰疼痛、 減肥手術(shù)、終末期腎病相關(guān)草酸沉積和其它腸道疾病狀態(tài)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括一種在I.9-6. 3內(nèi)pH 值下具有活性的酶。
19.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括一種在5.5-8. O內(nèi)pH 值下具有活性的酶。
20.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
21.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述至少一種草酸降解酶來源于金針菇 (Flammulina velutipes)、柱狀田頭燕(Agrocybe aegerita)和雞腿燕(Coprinus comatus),或其任意組合,其中所述酶在1.9-6. 3內(nèi)pH值下具有活性。
22.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中需要患者由患者表現(xiàn)出的狀況和患者體內(nèi)草酸濃度水平確定。
23.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述給藥步驟為經(jīng)口服給藥。
24.一種產(chǎn)品，包括封裝材料和有效劑量的草酸降解酶，其中所述封裝材料包括以下中至少一種丸劑、糖丸、袋裝、片劑、散裝、棒和/或食物添加劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的產(chǎn)品，其中所述草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和/或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
26.一種治療草酸相關(guān)臨床狀況的方法，包括給予需要此類治療的對(duì)象聯(lián)合應(yīng)用有效齊U量的(a) —種第一種組合物，其中所述第一種組合物在對(duì)象胃內(nèi)釋放出酶；和(b) 一種第二種組合物，其中所述第二種組合物在對(duì)象腸道內(nèi)釋放出酶，當(dāng)所述酶釋放時(shí)，所述第一種酶組合物降解胃內(nèi)草酸，所述第二種組合物降解腸道內(nèi)草酸。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中聯(lián)合應(yīng)用為序貫給藥。
28.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中聯(lián)合應(yīng)用為同時(shí)給藥。
29.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中第一種組合物和第二種組合物通過相同的給藥模式給藥。
30.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中第一種組合物和第二種組合物分別包括第一種口服單元和第二種口服單元。
31.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中第一種組合物包括OxOx和/或OxDC中至少一種。
32.—種來源于真菌的草酸降解組合物，包括至少第一種組合物和第二種組合物，所述第一種組合物包括第一種草酸降解酶，其中所述第一種組合物在PH值范圍I. 9-6. 3內(nèi)pH 下釋放所述第一種草酸降解酶，所述第二種組合物包括第二種草酸降解酶，其中所述第二種組合物在PH值范圍5. 5-8. 5內(nèi)pH下釋放所述第二種草酸降解酶。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的組合物，其中第一種草酸降解酶與在pH值范圍I.9-6. 3內(nèi)pH 下溶解的第一種聚合物結(jié)合，其中所述第二種草酸降解酶與在PH值范圍5. 5-8. 5內(nèi)pH下溶解的第二種聚合物結(jié)合。
34.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
35.一種包括口服給藥劑量的草酸降解酶的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括第一種組合物，其中所述第一種組合物在第一個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下發(fā)揮作用，和第二種組合物，其中所述第二種組合物在第二個(gè)PH值范圍內(nèi)pH值下發(fā)揮作用，其中所述產(chǎn)品包括至少一種第一種草酸降解酶和一種第二種草酸降解酶。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的產(chǎn)品，其中第一種草酸降解酶包括口服單元的第一種組合物， 其中所述第二種草酸降解酶包括口服單元的第二種組合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求35的產(chǎn)品，其中第一種組分在口服單元中包繞第二種組分。
38.根據(jù)權(quán)利要求35的產(chǎn)品，其中第二種組分在口服單元中包繞第一種組分。
39.根據(jù)權(quán)利要求35的產(chǎn)品，其中第一個(gè)pH值范圍包括pH值I.9-6. 3，其中第二個(gè)pH 值范圍包括5. 5-8.5。
40.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中第一種組合物和第二種組合物通過同一個(gè)口服單元給藥。
41.一種草酸降解組合物，所述組合物包括至少一種草酸降解酶，所述組合物包括一種濃縮的不可溶植物生物樣品組分，其中所述組合物能夠在PH值范圍5. 0-8. O內(nèi)pH下有效地降解草酸。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的組合物，其中所述組合物還包括另一種在pH值I.9-6. 3范圍內(nèi) PH值下具有活性的草酸降解酶。
43.根據(jù)權(quán)利要求41的組合物，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx) 和/或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
44.根據(jù)權(quán)利要求41的組合物,其中所述至少一種草酸降解酶來源于Bouganvillea buganvillea0
45.降低對(duì)象體內(nèi)草酸含量的方法，包括給予所述對(duì)象有效治療劑量的一種包括至少一種草酸降解酶的組合物，所述至少一種草酸降解酶包括一種在PH值范圍5. 0-8.0內(nèi)pH值下具有活性的酶，其中所述酶降解所述對(duì)象消化道內(nèi)可溶性草酸。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中所述有效治療劑量的所述組合物經(jīng)口服給予所述對(duì)象。
47.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中所述至少一種草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脫羧酶(OxDC)中至少一種。
48.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中所述組合物的配方使所述至少一種草酸降解酶在所述對(duì)象胃內(nèi)保持穩(wěn)定。
全文摘要
本發(fā)明一方面是關(guān)于一種草酸降解組合物，其中包括至少一種草酸降解酶。該組合物包括一種濃縮的不可溶真菌生物樣品組分，并且該組合物能夠在pH值1.9及以上環(huán)境中有效地降解草酸。該組合物免受蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶降解。該組合物能夠耐受對(duì)象胃、小腸和/或大腸環(huán)境。
文檔編號(hào)C12P1/00GK102725403SQ201080062401
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2010年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月25日
發(fā)明者李青山, 艾如·B·考利 申請(qǐng)人:凱普托杰姆有限責(zé)任公司