專利名稱：一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保健食品及其制造方法，具體是一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品 及其制備方法。
背景技術(shù)：
免疫力是人體自身的防御機(jī)制，是人體識(shí)別和消滅外來(lái)侵入的任何異物(病毒、 細(xì)菌等)，處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細(xì)胞以及識(shí)別和處理體內(nèi)突變細(xì)胞和病毒感染 細(xì)胞的能力。免疫功能失調(diào)或低下時(shí)，會(huì)降低機(jī)體對(duì)抗感染的能力，降低識(shí)別和清除自身衰 老的組織細(xì)胞能力，降低殺傷和清除異常突變細(xì)胞在體內(nèi)的能力，導(dǎo)致人體抗病力與自愈 力的下降。而現(xiàn)代社會(huì)，生活節(jié)奏的加快，競(jìng)爭(zhēng)壓力的增大，每日緊張的工作和學(xué)習(xí)會(huì)使機(jī) 體處于透支狀態(tài)，如得不到及時(shí)的休息和調(diào)整，日積月累，就會(huì)抑制免疫功能；同時(shí)，緊張的 工作和學(xué)習(xí)讓更多的人不得不食用方便快餐，造成體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)素的失衡，如果機(jī)體長(zhǎng)期處于 這種狀態(tài)，會(huì)使機(jī)體免疫力下降，最終導(dǎo)致機(jī)體的亞健康狀態(tài)。要想從根本上預(yù)防亞健康，最理想的辦法是在加強(qiáng)體育鍛煉的同時(shí)，注意自我保 健，合理食用保健食品，從而使身體達(dá)到最佳的免疫功能狀態(tài)。因此，開(kāi)發(fā)安全有效的增強(qiáng) 人體免疫力的保健食品是個(gè)熱門的題目。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種增強(qiáng)人體免疫力的保 健食品。本發(fā)明的另一目的在于提供上述保健食品的制備方法。技術(shù)方案本發(fā)明所述的一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品，包括以下重量百分比 的組分0 35%的姬松茸提取物，15 30%的灰樹(shù)花提取物，5 20%的紅景天提取物， 35 50%的淀粉，0 的硬脂酸鎂。其中，所述姬松茸提取物是由姬松茸經(jīng)水提取，將提取液濃縮，取濃縮液醇沉，將 醇沉物干燥，粉碎，過(guò)篩而得到。其中，所述灰樹(shù)花提取物是由灰樹(shù)花經(jīng)水提取，將提取液濃縮，取濃縮液醇沉，將 醇沉物干燥，粉碎，過(guò)篩而得到。其中，所述紅景天提取物是由紅景天經(jīng)粉碎，70 %乙醇回流提取，將提取液濃縮， 干燥，粉碎，過(guò)篩而得到。制備上述保健食品的方法，包括以下步驟(1)取姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂分別過(guò)篩；(2)將過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混 合；(3)將混合后的混合物料裝入膠囊，每粒0. 35g。其中，步驟(1)優(yōu)先選用60目篩。
其中，步驟(2)的混合時(shí)間以30min為最佳。姬松茸為蘑菇科姬松茸的干燥子實(shí)體，為可用于保健食品的普通食品。其功效成 分為姬松茸多糖，姬松茸多糖可以減弱四氯化碳的毒性，并保護(hù)枯否細(xì)胞Fc受體，提高枯 否細(xì)胞免疫活性。同時(shí)，能對(duì)抗腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，具有提高機(jī)體的免疫功能?；覙?shù)花為多孔菌科灰樹(shù)花的干燥子實(shí)體，為可用于保健食品的普通食品。其有效 成分為灰樹(shù)花多糖，灰樹(shù)花多糖可以提高小鼠的足跖脹度、抗體細(xì)胞生成數(shù)，具有很好的免 疫調(diào)節(jié)作用。紅景天為景天科植物大花紅景天Rhodiola crenulata (Hook. f. etThoms. )H. Ohba 的干燥根及根莖，為可用于保健食品的物品。紅景天是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用植物，從《神農(nóng)本 草》、《本草綱目》到現(xiàn)在的《現(xiàn)代實(shí)用草本》，都有記載。紅景天有調(diào)節(jié)免疫等特殊功效，同 時(shí)對(duì)小鼠細(xì)胞及體液免疫功能都有增強(qiáng)作用。有益效果本發(fā)明選用紅景天提取物、姬松茸提取物、松花粉提取物為原料，制成 膠囊劑，方便服用。幾味原料聯(lián)用，共同起到調(diào)節(jié)人體免疫力的功能。同時(shí)，由于采用非化 學(xué)類原料，無(wú)任何毒副作用，適合各年齡段人群。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 將20%的姬松茸提取物(單位為重量百分比，下同)、27. 5%的灰樹(shù)花提取物、 11. 5%的紅景天提取物、40. 5%的淀粉和0. 5%的硬脂酸鎂分別過(guò)60目篩，取過(guò)篩后的姬 松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合30min，將混合后的混合物 料裝入膠囊，每粒0. 35g。實(shí)施例2 將22. 5%的姬松茸提取物、25%的灰樹(shù)花提取物、7. 5%的紅景天提取物、44. 5% 的淀粉和0. 5%的硬脂酸鎂分別過(guò)60目篩，取過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景 天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合30min，將混合后的混合物料裝入膠囊，每粒0. 35g。實(shí)施例3 將25. 5%的姬松茸提取物、22%的灰樹(shù)花提取物、10. 5%的紅景天提取物、41. 5% 的淀粉和0. 5%的硬脂酸鎂分別過(guò)60目篩，取過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景 天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合30min，將混合后的混合物料裝入膠囊，每粒0. 35g。實(shí)施例4 將29. 5%的姬松茸提取物、18%的灰樹(shù)花提取物、18. 5%的紅景天提取物、35. 5% 的淀粉和0. 5%的硬脂酸鎂分別過(guò)60目篩，取過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景 天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合30min，將混合后的混合物料裝入膠囊，每粒0. 35g。實(shí)施例5 將35%的姬松茸提取物、15. 5%的灰樹(shù)花提取物、9. 5%的紅景天提取物、39. 5% 的淀粉和0. 5%的硬脂酸鎂分別過(guò)60目篩，取過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景 天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合30min，將混合后的混合物料裝入膠囊，每粒0. 35g。實(shí)施例6 本發(fā)明對(duì)增強(qiáng)人體免疫力功能的研究
1.材料1. 1 樣品由無(wú)錫市天賜康生物科技有限公司提供。人體推薦量為每日2次，每次4粒，成人 體重按60kg計(jì)算，折合劑量0. 0467g/kg. bw。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明種雌性小鼠200只，體重為18 22g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (豫)2005-0001。飼料由長(zhǎng)沙市開(kāi)福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部 提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK (湘)2006-0001。實(shí)驗(yàn)條件為屏障環(huán)境，溫度22 24°C，濕度 52 54%。每40只分為1組，共5組。免疫I組，進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)；免疫II組，進(jìn)行小鼠 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；免疫III組，進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；免疫IV組，進(jìn)行 半數(shù)溶血值(HC5tl)和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定；免疫V組，進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn) 化實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞的活性測(cè)定。每大組隨機(jī)分為對(duì)照組、低、中、高劑量組，每組10只小鼠。1. 3主要儀器與試劑動(dòng)物臺(tái)秤、分析天平、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、722分光光度計(jì)、恒溫 水浴箱、酶標(biāo)儀、顯微鏡、無(wú)菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺、微量注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、24孔和96孔 平底細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板、玻璃平皿、紗布、試管、玻片架、200目篩網(wǎng)、計(jì)時(shí)器、 血色素吸管、載玻片。以上實(shí)驗(yàn)儀器由湖南省疾病預(yù)防控制中心提供。綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、Hank，s液(ρΗ7· 2 7. 4)、RPMI1640培養(yǎng)液、小 牛血清、清鏈霉素、ConA (伴刀豆球蛋白)、lmol/L的HCL溶液，酸性異丙醇(96mL異丙醇加 lmol/L的HCL溶液4mL)、MTT (3-(4，5- 二甲基噻唑-2)-2，5- 二苯基四氮唑溴鹽)、PBS緩 沖液(pH7. 2-7. 4)，SA緩沖液、瓊脂糖、都氏試劑、YAC-I細(xì)胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩 嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、0. 2mol/L的Tris-HCL緩沖液、2. 5% Triton(聚乙二醇辛 基苯基醚)、印度墨汁、0. 的碳酸鈉、雞紅細(xì)胞、甲醇、Giemsa染液。以上試劑由湖南省疾 病預(yù)防控制中心提供。2.實(shí)驗(yàn)方法 2. 1劑量選擇與受試物給予方式據(jù)人體口服推薦量，設(shè)本發(fā)明低、中、高劑量組分別為0. 233g/kb. Bw、0. 467g/ kb. BwU. 400g/kb. Bw (分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍)。分別取樣品2. 33g、 4. 67g、14. OOg加蒸餾水定容至200ml，分別給予受試小鼠灌胃，每天灌胃一次，灌胃體積為 0. 2ml/10g. bw，對(duì)照組予以等體積的溶劑，連續(xù)30天。2. 2實(shí)驗(yàn)步驟2.2. 1小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0. 1ml，墨汁注 入后立即計(jì)時(shí)，于注入墨汁后第2、10min，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20 μ 1，加入到2mlNa2C03 溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白對(duì)照，用722型分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處比色測(cè)光密 度值(OD)。將小鼠處死，取肝、脾稱重，計(jì)算吞噬指數(shù)a。2. 2. 2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)小鼠腹腔注射20% (v/v，用生理鹽水配制)的雞紅細(xì)胞(2000rpm，IOmin)懸液 lmL，間隔30min，頸椎脫臼處死，仰位固定于鼠板上，正中剪開(kāi)腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽
5水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘。取腹腔巨噬細(xì)胞洗液lmL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷 盒內(nèi)，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗以除去未貼片細(xì)胞。晾干，以甲醇 丙酮(1 1)固定，4% (vAOGiemsa-磷酸緩沖液染色，用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下每片計(jì) 數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)吞噬率吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞 數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100，吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)。2. 2. 3遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射2% (v/v) SRBC(0. 2ml/每鼠)致敏4天后，測(cè)量左后足跖厚度，然后 再測(cè)量部位皮下注射20% (v/v) SRBC(20 μ 1/每鼠)，于注射后24h測(cè)量左后足跖厚度，同 一位測(cè)量三次，取平均值，以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來(lái)表示DTH的程度。2. 2. 4ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(MTT法)無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hanks液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng) 過(guò)濾。用Hanks液洗2次，每次離心IOmin (1000r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于ImL完全培養(yǎng)液 中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3 X IO6個(gè)/ml。再將細(xì)胞懸液分兩孔 加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加75 μ IConA液，另一孔作對(duì)照，置5% CO2孵箱37°C培 養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0. 7ml加入0. 7ml不含小牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/ml) 50 μ L/孔繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入Iml酸性異丙 醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔作3個(gè)平行孔，用 酶標(biāo)儀，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。淋巴細(xì)胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不 加ConA孔的光密度值表示。2. 2. 5抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jernr改良玻片法)取羊血用生理鹽水洗滌3次，每次離心2000rpml0min，將壓積SRBC用生理鹽水 配成2% (v/v)細(xì)胞懸液，每鼠腹腔注射0.2ml。將免疫后5天的小鼠處死，取脾，磨碎， 用Hanks液制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，洗滌、離心2次，最后將細(xì)胞懸浮在SmlHanks 液中。計(jì)數(shù)細(xì)胞，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為5X IO6個(gè)/mL。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量 的PH7. 4、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0. 5ml，再向管內(nèi)加入用SA液配制的 10% SRBC50y 1(ν/ν)、20μ 1脾細(xì)胞懸液(5X IO6個(gè)/mL)，迅速混勻后傾倒于已刷薄層瓊脂 糖的玻片上，待瓊脂糖凝固后將玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1. 5h， 將用SA液稀釋的補(bǔ)體(1 8)加入到玻片凹槽內(nèi)繼續(xù)溫育1.5h后計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。2. 2. 6半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制) SRBCO. 2mL進(jìn)行免疫。5天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置lh，剝離，2000r/min離心 lOmin，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為200倍，去ImL置管內(nèi)，依次加入10% (v/v，用 SA緩沖液配制)SRBC0.5mL，補(bǔ)體ImL (用SA緩沖液按1 8稀釋)。另設(shè)不加血清的對(duì)照 管(以SA緩沖液代替)。置37°C恒溫水浴中保溫30min后，冰浴終止反應(yīng)。2000r/min離 心lOmin，取上清液ImL加都氏試劑3mL。同時(shí)取10% (v/v，用SA緩沖液配制)SRBCO. 25mL, 加都氏試劑至4mL于另一管中，充分混勻，放置IOmin后，于540nm處以對(duì)照管作空白，分別 測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC5tl)表示，按下式計(jì)算半數(shù)溶血值(HC5tl) =樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值X稀釋倍數(shù)。2. 2. 7NK細(xì)胞活性測(cè)定(乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法)
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頸椎脫白處死動(dòng)物，取出脾臟，制成脾細(xì)胞懸浮液，用Hank’ s液洗2次，每次離心 IOmin (1000r/min)，棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0. 5ml滅菌水20秒，裂解紅細(xì)胞后再加入 0. 5ml2 倍Hanks 液及 8mlHanks 液，IOOOrpm離心 lOmin，用 ImL含 10%小牛血清的 RPMI1640 完全培養(yǎng)液重懸，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)(活細(xì)胞應(yīng)在95 %以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2 X IO7個(gè) /ml此為效應(yīng)細(xì)胞，取傳代后24h生長(zhǎng)良好的YAC-I細(xì)胞用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞 濃度為4 X IO5個(gè)/ml此為靶細(xì)胞；取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μ1(效靶比50 1)，加入U(xiǎn) 型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μ 1，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶 細(xì)胞和2. 5% Triton各100 μ 1 ；上述各項(xiàng)均設(shè)3個(gè)平行孔，于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 小時(shí)，取出1500r/min離心5min。將各孔上清液100 μ 1置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入 LDH基質(zhì)液100 μ 1，根據(jù)室溫反應(yīng)3-10min，每孔加入lmol/L的HCL30 μ 1，在酶標(biāo)儀490nm 處測(cè)定光密度(0D)。NK細(xì)胞活性=[(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD-自然 釋放孔OD)] X 100%3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用Spssl 1. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。4.結(jié)果4. 1本發(fā)明對(duì)小鼠體重的影響表1本發(fā)明免疫力功能試驗(yàn)I組小鼠體重(I 士 S)
權(quán)利要求
一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品，其特征在于它包括以下重量百分比的組分20～35％的姬松茸提取物，15～30％的灰樹(shù)花提取物，5～20％的紅景天提取物，35～50％的淀粉，0～1％的硬脂酸鎂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品，其特征在于所述姬松茸 提取物是由姬松茸經(jīng)水提取，將提取液濃縮，取濃縮液醇沉，將醇沉物干燥，粉碎，過(guò)篩而得 到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品，其特征在于所述灰樹(shù)花 提取物是由灰樹(shù)花經(jīng)水提取，將提取液濃縮，取濃縮液醇沉，將醇沉物干燥，粉碎，過(guò)篩而得 到。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品，其特征在于所述紅景天提 取物是由紅景天經(jīng)粉碎，70%乙醇回流提取，將提取液濃縮，干燥，粉碎，過(guò)篩而得到。
5.制備權(quán)利要求1所述的一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于包括以 下步驟(1)取姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂分別過(guò)篩；(2)將過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合；(3)將混合后的混合物料裝入膠囊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于步 驟⑴選用60目篩。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品的方法，其特征在于步 驟(2)的混合時(shí)間為30min。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種增強(qiáng)人體免疫力的保健食品及其制備方法，該保健食品包括以下重量百分比的組分20～35％的姬松茸提取物，15～30％的灰樹(shù)花提取物，5～20％的紅景天提取物，35～50％的淀粉，0～1％的硬脂酸鎂。該保健品的制備方法為將姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂分別過(guò)篩，取過(guò)篩后的姬松茸提取物、灰樹(shù)花提取物、紅景天提取物、淀粉和硬脂酸鎂混合，將混合后的混合物料裝入膠囊。本發(fā)明選用中藥原料，制成膠囊劑，方便服用，幾味原料聯(lián)用，共同起到調(diào)節(jié)人體免疫力的功能。
文檔編號(hào)A23L1/30GK101940313SQ20101013215
公開(kāi)日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月25日
發(fā)明者張國(guó)清, 潘亞蓮 申請(qǐng)人:無(wú)錫市天賜康生物科技有限公司